骨骼肌细胞

摘要： 目的研究参芪复方对2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞凋亡的调节作用及其对Bcl-2家族蛋白表达的影响。方法 30只雄性自发性2型糖尿病GK大鼠,给予高脂饲料喂养,连续3 d检测随机血糖≥11.1 mmol/L即确认造模成功。造模成功后,将2型糖尿病大鼠模型随机分为模型对照组、参芪复方组、罗格列酮组,每组10只;另取10只雄性Wistar大鼠作为正常对照组,普通饲料喂养。参芪复方组灌胃给予参芪复方浸膏(14.33 g/kg),罗格列酮组灌胃给予罗格列酮混悬液(0.67 mg/kg),模型对照组和正常对照组均给予等体积生理盐水灌胃,每天1次,连续给药8周。采用TUNEL法荧光染色观察骨骼肌细胞凋亡情况,RT-qPCR、Western blot检测骨骼肌组织中Bad、Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xL mRNA和蛋白表达。结果参芪复方可降低模型大鼠骨骼肌细胞凋亡率(P<0.05),下调Bak mRNA表达与Bad、Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),并上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论参芪复方可通过抑制2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞凋亡,从而改善糖尿病骨骼肌病变,其机制与调控Bak、Bad、Bax、Bcl-2的表达密切相关。

摘要： 【目的】研究miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞增殖分化的影响及其在不同组织中的表达情况,为探究miRNA在肌肉发育中的调控机制提供理论基础。【方法】利用生物信息学方法预测miR-495-3p的靶基因;实时荧光定量PCR检测miR-495-3p及其靶基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌等组织中的表达水平。构建miR-495-3p的过表达(miR-495-3p mimic、miR-495-3p mimic NC)及抑制物(miR-495-3p inhibitor、miR-495-3p inhibitor NC),在山羊骨骼肌细胞汇合度达60%~70%时进行转染,并用含2%马血清的培养基进行诱导分化,用CCK-8检测细胞增殖活力,实时荧光定量PCR检测过表达和干扰效率及增殖分化相关基因配对盒基因(paired-box 7,Pax7)、细胞蛋白周期E(Cyclin E)、肌细胞生成素(myogenin,myoG)、生肌因子5(recombinant myogenic factor 5,Myf5)的表达;构建miR-495-3p靶基因的野生型和突变型载体并转染至293T细胞,用双荧光素酶测定miR-495-3p与其靶基因的结合情况。【结果】生物信息学预测结果表明,miR-495-3p的靶基因为心肌肌动蛋白α1(alpha cardiacactin 1,ACTC1),且miR-495-3p和ACTC1在1和10月龄山羊背最长肌中表达量均差异极显著(P0.05)。双荧光素酶报告结果表明,miR-495-3p与ACTC1基因存在靶向关系。【结论】miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞的增殖无显著影响,但可通过靶向ACTC1基因促进山羊骨骼肌细胞分化。

摘要： 高迁徙率族蛋白A1(HMGA1)在胚胎发育过程中含量很高,而在成人细胞中含量很少。HMGA1在脂肪分化中起到重要作用,可以抑制性调节脂肪细胞的分化。HMGA1还对骨骼肌细胞发育、精子发育有促进作用。越来越多证据表明,HMGA1与肿瘤形成有密切关系,在恶性肿瘤中往往能检测到含量很高的HMGA1,而在正常细胞中含量极微。HMGA1可以促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力[1]。

摘要： KIRREL(kin of irregular chiasm-like protein)属于细胞粘附分子免疫球蛋白超家族,包括KIRREL1、KIRREL2和KIRREL3三个成员。在人体中,KIRRELs表达于胃、乳腺、胰腺、肺、脑、骨骼肌、肾脏等组织器官,参与肿瘤发生发展、神经元发育、肌细胞融合和肾小球滤过作用等生命活动的调节。该文通过在中国期刊全文数据库(CNKI)以及PubMed等数据库以“KIRREL1/2/3”为关键词对截至2020年12月关于KIRREL家族的研究情况进行梳理,就KIRREL家族的结构特点和在不同生理调控过程中的作用进行综述,为理解KIRRELs的细胞生物学功能提供线索,以期为KIRREL3调控突触连接在神经发育疾病中的作用及机制研究给出参考。

