鸡传染性贫血病毒

摘要： 拟制备针对鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2蛋白的单克隆抗体(mAb),为CIAV的诊断和病毒生物学特性研究提供有用制剂。以PCR技术扩增CIAV VP2基因并克隆到原核表达载体pET-32a中,经IPTG诱导表达。以原核表达的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术研制并筛选分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的阳性杂交瘤细胞;采用截短表达CIAV VP2基因方法鉴定mAb识别的抗原表位。结果显示:成功获得了1株能稳定分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的杂交瘤细胞株,并命名为CIAV-VP2-4A12;亚类鉴定结果表明,该mAb重链为IgG_(1)型,轻链为kappa链;Western blot结果显示,该mAb可以识别大肠杆菌,Sf9细胞和转染pCAGGS-VP2-Flag的DF1细胞中表达的VP2蛋白。使用原核表达截短蛋白进行表位鉴定,发现该mAb识别抗原表位序列是^(155)KTVRW^(159),序列比对发现该表位在CIAV中高度保守。本研究成功制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性mAb,并精确鉴定了其识别表位,为VP2蛋白功能的研究以及CIAV的诊断方法研发提供了有效工具。

摘要： 鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染鸡引起免疫抑制性疾病,严重危害养禽业。为了构建CIAV Cux-1株的感染性克隆,本试验通过PCR扩增CIAV全基因组序列,与pcDNA3.1载体同源重组,得到重组质粒pcDNA3.1-Cux-1。进一步通过对pcDNA3.1-Cux-1酶切、环化得到CIAV Cux-1环状DNA。将环状DNA电转染导入MSB1细胞并连续传代,用Western blot和间接免疫荧光进行重组病毒的鉴定。结果显示,本试验成功拯救出CIAV重组病毒rCux-1(recombinant Cux-1),重组病毒rCux-1携带有特定的遗传标记,并且与亲本株复制能力和蛋白表达水平基本一致。本试验成功构建的CIAV Cux-1株感染性克隆为进一步研究CIAV的致病机理和研制新型疫苗提供了试验基础。

摘要： 以鸡传染性贫血病毒与大肠杆菌混合感染的诊治为目的,临床分析和调查后获取对应资料,实验室研磨加工后准备使用.给予病料进行检测、鉴定和试验,分别为PCR检测、细菌分离鉴定及药敏试验.结果:在病例接种鸡胚3份资料中,得到尿囊液PCR检测的结果均表现为鸡传染性贫血病毒阳性,细菌分离被判断是大肠杆菌感染.药敏试验结果:经过分离处理的大肠杆菌给予头孢噻呋与大观霉素产生显著敏感特征,对庆大霉素的敏感特征为一般程度,且对阿莫西林等药物表现出耐药特征.结论:本次疫情是鸡传染性贫血病毒及大肠杆菌混合感染造成的.

摘要： 为研究一种可同时检测鸡传染性贫血病毒(CIAV)和鸡细小病毒(ChPV)的双重PCR方法,本试验根据GenBank中CIAV的VP基因和ChPV的NS1基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为219 bp和384 bp的特异性引物,通过对反应条件的优化,特异性和敏感性试验,建立和评价双重PCR检测方法.结果 显示,该方法最佳引物比例为CIAV上下游引物各0.4 μL(20.μmoL/L),ChPV上下游引物各0.6μL(20 μmol/L);最佳退火温度为56.1°C;灵敏度可达到66 fg(CIAV)和78 fg(ChPV);对常见鸡病病原体进行检测,结果全为阴性.结果 表明,本试验所建立的双重PCR方法具有特异、敏感、快速、稳定等优点和优势,可用于同时快速鉴别诊断CIAV和ChPV的混合感染.

