黄色短杆菌

摘要： 以黄色短杆菌SGr和DONr抗性高产L-谷氨酰胺BF.366作为生产菌株,将菌种斜面培养基、摇瓶种子培养基以及种子罐培养基的pH从原先的pH 7.0调高至pH 7.6(均为灭菌前pH,下同),16 L发酵罐平均产胺5.94％,周期42 h,糖转化率36％.与原先培养基pH 7.0时的16 L发酵罐平均产胺5.11％相比较,提高了16％以上.

摘要： 为探究新型离子液体在微生物发酵方面的作用,以黄色短杆菌XV0505为研究对象,选取了一种新型离子液体,研究了其对L-缬氨酸发酵的影响.通过摇瓶发酵,优化了离子液体添加的体积分数和添加时机,确定了最优组合为发酵16h添加0.1％ 离子液体,其L-缬氨酸产量为28.8g/L,在分批补料发酵中进一步研究了添加离子液体对XV0505生长、耗糖速率和产酸的影响.结果表明:添加离子液体可以促进XV0505生长,最大耗糖速率提升了7.7％,L-缬氨酸最终产量为73.0 g/L,提高了10.4％,糖酸转化率提高了5.5％.

摘要： 生物素作为微生物的生长因子,对生长速率、细胞膜通透性、代谢产物的生成等方面具有重要作用.为提高黄色短杆菌产L-亮氨酸产量,降低副产物生成,在30 L发酵罐水平研究了在培养基中添加20、50、80、120μg/L四种不同质量浓度生物素,对黄色短杆菌产L-亮氨酸的影响.结果 表明:培养基中添加50 μg/L生物素,黄色短杆菌发酵44 h,L-亮氨酸的产量最高,达到60 g/L,糖酸转化率为22％,副产物L-丙氨酸的质量浓度为8 g/L.在最适生物素浓度下,发酵36 h后,采用膜偶联间歇透析发酵工艺,发酵周期延长至56 h,L-亮氨酸的糖酸转化率为25％,较普通发酵工艺约提高13.6％,副产物L-丙氨酸的浓度降低约71.3％,L-亮氨酸的总产量提高了16.7％.研究结果对提高糖利用率、降低副产物、提高生产效率等方面具有重要意义.

摘要： 对黄色短杆菌突变株BM2610生产L-异亮氨酸的摇瓶发酵条件进行了研究.单因素优化了菌株BM2610的发酵培养基与培养条件,确定了发酵培养基的最佳碳氮源、最适起始pH、装液量及接种量等,进一步通过响应面分析方法优化了发酵培养基的组成配比.结果在优化条件下,BM2610摇瓶发酵平均积累L-异亮氨酸16.11 g·L^(-1),比未优化前提高了126.3%.

摘要： 以黄色短杆菌MH-1000为出发菌株,使用PCR技术克隆ilvBN与ilvC基因,对ilvBN进行定点突变,获得解除L-缬氨酸对乙酰羟酸合酶反馈抑制突变型基因ilvBN′.对基因ilvC进行点突变,获得乙酰羟酸变位酶突变基因ilvC′.通过重叠延伸PCR方法,将基因片段ilvBN′和ilvC′拼接为ilvBN′C′,进而连接至穿梭载体pXMJ19获得重组质粒pXMJ19-ilvBN′C′.该重组质粒转化至出发菌株获得工程菌株MH-1032.50L分批补料发酵结果显示:MH-1000发酵72hL-缬氨酸质量浓度为35.2g/L,MH-1032发酵72 h L-缬氨酸质量浓度为38.4 g/L,增长9.1%,糖酸转化率从21.7%提高到25.8%.

摘要： 对黄色短杆菌在发酵罐中产苏氨酸的发酵工艺进行研究.通过单因素试验确定了培养时间、温度、pH和接种量的最优条件.在单因素试验的基础上,利用正交试验确定发酵最优条件.结果证明:在最优试验条件下(温度30°C,pH 7,接种量10％),L-苏氨酸产率为12.14％.