摘要： 目的:探讨普萘洛尔对肝癌恶病质影响及其潜在机制。方法:通过MTT检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平。油红染色检测脂肪细胞脂滴,MYH1免疫荧光检测骨骼肌细胞分化情况,细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)检测细胞葡萄糖代谢。Western Blot检测相关蛋白表达水平。结果:与单独AD组和C2C12组相比,共培养组HepG2细胞增殖、侵袭及迁移增加,凋亡减少;与单独AD组和C2C12组相比,HepG2共培养组的3T3-L1及C2C12发生恶病质改变;普萘洛尔处理后上述改变皆部分逆转。结论:普萘洛尔能改善肝癌相关恶病质进展,其作用机制可能与PPARγ活化密切相关。

摘要： 目的:探讨骨化三醇[1,25(OH)_(2)D_(3)]联合黄芪多糖(APS)对骨骼肌细胞胰岛素抵抗(IR)的改善作用及其作用机制,为采用1,25(OH)_(2)D_(3)和APS缓解IR提供依据。方法:采用CCK-8法和己糖激酶法确定棕榈酸(PA)溶液(0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mmol·L^(-1))的最佳作用剂量和最佳作用时间、APS(25、50、100和200 mg·L^(-1))最佳作用剂量及1,25(OH)_(2)D_(3)(1、10、100和1000 nmol·L^(-1))最佳作用剂量。将骨骼肌细胞分为对照组(不进行任何处理)、PA组(给予0.4 mmol·L^(-1) PA作用24 h)、PA+APS组(给予0.4 mmol·L^(-1) PA作用24 h后再给予100 mg·L^(-1) APS作用24 h)、PA+1,25(OH)_(2)D_(3)组[给予0.4 mmol·L^(-1) PA作用24 h后再给予100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)作用24 h]、PA+APS+1,25(OH)_(2)D_(3)组[给予0.4 mmol·L^(-1) PA作用24 h后再给予100 mg·L^(-1) APS和100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)作用24 h]。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞培养上清中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,Western blotting法检测各组细胞中胰岛素受体(InsR)、胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS-1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、P65、磷酸化P65(p-P65)、P38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PA组骨骼肌细胞中ROS、IL-6、TNF-α、MCP-1水平和P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均升高(P<0.05),IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均降低(P<0.05);与PA组比较,PA+APS、PA+1,25(OH)_(2)D_(3)和PA+APS+1,25(OH)_(2)D_(3)组细胞中ROS、IL-6、MCP-1和TNF-α水平及P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均降低(P<0.05),IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均升高(P<0.05)。PA+APS+1,25(OH)_(2)D_(3)组细胞中ROS水平、p-P65和p38MAPK蛋白表达水平均低于PA+APS和PA+1,25(OH)_(2)D_(3)组(P<0.05),InsR、IRS-1、p-IRS-1和GLUT4蛋白表达水平均高于PA+APS和PA+1,25(OH)_(2)D_(3)组(P<0.05)。结论:1,25(OH)_(2)D_(3)联合APS可有效减轻IR,其机制可能是通过抑制氧化应激通路以及炎性因子的释放来实现的,且联合应用效果优于单独应用。

摘要： 本研究旨在探究生长激素(Growth hormone,GH)对贵州地方黄牛骨骼肌细胞增殖的表达调控,探明超表达GH基因对骨骼肌细胞增殖的影响.首先利用反转录PCR扩增黄牛GH基因的蛋白质编码区(Coding sequence,CDS),将其克隆至pUCM-T载体,并连接转化构建超表达载体pEGFP-N3-GH.同时使用实时荧光定量PCR检测GH基因在贵州地方黄牛骨骼肌相关组织(腰大肌与背最长肌)中的表达情况,然后培养牛原代骨骼肌细胞并进行鉴定,并将GH基因超表达载体导入细胞以研究GH基因对牛骨骼肌细胞增殖以及骨骼肌生长发育相关因子胰岛素样生长因子-1 (Insulin like growth factor 1,IGF-1)与胰岛素样生长因子-2(Insulin like growth factor 2,IGF-2)基因表达的影响.实时荧光定量PCR结果显示,GH基因在贵州地方黄牛腰大肌中的表达量均高于背最长肌,其中在关岭牛和威宁牛腰大肌中的表达量显著高于背最长肌(P＜0.05).细胞转染及增殖结果表明,相比于pEGFP-N3,pEGFP-N3-GH能极显著提高GH与IGF-1、IGF-2基因在骨骼肌细胞中的表达量,且在被检测的4个时期(6 h、12h、24 h、48 h),超表达GH基因组也能够极显著地提高骨骼肌细胞的增殖速率(P＜0.01).结果 提示,GH基因可促进贵州地方黄牛骨骼肌细胞的增殖,对其具有正向的调控作用,这为进一步探究GH基因对贵州地方黄牛生长发育的影响机制奠定基础.