摘要： [目的] 对福建省南平市某肉鸡场不明病因造成肉鸡死亡的病原进行确诊.[方法] 通过对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)、腺病毒(Fowl adenovirus,FadV)、鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)、传染性法氏囊病毒(Infectious bursal Disease virus,IBDV)、喉气管炎病毒(Laryngotracheitis virus,LTV)、禽肾炎病毒(Avian nephritis virus,ANV)等病原进行PCR检测,并对扩增片段进行克隆测序,利用生物信息学软件对测序结果进行分析.[结果] PCR检测结果及测序结果显示:鸡细小病毒ChPV、鸡传染性支气管炎病毒IBV、鸡传染性贫血病病毒CIAV为阳性,其余病原检测结果均为阴性.同源性分析结果显示分离株与ChPV的同源性为92.17％～100％,与IBV的同源性为76.9％～84.3％,与CIAV的同源性为91.19％～92.14％;遗传进化树分析结果显示分离到的IBV毒株及CIAV毒株均独处于一个单独的分支,分离到的ChPV毒株与广西参考株亲缘关系较近.[结论] 从南平市某鸡场检测到ChPV、IBV、CIAV等3种病原的共感染病例,分离到的IBV毒株的S1基因及CIAV毒株的VP1基因可能已经发生变异.

摘要： 为了调查近年来鸡传染性贫血病(CIA)在我国发病鸡群中的流行特点、分布及其危害,本研究于2016年1月～2019年9月,从黑龙江、北京、山东等13个省市的381个疑似CIA发病鸡群中采集肝脏样品1 677份,PCR检出鸡传染性贫血病毒(CAV)阳性样品共242份,分布于85个鸡群,阳性样品检出率为14.43％(242/1 677),阳性鸡群率为22.31％(85/381).CAV与鸡马立克氏病病毒、鸡白血病病毒等免疫抑制病病毒混合感染在检测鸡群中普遍存在,占CAV感染总量的52.94％(45/85).将来自山东临沂某CAV阳性鸡场的病鸡肝脏样品处理后接种MDCC-MSB 1细胞,连续传代6次,经PCR及间接免疫荧光鉴定,确定分离到一株CAV细胞适应病毒株,命名为CAV-SD19/4604.对分离株VP1基因测序并与GenBank中19株CAV参考株VP1基因序列比对,显示同源性为95.00％～98.80％,遗传进化树表明CAV-SD 19/4604与多数亚洲病毒株位于同一分支.本研究为CAV感染的研究和疾病防控提供了数据支持.

摘要： 为研究一种可同时检测FAdV-4和CIAV的方法,本研究建立了一种敏感、特异、快速的PCR检测方法。本试验参考GenBank中FAdV-4的Hexon基因和CIAV的VP基因的保守序列,设计筛选了扩增片段大小分别为291 bp和473 bp的特异性引物,通过对反应条件的优化,评估特异性和敏感性试验,成功建立了FAdV-4和CIAV的双重PCR检测方法。结果显示,该方法最佳引物比例为FAdV-4和CIAV上下引物均为0.5μL(20 mol/L);最佳退火温度为60.0°C;灵敏度分别达到64 fg(FAdV-4)和48 fg(CIAV);对常见鸡病病原体进行检测,没有特异性扩增,结果均为阴性。结果表明,特异、敏感、快速、稳定等是本研究所建立方法的优势,可成功运用于同时快速鉴别诊断FAdV-4和CIAV的混合感染.

摘要： 根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒、禽网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒A、C、D亚群参考毒株的序列,设计合成特异性扩增引物及探针,将下游引物进行cy3荧光标记,制备基因芯片;分别提取几种病毒的基因组DNA,进行PCR扩增后与探针进行杂交,荧光检测仪扫描并分析结果.结果表明:制备的芯片能够同时检测鸡传染性贫血病毒、禽网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒A、C、D亚群,具有较高的特异性和灵敏度;为今后在临床应用中快速鉴别诊断鸡传染性贫血病毒、禽网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒A、C、D亚群提供可行性.

