人胚肺成纤维细胞

摘要： 目的探讨补肾活血方对人胚肺成纤维细胞的作用机制。方法应用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞,将实验细胞分为空白组(A组),TGF-β1造模组(B组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h组(C组),TGF-β1处理+shRNA-IL-17A组(D组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+IL-17A过表达质粒组(E组),进行相应药物培养后,检测各组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A表达量的变化。结果B组中人胚肺成纤维细胞的增殖率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较A组明显增多(P<0.05);C组、D组细胞的增殖率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17AmRNA表达量较B组明显较少;而E组以上各项指标较C组明显增多。结论补肾活血方能有效降解人胚肺成纤维细胞中胶原蛋白的含量,具有较强的降纤作用,主要是通过阻断IL-17A通路降解胶原蛋白而起到抗纤维化作用的。

摘要： 目的:基于代谢组学技术探讨丹贝益肺方对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的作用机制。方法:将经丹贝益肺方提取物预处理24 h的MRC-5设为给药组,弃去预处理液,加入细胞维持液,在37°C、5%CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养72 h后收获上清液;另取未经丹贝益肺方提取物干预的MRC-5为模型组,未经丹贝益肺方提取物干预的人胚肺正常细胞为空白组,两组其他处理与给药组一致。收集各组样本上清液,采用超高液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术对细胞内容物进行细胞代谢组学采集,通过化学计量学算法分析MRC-5代谢数据。结果:与模型组比较,给药组细胞吸光度值升高(P<0.01),给药组细胞增殖抑制率为94%,明显高于模型组。通过Acequire X的数据依赖型扫描模式对细胞代谢产物进行采集和分析,共获得差异代谢产物6个,分别是溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、左旋肉碱、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺,经丹贝益肺方提取物干预后全部呈现回调趋势。结论:丹贝益肺方对肺纤维化有较好的干预作用,其机制可能与调节精氨酸生物合成、天冬氨酸和谷氨酸代谢及D-谷氨酰胺代谢等有关。

摘要： 目的 探讨补肾活血方对人胚肺成纤维细胞的作用机制。方法 首先,观察不同浓度的含药血清对人胚肺成纤维细胞的抑制情况及细胞内的胶原蛋白的含量,确定出实验用含药血清的最佳血药浓度;其次,应用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞,将实验细胞分为空白对照组,TGF-β1处理组,TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h组(含药血清组),TGF-β1处理+基因敲除阴性对照组(sh-NC组),TGF-β1处理+IL-7A基因敲减组(sh-IL-17A组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+过表达质粒阴性对照组(Vector组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+IL-17A过表达质粒组(IL-17AOE组),进行相应药物培养后,检测各组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A表达量的变化。结果 TGF-β1处理组中人胚肺成纤维细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较空白对照组明显增多(P<0.05);含药血清组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较TGF-β1处理组明显较少,而自噬小体的数量较TGF-β1处理组明显增多;sh-IL-17A组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较sh-NC组明显较少,而自噬小体的数量较sh-NC组明显增多;IL-17AOE组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A mRNA等各项指标较Vector组明显增多,而自噬小体的数量较Vector组明显减少。结论 补肾活血方可以对MRC-5细胞中的胶原显著降解。这一作用与抑制IL-17A介导的通路,激活细胞自噬,进一步降解胶原蛋白有关。