摘要： 目的 探讨白藜芦醇(Res)对二氯化钴(CoCl2)诱导的骨骼肌细胞缺氧损伤的保护机制.方法 将分化的小鼠骨骼肌细胞系C2C12按不同干预方法分为4组,即对照组、CoCl2组、Res组、CoCl2+Res组.观察免疫荧光染色后的细胞形态,统计肌管融合指数;采用荧光定量PCR技术检测肌球蛋白重链(MyHC)mRNA水平的变化;采用蛋白免疫印迹法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Bcl2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)以及p62和Beclin1蛋白水平.结果 CoCl2诱导的缺氧损伤使肌细胞形态异常、肌管分化减少,与对照组比较,CoCl2组肌管融合指数降低(P<0.001),MyHC mRNA水平和蛋白表达量降低(P均<0.05),HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白水平和LC3升高(P均<0.001),p62蛋白水平降低(P<0.001).加入Res处理后,细胞形态恢复,肌管分化增多;与CoCl2组比较,CoCl2+Res组肌管融合指数升高,MyHC亚型(Myh7、Myh2、Myh4)的mRNA和MyHC蛋白水平升高,HIF-1α、BNIP3和Beclin1蛋白水平降低,p62蛋白水平升高(P均<0.05).结论 CoCl2诱导的缺氧可抑制MyHC表达,导致肌细胞分化和融合能力下降.Res可增强缺氧条件下成肌细胞的分化和融合能力,对肌细胞的损伤修复有保护作用,可能通过抑制HIF-1α/BNIP3信号通路诱导的自噬来促进肌细胞的损伤修复.

摘要： 目的 探讨骨骼肌细胞Syncytin-1过表达对脊髓前角运动神经元-骨骼肌细胞-施万细胞共培养模型炎性因子、钠离子依赖性中性氨基酸转运体1(ASCT1)和神经保护因子的影响.方法 (1)体外原代培养脊髓前角运动神经元、骨骼肌细胞、施万细胞,免疫荧光染色分别检测细胞胆碱乙酰转移酶(ChAT)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙结合蛋白B(S100B)的表达进行鉴定.(2)将Syncytin-1重组质粒及空载质粒分别转染骨骼肌细胞后24 h,与另外2种细胞混合,分别建立3种细胞的共培养模型(Syncytin-1重组质粒转染组:Syncytin-1重组质粒转染的骨骼肌细胞、脊髓前角运动神经元、施万细胞混合;空载质粒转染组:空载质粒转染的骨骼肌细胞、脊髓前角运动神经元、施万细胞混合).于倒置显微镜下观察共培养细胞形态及连接的变化.共培养48 h后应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测2组共培养细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)的浓度,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting分别检测2组共培养细胞Syncytin-1、ASCT1、TNF-α、iNOS、VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 (1)免疫荧光染色检测显示:脊髓前角运动神经元中ChAT阳性表达细胞、骨骼肌细胞中α-SMA阳性表达细胞、施万细胞中S100B阳性表达细胞均占95％以上,且定位在细胞质内.(2)Syncytin-1重组质粒转染组及空载质粒转染组共培养细胞的数量及形态未见明显差异.与空载质粒转染组比较,Syncytin-1重组质粒转染组共培养细胞上清液TNF-α、iNOS及VEGF的浓度均增高,细胞TNF-α、iNOS、Syncytin-1、VEGFmRNA和蛋白的表达均增高,ASCT1 mRNA和蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 骨骼肌细胞Syncytin-1过表达可以引起共培养细胞炎性因子释放、ASCT1表达降低、神经保护因子VEGF表达增高.