摘要： 根据鸡传染性贫血病毒基因组保守区域设计1对扩增片段为180bp的特异性引物,构建PGM—T—CIAV重组质粒,制备阳性标准品,建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验和重复性试验.结果显示,CIAV的CT阈值与标准品浓度在5.33×108拷贝/ul与5.33 ×103拷贝/ul间呈良好的线性关系,相关系数为R2=0.998,斜率为-3.443,产物TM值在86°C左右.该方法与REV、ALV、MDV、IBDV基因组均无交叉反应,敏感性为5.33拷贝/ul,比常规PCR反应高1000倍,批内和批间重复试验变异系数均小于3％.结果表明,建立的CIAV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,可实现对该病的早期诊断以及感染程度的定量分析的检测.

摘要： 本试验旨在研究鸡传染性贫血病毒(CIAV)VPI、VP2基因在昆虫细胞Sf21中的表达及其免疫原性鉴定.将鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因分别克隆到转移载体pFastBacHTA中,构建得到pFBH-VP1、pFBH-VP2两种重组质粒,将它们分别转化DHIOBac感受态细胞得到相应的重组表达载体,转染昆虫细胞Sf21获得含有VP1、VP2基因的重组杆状病毒vBac-VPl、vBac-VP2,应用Sf21悬浮培养表达重组蛋白.SDS-PAGE及Westem blotting结果证明,VP1.VP2基因在昆虫细胞中得到了表达.重组蛋白免疫SPF鸡,血清经Elisa检验表明重组蛋白具有良好的免疫原性.

摘要： 目的：建立鸡传染性贫血病毒的环介导等温扩增(LAMP)技术,以便简单、快速、特异地检测CAV,同时搭建LAMP技术平台.方法：选取GenBank中69株CAV序列,利用DNAstar软件包中的MegAlign软件对上述序列进行比对,选择第300bp～1050bp的保守序列区域,使用在线设计软件Pirmer Explorer V4软件对引物进行设计并筛选,以CAV阳性质粒为模板用3对LAMP引物进行等温扩增,扩增产物分别进行电泳、SupergreenⅠ荧光染色以及酶切鉴定,正确后对该方法的反应体系及反应条件进行梯度优化.结果：根据引物设计优化结果,最终选定的引物组选取了215bp～395bp的181bp序列作为扩增片段;扩增产物电泳呈LAMP特有的拖带,能被PstI和BgⅢ有效酶切,Superee nI染色后肉眼可见特有的绿色荧光,阴性产物呈红棕色;经优化后25μL体系的最佳反应条件为:dNTPs(10 mmol/L)0.3μl、FIP/BIP(100 umol/L) 0.3μL、F3/B3(10umol/L) 10μmol/L、LF/LB (10umol/L) 10μmol/L、Betaine (5mol/L) 5.0μμL、MgC12 (25mmol/L) 2.5 μL、Bst DNA Polymerase 1μl、10×ThermoPolbuffer 2.5μl、模板DNA2μl,超纯水补至25μL;65°C温浴1h,80°C灭活5min.结论：成功建立了CAV的LAMP检测方法,为基层实验室的快速诊断及CAV防控提供了技术支撑,同时为其它病原的LAMP方法的建立奠定了基础.

摘要： 目的：建立鸡传染性贫血病毒(CAV)的环介导等温扩增(LAMP)技术,以便简单、快速、特异地检测CAV,同时搭建LAMP技术平台。方法：选取GenBank中69株CAV序列,选择保守序列区域,使用在线设计软件Pirmer Explorer V4软件对引物进行设计并筛选,以CAV阳性质粒为模板用3对LAMP引物进行等温扩增,扩增产物分别进行电泳、SupergreenⅠ荧光染色以及酶切鉴定,正确后对该方法的反应体系及反应条件进行优化。结果：根据引物设计优化结果,最终选定的引物组选取了215bp～395bp的181bp序列作为扩增片段;扩增产物电泳呈LAMP特有的拖带,能被PstⅠ和BgⅢ有效酶切,SupergreenⅠ染色后肉眼可见特有的绿色荧光,阴性产物呈红棕色;经优化后25μL体系为:dNTPs(10 mmol/L)0.3μl、FIP/BIP(100 umol/L)0.3μL、F3/B3(10umol/L)10μmol/L、LF/LB(10umol/L)10μmol/L、Betaine(5mol/L)5.0μL、MgCl2(25mmol/L)2.5μL、Bst DNA Polymerase1μl、10×ThermoPolbuffer2.5μl、模板DNA2μl,超纯水补至25μL;反应条件为:65°C温浴1h,80°C灭活5min.结论：成功建立了CAV的LAMP检测方法,为基层实验室的快速诊断及CIA防控提供了技术支撑,同时为其它病原的LAMP方法的建立奠定了基础。