摘要： 目的 从细胞水平观察线粒体融合蛋白2(Mfn2)对内毒素(LPS)致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化形成的影响.方法 LPS以浓度梯度及时间梯度作用于人胚肺成纤维细胞(HELF),检测细胞内胶原蛋白表达情况,建立ARDS细胞模型;以复制缺陷型腺病毒作为载体,将Mfn2蛋白转移到HELF中,通过Western blot检测HELF中Mfn2蛋白水平,并运用MTT观察HELF增殖情况,考马斯亮蓝法测定细胞内总蛋白、Sircol胶原测定试剂盒测定胶原蛋白含量.结果 LPS浓度为0.5、1、5、10μg/mL刺激HELF 24 h,细胞内胶原蛋白水平分别为(70.97±1.03)、(71.31±0.82)、(76.50±1.31)、(76.84±1.44)μg/mg,与对照组(69.08±2.48)μg/mg相比较差异有统计学意义(P值分别为0.028、0.011、0.000、0.000),且在LPS 5μg/mL时作用显著;LPS(5μg/mL)处理HELF 6、12、24、48 h,细胞内胶原蛋白水平分别为(70.67±0.96)、(73.39±0.80)、(76.01±0.59)、(76.91±0.79)μg/mg,与对照组(69.66±0.99)μg/mg比较差异有统计学意义(P值分别为0.031、0.000、0.000、0.000),并且在24 h时作用明显;LPS以浓度及时间依赖性诱导HELF胶原蛋白的表达,建立ARDS细胞模型适宜的条件为5μg/mL LPS刺激HELF 24 h;同时发现LPS组较对照组Mfn2蛋白表达明显下调(P=0.000),转染Adv-Mfn2后,LPS+Adv-Mfn2组较LPS组Mfn2蛋白表达明显上调(P=0.000);与LPS组相比较,LPS+Adv-Mfn2组HELF 12、24、48 h细胞增殖率(0.93±0.06、1.48±0.03、1.76±0.01)明显降低(P<0.05),且胶原蛋白水平(72.12±0.30)、(73.21±0.26)、(73.46±0.25)μg/mg明显下降(P<0.05).结论 过表达Mfn2能减轻内毒素诱导的肺成纤维细胞增殖并减少胶原产生.

摘要： 目的 探讨过表达线粒体融合蛋白2(Mfn2)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化的抑制作用及其机制.方法 离体培养人胚肺成纤维细胞(HELF),待细胞生长贴壁率达80％以上进行消化传代,选取状态良好的细胞进行实验.给予5?mg/L脂多糖(LPS)刺激制备ARDS细胞模型(LPS组);并将75?mol/L携带线粒体融合蛋白2腺病毒载体(Adv-Mfn2)转染到HELF中(Adv-Mfn2+LPS组);同时设空白对照组(完全培养基培养)和空载腺病毒载体(Adv-vector)+LPS组作为对照.采用磺基罗丹明B(SRB)法观察各组细胞培养0、12、24、36、48?h的增殖情况;Hoechst?33342染色后,共聚焦显微镜下观察细胞形态学改变;采用蛋白质免疫印迹试验(Western?blotting)检测抗凋亡基因Bcl-2和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Bcl-2和caspase-3的基因表达.结果 经LPS刺激12～48?h,?LPS组细胞增殖率随时间延长而逐渐增加,而且明显高于空白对照组〔12?h:(10.75±1.51)％比(0.73±1.22)％,24?h:(20.09±1.71)％ 比(1.15±1.12)％,36?h:(20.58±1.55)％ 比(1.20±1.12)％,48?h:(21.30±1.51)％ 比(1.23±1.10)％,均P<0.01〕;LPS组与Adv-vector+LPS组各时间点细胞增殖率比较差异则均无统计学意义;而Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2后12、24、36、48?h的细胞增殖率分别为(8.93±1.14)％、(10.52±1.24)％、(10.72±1.30)％、(10.91±1.20)％,均较LPS组明显降低(均P<0.05).共聚焦显微镜下显示,空白对照组细胞核大小不一,部分细胞核碎裂或核固缩,形成凋亡小体;LPS组和Adv-vector+LPS组细胞核呈圆形或椭圆形,大小均匀,仅出现个别凋亡细胞;而Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2后,凋亡细胞较LPS组增多.Western?blotting和RT-qPCR检测结果显示,给予LPS刺激后,LPS组Bcl-2表达较空白对照组明显上调〔Bcl-2蛋白(Bcl-2/GAPDH):?0.68±0.01比0.29±0.01,Bcl-2?mRNA(2-ΔΔCT):2.23±0.34比1.00±0.00,均P<0.01〕,而caspase-3的表达较空白对照组明显下调〔caspase-3蛋白(caspase-3/GAPDH):0.37±0.02比0.66±0.02,caspase-3?mRNA(2-ΔΔCT):0.31±0.05比1.00±0.00,均P<0.01〕;与LPS组比较,Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2蛋白后,Bcl-2表达明显下调〔Bcl-2蛋白(Bcl-2/GAPDH):0.46±0.01比0.68±0.01,Bcl-2?mRNA(2-ΔΔCT):1.45±0.14比2.23±0.34,均P<0.01〕,caspase-3表达明显上调〔caspase-3蛋白(caspase-3/GAPDH):0.54±0.02比0.37±0.02,caspase-3?mRNA(2-ΔΔCT):0.88±0.10比0.31±0.05,均P<0.01〕.结论 Mfn2蛋白参与ARDS肺纤维化,可能与线粒体介导的抑制细胞增殖途径有关.