摘要： At the liquid culture conditions, the fermentation medium of GC 1325, the high yielding of L-arginine strain mutagenized form brevibacterium flavum optimized using single factor test. Different concentrations of carbon sources, nitrogen sources, inorganic salts, and thiamine effect on the production of L-arginine were studied. The initial concentration of carbon sources , nitrogen sources and additional way were confirmed. The experimental results show that the optimal fermentation medium for GC 1325:glucose 100 g/L, (NH4)2SO4 25 g/L,KH2PO4 1.2 g/L,MgSO4·7H2O 0.6 g/L, biotin 100μg/L;Glucose (50 g/L) fed once at 24 h and 25 % aqueous ammonia fed continuously to maintain the (NH4)2SO4 concentration was 25 g/L in the fermentation process. At this optimization of culture conditions, the maximum yield of L-arginine was 37.8 g/L, which was increased by 58.8%.%在液体培养条件下，采用单因素试验法，考察了发酵培养基中不同浓度的碳源、氮源、无机盐和生物素对实验室筛选获得的黄色短杆菌L-Arg高产突变株GC 1325产酸的影响，确定了碳源和氮源的初始浓度和补加方式。实验结果表明，GC 1325发酵的最优培养基为：葡萄糖100 g/L，（NH4）2SO425 g/L、KH2PO41.2 g/L、MgSO4·7H2O 0.6 g/L、生物素100μg/L；发酵过程中24 h后一次流加50 g/L葡萄糖维持碳源；连续流加25%的氨水维持（NH4）2SO4浓度在25 g/L水平，在此优化的培养条件下， GC 1325获得的最大的L-Arg产量为37.8 g/L，比优化前提高了58.8%。

摘要： Objective To determine the optimal conditions of protoplast preparation and regeneration of Brevibacterium flavum which produces glutamine highly.Methods we used lysozyme to hydrolyze Brevibacterium flavum which had been pretreated with penicillin and glycine,then researched the effects of cell age,concentration and pretreatment time of penicillin and glycine,enzyme concentration,enzymolysis time,enzymolysis temperature on protoplast preparation and regeneration.Results The optimal conditions of protoplast preparation and regeneration were as follows:pretreating Brevibacteriumflavum at the early time of exponential phase,the optimum concentration of penicillin of 0.4 u/mL,2 ％ glycine,preconditioning time of 2 h,enzyme concentration of 1 mg/mL,enzymolysis time of 12 h,enzymolysis temperature of 37 °C.Conclusion Under the optimal conditions,the protoplast formation rate can be 99.71％,the regeneration rate can be 16.52 ％.%目的 研究高产谷氨酰胺的黄色短杆菌原生质体制备和再生的最佳条件.方法 用青霉素和甘氨酸预处理黄色短杆菌后,用溶菌酶酶解,研究菌龄、青霉素和甘氨酸预处理浓度及时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度等条件对原生质体制备和再生的影响.结果 原生质体制备和再生的最佳条件为:预处理处于对数生长早期的黄色短杆菌,青霉素最适浓度0.4 u/mL,甘氨酸浓度2％,预处理时间2h,酶浓度1 mg/mL,酶解时间12h,酶解温度37°C.结论 在最佳条件下原生质体形成率达99.71％,再生率达16.52％.

摘要： 黄色短杆菌(Breviabacterium flavum)是L-缬氨酸生产的重要菌株,但缬氨酸发酵中常出现亮氨酸、异亮氨酸含量超标的问题.本研究敲除编码黄色短杆菌亮氨酸和异亮氨酸合成的关键基因,自主构建得到了工程菌株MH-1000-△ilvA、MH-1000-△leuA和MH-1000-△ilvA△leuA.对这些工程菌株进行摇瓶发酵和50 L罐发酵,结果表明,工程菌株有效地降低了L-缬氨酸发酵液中L-亮氨酸和L-异亮氨酸的含量,对于缬氨酸的高纯度生产具有一定的实际意义.

