骨髓瘤细胞

摘要： 目的探讨SOX2蛋白及趋化相关基因CCR1、CCR2、MCP-1影响骨髓瘤细胞(MC)生物学特性的分子机制。方法筛选40例骨髓瘤标本,试验设置分组为:对照组(A组,n=20)和慢病毒rLV-hsox2-Z s-Green-Puro转染组(B组,n=20)。生物学特性分别用多功能酶标仪和流式细胞仪测定两组细胞的总数、存活率和凋亡率;用Western印迹分别检测各组细胞SOX2蛋白的表达水平;用RT-PCR法检测各组细胞内CCR1、CCR2和MCP-1 mRNA水平的表达情况。结果与A组相比,B组SOX2蛋白的表达显著上调;且B组细胞总数显著升高(P<0.05)。用MTT试验检测细胞存活率,与A组相比,B组细胞存活率显著降低(P<0.05)。与A组相比,B组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CCR1、CCR2、MCP-1 mRNA基因表达显著上调(P<0.05)。结论SOX2蛋白的在细胞特定周期的高效表达可以加速MC的快速凋亡,且CCR1、CCR2和MCP-1基因通过在细胞中的过表达可调节MC的增殖,甚至导致疾病及抗凋亡反应的发生。

摘要： 目的:探讨桦木酸(BA)通过介导Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子(STAT3)信号通路对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法:骨髓瘤U266细胞给予不同浓度(0、20、40、60、80、100、120和160μmol·L-1)BA作为不同浓度BA组,同时设置空白组(不加入BA且无细胞),以未经BA处理的U266细胞作为对照组.检测各组骨髓瘤U266细胞增殖率.将U266细胞分为对照组和20、40、60μmol·L-1 BA组,CCK-8法检测各组细胞增殖率,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中原癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平.将裸鼠分为对照组(给予100μL DMSO)和20、30和40 mg·kg-1 BA组(给予20、30及40 mg·kg-1 BA),观察各组裸鼠瘤体质量和体积.结果:与对照组比较,作用48和72 h时,20、40和60μmol·L-1 BA组细胞增殖率和细胞中c-Myc、cyclin D1、Bcl-2及JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和细胞中Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05).作用48和72 h时,与20μmol·L-1 BA组比较,40和60μmol·L-1 BA组细胞增殖率、细胞中c-Myc、cyclin D1、Bcl-2及JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和细胞中Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与40μmol·L-1BA组比较,60μmol·L-1BA组细胞增殖率、细胞中c-Myc、cyclin D1、Bcl-2及JAK2/STAT3信号通路蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和细胞中Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05).与对照组比较,20、30和40 mg·kg-1 BA组裸鼠瘤质量及体积明显降低(P<0.05);与20 mg·kg-1BA比较,30和40 mg·kg-1 BA组裸鼠瘤质量及体积明显降低(P<0.05),与30 mg·kg-1BA组比较,40 mg·kg-1 BA组裸鼠瘤质量及体积明显降低(P<0.05).结论:BA可促进骨髓瘤细胞凋亡、抑制骨髓瘤细胞增殖及裸鼠移植瘤生长,其作用机制可能与BA抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关.

摘要： 目的:探究miR-32-5 p靶向CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinsα,CEBPA)调控表皮生长因子/β联蛋白(EGFR/β-catenin)信号通路影响骨髓瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的机制.方法:qRT-PCR、Western blot检测细胞中miR-32-5p、CEBPA的表达水平;转染慢病毒至骨髓瘤细胞U266,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;生物信息学预测miR-32-5 p的靶基因,双荧光素酶报告基因、Western blot验证miR-32-5 p与CEBPA的关系及在骨髓瘤细胞中的作用,Western blot检测miR-32-5 p与CEBPA的表达对EGFR/β-catenin信号通路的影响.结果:与正常浆细胞比较,骨髓瘤细胞株H929、U266、IM-9、RPMI-8226中miR-32-5 p表达水平显著增高,CEBPA mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与NC、anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组miR-32-5p mRNA表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,细胞侵袭数目显著减少(P<0.05);TargetScan生物信息学预测显示,miR-32-5 p与CEBPA 3'UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验、Western blot进一步证实miR-32-5 p可与CEBPA直接结合负向调控CEBPA的表达;与NC、pcDNA-control组比较,pcDNA-CEBPA组CEBPA表达量显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭数目显著减少(P<0.05);与anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组CEBPA蛋白表达量显著升高,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著降低;与anti-miR-32-5 p+si-con组比较,anti-miR-32-5 p+si-CEBPA组CEBPA蛋白表达量显著降低,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著升高(P<0.05).结论:骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭受miR-32-5 p和CEBPA的双重调控,miR-32-5 p可靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭.