摘要： 本文为了查明安徽滁州温氏公司矮脚黄D品种发生疑似传染性法氏囊病的病因,临床调查后采集相应病料,实验室研磨处理后备用。首先对病料进行鸡传染性贫血病毒(CAr)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)的PCR检测。第1次病例复制,病料攻毒SPF鸡观察病变,并采集病料和血清进行相关抗原和抗体的检测;第2次病例复制,采集SPF鸡病料进行氯仿和热处理,使病料中仅保留CAV后再攻毒SPF鸡观察病变,并采集病料和血清进行相关抗原和抗体的检测。结果:4份病料有3份CAVPCR阳性,1份IBDV F1代尿囊液PCR阳性。第1次病例复制出现和临床相似的IBDV典型病变,第2次病例复制出现CAV典型病变。因此表明本次疫情为CAV与IBDV混合感染引起。

摘要： 鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemiavirus,CIAV)是引起鸡传染性贫血病(Chicken infec-tious anemia,CIA)的病原，属圆环病毒科，圆环病毒属。采用PCR方法分段克隆了从北京分离的一株鸡贫血病毒的全基因组，对其进行了测序并命名为BJ0924，将拼接好的序列与其他已知序列比对.进行同源性分析。同时用分离到的鸡贫血毒株BJD924株攻1日龄SPF雏鸡，通过TCID50、红细胞压积、体重变化、组织病理变化、主要免疫器官的损伤指数和免疫细胞的变化，系统地研究了BJ0924株对SPF雏鸡的致病性。

摘要： 本文描述了Th-1细胞因子对病毒的免疫反应的作用并探讨这些细胞因子在增强鸡抗病毒治疗策略中的潜在用途。本文重点描述Ch1FN-γ用于鸡传染性贫血病毒(CAV)感染的治疗。CAV除了造成胸腺细胞被删除和胸腺萎缩之外，还引起鸡的免疫抑制。然而，由于接种疫苗，临床疾病出现较少。尽管如此，疾病的亚临床型常与由于免疫功能低下的继发合并感染相关的。由于CAV病毒诱导的免疫抑制可能导致机体对其他病原体的免疫反应显著降低，因此对CAV以及其引起的疾病的了解是非常重要的，特别是能够对开发新的控制方法提供理论依据和帮助。新颖的细胞因子治疗策略为开发新的可替代的家禽疾病控制方案提供了一个新方法。本文主要展示在CAV感染期间通过卵内注射ChIFN-γ对CAV感染的T细胞前体细胞的删除的影响。结果表明Ch1Fh1-γ可被用来作为一种新的治疗制品以改变病毒感染和病毒感染所引起的免疫抑制，以及作为其他病原体的治疗制剂的潜力。

