鸡胚成纤维细胞

摘要： 传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)是双RNA病毒科的重要代表。IBDV引起的传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是鸡的一种急性、高度接触性、致死性传染病,直接摧毁中枢免疫器官法氏囊和B淋巴细胞,也是鸡的最重要的免疫抑制病,导致养禽业严重的经济损失。IBDV不同毒力毒株显示不同的生物学性状。IBDV超强毒株(Very virulent IBDV,vvIBDV)危害养禽业已经40余年,能引起鸡群的高致死率,不能适应鸡胚成纤维细胞等体外细胞培养。

摘要： 旨在研究硒化修饰提高大蒜多糖的体外抗新城疫病毒(NDV)活性并筛选出体外抗NDV活性较好的硒化大蒜多糖。依次通过水提醇沉法、Sevage法去蛋白得到大蒜多糖(GPS),并采用硝酸-亚硒酸钠法对大蒜多糖进行硒化修饰,得到9个硒化大蒜多糖sGPS_(1)~sGPS_(9)。以鸡胚成纤维细胞(CEF)为作用对象,采用MTT法通过先加硒化大蒜多糖,或先加NDV,或两者同时加入3种方式比较9个硒化大蒜多糖抗NDV侵入、复制、直接抑制NDV的作用,同时设置细胞对照(CC)和病毒对照(VC),并计算病毒抑制率;筛选出活性较好的sGPS_(3)、sGPS_(5)、sGPS_(6)测定其对NDV感染CEF后细胞凋亡、细胞周期的影响以及其对鸡胚的存活数的影响,同时设置GPS对照、VC对照、空白对照(BC)。结果表明,GPS_(5)、sGPS_(6)组的细胞凋亡率、处于S期的细胞百分数显著低于VC组和GPS组(P<0.05);sGPS_(6)组36 h、48 h的细胞凋亡率显著小于sGPS_(3)、GPS_(5)组(P<0.05),处于S期的细胞百分数小于sGPS_(3)、sGPS_(5)组,sGPS_(3)组在36 h、sGPS_(5)组在24 h和36 h、sGPS_(6)组在3个时间点的鸡胚死亡数均显著小于GPS组(P<0.05),sGPS_(6)组在3个时间点的鸡胚死亡数均为最低。综上,硒化修饰能提高大蒜多糖抗NDV的活性,其机制可能与阻止NDV侵入、抑制NDV诱导CEF凋亡有关。其中sGPS_(6)的活性最强,可作为抗NDV的候选药。

摘要： 旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的毒性作用机制,采用MTT法检测细胞活力变化,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活力,ELISA法检测Caspase-3含量,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,荧光显微镜观察细胞活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位变化,RT-qPCR法检测内质网应激(ERs)和细胞凋亡相关基因的mRNA转录水平。结果显示,12.5~50.0μg·mL^(-1) ZEA显著抑制DF-1细胞增殖(P<0.01),且呈时间和剂量依赖性关系。25.0μg·mL^(-1) ZEA处理细胞24 h后,上清液中LDH和Caspase-3含量显著升高(P<0.01);细胞中ROS水平和细胞凋亡数量极显著升高(P<0.01);线粒体膜电位极显著降低(P<0.01)。凋亡相关基因Caspase-3、Bax mRNA转录水平极显著上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);ERs相关基因GRP78、ATF6、ATF4、CHOP、PERK mRNA转录水平极显著上调(P<0.01)。综上表明,ZEA能通过内质网应激途径导致细胞凋亡并对鸡胚成纤维细胞发挥毒性作用。研究结果为深入研究ZEA对鸡细胞的毒性作用和解毒手段奠定基础,对相关禽类疾病治疗具有意义。

摘要： 1病原特征蛋鸡产蛋下降综合症主要是由禽腺病病毒Ⅲ群所引起的,该类病原仅仅只有一种血清,除了能够在鸡胚成纤维细胞上进行繁殖以外,鹅、鸭也同样会感染此病原体。从该病原体的特征来看,对于环境往往还具备着较强的适应力,抗酸碱能力也非常强,并且还具备耐高热的特点。