摘要： 苦荞是芦丁含量最高的粮食作物,但不同的加工过程会导致芦丁降解为单糖苷结构的异槲皮素及其前体槲皮素,进而影响生物活性.本研究比较芦丁及其降解产物(槲皮素、异槲皮素)这三类含有不同糖苷结构的黄酮在C2C12小鼠骨骼肌细胞中促进葡萄糖摄取的功效差异,并探究其作用机制.研究结果表明,苦荞与水接触会导致苦荞中的核心黄酮组分-芦丁降解为槲皮素.芦丁及其降解产物(槲皮素、异槲皮素)均能有效促进C2C12细胞对葡萄糖的摄取,作用顺序为:槲皮素>异槲皮素>芦丁.糖苷键的增加会降低槲皮素促进骨骼肌细胞糖摄取的效果.芦丁和异槲皮素不能激活胰岛素依赖型信号通路中的IRS-1表达及AKT的磷酸化,但高浓度下(400μmol/L),芦丁和异槲皮素可以通过非胰岛素依赖型的信号通路中的p-AMPK/p-ACC促进葡萄糖摄取作用,且异槲皮素的作用大于芦丁.槲皮素虽然抑制了IRS-1的表达及AKT的磷酸化,但槲皮素通过AMPK/ACC的磷酸化显著了促进C2C12细胞对葡萄糖的摄取.本研究揭示芦丁及其降解产物在细胞水平上的降血糖作用及机理的差异,对于充分理解苦荞黄酮降血糖机制提供了科学依据.

摘要： 运动耐力强弱的两大生物学基础分别是能量代谢与心血耐力.近几年在能量代谢方面研究显示不需任何训练,仅口服调节葡萄糖转运蛋白4(Glucose Transporter4,GLUT4)基因及蛋白的激活子5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(5-Amino-imidazole-4-carboxamideribo-nucleoside,AICAR)四周就能增加小鼠葡萄糖转运能力而提高44％的跑步耐力.这些研究结果暗示小鼠骨骼肌细胞中GLUT4蛋白表达水平与小鼠运动耐力的强弱有高度相关性,因此可以假设骨骼肌细胞中的GLUT4蛋白表达水平有可能成为一个评定运动耐力的标志性分子指标.本实验研究探讨骨骼肌细胞GLUT4蛋白表达水平是否与大鼠的运动耐力高度相关,为骨骼肌细胞GLUT4蛋白表达水平评定运动耐力水平提供依据.将未经任何训练的40只雄性wistar大鼠进行3天适应性训练，然后进行负重7%的游泳耐力水平测试，根据耐力水平的结果分别选择出运动耐力最强的10只为一组和最弱的10只为一组，并对于这两组的游泳耐力水平进行统计学检验以确认耐力水平最好的与最差的确实存在显著性差异（实际值P<0.01）。安静休息3天后取静息状态下大鼠骨骼肌样本，检测这两组在静息状态下大鼠骨骼肌样本中GLUT4蛋白的表达水平，以判定大鼠先天的运动耐力水平与大鼠骨骼肌细胞中GLUT4蛋白表达水平是否密切相关。运动能力测试结果显示Wistar大鼠的游泳耐力存在很明显的先天差异，先天游泳耐力高的游泳时间可达55±5.3分，而先天游泳耐力低的仅为22±25.1分，即先天游泳耐力高水平组比游泳耐力低水平组的运动能力高出1.47倍，显著性检验为P<0.01。从先天游泳运动耐力强的大鼠其骨骼肌细胞内高表达了GLUT4蛋白水平，而先天游泳运动耐力很弱的大鼠骨骼肌细胞对应低表达了GUT4蛋白水平，这表明在一定程度上骨骼肌细胞GLUT4蛋白表达水平对于大鼠游泳运动耐力起着重要作用，本研究认为骨骼肌细胞GLUT4蛋白表达水平可以作为评定运动能力的一项分子指标。建议一方面在运动训练效果的评定中应该考虑骨骼肌细胞GLUT4蛋白表达水平作为评定的重要指标；另一方面在运动员选材中也应该考虑运动员骨骼肌中细胞基因与GLUT4蛋白的表达水平。关于如何在分子水平上和分子生物学层面上评定运动员的运动能力并进行科学的选材一直是我国运动科学的薄弱环节，今后应该引起重视。