摘要： 目的探讨过表达线粒体融合蛋白2(Mfn2)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化的抑制作用及其机制。方法离体培养人胚肺成纤维细胞(HELF),待细胞生长贴壁率达80%以上进行消化传代,选取状态良好的细胞进行实验。给予5 mg/L脂多糖(LPS)刺激制备ARDS细胞模型(LPS组);并将75 mol/L携带线粒体融合蛋白2腺病毒载体(Adv-Mfn2)转染到HELF中(Adv-Mfn2+LPS组);同时设空白对照组(完全培养基培养)和空载腺病毒载体(Adv-vector)+LPS组作为对照。采用磺基罗丹明B(SRB)法观察各组细胞培养0、12、24、36、48 h的增殖情况;Hoechst 33342染色后,共聚焦显微镜下观察细胞形态学改变;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测抗凋亡基因Bcl-2和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Bcl-2和caspase-3的基因表达。结果经LPS刺激12~48 h,LPS组细胞增殖率随时间延长而逐渐增加,而且明显高于空白对照组〔12 h:(10.75±1.51)%比(0.73±1.22)%,24 h:(20.09±1.71)%比(1.15±1.12)%,36 h:(20.58±1.55)%比(1.20±1.12)%,48 h:(21.30±1.51)%比(1.23±1.10)%,均P<0.01〕;LPS组与Adv-vector+LPS组各时间点细胞增殖率比较差异则均无统计学意义;而Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2后12、24、36、48 h的细胞增殖率分别为(8.93±1.14)%、(10.52±1.24)%、(10.72±1.30)%、(10.91±1.20)%,均较LPS组明显降低(均P<0.05)。共聚焦显微镜下显示,空白对照组细胞核大小不一,部分细胞核碎裂或核固缩,形成凋亡小体;LPS组和Adv-vector+LPS组细胞核呈圆形或椭圆形,大小均匀,仅出现个别凋亡细胞;而Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2后,凋亡细胞较LPS组增多。Western blotting和RT-qPCR检测结果显示,给予LPS刺激后,LPS组Bcl-2表达较空白对照组明显上调〔Bcl-2蛋白(Bcl-2/GAPDH):0.68±0.01比0.29±0.01,Bcl-2 mRNA(2-ΔΔCT):2.23±0.34比1.00±0.00,均P<0.01〕,而caspase-3的表达较空白对照组明显下调〔caspase-3蛋白(caspase-3/GAPDH):0.37±0.02比0.66±0.02,caspase-3 mRNA(2-ΔΔCT):0.31±0.05比1.00±0.00,均P<0.01〕;与LPS组比较,Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2蛋白后,Bcl-2表达明显下调〔Bcl-2蛋白(Bcl-2/GAPDH):0.46±0.01比0.68±0.01,Bcl-2 mRNA(2-ΔΔCT):1.45±0.14比2.23±0.34,均P<0.01〕,caspase-3表达明显上调〔caspase-3蛋白(caspase-3/GAPDH):0.54±0.02比0.37±0.02,caspase-3 mRNA(2-ΔΔCT):0.88±0.10比0.31±0.05,均P<0.01〕。结论Mfn2蛋白参与ARDS肺纤维化,可能与线粒体介导的抑制细胞增殖途径有关。

摘要： 目的 探讨黄芩苷修复细胞损伤的作用及相关分子机制.方法 首先采用10 ng·mL-1的肿瘤坏死因子(TNF-α)连续刺激体外培养的人胚肺成纤维细胞7 d,再用100μg·mL-1黄芩苷干预作用72 h,经β-半乳糖苷酶染色试剂染色后,通过倒置显微镜观察并评判细胞损伤情况及黄芩苷修复损伤效果;采用RT-qPCR法检测黄芩苷对TNF-α诱导的MCR-5细胞miR-22表达的影响;采用Western blot技术测定黄芩苷对TNF-α诱导的MCR-5细胞SIRT1及CDK6蛋白表达的影响.结果 β-半乳糖苷酶活性检测结果显示,TNF-α诱导MCR-5细胞损伤率为65.2％,黄芩苷可明显修复MCR-5细胞的损伤,损伤率为52.4％;黄芩苷100μg·mL-1浓度可有效抑制损伤的MCR-5细胞miR-22的表达,促进SIRT1及CDK6表达(P均<0.05).结论 黄芩苷具有修复细胞损伤的作用,其作用可能与下调miR-22表达、增强SIRT1-CDK6路径的信号转导相关.