摘要： 本试验利用非放射性标记物地高辛(DIG)通过PCR法制备DNA探针,运用PCR技术、斑点杂交方法和PCR产物结合斑点杂交方法检测病料组织中的CAV核酸,比较三个方法的检测效果和相关性.PCR法标记的核酸探针，只与自身病毒核酸反应与其它病毒核酸均不显色，特异性强。该探针可检测到lpg量的CAV核酸片段，灵敏度高。用PCR一电泳、斑点杂交和PCR产物斑点杂交检测各样品表明，PCR扩增产物斑点杂交法检出率(77.27%，17/22)高于组织DNA直接斑点杂交法(50% ,11/22)，更显著高于单纯PCR扩增法(11%,2/22) o经PCR一电泳检测为阴性的某些样品，样品DNA直接经斑点杂交检测却有阳性反应;相应样品的PCR产物经斑点杂交检测却有较强的信号;某些经PCR一电泳检测目的条带模糊的样品，相应PCR产物经斑点杂交检测却有很强的信号。

摘要： 鸡传染性贫血(CIA)是由鸡传染性贫血病毒(CAV)引起的以雏鸡再生障碍性贫血和免疫抑制为主要特征的传染病,是导致许多疫苗免疫失败以及雏鸡死亡的主要原因之一。该病对雏鸡和肉鸡威胁很大,造成的直接和间接经济损失相当严重,而且它还可与其他免疫抑制性传染因子相互作用,所造成的损失往往更大。目前该病毒的实验室诊断方法包括病毒分离鉴定、血清学方法和分子生物学方法。

摘要： 本发明公开了一种用于鉴别鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒的特异性引物，包括用于检测鸡新型环状病毒的检测引物GyV3‑1/GyV3‑2，和用于检测鸡传染性贫血病毒的检测引物CIAV‑5/CIAV‑6；其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑4所示。一种鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒鉴别诊断试剂盒，包括上述用特异性引物，以及阳性质粒。一种鉴别鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒的方法：提取待测样品的基因组DNA，利用特异性引物进行扩增，对扩增产物进行电泳并观察有无扩增条带，从而作出判断。本发明对两种病毒DNA的最低检出量均低于100拷贝，且对其他常见鸡源病毒均检不出，具有敏感性高、特异性好等优点。

摘要： 本发明公开了一种表达鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组鸡痘病毒活载体疫苗。本发明在鸡痘病毒转移载体pSY681的基础上，构建重组感染性克隆pSY681‑VP1‑LacZ‑VP2，在CEF细胞内pSY681‑VP1‑LacZ‑VP2与FVP毒株基因通过同源臂发生同源重组获得rFPV‑VP1‑VP2。所述rFPV‑VP1‑VP2病毒株可以诱导机体产生抗CAV的有效抗体，起到免疫保护作用；子代鸡获得高水平的抗CAV的有效抗体可以很好的抵抗CAV强毒的侵袭，起到免疫保护作用。

摘要： 本发明公开了一种检测鸡马立克氏病病毒和鸡传染性贫血病病毒的多重免疫荧光分析引物、试剂盒及方法。本发明操作简单，通过PCR获得目标扩增片段，然后将扩增产物、荧光编码微球和链霉亲和素‑藻红蛋白进行杂交，然后通过检测仪读取MFI值，分辩不同类型的病原。本发明方法，能够同时检测鉴别鸡传染性贫血病毒和鸡马立克氏病病毒，而且具有特异性强，灵敏度高，重复性好等优点，可实现同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测。本发明灵活性好，可以根据需要在此基础上加减检测病原的种类。

摘要： 本发明公开了一种表达鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组鸡痘病毒活载体疫苗。本发明在鸡痘病毒转移载体pSY681的基础上，构建重组感染性克隆pSY681‑VP1‑LacZ‑VP2，在CEF细胞内pSY681‑VP1‑LacZ‑VP2与FVP毒株基因通过同源臂发生同源重组获得rFPV‑VP1‑VP2。所述rFPV‑VP1‑VP2病毒株可以诱导机体产生抗CAV的有效抗体，起到免疫保护作用；子代鸡获得高水平的抗CAV的有效抗体可以很好的抵抗CAV强毒的侵袭，起到免疫保护作用。