摘要： 异黄酮,是一种能改善人类健康及动物产品的抗氧化剂,但是在一定条件下具有促氧化特性.为了进一步探究这种促氧化作用及其机理,本实验测定了不同浓度的异黄酮对原代骨骼肌细胞的增殖及抗氧化能力的影响.结果表明,低剂量的异黄酮促进原代骨骼肌细胞的增殖,高剂量的异黄酮抑制其增殖,且促进了脂肪的氧化,抑制了细胞膜的流动性.通过选择200μM的异黄酮作为促氧化处理,5μM浓度的异黄酮作为抗氧化正对照处理,研究其促氧化作用机制.200μM的异黄酮促进ROS的产生,抑制NAPDH氧化酶4,环氧水合酶类1和2的活性,提高谷胱甘肽还原系统的活性.总之,200μM的异黄酮提高了5-脂肪氧合酶的活性,加入其抑制剂(Zileuton),显著降低了ROS及N-乙酰半胱氨酸的产生.结论:高剂量的异黄酮在原代骨骼肌细胞中通过5-脂肪氧合酶介导活性氧的产生从而发挥促氧化作用.

摘要： 目的：观察不同浓度祛胰抵方对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌细胞上葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)表达的影响并探讨其发生的可能机制.rn 方法：健康的雄性Wistar大鼠80只,随机抽取10只作为正常对照组(NC),饲以普通饲料,其余以高脂饲料喂养4周后腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的模型.将建模成功后大鼠随机分为糖尿病模型(DM)组,高、中、低浓度中药组以及迪化唐锭组.NC组与DM组给予生理盐水,各组均给药12周.应用葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)ELISA试剂盒测定骨骼肌组织胞膜GLUT-4蛋白的含量.rn 结果：与NC组比较,DM组大鼠的骨骼肌细胞中GLUT-4表达明显降低;与DM组比较,药物治疗组骨骼肌细胞中GLUT-4的表达明显增强.rn 结论：祛胰抵方可能通过增强大鼠骨骼肌组织细胞中GLUT-4的表达以改善2型糖尿病胰岛素抵抗.

摘要： 目的:评价LYRM1基因过表达对成熟骨骼肌细胞线粒体合成基因表达的影响.方法:体外培养大鼠骨骼肌细胞株(L6),分别将pcDNA3.1及LYRM1-pcDNA3.1转染L6,通过G418筛选稳定表达株,应用Western blot技术验证其转染情况.诱导L6分化成熟后采用荧光定量RT-PCR方法检测线粒体基因PGC-1α、PG C-1β mRNA表达量.结果:Western blot证实LYRM1表达质粒转染成功;LYRM1-pcDNA3.1 L6细胞中PGC-1 α、PGC-1β mRNA水平显著高于对照空载L6细胞的水平.结论:LYRM1基因在L6细胞中过表达能明显改变线粒体PGC-1 α、PGC-1β mRNA水平,提示LYRM1基因在L6细胞中过表达影响了线粒体合成蛋白基因的表达.

摘要： 目的:探讨LYRM1基因过表达对骨骼肌细胞ROS生成的影响.方法:培养大鼠骨骼肌细胞株(L6),分别以pcDNA3.1及LYRM1-pcDNA3.1转染L6,筛选、验证细胞株LYRM1的表达.诱导L6分化成熟后以H2-DCFDA探针孵育,荧光显微镜观察ROS的荧光强度,流式细胞仪定量测定ROS的生成变化.结果:过表达LYRM1基因细胞株的荧光强度明显强于对照空载细胞;LYRM1基因过表达组荧光值为24.8933±4.45736,空载对照组荧光值为13.1512±0.73468,两组比较差异有统计学意义.结论:LYRM1基因在骨骼肌细胞中过表达可显著增加其ROS的产生,提示LYRM1基因过表达可影响细胞线粒体功能、造成线粒体损伤.

摘要： 探讨杨梅黄酮对高浓度胰岛素诱导的骨骼肌细胞胰岛素抵抗的影响及其相关机制.利用3H-2-脱氧葡萄糖摄取实验研究杨梅黄酮对骨骼肌细胞摄取葡萄糖的影响；采用Western blot法检测AMP活化蛋白激酶(AMPK)和蛋白激酶B(Akt)相关通路蛋白表达水平。研究结果表明,在正常情况下,杨梅黄酮增强了C2C12细胞对葡萄糖的摄取,并分别激活了Akt和AMPK信号通路；高浓度胰岛素(500 nM,12h)处理明显抑制了Akt和AMPK的活性,并降低了C2C12细胞在低浓度胰岛素(100 nM,1h)刺激下对葡萄糖的摄取作用；而杨梅黄酮预处理后,能逆转高浓度胰岛素抑制C2C12细胞葡萄糖摄取的作用,且这种作用可能与增强AMPK信号通路相关.上述结果表明,高浓度胰岛素作用12小时能诱导C2C12骨骼肌细胞胰岛素抵抗,杨梅黄酮干预后能改善这种胰岛素抵抗,机制可能与其激活AMPK通路有关.

