人牙龈成纤维细胞

摘要： 目的:探讨白藜芦醇(RSV)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)炎症的调控及其与PI3K/AKT信号通路的相关性。方法:空白对照组、RSV组、LPS组、LPS+RSV组,通过CCK-8法评估细胞活力。然后,设置空白对照组、LPS组、LPS+RSV组,通过酶联免疫吸附(ELISA)测定炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;通过Western blot分析PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达水平。最后,设置空白对照组、LPS组、LPS+RSV组、LPS+RSV+LY294002组,ELISA测定炎症因子水平;通过Western blot分析PI3K/AKT信号通路的激活情况。结果:RSV对HGFs无细胞毒性;在LPS诱导的HGFs炎症中,RSV下调IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α水平;RSV可诱导PI3K/AKT信号通路失活;且PI3K/AKT信号通路抑制剂(LY294002)能通过下调IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α表达,进一步增强RSV的抗炎效果。结论:RSV可通过抑制PI3K/AKT信号通路,减轻LPS诱导的HGFs的炎症反应。

摘要： 目的:观察富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)在牙龈缺损修复中对原代细胞生物学行为的影响及组织再生作用。方法:制备PRF膜,扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)和组织病理学观察其超微结构;体外实验采用CCK-8法、Transwell实验检测细胞的增殖、迁移能力;实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测不同时间点软组织愈合标志物基因COL-I、TGF-β的表达水平。体内实验采用HE染色、免疫组化观察不同时间点组织愈合情况,qRT-PCR检测炎症因子IL-6、TNF-α和TGF-β的表达。结果:体外实验表明,PRF能够促进人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)的增殖、创伤后的愈合和迁移(P<0.05);培养7 d时PRF组的COL-I、TGF-β表达高于DMEM组(P<0.05);体内实验表明PRF组愈合效果优于Control组;组织学观察,PRF组炎症细胞浸润较Control组少,PRF组血管新生较Control组多;术后7 d,Control组IL-6、TNF-α表达较PRF组更高,Control组TGF-β表达较PRF组低(P<0.05);VEGF免疫组化结果显示,PRF组的阳性细胞表达早于Control组。结论:PRF能促进牙龈中软组织愈合因子COL-I,TGF-β及生长因子VEGF的表达,减小局部炎症反应,加快组织的愈合。

摘要： 目的比较不同浓度的富血小板纤维蛋白(A-PRF)膜萃取液对人牙龈成纤维细胞(HGF)增殖能力及骨保护素(OPG)表达的影响。方法将健康成人的牙龈依照组织块培养法进行传代,对其来源进行免疫荧光染色鉴定,取浓度0、10%、50%、100%的A-PRF提取液100μl分别加入到人牙龈成纤维细胞培养基内,标记为A组、B组、C组、D组,观察人牙龈成纤维细胞的生长密度与形态;用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测OPG表达水平,并进行组间比较。结果利用组织块贴壁的培养方法培养HGF。在倒置相差显微镜下进行观察,可见HGF呈现梭形或者星形,细胞排列十分规则,呈束状或旋涡状。用免疫荧光染色法鉴别HGF组织的来源,抗角蛋白抗体染色结果无染色呈阴性,抗波形丝蛋白抗体染色呈现阳性,胞浆呈现荧光绿色,HGF的细胞有明显细长的伪足呈长梭形,胞核多呈椭圆形位于细胞的中央,照相记录HGF的细胞形态,证实本实验所培养的细胞为来源于中胚层的纤维母细胞,具有HGF的形态特点。随着A-PRF膜萃取液浓度的增高牙龈成纤维生长密度增加,细胞数量明显增多。HGF在低浓度的生长因子萃取液刺激的条件下,OPG表达水平随着萃取液浓度的增高而不断增加。经不同浓度A-PRF膜萃取液刺激后,A组、B组、C组、D组的OPG表达分别为(2490.69±255.94)、(3336.86±245.41)、(5434.33±256.56)、(6931.46±132.72)pg/ml,四组的OPG表达水平比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论A-PRF膜萃取液能够很好的促进牙龈成纤维细胞的增殖,并且OPG的含量也相应有所增加,更加证实了A-PRF膜在促进牙龈组织愈合及骨组织愈合具有很好的贡献。