摘要： 比较鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡成纤维细胞系(DF-1)两种细胞在重组鸡α干扰素(rChIFN-α)生物学活性测定中的应用效果。选择了三个批次的rChIFN-α在CEF和DF-1上进行生物学活性测定,活性测定结果分别为4.19×10^(7) IU/mL、4.19×10^(7) IU/mL、4.19×10^(7) IU/mL和4.19×10^(7) IU/mL、4.19×10^(7) IU/mL、2.10×10^(7) IU/mL。CEF制备繁琐、成本较高,DF-1比CEF更适合于rChIFN-α生物学活性的测定。

摘要： 本研究通过细胞永生化这一过程,建立一个传代稳定、完整的鸡胚成纤维细胞系,为下一步顺利扩增病毒做进一步准备.利用10日龄左右鸡胚分离得到原代鸡胚成纤维细胞,贴壁培养.通过细胞玻片,进行免疫荧光鉴定,在倒置显微镜辅助下检测细胞活性及细胞鉴定.通过转染慢病毒,将慢病毒感染原代鸡胚成纤维细胞,利用嘌呤霉素作用进行细胞筛选,传代稳定后,达到细胞永生化.

摘要： 纳豆激酶(nattokinase,NK)是一种有效的抗血栓药物.基于已构建的纳豆激酶慢病毒表达载体,旨在比较其在鸡输卯管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞中特异性表达的有效性.提取含卵清蛋白启动子(ovalbumin promoter, OV2)和雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)的pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP重组质粒.通过PCR和双酶切进行初步鉴定,经生物公司测序、包装和滴定得转染传代培养的鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞,并采用荧光显微镜和qPCR法检测细胞表达产物.结果 表明,载体pLV-OV2-ERE-NK-2A-EGFP构建成功;且荧光显微镜下,鸡输卵管上皮细胞的绿色荧光多于成纤维细胞;qPCR检测发现NK正常表达.提示成功构建纳豆激酶慢病毒表达载体且在鸡输卯管上皮细胞中正常表达.

摘要： 本试验用半胚法制备鸡胚成纤维细胞,用胰酶对SPF鸡胚进行消化培养,并观察所得细胞的生长情况.在相同条件下设立两个对照组,观察胰酶在细胞制备过程中对试验的影响,并比较不同厂家(Gibco和Difco)生产的胰酶在相同条件下对鸡胚消化情况及所得细胞生长情况的影响.

摘要： To study the proliferation of avian reovirus(ARV)on chicken embryo fibroblasts(DF1),DF1 cells was infected with ARV S1133 strain and serialized continuouly for three passages.The cytopathic effect(CPE)was observed after virus infection,and virus was identified by RT-PCR and the proliferation of the virus was studied by Reed-Meunch method.The results showed that ARV S1133 strain was palpable to DF1 cells and had typical CPE.TCID50was measured at seven time points according to the Reed-Meunch method and plotted as a growth curve,the results revealed that ARV began to proliferate at hour 12,and reached a rapid proliferation during hour 12 to 48 post-infection.The virus titer reached the peak at hour 48,TCID50was 10-8.9/0.1 mL.This study provided a good platform for further study on the pathogenesis of ARV and a theoretical basis for the development of cell-inactivated vaccine of avian reovirus at DF1 cells.%为研究禽呼肠病毒(ARV)在鸡胚成纤维细胞(DF1)上的增殖规律,将 ARV S1133株接种至DF1细胞,连续传代3次后观察细胞病变(CPE),RT-PCR检测病毒核酸.结果显示,ARV S1133株对DF1细胞有很好的亲嗜性,并出现典型的CPE.按照Reed-Meunch方法测量7个时间点的 TCID50,并绘制生长曲线.结果显示,ARV感染DF1细胞后的0 h~12 h为静止期,12 h~48 h为快速增长期,并在48 h达到最大的病毒效价,TCID50为10-8.9/0.1 mL,为进一步研究 ARV的致病机理,以及在 DF1上研制禽呼肠病毒细胞灭活苗提供参考.