摘要： 本研究以小鼠骨骼肌肌母细胞系C2C12骨骼肌细胞为研究对象，旨在探究频谱水培养对C2C12骨骼肌细胞糖脂代谢和线粒体功能的作用，为寻找改善骨骼肌细胞功能的无副作用手段提供一些研究数据和思路。研究阐明：频谱水培养C2C12骨骼肌细胞可通过增加骨骼肌细胞膜上葡萄糖运载体（GLUT1,4）的含量来提高骨骼肌细胞葡萄糖利用量；频谱水不改变正常骨骼肌细胞线粒体膜电位；频谱水可能通过提高线粒体中其中呼吸链复合体Ⅳ（COX1）的表达量而在骨骼肌细胞能量需要增加时加强线粒体的产能功能。

摘要： 选用20日龄岭南黄羽肉鸡鸡胚在无菌环境下分离腿部骨骼肌,经过剪碎、胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶消化,通过100目和200目筛过滤,滤液转移到10ml离心管中1700rpm离心、清洗得到骨骼肌原代细胞,用计数板计数,根据计数结果将细胞液稀释至5.0×105/mL,然后接种至培养瓶中,用完全培养基在二氧化碳培养箱培养48小时,再经0.25％胰蛋白酶消化传代,采用差速贴壁法得到骨骼肌卫星细胞,以5.0×105/mL浓度接种至96孔板和24孔板,试验分5组,各组无血清培养液中分别添加0、12.5、25、50、75和100 μmol/L的异黄酮S(所用异黄酮S为广东省农业科学院畜牧研究所研制产品,纯度为98.5％以上),异黄酮S预先溶解于二甲基亚砜中,并保持各组中二甲基亚砜浓度一致,所有培养液中均添加80μmol/LH2O2/FeSO4进行氧化处理建立氧化模型,每组6个重复(孔),研究了异黄酮S对肉鸡骨骼肌卫星细胞增殖和抗氧化作用的影响,试验观察了骨骼肌卫星细胞经异黄酮S处理后的形态变化和采用MTT法测定骨骼肌卫星细胞的增殖情况,结果表明,在氧化环境中,异黄酮S可减少骨骼肌卫星细胞死亡,而且添加异黄酮S均促进骨骼肌卫星细胞的增殖(p＜0.01),各异黄酮S处理组骨骼肌卫星细胞经MTT染色和SDS处理后的吸光度分别较对照组提高45.90％(p＜0.01)、58.64％(p＜0.01)、60.21％(p＜0.01)、46.42％(p＜0.01)和25.48％(p＜0.05).添加25,50,75和100μmol/L异黄酮S使细胞培养上清液中T-SOD活性分别提高17.02％ (p＜0.01),13.00％ (p＜0.05),13.26％(p＜0.05)和11.89％ (p＜0.05),添加25μmol/L异黄酮S提高GSH-px活性90.68％ (p＜0.05),75和1001μmol/L异黄酮S处理组CAT活性分别比对照组提高49.17％ (p＜0.01)和49.13％(p＜0.05),异黄酮S有提高细胞上清液中T-AOC的趋势(p＞0.05),添加75和100μmol/L异黄酮S处理显著降低细胞CK的分泌(p＜0.05).总之,异黄酮S能促进骨骼肌卫星细胞在氧化环境中的增殖,提高骨骼肌卫星细胞的抗氧化能力.