摘要： 目的:探讨不同浓度的百草枯(PQ)诱导人胚肺成纤维细胞纤维化(MRC-5)构建细胞纤维化模型.方法:运用CCK-8 (cellcountingkit-8)法检测不同浓度的PQ对MRC-5细胞的毒性,以测得的最高不致死给药浓度的PQ诱导的MRC-5细胞模型,进而通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测细胞纤维化指标的mRNA及蛋白质表达水平变化.结果:50 μg/ml PQ可成功诱导MRC-5细胞发生纤维化,且电镜下细胞成纤维化及细胞内α-平滑肌肌动蛋白的mRNA表达水平均显著升高.结论:PQ诱导MRC-5细胞纤维化的表型,为后续实验研究提供基础.

摘要： 目的:探讨不同浓度胺碘酮对人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖与氧化应激水平的影响.方法:HELF细胞体外培养分为对照组与胺碘酮组,对照组为单纯HELF细胞培养,胺碘酮组在对照组基础上分别加入终浓度为1、3、6μg/ml的胺碘酮溶液,各组体外培养24h,CCK8检测细胞增殖活性,荧光酶标仪检测细胞活性氧(ROS)水平,酶生物法检测丙二醛(MDA)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果:不同浓度胺碘酮组(1、3、6μg/ml)的细胞增殖活性OD值分别为(1.11±0.10、1.28±0.03、1.48±0.06)、MDA含量为(2.05±0.19、2.51±0.17、3.47±0.14)nmol/mg、SOD活性分别为(21.27±0.97、18.05±1.06、13.53±0.98)U/mg,均较对照组(0.77±0.10)、(1.33±0.19)nmol/mg、(24.27±0.83)U/mg明显升高,差异有统计学意义(P0.05),胺碘酮组(3、6μg/ml)细胞内ROS水平分别为(5365±411、6675±246),较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:一定浓度范围内胺碘酮可促使HELF细胞增殖,加重细胞氧化应激反应,促进肺纤维化.

摘要： 目的 基于NOTCH信号通路探讨FIZZ1对人胚肺成纤维细胞(HELF)转分化为肌成纤维细胞(MFb)的影响.方法 1)HELF培养与传代后分成5组,加入不同浓度的FIZZ1 (0.25ug/mL,0.5 ug/mL,1 ug/mL,2ug/mL),采用CCK8实验检测细胞增殖活性.2)用不同浓度DAPT(0.25umoL/L,0.5umoL/L)处理4小时,再加入1 ug/mL FIZZ1处理24小时,用CCK8法检测细胞增殖活性确定DAPT的最佳实验浓度.3)HELF分成3组:对照组(无血清培养基4h+ 2％ PBS处理24h)、模型组(无血清培养基4h+1ug/mLFIZZ1处理24h)、DAPT组(含0.5umol/L DAPT的无血清培养基4h+1ug/mL FIZZ1处理24h),RT-PCR检测HELF中a-SMA、NOTCH的mRNA表达.结果 1)FIZZ1刺激HELF后,与空白组相比,细胞核质比缩小,变成长梭形,数量增多.2)CKK8实验结果显示1ug/mL FIZZ1组增值率(OD值)最高(P＜0.05).用0.5umoL/L浓度DAPT处理后细胞增殖率下降最为显著.3)RT-PCR实验显示,用1ug/mLFIZZ1刺激HELF后,与对照组相比,a-SMA及NOTCH1的mRNA表达显著增高(P＜0.05),0.5umoL/L浓度DAPT处理后其两者表达显著降低.结论 FIZZ1可能通过NOTCH信号通路的激活促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化增殖,导致a-SMA分泌增多,加重肺间质纤维化的发生发展.