摘要： 目的 研究烟草烟雾提取物(CSE)对人牙龈成纤维细胞(HGF)增值的影响。方法 采用组织块法原代培养HGF并鉴定其来源,制备含有不同浓度CSE培养液,采用四唑盐(MTT)比色法测定不同浓度烟草烟雾对HGF增殖的影响。结果 作用24、48、72 h时,空白对照的光密度(OD)值分别为(0.2812±0.0296)、(0.3894±0.0298)、(0.5059±0.0269), 2.5%CSE的OD值分别为(0.1832±0.0342)、(0.2959±0.0214)、(0.3153±0.0219), 5.0%CSE的OD值分别为(0.1379±0.0298)、(0.1423±0.0134)、(0.1586±0.0379), 10.0%CSE的OD值分别为(0.1060±0.0246)、(0.1031±0.0169)、(0.0920±0.0161), 20.0%CSE的OD值分别为(0.0861±0.0142)、(0.0789±0.0190)、(0.0726±0.0159)。空白对照、2.5%CSE、5.0%CSE、10.0%CSE、20.0%CSE的OD值均逐渐降低,且2.5%CSE、5.0%CSE、10.0%CSE、20.0%CSE的OD值均低于空白对照,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 烟草烟雾可抑制HGF的增殖,并随着培养液浓度的增大,抑制作用愈来越明显,具有浓度依赖性。

摘要： 目的 明确西格列汀对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGF)炎症反应的影响,并探讨其发挥作用的分子学机制,为未来西格列汀在牙周炎治疗中的应用提供初步的实验依据.方法 收集临床患者健康牙龈组织标本,利用酶消化法分离培养HGF并进行细胞来源鉴定;采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测LPS和西格列汀与HGF共培养24、48 h细胞增殖变化;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测炎性细胞因子白细胞介素(IL)-6、IL-8、趋化因子配体2(CCL2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)的基因表达水平;酶联免疫吸附实验检测细胞培养上清液中IL-6、IL-8和CCL2的蛋白表达水平;应用蛋白免疫印迹法检测核因子-κB(NF-κB)信号通路的激活情况,通过qRT-PCR验证NF-κB通路抑制剂BAY11-7082对LPS诱导的HGF炎症细胞因子基因表达水平的影响.结果 低浓度的西格列汀(0.1、0.25、0.5μmol·L-1)作用24、48 h对HGF的生长无影响,而高浓度西格列汀(5～1000μmol·L-1)明显抑制了细胞增殖.西格列汀浓度依赖性抑制5μg·mL-1 LPS诱导的HGF中IL-6、IL-8、CCL2和SOD2的基因表达水平.此外,西格列汀显著抑制LPS诱导的IL-6、IL-8和CCL2蛋白表达水平.蛋白免疫印迹结果表明:0.5μmol·L-1西格列汀显著性抑制了LPS诱导的NF-κB信号通路激活,qRT-PCR结果表明0.5μmol·L-1西格列汀与5μmol·L-1BAY11-7082均显著抑制了LPS诱导的IL-6、IL-8、CCL2和SOD2的基因表达水平.结论 西格列汀通过阻断NF-κB信号通路的激活来抑制LPS诱导的HGF炎症反应.