摘要： 目的：阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征对日常生活的影响以及对全身多系统功能损害而成为近年研究的热点,以上气道肌肉易塌陷性为主要特征,但其结构基础尚未完全阐明.因此需深入探索上气道肌肉肌蛋白的合成、纤维类型及其相对比例的改变.本实验则旨在建立体外骨骼肌细胞培养分化与肌纤维鉴定技术模型.方法：取C2C12细胞含10%FBS的高糖DMEM培养基中增殖培养，生长到75%-100%融合时，用胰酶洗脱离心后以合适的浓度用含20 mL/L马血清的高糖DMEM培养基重悬，置37°C，体积分数5%C02的孵箱内分化培养成肌管细胞，免疫荧光技术检测生肌素myogenin的表达，验证C2C12细胞的分化潜能，R-TPCR,western-blot技术检测肌球重链蛋白亚型的表达，鉴定肌纤维类别。结果：C2C12细胞分化前呈梭形，贴壁、融合生长，分化时逐渐变长，并形成肌管，细胞核为多核，呈串珠样排列。免疫荧光检测出myogenin表达，验证了C2C12细胞具有分化潜能，RT PCR, western-blot显示所培养的C2C12细胞在马血清诱导下分化为肌管细胞后，可表达MHC I, MHCIIA, MHCIIB3种不同类型肌球重链蛋白，并计算MHC I型纤维蛋白表达所占比例，约60%。结论：本实验成功建立了培养分化C2C12肌卫星细胞，测定肌球重链蛋白的表达及肌肉纤维的分化的模型，为今后睡眠呼吸暂停相关上气道塌陷性机制研究奠定了基础。

摘要： 机体氧化和抗氧化状态失衡是骨骼肌运动性疲劳的重要机制.核因子E2相关因子2(Nrf2)介导的抗氧化信号转导通路,是细胞抗氧化防御系统的核心部分.Nrf2与Keap1结合阻止了Nrf2在核内识别并结合靶基因中特异的抗氧化反应元件(ARE),从而抑制下游的抗氧化酶基因转录的启动.AMPK 是能量代谢的调节者，激活AMPK 可降低细胞内活性氧水平。而AMPK是否参与Nrf2的抗氧化信号通路调节，缺乏直接证据。本研究试图通过AMPK激活剂AICAR和Nrf2 激动剂(t-BHQ)作用，观察小鼠骨骼肌C2C12细胞Nrf2 mRNA 和蛋白表达、Nrf2/ARE 结合活性以及Nrf2 的靶基因mRNA 表达变化。

摘要： 本申请描述了从多能干细胞生产工程化骨骼肌组织的方法。还公开了一种从多能干细胞生产骨骼肌成肌细胞、骨骼肌管和卫星细胞的方法。在所述方法中，多能干细胞定向分化和成熟为骨骼肌管和卫星细胞。本申请还描述了工程化骨骼肌组织，其具有多核骨骼肌纤维与卫星细胞。此外，本发明还涉及中胚层分化的骨骼肌成肌细胞祖细胞、肌源性特定的骨骼肌成肌细胞祖细胞、骨骼肌成肌细胞、卫星细胞和骨骼肌管，它们可以通过所公开的方法来生产。本申请还描述了骨骼肌组织或所披露的细胞在药物测试或医学中的用途。最后，本申请涉及到使用骨骼肌组织或所披露的细胞的体外方法。

摘要： 本文公开了用于提高Pax7表达的方法和系统，在细胞中激活内源成肌转录因子Pax7的方法，将干细胞分化成骨骼肌祖细胞的方法，以及用于治疗需要再生的肌肉祖细胞的对象的组合物和方法。所述组合物和方法可以包括基于Cas9的转录激活蛋白和至少一种靶向Pax7的指导RNA(gRNA)。

摘要： 本发明提供了一种通过导入Notch基因将骨髓间质细胞诱导/分化神经细胞和骨骼肌细胞的方法。即，本发明提供了一种通过导入Notch基因将骨髓间质细胞体外诱导分化为神经细胞或骨骼肌细胞的方法，所述方法包括将Notch基因和/或Notch信号传导相关基因导入所述细胞，其中所得分化/诱导的细胞是导入了Notch基因和/或Notch信号传导相关基因的骨髓间质细胞的细胞分裂子代。本发明还提供了将分化/诱导的神经细胞进一步诱导/分化为多巴胺能神经元或乙酰胆碱能神经元。本发明还还涉及用本发明的方法所获得的神经前体细胞、神经细胞或骨骼肌细胞治疗神经退化性疾病或肌退化性疾病的方法。

摘要： 本发明提供了一种通过导入Notch基因将骨髓间质细胞诱导/分化神经细胞和骨骼肌细胞的方法。即，本发明提供了一种通过导入Notch基因将骨髓间质细胞体外诱导分化为神经细胞或骨骼肌细胞的方法，所述方法包括将Notch基因和/或Notch信号传导相关基因导入所述细胞，其中所得分化/诱导的细胞是导入了Notch基因和/或Notch信号传导相关基因的骨髓间质细胞的细胞分裂子代。本发明还提供了将分化/诱导的神经细胞进一步诱导/分化为多巴胺能神经元或乙酰胆碱能神经元。本发明还还涉及用本发明的方法所获得的神经前体细胞、神经细胞或骨骼肌细胞治疗神经退化性疾病或肌退化性疾病的方法。