摘要： 目的:石英和苯并芘已被列为致癌物质.本文旨在研究MAPK和AP-1信号转导通路在调节石英和苯并芘诱导的恶性转化的人胚肺成纤维细胞中cyclin D1和CDK4表达以及细胞周期改变方面的差异. 方法:采用Western blot(WB)法检测石英、苯并芘诱导的恶性转化人胚肺成纤维细胞中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)各亚家族(ERK、p38和JNK)表达的变化情况;以及cyclinD1和CDK4(cyclin dependent kinase)表达变化情况. 结果:与空白对照组比较,石英诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化组P-ERK、P-JNK表达均升高(P＜0.01);CDK4、P-p38表达下降(P＜0.01,P＜0.05).苯并芘诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化组与空白对照组比较,P-ERK、P-JNK、CyclinD1表达均升高(P＜0.01,P＜0.01和P＜0.05).苯并芘诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化组与石英诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化组比较,P-ERK、P-JNK表达下降(P＜0.01);P-p38、CyclinD1、CDK4表达升高(P＜0.05,P＜0.05和P＜0.01).与空白对照组比较,石英诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化组P-ERK、P-JNK表达均升高(P＜0.01);P-p38表达下降(P＜0.05).与空白对照组比较,苯并芘诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化组P-ERK、P-JNK、CyclinD1表达均升高(P＜0.01,P＜0.01和P＜0.05);p38表达下降(P＜0.05).苯并芘诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化组与石英诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化组比较,P-ERK、P-JNK表达下降(P＜0.01);P-p38、CDK4、CyclinD1表达升高(P＜0.05). 结论:在石英和苯并芘诱导的恶性转化的人胚肺成纤维细胞中MAPK/AP-1通路存在差异.

摘要： 目的:探讨“清肝化瘀方”含药血清对人巨细胞病毒(HCMV)感染后人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞病变及增殖活性的影响.rn 方法:以体外培养的HELF为靶细胞,将“清肝化瘀方”含药血清和更昔洛韦含药血清分别作用于HCMV AD 169株感染的HELF,采用倒置相差显微镜动态观察细胞病变,MTr检测细胞增殖活性.rn 结果:HCMV感染24h～72h后出现细胞病变(+),即细胞变大,细胞核及细胞质内可见病毒包涵体等,96h～144h未见病变细胞,空白血清对照组所见细胞病变与病毒感染组相似,“清肝化瘀方”含药血清组及更昔洛韦含药血清组168h出现少许细胞病变(+),其余各组及各时段均未见明显细胞病变.同时,HCMV感染24h～72h后,HELF增殖活跃,增殖活性逐渐减低,而“清肝化瘀方”含药血清、更昔洛韦含药血清干预后HELF增殖活性呈升高趋势且均高于病毒组,尤以72h时显著升高(P＜0.05);更昔洛韦含药血清组增殖活性低于“清肝化瘀方”含药血清组,但二者差异无统计学意义(P＞0.05).96h～144h,两组HELF增殖活性均呈降低趋势,且差异无统计学意义(P＞0.05).rn 结论:“清肝化瘀方”、更昔洛韦均可较好的阻遏HCMV感染,通过在不同的HCMV感染状态下促进或抑制HELF增殖发挥抗病毒作用,但二者的差异无统计学意义(P＞0.05).

摘要： 目的:探讨麻杏石甘汤含药血清对3型腺病毒感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子—β1(TGF—β1)、血小板衍生生长因子—BB (PDGF—BB)、肿瘤坏死因子-α(TNF—α)蛋白表达的影响.方法:以3型腺病毒攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备麻杏石甘汤含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组,病毒对照组,利巴韦林组,采用ELISA法检测不同组细胞TGF—β1、PDGF—BB、TNF—α的蛋白表达,并进行比较.结果:病毒对照组较正常细胞组之TGF—β1、PDGF—BB、TNF—α蛋白表达均明显增强(P＜0.0l),含药血清组可显著降低3型腺病毒攻击后细胞TGF—β1、PDGF—BB、TNF—α的蛋白表达(P＜0.01).结论:麻杏石甘汤可下调3型腺病毒感染后TGF—β1、PDGF—BB、TNF—α的蛋白表达,这可能是其治疗病毒性肺炎的作用机制之一。