摘要： 目的 探讨扶正培元方辅助改良VAD方案对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者M蛋白、骨髓瘤细胞及免疫功能的影响.方法 将符合入选标准的2017年1月-2019年5月96例MM患者按随机数字表法分为2组,每组48例.对照组给予改良VAD方案(长春新碱+阿霉素+地塞米松)治疗,观察组在对照组基础上给予扶正培元方辅助治疗.2组均治疗3个周期.分别于治疗前后进行中医证候评分,采用VAS量表对骨痛程度进行量化评分,采用氧化酶法检测SCr,采用氰酸盐法检测HbAlc,以紫外吸收分光光度法测定血钙水平,以免疫扩散电泳法测定M蛋白水平;行骨髓穿刺制作骨髓涂片测定骨髓瘤细胞水平.采用ELISA法测定血清IL-2、γ-干扰素、IL-4、IL-10水平.观察治疗期间的毒副作用,评价临床疗效.结果 观察组总有效率为81.3％(39/48)、对照组为62.5％(30/48),2组比较差异有统计学意义(x2=4.174,P=0.041).治疗第1、3个周期,观察组中医证候积分(t值分别为4.674、13.328)、骨痛评分(t值分别为4.505、11.398)均低于对照组(P＜0.01);观察组SCr(t值分别为4.452、10.039)、血钙(t值分别为4.578、4.155)水平均低于对照组(P＜0.01);HbAlc(t值分别为5.290、8.871)水平高于对照组(P＜0.01);M蛋白(t值分别为11.145、33.812)、骨髓瘤细胞(t值分别为6.415、19.731)水平均低于对照组(P＜0.01);血清IL-2(t值分别为4.922、8.789)、γ-干扰素(t值分别为5.610、8.886)水平均高于对照组(P＜0.01);IL-4(t 值分别为4.709、6.784)、IL-10(t值分别为5.287、12.823)水平均低于对照组(P＜0.01).治疗期间,观察组毒副作用发生率为41.7％(20/48)、对照组为62.5％(30/48),2组比较差异有统计学意义(x2=4.174,P=0.041).结论 扶正培元方辅助改良VAD方案可有效缓解MM患者的临床症状,减轻骨痛程度,促进骨髓瘤细胞减少,提高患者免疫功能及化疗耐受性.

摘要： 大多数多发性骨髓瘤患者会发展出严重的溶骨性疾病。骨髓瘤细胞分泌免疫球蛋白,患者血清中存在单克隆免疫球蛋白是重要的诊断标准。近期,研究人员证明,将从骨髓瘤合并骨病患者中分离出的免疫球蛋白添加到体外培养的人破骨前体细胞中可以促进破骨细胞分化,而从不合并骨病的骨髓瘤患者中分离的免疫球蛋白则无此效应。该作用主要是由免疫复合物或聚集物介导的。

摘要： 学科核心素养是学生后天习得的终身受益成果,是学生在解决真实情境中的生物学问题时所表现出来的必备品格和关键能力。学科核心素养主要包括生命观念、科学思维、科学探究和社会责任四个维度,需要通过每节课或每项活动来逐步培养,最终使学生成为对社会有用的人才。

摘要： 目的:探讨自噬调节药物包括自噬激活剂(雷帕霉素)、自噬抑制剂(羟氯喹和3-甲基腺嘌呤)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖、凋亡和自噬的影响.方法:采用不同浓度雷帕霉素(RAPA)、羟氯喹(HCQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理RPMI 8226细胞,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术检测药物作用24 h后细胞凋亡率,应用单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬小体数量,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC-3b和凋亡相关蛋白(caspase-3、PARP和BCL-2)的表达情况.结果:RAPA和HCQ可呈时间及剂量依赖性抑制RP-MI8226细胞的增殖,并增加细胞的凋亡,而3-MA无明显抑制细胞增殖作用,也无诱导凋亡作用.MDC染色结果显示,细胞内自噬泡数量随着RAPA浓度的提高逐渐增多,而随着HCQ和3-MA浓度升高自噬泡数量却逐渐减少.Western blot结果显示,RAPA可诱导自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和凋亡蛋白caspase-3及PARP表达上调,但抑制抗凋亡蛋白BCL-2表达;HCQ抑制LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和BCL-2表达,但可上调caspase-3和PARP表达;3-MA可下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达,但对caspase-3、PARP及BCL-2表达均未显示明显影响.结论:RAPA能抑制RPMI8226细胞增殖,诱导RPMI8226细胞凋亡和自噬,HCQ则在抑制自噬和增殖的同时也可诱导凋亡,3-MA可抑制细胞自噬但对细胞增殖和凋亡影响不大.