摘要： 以黄色短杆菌BF420为出发菌株,经紫外线和亚硝基胍复合诱变处理后,单菌落分离筛选到一株营养缺陷型突变菌株BF35(Lys-)。进一步采用氨基酸结构类似物S-2-氨基乙基-L-半胱氨酸(AEC)、α-氨基丁酸(α-AB)进行抗性筛选,获得一株带有遗传标记的L-异亮氨酸高产突变株BF3510(Lys-+AECr+α-ABr)。该菌株在培养基未优化的条件下摇瓶产酸量为6.4g·L-1,比出发菌株增加了83%。

摘要： @@ 谷氨酸化学名为α-氨基戊二酸，它是生物机体内氮代谢的基本氨基酸之一，在代谢上具有十分重要的意义。谷氨酸具有多种生理功能，广泛用于食品，医药及饲料行业。谷氨酸发酵作为典型的代谢控制发酵，是工业微生物发酵工艺与过程控制的典型代表。1957年Kinostlita等人创立微生物发酵法生产谷氨酸，开创了发酵法氨基酸工业化生产的新纪元，使得发酵法生产氨基酸成为工业微生物最重要的研究领域之一。在发酵过程中，适当采用便变温控制会获得较为理想的结果，这方面的研究有较多成功例子。文中探讨了变温控制对黄色短杆菌发酵生产L-谷氨酸的影响，提出了L-谷氨酸的变温控制模式，并在5L自控发酵罐上进行验证。

摘要： 本文根据代谢控制发酵原理,采用均匀设计法考查了发酵培养基中几种主要成分对L-异亮氨酸发酵的影响,通过MATLAB软件获得最佳发酵培养基配比,并研究了各种发酵条件对黄色短杆菌生物合成异亮氨酸的影响,得到最佳发酵条件。

摘要： 以黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)AG77(AHV-r,TAr,SGr)[1]为诱变出发酵菌株,经亚硝基胍(NTG)诱变处理和选育,获得一株能够积累大量L-精氨酸的菌株AN78(AHV-r,TAr,SGe,His-).AN78菌株在20L发酵罐中,以葡萄糖为碳源,以玉米浆、硫酸铵等为氮源的培养基中培养4d,产酸率可达61.1g/l,对糖转化率20.2％,与AG77菌株相比较,分别提高了95％和39.3.发酵液中L-精氮酸的提取收率为71％,精氨酸成品质量符合国家药品标准.

摘要： 应用途径分析方法分析了黄色短杆菌GDK-9由葡萄糖发酵生产L-谷氨酸的途径，确定了L-谷氨酸合成的最佳途径和最大理论产率。通过比较途径分析所获得的反应模型，确定了α-酮戊二酸和柠檬酸是L-谷氨酸合成途径的关键节点。在此基础上改变外界环境因子，强化L-谷氨酸生物合成途径中关键节点柠檬酸的代谢流，减少副产物乳酸的生成，以提高L-谷氨酸产率。实验采用脉冲流加补料方式，控制溶氧浓度在10％左右，生物素亚适量法生产L-谷氨酸产量达到136g/L。

摘要： 本文使用代谢工程的方法,对黄色短杆菌合成L-异亮氨酸的生物过程,进行了代谢途径分析和代谢流分析。研究了L-异亮氨酸在5L罐发酵过程中后期的代谢流分布,结合途径分析提出了黄色短杆菌由葡萄糖合成L-异亮氨酸的最优途径,并计算出L-异亮氨酸取得最大理论转化率时的代谢流分布,研究成果对发酵法生产L-异亮氨酸有重大指导意义。

摘要： 以黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)XVO505为生产菌株，研究了发酵培养基和发酵控制条件对L-缬氨酸的产量和糖酸转化率的影响。应用单因素实验确定发酵的工艺条件，利用纸层析-色班洗脱比色法测定发酵液中L-缬氨酸含量。在最优发酵条件下，通过10L罐流加发酵72h，产酸可达53.4g/L，糖酸转化率为26.7%，分别比补料分批发酵提高11.9%和3.5%。

摘要： 研究了能积累L-亮氨酸的黄色短杆菌TL0412的菌体生长规律，并讨论了葡萄糖、玉米浆以及蛋氨酸等几个主要的营养物质对其积累L-亮氨酸的影响，确定了较优的发酵条件，种龄36h，接种量为10%，在此条件下72h摇瓶产酸可达19.4%。在上述基础上，研究了不同温度、溶氧、pH值对菌株TL0412积累L-亮氨酸的影响，采用10L罐实验64h可积累29.47%亮氨酸。