摘要： 目的：研究不同浓度的过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)氧化损伤,确定最佳H2O2作用浓度的MRC-5细胞模型,检测无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子l(apurinic/apyrimidinic endonuclease/redox factor-1,APE/Ref-1)和APE/Ref-1氧化还原反应活性的重要辅因子--硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)表达变化.rn 方法：将培养的MRC-5细胞随机分组:空白对照组、200, 400, 600,800,1000,1200,1400，1600Euno1/L的H2O2组，分别孵育6,12,24 h;。通过H2O2作用于MRC-5细胞建立细胞氧化损伤模型，使用MTT法检测H2O2对MRC-5细胞的增殖抑制率，待H2O2作用的MRC-5细胞氧化损伤模型建立后，用最佳H202浓度作用于MRC-5细胞，采用免疫荧光检测MRC-5细胞中DNA氧化损伤情况的8-羟脱氧鸟苷(8-OHdG)含量;应用流式细胞术检测MRC-5细胞的凋亡;采用反转录PCR分析TRX和APE/Ref-1 mRNA的表达;Western blot法检测TRX和APE/Ref-1蛋白水平的变化。rn 结果：与对照组相比，不同浓度的H2O2对MRC-5细胞均有损伤作用，细胞增殖的抑制程度随H2O2浓度升高而增强，随时间延长呈递增趋势，当H2O2浓度800μmol/L孵育24h时，细胞存活力下降至47.25%。由此建立800μmol/L的氧化损伤细胞模型。对照组8-OHdG荧光强度为0.54±0.13, H2O2模型组MRC-5的8-OHdG荧光强度为0.98±0.15，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05);对照组凋亡率为1.63%±0.89%，H2O2模型组MRC-5细胞的早期凋亡率为20.70%±2.21%，模型组凋亡细胞增多(P＜0.01);H2O2模型组与对照组比较，TRX和APE/Ref-1mRNA和蛋白表达均降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。rn 结论：H2O2引起MRC-5细胞氧化损伤，APE/Ref-1和TRX表达在H2O2诱导的氧化损伤MRC-5细胞中表达减低。

摘要： 目的:探讨麻杏石甘汤含药血清对3型腺病毒感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB (PDGF-BB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA基因表达的影响.方法:以3型腺病毒分别攻击体外培养的HELF,制备麻杏石甘汤含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组,病毒对照组,利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的mRNA基因表达,进行各组间比较.结果:病毒对照组较正常细胞组之TGFβ1、PDGF-BB、TNF-α mRNA的表达均明显升高(P＜0.01),含药血清组对腺病毒攻击后的TGF-β1、PDGF-BB、TNF-αmRNA表达均有显著降低作用(P＜0.01).结论:麻杏石甘汤可下调TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的mRNA表达,这可能是其治疗病毒性肺炎的作用机制之一.

摘要： 目的：观察石英粉尘诱导的RAW264．7上清液对HELF TrxR和Trx表达的影响。方法：MTT法测定HELF的增殖能力，TBA显色法测定MDA，DCFH-DA探针检测ROS，Real time-qPCR法和Western Blot法分别测定TrxR和Trx的mRNA和蛋白表达。结果：石英粉尘刺激的RAW264．7上清液可以促进HELF增殖，引起HELF内MDA和ROS的含量升高(P<0．05)；HELF的Trx mRNA表达量随着石英浓度的升高呈现下降趋势；低剂量组TrxR mRNA表达量无明显改变，高剂量组的TrxR mRNA和蛋白表达则均明显下降(P<0．05)。结论：石英粉尘可能通过下调Trx系统表达Trx和TrxR mRNA，导致HELF内氧化产物ROS和MDA堆积，从而加重HELF的氧化损伤。

摘要： 探讨黄芪总黄酮(TFA)对H2O2诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)衰老的影响,观察MRC-5细胞活力、SA-β-gal活性,并以细胞p53、p21、cyclinD1、CDK4的基因表达水平说明黄芪总黄酮对抗H2O2诱导细胞衰老作用的机制。指出，黄芪总黄酮可拮抗H2O2诱导的MRC-5细胞衰老作用，其作用可通过减低MRC-5细胞p53、p21、cyclinD1的基因表达水平、上调CKD4的表达，而发挥抗H2O2诱导MRC-5细胞衰老的作用，TFA的作用与其对p21/Rb途径的调节有关。