摘要： 目的：本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培养不稳定对试验准确性带来的问题. 方法：采用口吸管法收集度过危相期的单个鸡胚成纤维细胞,传代培养形成单克隆细胞系CSC.通过稀释法克隆形成试验确立CEF单克隆最适培养体系,并比较两种方法的克隆形成效率;对单克隆细胞系的基本生物学特性进行了检测,比较摸索Fugene介导的最佳转染体系;利用Edu染色法检测CSC对胚胎干细胞的促增殖能力. 结果：经过传代培养,少数CEF度过危相期并形成连续细胞系,稀释法克隆形成实验结果表明Ham's F12培养基为CEF形成克隆的最适培养基,形成效率为25％±0.006;口吸管法分离能高效分离单细胞,单克隆形成率为32.29％±0.04,显著高于有限稀释法6.95％±0.01,传代建系后其中一株命名为CSC-1-5;CSC-1-5细胞系具有二倍体核型,无致瘤性,增殖能力稳定,且细胞周期G2/M期细胞比率显著高于pCEF.pEGFP-N1转染CSC-1-5效率为51.3％±0.009较pCEF有显著提升且能促进鸡胚胎干细胞的增殖. 结论：度过危相期的CEF可通过单细胞克隆形成能稳定增殖的单克隆细胞系CSC,这种细胞系具有更高的均一度能够用于外源基因的转染和制备饲养层细胞.

摘要： 为筛选在鸡胚胎干细胞(Chicken Embryonic Stem Cells,cESCs)和鸡胚成纤维细胞(Chicken Embryo Fibroblast Cells,CEFs)中差异表达的MicroRNA(miRNA),探讨miRNA在维持cESCs多能性中的作用.分别离体培养cESCs与CEFs,应用miRNA芯片检测这两种细胞的miRNA表达谱,筛选差异表达的miRNA,并采用实时荧光定量PCR进行验证,同时利用生物信息学软件对靶基因进行预测.结果从已知的993条鸡miRNA中,筛选出gga-miR-1777、gga-miR-302d、gga-miR-1607、gga-miR-1599和gga-miR-1576等19条在cESCs中高表达的miRNA,实时荧光定量PCR检测结果显示gga-miR-1777、gga-miR-302d的表达与miRNA芯片结果相符,生物信息学分析结果显示gga-miR-1777、gga-miR-302d的靶基因中包含细胞分化相关的基因.上述结果提示cESCs中高水平表达的miRNA可能通过抑制分化基因的表达来维持cESCs的多能性.

摘要： 本文将近江牡蛎经过超声波-自溶-酶解得到的多肽通过超滤得到6个分子量段的组分:OSP1 (＞300Ku)、OSP2(100～300Ku)、OSP3 (30～100Ku)、OSP4(10～30Ku)、OSP5 (5～10Ku)、OSP6(＜5Ku),分别用DMEM培养液倍比稀释成多肽含量为1000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63mg/100mL等7个浓度,再分别加入鸡胚成纤维细胞(CEF)一起培养,通过MTT法测定6种近江牡蛎多肽组分对鸡胚成纤维细胞(CEF)增殖的影响.结果表明,OSP1和OSP4对CEF的最大安全浓度是500mg/100mL;OSP2、OSP3为125mg/100mL;OSP5为62.5mg/100mL.OSP1和OSP4在15.63～250mg/100mL多肽浓度范围内对CEF增殖有明显促进作用;OSP2、OSP3为15.63～62.5mg/100mL;OSP5为15.63～31.25mg/100mL;OSP6对CEF增殖没有促进作用.