摘要： 本文论述了用黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)T1为出发菌株,根据代谢控制发酵原理,利用紫外线、硫酸二乙酯进行诱变,定向选育出具有寡霉素抗性、谷氨酸氧肟酸盐抗性的温度敏感突变株TM106。然后,以温度敏感突变株TM106和产酸率高(10.5％以上)的天津短杆菌TG961为亲株,通过原生质体融合技术,成功地选育出了产酸率高的融合子CN1021,并且该菌株系温度敏感型菌株,可用于谷氨酸强制发酵。在摇瓶条件下,产酸达13.6g/dl;在6m3发酵罐上进行中试,产酸达14.6g/dl,转化率达62％。

摘要： 本文通过对L-异亮氨酸生产菌TC21的5L罐发酵研究,利用途径分析的方法对L-异亮氨酸的发酵过程进行优化,提出了分阶段控制溶氧的发酵方法。实验证明,通过溶氧分阶段控制发酵生产L-异亮氨酸比溶氧恒定控制方式发酵产率提高了15.77％.实验结果说明环境因素,特别是溶氧条件对L-异亮氨酸发酵有很大影响。

摘要： 本文通过对L-异亮氨酸生产菌TC21的5L罐发酵研究,利用途径分析的方法对L-异亮氨酸的发酵过程进行优化,提出了分阶段控制溶氧的发酵方法。实验证明,通过溶氧分阶段控制发酵生产L-异亮氨酸比溶氧恒定控制方式发酵产率提高了15.77％.实验结果说明环境因素,特别是溶氧条件对L-异亮氨酸发酵有很大影响。

摘要： 本发明涉及在大肠杆菌中高效表达金黄色葡萄球菌截短的SasA(Serine-rich adhesion forplatelets)蛋白的方法。根据GenBank报导的金黄色葡萄球菌SasA基因全长序列(GenBank：BX571856.1)，设计引物扩增金黄色葡萄球菌SasA基因的142-999bp，扩增得到的基因序列如SEQ ID No.1，其编码的蛋白序列如SEQ ID No.2。扩增得到的SasA基因经双酶切后连接入表达载体pET21a(+)中，重组SasA蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性高表达，目的蛋白占碎菌上清总蛋白的约20％。经QFF柱、镍柱纯化后，目的蛋白纯度可达85％以上。通过本发明的方法制备的重组蛋白具有很好的免疫原性，能够诱导小鼠产生高滴度保护性抗体，抵御致死剂量金黄色葡萄球菌引起的小鼠死亡。本发明在金黄色葡萄球菌重组亚单位疫苗的大规模高效制备中具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种产L‑缬氨酸的黄色短杆菌，所述黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)已于2019年07月01日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2019496，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。本发明还涉及一种利用上述黄色短杆菌生产L‑缬氨酸的方法，将所述黄色短杆菌菌株，经过活化培养、种子液培养，所得种子液接入发酵培养基进行发酵培养，所述发酵培养过程是先进行需氧发酵，再进行厌氧发酵。采用本发明保藏的菌种及生产方法进行L‑缬氨酸生产，产量高，糖酸转化率高，且发酵过程用时短，大大提高了生产效率。

摘要： 本发明公开了一株产L‑脯氨酸的黄色短杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。所述黄色短杆菌已于2019年1月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019052，保藏地址为中国武汉武汉大学。本发明的黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)FMME444，表现出积累高水平L‑脯氨酸的能力，其谷氨酸钠耐受能力达70g/L，减少了在发酵过程中因添加谷氨酸钠对细胞产生毒害的影响，并进一步促进谷氨酸向脯氨酸方向转化。该菌发酵生产L‑脯氨酸产量高达100～110g/L，葡萄糖得率高达45％～50％。

摘要： 本发明公开了一株产L‑缬氨酸的黄色短杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。所述黄色短杆菌已于2019年1月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019053，保藏地址为中国武汉武汉大学。本发明的黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)FMME447，表现出积累高水平L‑缬氨酸的能力，并验证其缬氨酸耐受能力达100g/L。该菌发酵生产L‑缬氨酸产量达到80‑90g/L，葡萄糖得率高达25‑30％左右，具有工业实用性价值。