摘要： 目的:探讨牙龈卟啉单胞菌重组牙龈蛋白酶(rRgpB)刺激蛋白酶激活受体(PAR)介导的人牙龈成纤维细胞(HGF)内钙离子浓度([Ca2+]i)的动态变化及细胞内信号转导通路.方法:流式细胞术检测HGF表达的PAR类型,CCK-8法检测细胞增殖,以牙龈卟啉单胞菌rRgpB作用于HGF,激光共聚焦显微镜观察HGF内[Ca2+]i的动态变化及PAR-1拮抗剂的阻断作用;蛋白质印迹法检测HGF内c-Jun氨基末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)、p65蛋白水平的变化.结果:HGF表达PAR-1和PAR-3,且rRgpB可促进HGF生长.细胞受到rRgpB作用后能激发瞬时增强的[Ca2+]i荧光信号,并且这种作用能够被PAR-1拮抗剂完全阻断;与空白对照组比较,rRgpB诱导细胞6、12h后,JNK、ERK1/2、p65磷酸化蛋白表达均显著上调(均P＜0.05),但p38MAPK磷酸化蛋白水平未见明显变化(P＞0.05);PAR-1拮抗剂成功抑制了 rRgpB诱导的JNK、ERK1/2、p65磷酸化蛋白表达的上调.结论:rRgpB通过PAR-1诱导HGF内[Ca2+]i增加,并激活细胞内JNK、ERK1/2、核因子κB信号通路.

摘要： 目的 研究慢病毒介导核心结合因子α1(cbfα1)基因感染对人牙龈成纤维细胞(hGFs)成骨特性的影响.方法 构建携带目的基因的慢病毒表达载体pLenti6.3-cbfα1-Ires-EGFP(pL-cbfα1)(实验组),通过酶切、测序验证其构建成功,利用293T细胞包装病毒,并测定病毒浓度,将病毒液感染hGFs,pLenti6.3-Ires-EGFP(pL-E)为空载体组,未被感染的正常hGFs为空白对照组,通过荧光实时定量PCR检测cbfα1的mRNA的表达,通过细胞免疫化学染色检测cbfα1蛋白的表达;通过荧光实时定量PCR检测各组成骨相关基因骨涎蛋白(Bsp)、骨桥蛋白(Opn)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、骨钙蛋白(OC)的表达.结果 慢病毒表达载体能够成功感染人牙龈成纤维细胞,并检测到cbfα1基因mRNA、蛋白的表达;实验组中,BSP、OPN、ColⅠ、OC的表达明显高于对照组和空载体组(P<0.05).结论 外源性基因cbfα1能够在人牙龈成纤维细胞中表达,并促进其向成骨细胞方向转化,为进一步研究该基因及种子细胞在牙周组织再生工程中的作用奠定了基础.

摘要： 目的:探究姜黄素(Cur)对牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)炎症反应及微小RNA-124(miR-124)的影响.方法:将HGFs分为对照(control)组、LPS组(10 mg/L LPS)及LPS+Cur(20、40和80μmol/L)组(10 mg/L LPS+对应剂量Cur).各组处理24 h,CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测上清液中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;RT-qPCR法检测细胞中miR-124的水平;Western blot检测胞浆和胞核中核因子κB(NF-κB)p-p65蛋白水平;激光共聚焦显微镜检测NF-κB p-p65蛋白的入核情况.转染mimic-NC和miR-124 mimic,检测细胞中miR-124及胞浆和胞核中NF-κB p-p65蛋白水平.结果:LPS组细胞活力、miR-124水平和胞浆NF-κB p-p65蛋白水平低于control组(P<0.05),上清液IL-1β和TNF-α水平及胞核NF-κB p-p65蛋白水平高于control组(P<0.05).LPS+Cur(40和80μmol/L)组细胞活力、miR-124水平及胞浆NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组(P<0.05),上清液TNF-α水平和胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组(P<0.05).LPS+80μmol/L Cur组细胞上清液IL-1β水平低于LPS组(P<0.05).miR-124 mimic组细胞miR-124和胞浆中NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组和mimic-NC组(P<0.05),胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组和mimic-NC组(P<0.05).结论:Cur可抑制Pg LPS诱导的HGFs炎症反应,可能是通过上调miR-124进而抑制NF-κB p-p65入核实现的.