摘要： 本发明公开了一种用于鉴别鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒的特异性引物，包括用于检测鸡新型环状病毒的检测引物GyV3‑1/GyV3‑2，和用于检测鸡传染性贫血病毒的检测引物CIAV‑5/CIAV‑6；其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑4所示。一种鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒鉴别诊断试剂盒，包括上述用特异性引物，以及阳性质粒。一种鉴别鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒的方法：提取待测样品的基因组DNA，利用特异性引物进行扩增，对扩增产物进行电泳并观察有无扩增条带，从而作出判断。本发明对两种病毒DNA的最低检出量均低于100拷贝，且对其他常见鸡源病毒均检不出，具有敏感性高、特异性好等优点。

摘要： 本发明公开了鉴定鸡细小病毒和鸡传染性贫血病毒的引物组，包括引物对Ⅰ和引物对Ⅱ，引物对Ⅰ由引物ChPV‑F和ChPV‑R组成，引物对Ⅱ由引物CIAV‑F和CIAV‑R组成；引物ChPV‑F、ChPV‑R、CIAV‑F和CIAV‑R分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.4的碱基序列。据此，发明人还建立了相应检测鉴定方法并研制了对应试剂盒。本发明建立的二重PCR可用于快速检测鸡细小病毒和鸡传染性贫血病毒的混合感染，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。

摘要： 本发明公开了一种检测鸡马立克氏病病毒和鸡传染性贫血病病毒的多重免疫荧光分析引物、试剂盒及方法。本发明操作简单，通过PCR获得目标扩增片段，然后将扩增产物、荧光编码微球和链霉亲和素‑藻红蛋白进行杂交，然后通过检测仪读取MFI值，分辩不同类型的病原。本发明方法，能够同时检测鉴别鸡传染性贫血病毒和鸡马立克氏病病毒，而且具有特异性强，灵敏度高，重复性好等优点，可实现同一样本中的多种不同目的分子同时进行检测。本发明灵活性好，可以根据需要在此基础上加减检测病原的种类。

摘要： 本发明公开了可视化二重LAMP鉴别禽白血病病毒和鸡传染性贫血病毒的方法。本发明提供了可视化二重LAMP鉴别禽白血病病毒和鸡传染性贫血病毒的单链DNA组，由SEQ ID No.1‑10所示单链DNA分子组成。本发明成功建立了鉴别检测ALV和CIAV可视化二重LAMP方法。该二重LAMP能够在在同一反应管里鉴别诊断ALV和CIAV，具有特异性好、敏感性高、污染小、方便快捷等优点，并且检测结果可直接用肉眼观察，根据反应产物颜色判断结果，适用于ALV和CIAV的临床快速筛查。

摘要： 本发明公开了鉴定禽肾炎病毒和鸡传染性贫血病毒的引物组，包括引物对Ⅰ和引物对Ⅱ，引物对Ⅰ由引物ANV‑F和ANV‑R组成，引物对Ⅱ由引物CIAV‑F和CIAV‑R组成；引物ANV‑F、ANV‑R、CIAV‑F和CIAV‑R分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.4的碱基序列。据此，发明人还建立了相应检测鉴定方法并研制了对应试剂盒。本发明建立的二重PCR可用于快速检测禽肾炎病毒和鸡传染性贫血病毒的混合感染，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。

摘要： 本发明公开了鉴定禽腺病毒4型和鸡传染性贫血病毒的引物组，包括引物对Ⅰ和引物对Ⅱ，引物对Ⅰ由引物FadV‑4F和FadV‑4R组成，引物对Ⅱ由引物CIAV‑F和CIAV‑R组成；引物FadV‑4F、FadV‑4R、CIAV‑F和CIAV‑R分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.4的碱基序列。据此，发明人还建立了相应检测鉴定方法并研制了对应试剂盒。本发明建立的二重PCR可用于快速检测禽腺病毒4型和鸡传染性贫血病毒的混合感染，适于大批量检测，既可节约成本和节省时间，又能减少污染，具有很高的实用价值。