摘要： [目的]研究苯醌(1,4-BQ)对人胚肺成纤维细胞(HELF)的凋亡效应和遗传毒性作用。[方法]用终浓度为10、20、40、60μmol/L的1,4-BQ溶液染毒HELF细胞24h,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测1,4-BQ对HELF细胞相对增殖率的影响,用Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡,用单细胞凝胶电泳实验(SCEG)检测DNA损伤,用微核试验(MNT)检测染色体损伤。[结果]以10、20、40、60μmol/L的1,4-BQ溶液染毒HELF细胞24h,染毒组的细胞相对增殖率明显低于对照组(t test,P<0.05),且增殖率随着染毒浓度的增加而下降(γ1,4-BQ concentration-RCR=0.989,P<0.01);染毒浓度为20、40、60μmol/L的暴露组,与对照组相比细胞凋亡效应显著(t test,P<0.05),且细胞凋亡率随着染毒浓度的增加而增加(γ1,4-BQ concentration-Cell apoptosis rate=0.987,P<0.01);各染毒组拖尾细胞率、尾DNA含量、OT尾距、尾长及细胞微核率与对照组相比明显升高,其中DNA损伤效应呈现明显的剂量-效应关系(γ1,4-BQ concentration-comet rate=0.941,γ1.4-BQ concentration-Tail DNA=0.984,γ1,4-BQ concentration-Oliver Tail Moment=0.993,γ1,4-BQ concentration-Tail Length=0.999,P<0.01),微核率在10～40 μmol/L剂量范围内随着染毒浓度的增加而增加(γ1,4-BQ concentration-MN rate=0.961,P<0.01),但40与60μmol/L染毒组的微核率没有显著性差异。[结论]苯醌可以引起HELF细胞凋亡,并有明显的遗传毒性效应。

摘要： 目的：探讨磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)DNA双链断裂修复中的作用。rn 方法：200μg/ml的石英刺激HELF和用显性失活突变体抑制PI3K功能的HELF(DN-△p85)不同时间。免疫印迹法检测磷酸化H2AX(γ H2AX)的水平以及DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)的组成成分Ku70、Ku8和DNAPKcs的蛋白水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析。中性彗星实验检测DNA双链断裂损伤,用彗尾DNA百分含量值观察DNA双链断裂损伤程度变化,并计算DNA修复能力。rn 结果：γH2AX的水平随石英刺激时间延长有增高趋势.DN-△p85与HELF相比,石英诱导的γH2AX水平,以及Ku70、Ku80蛋白水平增高受到抑制,差异有统计学意义(P＜0.05),而DNA-PKcs水平变化无统计学意义。两个细胞系的彗尾DNA百分含量均在石英刺激12h明显增高(P＜0.05),24h回落。DN-△p85在24h的彗尾DNA百分含量高于HELF(P＜0.05),DNA修复能力由75.74％下降为49.64％。rn 结论：石英可诱导DNA双链断裂损伤,PI3K与DNA损伤修复有关,通过调节Ku70/80水平,促进石英诱导的DNA双链断裂损伤的修复。

摘要： 目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在二甲基胂酸(DMA)所致人胚肺成纤维(HELF)细胞增殖与凋亡中的作用.方法 0、0.5、1.0和1.5 mM DMA处理HELF细胞24、48和72 h后,检测HELF细胞生长、细胞凋亡、JNK磷酸化水平;并用20μM JNK抑制剂SP600125预处理30 min后,再用不同浓度DMA处理HELF细胞48 h,观察上述指标变化情况.结果 DMA对HELF细胞生长产生明显抑制作用和诱导凋亡作用,并均呈现明显剂量-和时间-效应关系;0.5、1.0和1.5 mM DMA处理HELF细胞48 h后,引起JNK磷酸化水平明显增加;SP600125可明显阻滞DMA对HELF细胞生长的抑制和诱导的凋亡作用.结论 JNK信号通路在DMA诱导的HELF细胞增殖与凋亡中发挥重要调控作用.

摘要： 本发明公开了人二倍体成纤维细胞株Walvax-2在制备甲肝疫苗中的应用，人二倍体成纤维细胞株对甲肝病毒易感，采用Walvax-2生产甲肝疫苗，可得到一种抗原纯度高、免疫效果好、安全性高、价格低的人用二倍体细胞甲肝病毒纯化疫苗。

摘要： 本发明涉及一种过氧化氢在诱导鸭胚成纤维细胞建立鸭胚成纤维细胞凋亡模型中的应用，使用终浓度为400μM的过氧化氢处理鸭胚成纤维细胞后，DAPI染色观察到细胞核缩小，扭曲变形，核质聚集于核膜边缘且出现凋亡小体，荧光定量RT‑PCR及Caspase活性检测试剂盒检测到处理后的细胞中凋亡因子Caspase 3、Caspase 9的mRNA水平和蛋白活性均上调，表明该方法能够成功获得鸭胚成纤维细胞凋亡模型，本发明的方法操作容易，成本较低，该方法的建立可帮助研究人员完成鸭胚成纤维细胞凋亡模型的构建，为在鸭胚成纤维细胞上开展凋亡抑制的研究奠定模型基础，具有重要意义。