摘要： 目的：探讨甘草酸二钾体外抗MDV的活性及作用机制.方法：在体外以鸡胚成纤维细胞为MDV增殖模型,利用MTT比色法、噬斑减少法通过抗病毒试验、病毒复制抑制试验、直接灭活试验来评价甘草酸二钾的抗病毒效果;并通过细胞凋亡试验解释其抗病毒机制.结果：抗病毒试验结果表明,在安全浓度范围内,甘草酸二钾在体外具有较强的抗MDV的活性,其EC50为893.5±36.99μg/mL,SI＞3.36,最大抑制率达94.4％;在病毒复制抑制试验中,甘草酸二钾可以抑制病毒复制的整个过程;病毒直接灭活试验表明甘草酸二钾可直接杀灭病毒粒子且不呈时间依赖性;细胞凋亡试验结果显示甘草酸二钾能够诱导感染MDV的鸡胚成纤维细胞凋亡.结论：甘草酸二钾在体外具有抗MDV的活性,可以通过诱导感染病毒的鸡胚成纤维细胞凋亡发挥抗病毒作用.

摘要： 通过不同厂家来源的新生牛血清对鸡胚成纤维细胞的生长影响比较试验，阐明了血清作为细胞培养液中的主要营养成分，对细胞生长状态的重要作用，并进一步说明在疫苗生产过程中对主要原辅材料进行筛选的必要性。

摘要： MEQ基因是马立克氏病病毒血清l型特异性基因,为了研究MEQ基因的致瘤机理,本研究构建了MEQ基因的真核表达载体.首先采用TA克隆将MEQ基因片段连接pMD19-T Vector质粒,构建成pMD19-T-meq质粒,然后采用EcoRI、XhoI限制性内切酶双酶切将MEQ基因克隆至pVAX-1真核表达质粒,构建pVAX-1-meq真核表达质粒.提取pVAX-1-meq质粒转染至鸡胚成纤维细胞中,转染后提取贴壁细胞中总RNA,以β-actin作为内参采用real-time PCR检测MEQ基因、错配修复相关基因、p53基因的mRNA的表达情况.结果本试验成功构建出pVAX1-meq真核表达载体,并在鸡胚成纤维细胞中成功表达.MEQ基因转染的鸡胚成纤维细胞中错配修复相关基因(MSH2和MLH1基因)、p53基因的mRNA表达量显著上调.表明MDV感染造成宿主DNA损伤后,MEQ基因影响DNA损伤修复相关基因的表达,干扰宿主对损伤的DNA进行修复,导致MD肿瘤的形成.

摘要： 采用传代细胞系BHK-21细胞、PK-15细胞、ST细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF)测定伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)病毒含量.结果表明,四种细胞测定的结果基本相同,无显著差别.

摘要： 目的:本研究旨在建立快速、灵敏、特异性强的方法以检测宿主细胞中的禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis vrrus,REV),并对其在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的增殖动态规律进行初步研究.rn 方法:本研究针对gag、env以及LTR基因的保守序列设计三对引物,利用重组质粒作为模板,完成三种不同基因的标准曲线绘制,以此建立了SYBR GreenI实时荧光PCR检测方法并利用该方法推算出REV感染后不同时间点的病毒基因拷贝数.rn 结果:所制备的标准品模板在108拷贝/μl-101拷贝/μl范围内与CT值之间呈现良好的线性关系,且最低检出量为101拷贝/μl.实验结果显示,gag、env以及LTR基因的拷贝数均呈现先减少后增多的变化过程.rn 结论:通过实时荧光PCR技术,并与间接免疫荧光方法(IFA)相比较,发现REV在CEF上复制的初始阶段受到抑制,此后病毒大量复制,表现出明显的增长趋势.该研究不仅为REV的诊断技术提供了一种新的方法,同时也为深入研究REV的感染机制和致病机理奠定了基础.