摘要： 本发明属于动物细胞培养技术领域，具体涉及一种利用猪去分化脂肪细胞诱导分化形成骨骼肌细胞的方法。本发明通过胶原酶消化法分离猪皮下脂肪组织的成熟脂肪细胞，去分化形成去分化脂肪细胞(DFAT细胞)。DFAT细胞与间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有相似的功能特性，能够在体外高效增殖和诱导多向分化。另外，本发明成功将猪DFAT细胞在体外利用半乳糖凝集素‑1(Galectin‑1)蛋白的诱导，分化形成能够表达骨骼肌细胞特异性标志分子的多核细胞。

摘要： 本发明涉及干细胞领域，具体涉及一种多能干细胞快速分化为骨骼肌细胞的方法，旨在解决多能干细胞诱导骨骼肌细胞时间长，效率低的问题。具体包括向培养基中的多能干细胞中引入含有至少一种潜能基因的表达载体，从而将所述多能干细胞定向分化为骨骼肌细胞。通过在诱导人的多能干细胞向骨骼肌细胞定向分化的不同阶段，特异诱导Mef2b、Pax3、Pax7、Mydo1、Pitx1、Myogenin、Mef2c、Mrf4、Desmin中的一种或几种不同组合基因的表达，可获得了纯度高达80％的功能性的骨骼肌细胞，而且显著缩短了诱导的周期。

摘要： 本发明公开了一种利用骨骼肌组织块培养获得骨骼肌细胞的方法，包括采样、剪切、摆布、培养，它的步骤如下：（1）采集骨骼肌组织块，剪切，摆布于培养瓶的瓶底；（2）翻转培养，将培养瓶的瓶底朝上，盖好瓶塞，放入培养箱中，在体积浓度为5%CO

摘要： 本发明提供了一种通过导入Notch基因将骨髓间质细胞诱导/分化神经细胞和骨骼肌细胞的方法。即，本发明提供了一种通过导入Notch基因将骨髓间质细胞体外诱导分化为神经细胞或骨骼肌细胞的方法，所述方法包括将Notch基因和/或Notch信号传导相关基因导入所述细胞，其中所得分化/诱导的细胞是导入了Notch基因和/或Notch信号传导相关基因的骨髓间质细胞的细胞分裂子代。本发明还提供了将分化/诱导的神经细胞进一步诱导/分化为多巴胺能神经元或乙酰胆碱能神经元。本发明还涉及用本发明的方法所获得的神经前体细胞、神经细胞或骨骼肌细胞治疗神经退化性疾病或肌退化性疾病的方法。

摘要： 本发明提供了一种通过导入Notch基因将骨髓间质细胞诱导/分化神经细胞和骨骼肌细胞的方法。即，本发明提供了一种通过导入Notch基因将骨髓间质细胞体外诱导分化为神经细胞或骨骼肌细胞的方法，所述方法包括将Notch基因和/或Notch信号传导相关基因导入所述细胞，其中所得分化/诱导的细胞是导入了Notch基因和/或Notch信号传导相关基因的骨髓间质细胞的细胞分裂子代。本发明还提供了将分化/诱导的神经细胞进一步诱导/分化为多巴胺能神经元或乙酰胆碱能神经元。本发明还涉及用本发明的方法所获得的神经前体细胞、神经细胞或骨骼肌细胞治疗神经退化性疾病或肌退化性疾病的方法。

摘要： 一种基于Rbm24基因获得干细胞源骨骼肌细胞的方法，涉及干细胞再生医学与药物。所述基于Rbm24基因序列构建的表达载体包括其核苷酸序列如序列表所示的Rbm24基因、荧光报告基因以及抗生素筛选基因。所述干细胞为胚胎干细胞或诱导多能性干细胞。所述Rbm24基因转染多能性干细胞在促进多能性干细胞向骨骼肌分化中的应用。所述Rbm24基因感染多能性干细胞在促进多能性干细胞向骨骼肌分化中的应用。构建含有编码RNA结合蛋白Rbm24的基因序列的转染载体；将构建的转染载体转染到干细胞中；转染后，用骨骼肌定向分化诱导液进行诱导分化，直至获得成熟的骨骼肌细胞。