摘要： 目的:探讨阿霉素增强细胞因子诱导的杀伤性(CIK)细胞抗多发性骨髓瘤细胞的机制.方法:用阿霉素处理骨髓瘤细胞株U266以及患者骨髓瘤细胞,流式细胞仪(FCM)检测细胞表面NKG2D配体(MICA/B和ULBPs)表达的变化及CIK细胞对U266细胞杀伤作用的变化.结果:阿霉素处理后U266细胞表面MI-CA/B表达明显升高(P =0.002),而ULBPs的表达无明显变化.阿霉素亦能够诱导患者骨髓瘤细胞表面MICA/B的表达增加.CIK细胞对阿霉素处理过的U266细胞杀伤作用明显增加(P=0.01),这种杀伤作用可以被抗NKG2D抗体部分抑制(P=0.03).结论:化疗药物诱导骨髓瘤细胞表面MICA/B表达的增加,从而增强CIK细胞对骨髓瘤细胞的杀伤作用.

摘要： 目的：回顾分析208例多发性骨髓瘤病例的骨髓细胞学、临床分型以及血清免疫球蛋白、免疫固定电泳结果，探讨其在MM诊断中的作用。rn 方法：回顾分析208例MM患者骨髓细胞学特点，按照欧洲血液学会议形态学分型标准将骨髓瘤细胞分型，计数骨髓瘤细一胞比例:按临床特点和分期标准将病人分期;记录病人血清免疫球蛋白、免疫固定电泳结果。rn 结果：208例MM病例中:骨髓涂片中骨髓瘤细胞比例的204例(98.1%)，骨髓瘤细胞比例在6.0%-10.0%的3例((1.4% )，骨髓瘤细胞比例不增高的1例(C0.5% ):血清免疫固定电泳:IgG型128例(61%).IgA型47例(22.7% )，轻链型28例(13.7%)，未分泌型5例(2.8%); }临床表现主要有骨破坏168例(80.1%)、贫血163例(79: 5%)、骨痛146例(70.1%)、肾功能损害102例(49% )、出血8例(3.8% )、粘滞血症2例(0.9% ) 。rn 结论：骨髓细胞形态学在MM的诊断中尤为重要。血清学特点及明显的临床表现也对MM的诊断有提示作用，三者需紧密结合。

摘要： 根据狂犬病毒糖蛋白(G蛋白)免疫活性及免疫特性,参考有关文献及用蛋白质亲疏水性分析程序分析,选取狂犬病毒ERA株糖蛋白膜外区的基因片段设计扩增引物,在上、下游引物中引入BamHⅠ和EcoRI限制性酶切位点。并在下游引物5'端添加了His-tag。用分子克隆的方法将目的基因插入真核表达载体质粒pcDNA3.1(+)中,构建表达载体pcDNA3.1-RG,进行核酸序列测定。用真核表达载体pcDNA3.1-RG,通过脂质体介导法转染小鼠SP2/0和NS0骨髓瘤细胞,利用夹心ELISA方法和荧光抗体方法进行检测。结果检测到重组真核表达质粒pcDNA3.1-RG在SP2/0和NS0骨髓瘤细胞中均进行了瞬时表达。此方法的建立为研究大量分泌表达狂犬病毒ERA株糖蛋白奠定了基础,也为研发防治狂犬病的新型免疫制剂和诊断方法打下良好的基础。

摘要： 梧桐花粉(P.acerifolia)被认为是在许多城市空气中的过敏原的重要来源.Plaa1是梧桐花粉中一个主要的过敏原.本研究主要是梧桐花粉过敏原(Plaa1 )的表达纯化及其单克隆抗体的制备.在本研究中,Plaa1包载于pET-28a空载质粒中,并转化成ArcticExpressTM (DE3)RP大肠杆菌宿主菌株中.将Plaa1接种于BALB/c小鼠.当血清检测结果为阳性,小鼠脾脏细胞将从小鼠中分离出来,并与SP2/0骨髓瘤细胞融合,其比例为10∶1.杂种细胞细胞接受间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和有限稀释.腹水抗体由阳性细胞诱导,然后被A-agarose蛋白质纯化.最后,Pla a 1成功重组表达和纯化.它表现出IgE结合于P.acerifolia过敏患者血清.十一个杂交细胞不断分泌抗体,得到pla a 1的单克隆抗体,免疫印迹分析表明,这些单克隆抗体能够识别Plaa1.结果表明anti-Pla1得到了抗体与特异性,可用于Plaa1过敏原的快速检测.