摘要： 为了研究RKIP对新城疫病毒(NDV)复制的影响，从鸡胚成纤维细胞中提取总RNA，采用RT-PCR方法扩增RKIP基因，将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1中，经PCR、双酶切和测序鉴定，采用FuGENEHD法将阳性质粒转染Vero细胞，经G418筛选，有限稀释法获取单克隆细胞株，Western blot检测RKIP的表达。利用Real-time PCR测定病毒感染细胞后培养上清的病毒量。结果表明，成功构建鸡RKIP真核表达质粒；转染Vero细胞后经克隆化培养获得稳定表达鸡RKIP的细胞株Vero-RKIP；感染初期，NDV在Vero-RKIP上表现出了更强的复制能力。

摘要： 目的：本试验旨在探究灵芝多糖(GLP)对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)感染鸡胚成纤维(CEF)细胞的影响.方法：首先测定了GLP对CEF细胞的安全浓度,然后将GLP和IBDV以3种先后顺序分别加入培养24h的CEF细胞单层上,每天观察细胞病变程度,用MTT法测定细胞活性以评价GLP对IBDV感染细胞的影响.结果：结果显示,先加GLP后接种病毒的方式可以在一定程度上降低病毒造成的细胞病变,其余两种方式只有在高浓度才体现作用.结论：试验表明,GLP对IBDV感染CEF细胞的影响主要表现为阻断作用,并且高浓度的GLP也会表现出一定的抑制和直接杀灭的作用.

摘要： 本发明涉及一种过氧化氢在诱导鸭胚成纤维细胞建立鸭胚成纤维细胞凋亡模型中的应用，使用终浓度为400μM的过氧化氢处理鸭胚成纤维细胞后，DAPI染色观察到细胞核缩小，扭曲变形，核质聚集于核膜边缘且出现凋亡小体，荧光定量RT‑PCR及Caspase活性检测试剂盒检测到处理后的细胞中凋亡因子Caspase 3、Caspase 9的mRNA水平和蛋白活性均上调，表明该方法能够成功获得鸭胚成纤维细胞凋亡模型，本发明的方法操作容易，成本较低，该方法的建立可帮助研究人员完成鸭胚成纤维细胞凋亡模型的构建，为在鸭胚成纤维细胞上开展凋亡抑制的研究奠定模型基础，具有重要意义。

摘要： 本发明涉及永生化鸡胚成纤维细胞，包含此类永生化细胞的细胞培养物，包含此类细胞的疫苗，用于在此类细胞上繁殖禽类病毒的方法，以及制备此类细胞和此类疫苗的方法。

摘要： 本发明涉及细胞生物学和免疫学技术，特别涉及生物制品领域免疫佐剂的体外细胞筛选技术，具体涉及鸡胚成纤维细胞在体外筛选CpG寡聚脱氧核苷酸活性分子中的应用。将鸡胚成纤维细胞与CpG寡聚脱氧核苷酸混匀后放入细胞培养箱培养，对CpG寡聚脱氧核苷酸刺激所产生的增殖效果与淋巴细胞具有相同的规律。CEF用于CpG ODN的体外筛选不仅避免了核酸序列细胞毒性的干扰问题，扩大CpG ODN的浓度筛选范围，还正确区分体现了CpG ODN的结构与功能，与淋巴细胞相比，其免疫反应更强，更适合于CpG ODN免疫佐剂的体外筛选。

摘要： 本发明公开了鹅副黏病毒鸡胚成纤维细胞适应株及其应用，属于鹅副黏病毒的分离及应用领域。本发明首先分离了一株鹅副黏病毒鸡胚成纤维细胞适应株DQ03株，其微生物保藏编号是：CGMCC No.9901。本发明进一步公开了一种制备预防鹅副黏病毒灭活疫苗的方法，包括以下步骤：(1)培养鹅副黏病毒鸡胚成纤维细胞适应株DQ03株，收集病毒液；(2)灭活病毒液；(3)离心，取病毒上清液，与佐剂混合，乳化，即得。本发明分离的鹅副黏病毒鸡胚成纤维细胞适应株DQ03株对鸡胚成纤维细胞高度适应，适合细胞培养；免疫原性良好，与胚毒制备的疫苗相比，具有产生抗体效价高并且节约生产成本等优点。