摘要： 本发明公开一种能在大肠杆菌和黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）中穿梭表达的重组质粒转化进入谷氨酸棒杆菌和营养缺陷型黄色短杆菌的快速有效方法。本发明提供的方法包括制备感受态细胞和高温培养转化两个步骤：（1）将营养缺陷型黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）接种至特殊配制的培养基上，使营养缺陷型黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）快速增殖，之后再转接到营养缺乏的培养基上，制备感受态细胞。（2）将待转化的质粒和上述制备的感受态细胞混匀并冰浴，然后恒温培养，将质粒导入到所述待转化的黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）中。本发明提供的方法，能减少黄色短杆菌对穿梭质粒的限制性酶切作用，并能稳定复制和传递，转化效果好，操作简便。

摘要： 本发明公开了一种发酵黄色短杆菌产L‑缬氨酸的方法。本发明将gapA和ilvBNC基因通过表达载体导入黄色短杆菌中，筛选获得高产L‑缬氨酸菌株的黄色短杆菌工程菌；利用该工程菌进行有氧‑厌氧分段发酵，并在厌氧发酵中后期添加VB3以及采用流加葡萄糖的方式，将发酵时间缩短到72h，L‑缬氨酸产率达到了95.00±1.50g/L，转化率达到33％，生产强度为1.32g/L/h，优化了L‑缬氨酸的发酵工艺，极大地提高了菌株的生产力和产酸效率。本发明所得高产L‑缬氨酸菌株，后续改造潜力巨大，且发酵工艺简单易行，成本低廉，适用于工业化生产。

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种产L‑缬氨酸的黄色短杆菌，所述黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)已于2019年07月01日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2019496，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。本发明还涉及一种利用上述黄色短杆菌生产L‑缬氨酸的方法，将所述黄色短杆菌菌株，经过活化培养、种子液培养，所得种子液接入发酵培养基进行发酵培养，所述发酵培养过程是先进行需氧发酵，再进行厌氧发酵。采用本发明保藏的菌种及生产方法进行L‑缬氨酸生产，产量高，糖酸转化率高，且发酵过程用时短，大大提高了生产效率。

摘要： 本发明公开了一株产L‑异亮氨酸的黄色短杆菌重组菌及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明利用基因工程手段强化了黄色短杆菌中乙酰羟基酸合酶、二羟酸还原异构酶和支链氨基酸转氨酶，并异源表达tdcB编码的分解代谢苏氨酸脱水酶，从而构建了一株L‑异亮氨酸高产菌株B.flavum I12/pEC‑XK99E‑ilvBNCE‑tdcB。该重组菌株积累异亮氨酸的产量提高到22.65g/L，比出发菌株提高了25.48％，最大生物量为达到20.95g DCW/L。此发明可将赖氨酸途经碳源转向L‑异亮氨酸，为构建L‑异亮氨酸高产菌株提供崭新的思路。

摘要： 本发明公开了一株产L‑缬氨酸的黄色短杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。所述黄色短杆菌已于2019年1月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019053，保藏地址为中国武汉武汉大学。本发明的黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)FMME447，表现出积累高水平L‑缬氨酸的能力，并验证其缬氨酸耐受能力达100g/L。该菌发酵生产L‑缬氨酸产量达到80‑90g/L，葡萄糖得率高达25‑30％左右，具有工业实用性价值。

摘要： 本发明公开了一株产L‑脯氨酸的黄色短杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。所述黄色短杆菌已于2019年1月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019052，保藏地址为中国武汉武汉大学。本发明的黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)FMME444，表现出积累高水平L‑脯氨酸的能力，其谷氨酸钠耐受能力达70g/L，减少了在发酵过程中因添加谷氨酸钠对细胞产生毒害的影响，并进一步促进谷氨酸向脯氨酸方向转化。该菌发酵生产L‑脯氨酸产量高达100～110g/L，葡萄糖得率高达45％～50％。