摘要： 本发明公开了人二倍体成纤维细胞株Walvax-2在制备甲肝疫苗中的应用，人二倍体成纤维细胞株对甲肝病毒易感，采用Walvax-2生产甲肝疫苗，可得到一种抗原纯度高、免疫效果好、安全性高、价格低的人用二倍体细胞甲肝病毒纯化疫苗。

摘要： 本发明提供了一株新的人胚肺二倍体成纤维细胞株Walvax-2，CCTCCC201055，该细胞株对手足口病主要流行病毒株---柯萨奇病毒A组16型COX.A16和肠道病毒71型EV71二株病毒敏感，且病毒产量高。本发明还提供了制备二价手足口病毒灭活疫苗的方法，以及人胚肺二倍体成纤维细胞株在制备手足口病毒灭活疫苗中的应用。用本发明提供人胚肺二倍体成纤维细胞株生产的二价灭活疫苗可有效预防手足口病。

摘要： 本发明涉及纤维蛋白凝胶释放系统技术领域，提供一种用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统，包括纤维蛋白凝胶释放系统及以之为载体加入其中的四种生长因子，所述四种生长因子为血小板源性生长因子-AB、血管内皮生长因子、转化生长因子-β1及表皮生长因子。

摘要： 人胚肺成纤维细胞二倍体细胞株LBHEL(KCTC 0127BP)对水痘带状疱疹病毒(VZV)高度易感。无细胞水痘带状疱疹病毒(VZV)是由下列步骤产生的：(a)在培养容器中培养权利要求1的人胚肺成纤维细胞二倍体细胞株LBHEL(KCTC 0127BP)；(b)用VZV感染培养的LBHEL细胞得到VZV感染的细胞；(c)培养和收获VZV感染的细胞；(d)破碎收获的细胞以获得细胞匀浆；和(e)离心细胞匀浆以获得含有无细胞VZV的上清液。

摘要： 本发明提供保藏号为CGMCC？No.6957的人胚肺成纤维细胞SV-4及其应用，SV-4细胞特征明显，生长旺盛，生命周期长，平均群体倍增水平为68代，且纯净无污染，培养方法简单，对多种病毒具有适应性，尤其对于风疹病毒适应性较强，可应用于风疹病毒疫苗的研发和制备。

摘要： 本发明提供保藏号为CGMCC？No.6956的人胚肺成纤维细胞SV-7在病毒培养中的应用，SV-7细胞特征明显，生长旺盛，生命周期长，平均群体倍增水平为60代，且纯净无污染，培养方法简单，对多种病毒具有适应性，可用于水痘带状疱疹病毒、肠道病毒71型、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇A16病毒、风疹病毒、甲肝病毒、狂犬病病毒、轮状病毒、麻疹病毒的培养，进一步可用于针对上述病毒的疫苗的研发和制备。细胞培养成本低廉，具有良好的经济价值和广阔的应用前景。

摘要： 人胚肺成纤维细胞二倍体细胞株LBHEL(KCTC0127BP)对水痘带状疱疹病毒(VZV)高度易感。无细胞水痘带状疱疹病毒(VZV)是由下列步骤产生的:(a)在培养容器中培养权利要求1的人胚肺成纤维细胞二倍体细胞株LBHEL(KCTC0127BP);(b)用VZV感染培养的LBHEL细胞得到VZV感染的细胞;(c)培养和收获VZV感染的细胞;(d)破碎收获的细胞以获得细胞匀浆;和(e)离心细胞匀浆以获得含有无细胞VZV的上清液。

摘要： 本发明涉及纤维蛋白凝胶释放系统技术领域，提供一种用于促进人胚肺成纤维细胞增殖分化的多种生长因子复合物纤维蛋白凝胶释放系统，包括纤维蛋白凝胶释放系统及以之为载体加入其中的四种生长因子，所述四种生长因子为血小板源性生长因子-AB、血管内皮生长因子、转化生长因子-β1及表皮生长因子。