摘要： 一种人成纤维细胞无血清培养基，包括基础培养基和无血清培养上清浓缩液，还包括如下组分及其浓度：维生素组合物为5‑100ng/mL，葡多酚为50‑200μg/mL，重组人表皮细胞生长因子为1～50ng/mL，重组人碱性成纤维细胞生长因子为50～200ng/mL，重组人转化生长因子β1为1～50ng/mL，重组血小板衍生生长因子‑C为1～10ng/mL，重组人胰岛素样生长因子‑1浓度为1～10ng/mL，β‑巯基乙醇为50～200μM，人血白蛋白浓度为1～100μg/mL，谷胱甘肽浓度为1‑100μg/mL，黄芪多糖为1‑50μg/mL，透明质酸0.1‑5μg/mL，碳酸氢钠为1.0‑3.7g/L。利用无血清培养基替代传统含动物血清的培养基来培养人成纤维细胞，避免了动物源性成分污染以及异种蛋白引起人体免疫反应等不安全因素。

摘要： 本发明涉及对成纤维细胞激活蛋白(FAP)具有特异性的能够与犬、小鼠、和人FAP交叉反应的抗体、结合多肽、和scFv。

摘要： 一种人成纤维细胞无血清培养基，包括基础培养基和无血清培养上清浓缩液，还包括如下组分及其浓度：维生素组合物为5‑100ng/mL，葡多酚为50‑200μg/mL，重组人表皮细胞生长因子为1～50ng/mL，重组人碱性成纤维细胞生长因子为50～200ng/mL，重组人转化生长因子β1为1～50ng/mL，重组血小板衍生生长因子‑C为1～10ng/mL，重组人胰岛素样生长因子‑1浓度为1～10ng/mL，β‑巯基乙醇为50～200μM，人血白蛋白浓度为1～100μg/mL，谷胱甘肽浓度为1‑100μg/mL，黄芪多糖为1‑50μg/mL，透明质酸0.1‑5μg/mL，碳酸氢钠为1.0‑3.7g/L。利用无血清培养基替代传统含动物血清的培养基来培养人成纤维细胞，避免了动物源性成分污染以及异种蛋白引起人体免疫反应等不安全因素。

摘要： 本发明公开了一种使用电磁射线治疗各种皮肤病的方法。尤其优选窄带、多色电磁射线发射器，该发射器的主发射波长对应于被对准治疗的哺乳动物组织的峰值吸收波长。还公开了一种局部成分，用于对被对准的组织进行预处理以改变该组织的峰值吸收波长。

摘要： 本发明公开了一种使用电磁射线治疗各种皮肤病的方法。尤其优选窄带、多色电磁射线发射器，该发射器的主发射波长对应于被对准治疗的哺乳动物组织的峰值吸收波长。还公开了一种局部成分，用于对被对准的组织进行预处理以改变该组织的峰值吸收波长。

摘要： 提供以新的作用机制为指标的成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选方法。通过以神经激活作为指标，能够进行成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选。

摘要： 本发明提供了一种成纤维细胞转化培养基及其应用、成纤维细胞的制备方法，涉及生物技术的技术领域。该成纤维细胞转化培养基中含有血小板活性因子(PRP)，用于诱导脐带间充质干细胞向成纤维细胞转化，可以使脐带间充质干细胞更好的向成纤维细胞转化，缓解了现有技术中存在的外源成纤维细胞获取困难的技术问题。

摘要： 提供制备CD106阳性和/或CD90阳性成纤维细胞的方法。此外，提供G‑CSF阳性成纤维细胞群。一种制备CD106阳性和/或CD90阳性成纤维细胞的方法，所述方法包括在选自于由TNF‑α和IL‑4组成的组中的一种以上的存在下培养成纤维细胞以使CD106阳性和/或CD90阳性成纤维细胞增加的步骤。

摘要： 本发明涉及一种成纤维细胞的培养基及利用其培养成纤维细胞的方法，包括基础培养基、NH

摘要： 本发明提供了一种诱导成纤维细胞分泌抗菌肽的诱导培养基和方法、成纤维细胞及应用，涉及细胞工程领域。该诱导培养基包含基础培养基、血小板裂解液和TGF‑β信号通路抑制剂。该诱导培养基能够激活皮肤成纤维细胞的脂肪分化潜能并在脂肪分化的过程中分泌抗菌肽。使用该诱导培养基诱导成纤维细胞分泌抗菌肽，操作简单，可操控性强，缓解了现有技术中存在的缺乏一种获得能够体外分泌抗菌肽的成纤维细胞的问题。