摘要： 目的：研究人胚胎间充质干细胞(hFMSC)的生长特性及骨髓瘤(MM)细胞对其表达核因子κB受体激活剂配体(RANKL)/护骨素(OPG)的影响.rn 方法：常规分离培养hFMSC,流式细胞术(FCM)检测免疫表型,yon Kossa染色及油红O染色观察hFMSC向成骨细胞及脂肪细胞分化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测与8226、XG7细胞共培养前后hFMSC对RANKL/OPG的表达.rn 结果：hFMSC表现出很强的增殖能力,且扩增传代15次后增殖能力无明显下降;该类细胞不表达造血细胞标志CD34,而高表达一些黏附分子如CD29、CD44及CD49e;hFMSC具有成骨成脂的分化潜能;hFMSC不表达RANKL,与8226或XG7细胞共培养后RANKL表达明显增加,而OPG表达明显受抑.rn 结论：hFMSC与来源于成人骨髓的MSC具有类似的生长特性、免疫表型及分化潜能,hFMSC不表达RANKL,MM细胞促进hFMSC表达RANKL,抑制OPG的表达.

摘要： 本发明总体涉及使用嵌合抗原受体(CAR)工程化的T细胞的免疫疗法，具体地，本发明涉及利用嵌合抗原受体(CAR)工程化的T细胞靶向以低表达癌细胞表面抗原为特征的癌细胞亚群的免疫疗法，更具体地，本发明涉及使用嵌合抗原受体(CAR)工程化的T细胞靶向多发性骨髓瘤中的CD19(CD19CART)的免疫疗法，其中所述多发性骨髓瘤为浆细胞的克隆性增殖。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种青梅感冒片的制备方法及应用。本发明的青梅感冒片的制备方法，由青蒿200g、五指柑267g、香薷134g、狗肝菜200g、甘草134g、积雪草134g、岗梅267g作为原料药制成，采用超临界萃取和微波萃取制备而成，使得甘草酸含量有很大提高。本发明还提供了青梅感冒片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞P3X63AG8细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种九味獐牙菜片的制备方法及应用。本发明的九味獐牙菜片的制备方法，由獐牙菜53.6g、金腰草17.9g、榜嘎35.7g、木香35.7g、兔耳草35.7g、苦荬菜42.9g、角茴香35.7g、小檗皮28.6g、波棱瓜子14.2g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得盐酸小檗碱含量有很大提高。本发明还提供了九味獐牙菜片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞FO细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种黄萱益肝片的制备方法及应用。本发明的黄萱益肝片的制备方法，由土大黄291g、萱草103g、千里光92g、猕猴桃92g、红土茯苓92g、野蔷薇62g、獐芽菜62g、骚羊古62g、南五味子62g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得大黄素含量有很大提高。本发明还提供了黄萱益肝片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞P3X63Ag8 细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种黄萱益肝片的制备方法及应用。本发明的黄萱益肝片的制备方法，由土大黄291g、萱草103g、千里光92g、猕猴桃92g、红土茯苓92g、野蔷薇62g、獐芽菜62g、骚羊古62g、南五味子62g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得大黄素含量有很大提高。本发明还提供了黄萱益肝片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种阿里红咳喘片的制备方法及应用。本发明的阿里红咳喘片的制备方法，由阿里红20g、洋李100g、芦根80g、甘草60g、麻黄50g、木香30g、洋茴香120g、香附30g、豆蔻20g作为原料药制成，采用超临界萃取和微波萃取制备而成，使得甘草酸含量有很大提高。本发明还提供了阿里红咳喘片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞FO细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种阿里红咳喘片的制备方法及应用。本发明的阿里红咳喘片的制备方法，由阿里红20g、洋李100g、芦根80g、甘草60g、麻黄50g、木香30g、洋茴香120g、香附30g、豆蔻20g作为原料药制成，采用超临界萃取和微波萃取制备而成，使得甘草酸含量有很大提高。本发明还提供了阿里红咳喘片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种黄萱益肝片的制备方法及应用。本发明的黄萱益肝片的制备方法，由土大黄291g、萱草103g、千里光92g、猕猴桃92g、红土茯苓92g、野蔷薇62g、獐芽菜62g、骚羊古62g、南五味子62g作为原料药制成，采用超临界萃取、微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得大黄素含量有很大提高。本发明还提供了黄萱益肝片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞FO细胞增殖药物中的应用。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种双姜胃痛片的制备方法及应用。本发明的双姜胃痛片的制备方法，由姜黄200g、紫色姜200g、地不容200g、石菖蒲200g、苦菜子200g作为原料药制成，采用微波萃取和大孔树脂吸附制备而成，使得姜黄素含量有很大提高。本发明还提供了双姜胃痛片在制备抑制小鼠骨髓瘤细胞P3X63AG8细胞增殖药物中的应用。