摘要： 一种提高鸡胚成纤维细胞体外诱导重编程为鸡iPS细胞效率的方法，属于生物技术领域。前期研究发现通过OSNL体系可将鸡CEF诱导重编程为iPS，但效率较低，在此基础上，研究体细胞诱导重编程过程中糖酵解代谢发挥的作用并对诱导体系进行进一步的优化。本发明操作简单，切实可行，应用广泛。由于鸡诱导多能干细胞具有发育的全能性，在适当条件下可被诱导分化为多种细胞组织，因此可作为一种新的干细胞来源，也为珍稀动物的保种、转基因动物的生产等研究开辟了新思路。本发明将小分子化合物和细胞代谢联系在一起，将为禽类体细胞诱导重编程研究提供了更多的理论基础和技术支撑，也有利于为家禽细胞和胚胎工程研究提供更多的实验材料。

摘要： 本发明涉及一种规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法。包括以下步骤：(1)挑选鸡胚并进行初步消毒；(2)对鸡胚进行再次消毒；(3)取鸡胚；(4)处理鸡胚；(5)清洗鸡胚；(6)消化鸡胚；(7)组织细胞离心；(8)组织细胞重悬；(9)组织细胞过滤；(10)分装；(11)细胞培养。本发明提供了一种规模化制备鸡胚成纤维细胞的方法，与现有的制备方法相比，本制备方法实现了对鸡胚成纤维细胞的无菌制备、提升规模效率制备以及降低成本制备，实现了低制备成本下的高效、规模化制备，保证了鸡胚成纤维细胞的质量，解决了生物制品规模化生产的瓶颈问题，满足工业化生产对鸡胚成纤维细胞的需要。

摘要： 小分子化合物诱导鸡胚成纤维细胞CEFs成iPSCs的体系建立方法，其特征是，设置不同浓度的小分子化合物组合体系，细胞形态学观察、毒性试验及qRT‑PCR检测相关基因的表达，验证小分子化合物在鸡CEFs诱导重编程中是否适用及其适宜诱导浓度；然后利用剔除法结合qRT‑PCR、间接免疫荧光、细胞流式分析技术、AKP染色、EDU细胞增值技术手段优化诱导体系，建立适宜鸡CEFs重编程诱导体系。本发明解决了器官来源及免疫排斥问题，同时为个体发育及遗传修饰与保存的研究提供了新方法；为后续诱导多能干细胞的使用奠定理论和技术基础，也为其他物种的化学诱导重编程研究提供参考。

摘要： 本发明提供了一种PI3K/Akt信号通路在鸡胚成纤维细胞内对马立克氏病毒增殖的应用及其检测方法，涉及生物信息学技术领域。上述PI3K/Akt信号通路在抑制鸡胚成纤维细胞中马立克氏病病毒增殖的应用证明可以通过抑制PI3K/Akt信号通路，进而抑制马立克氏病毒在鸡胚成纤维细胞内的增殖表达，该应用对进一步揭示鸡的马立克氏病的致病机制以及研发新的针对鸡马立克氏病的抗病毒策略具有积极的意义。同时本发明还优化了适用于检验MDV感染激活PI3K/Akt信号通路的免疫印记实验方法以及检验鸡马立克氏病毒DNA分子水平检测的PCR反应体系和条件。本发明提供的检测方法具有特异性高，灵敏性强和重复性好的特点。

摘要： 一种制备鸡胚成纤维细胞的方法，本发明提供了一种高效制备CEF的方法；用该方法制备的CEF不仅制备过程耗时少，所得细胞数量多，而且细胞状态优，操作简单，制备次日即可用于病毒培养、疫苗制备和对细胞损伤较大的病毒的转染等试验的操作。相比现有技术，采用本发明方法制备CEF仅需20min，每枚鸡胚制备的细胞数量可达1.5×10

摘要： 本发明涉及永生化鸡胚成纤维细胞，包含此类永生化细胞的细胞培养物，包含此类细胞的疫苗，用于在此类细胞上繁殖禽类病毒的方法，以及制备此类细胞和此类疫苗的方法。