阿萨希毛孢子菌

摘要： 目的研究微进化对阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)感染宿主情况及感染后机体免疫反应等方面的影响。方法用微进化株(TEVO)与阿萨希毛孢子菌原代株(TO)感染Balb/c小鼠,比较两株菌感染小鼠脏器组织中真菌的相对载量、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、血清β-葡聚糖水平以及脾脏T细胞分化差异。结果TEVO菌株以孢子状态为主,TO菌株以菌丝生长状态为主;TEVO组小鼠各组织相对载量、血浆(1,3)-β-D-葡聚糖水平及MPO浓度均明显低于TO组;TEVO组小鼠脾脏中CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞的比例均高于TO组。结论微进化后的TEVO菌株对宿主的感染能力以及感染前期宿主对TEVO菌株的防御和杀伤能力均低于TO菌株,这可能与TEVO菌株表型变化密切相关。

摘要： 目的使用两种方法分离和纯化临床分离阿萨希毛孢子菌的荚膜多糖葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖(GXM)。方法对临床分离的阿萨希毛孢子菌进行增菌,采用无水乙醇沉淀荚膜多糖,通过十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对GXM特异性沉淀,分别采用透析法和萃取法分离GXM-CTAB复合物从而纯化GXM。使用苯酚硫酸法测定GXM的浓度。结果通过透析法从200 mL培养上清中获得了约6.6 mg的GXM,阿萨希毛孢子菌GXM的获得率(GXM/GXM和GalXM混合多糖)为13.9%(6.6/47.4)。通过萃取法从200 mL培养上清中获得了约8.4 mg的GXM,阿萨希毛孢子菌GXM的获得率为14.2%(8.4/59)。结论两种方法都成功地提取和纯化了阿萨希毛孢子菌荚膜多糖GXM,萃取法较透析法更为高效。

摘要： 患者,男,41岁,急性白血病化疗后骨髓抑制期出现高热,广谱抗生素覆盖,患者体温好转后再次高热.第1次发热血培养缓症链球菌/葡萄球菌.第2次发热血培养阿萨希毛孢子菌.血清隐球菌抗原(免疫胶体金法)阳性,胸部CT提示肺部感染.加用国产伏立康唑后体温曾下降,再次上升,换用进口伏立康唑患者未再发热,持续口服伏立康唑,2个月后复查胸部CT肺部病灶好转.

摘要： 目的 研究微进化对阿萨希毛孢子菌(T.asahii)与巨噬细胞RAW264.7相互作用的影响.方法 将微进化前后的T.asahii与RAW264.7细胞共培养,检测RAW264.7对两株菌的吞噬和杀伤能力以及两株菌对RAW264.7产生的细胞毒性的差异,同时分析RAW264.7自身细胞因子分泌情况的变化.结果 巨噬细胞对原代菌株(TO)的吞噬能力以及杀伤率均明显高于微进化株(TEVO);TO菌株对巨噬细胞的细胞毒性要强于TEVO;当巨噬细胞与菌株按1:3或1:6共培养24 h时,与TO共培养的巨噬细胞TNF-α和IL-6的分泌量要高于TEVO组,而按1:9共培养时TEVO组细胞因子的分泌量却高于TO组.结论 微进化后的TEVO菌株与巨噬细胞的相互作用明显弱于原代株TO,这也为TEVO菌株在宿主体内长期共存提供了良好的基础.

摘要： 目的 研究体内微进化对阿萨希毛孢子菌生物膜相关表型及耐药性的影响.方法 阿萨希毛孢子菌标准株源自荷兰真菌多态性保藏中心,阿萨希毛孢子菌原代株TO(氟康唑敏感)为解放军总医院第七医学中心皮肤科1例毛孢子菌病的临床分离株,进化株TEVO(氟康唑耐药)在该患者2014年复诊时分离.体外构建上述菌株的生物膜,使用四甲基氮盐(XTT)还原法及激光共聚焦扫描显微镜评估生物膜生长动力学并测定生物膜厚度;体外测定氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑对不同生长阶段生物膜的最低抑菌浓度(SMIC),评估生物膜的耐药性.多组间比较采用单因素方差分析,Hartley检验对数据进行方差同质性检验,若方差齐,选用LSD检验进行组间多重比较,若方差不齐,选用Tamhane＇T2检验进行组间多重比较.结果 在阿萨希毛孢子菌生物膜黏附(0 h)及形成阶段(4 ～ 24 h),进化株TEVO代谢活性最弱(F黏附= 35.705,P＜ 0.001;F形成= 15.042,P＜ 0.001).而黏附后第48小时生物膜成熟,此时生物膜代谢活性最弱的菌株为TO株(F= 10.985,P＜0.001).生物膜厚度测量结果显示,成熟阶段TEVO株生物膜厚度[(26.1 ±1.18) μm]大于TO株[(22.8±1.73)μm,P = 0.001],但小于标准株[(29.5 ± 1.28) μm,P = 0.001].药物敏感性实验结果显示,在阿萨希毛孢子菌生物膜黏附及形成阶段,唑类抗真菌药物对TEVO株的SMIC值大于TO株;生物膜成熟阶段,3株菌生物膜的SMIC值均大于1 024mg/L.结论 在宿主内环境和抗真菌药物的双重压力下,阿萨希毛孢子菌生物膜相关表型发生了适应性改变,并增强了对唑类抗真菌药物的耐药性.

摘要： 目的 研究中药单体肉桂醛是否对阿萨希毛孢子菌的生长及其生物膜形成有影响.方法 选取临床分离菌株进行ITS基因序列分析及VITEK MS鉴定,通过培养建立体外生物膜模型.倍比稀释法测定1050 mg/L、525 mg/L、262.5 mg/L和131.25 mg/L浓度肉桂醛溶液对阿萨希毛孢子菌生长的抑制作用,银染法观察不同浓度肉桂醛对阿萨希毛孢子菌生物膜形成的影响.结果 实验中各浓度的肉桂醛都能抑制阿萨希毛孢子菌的生长,延长生物膜的形成时间,且肉桂醛浓度越高,其作用效果越明显.当肉桂醛浓度达到1050 mg/L时,对阿萨希毛孢子菌生长的抑制效果最显著,该浓度下培养基孔内未见阿萨希毛孢子菌生长.银染法观察可见,此浓度下培养基内未形成生物膜,表明1050 mg/L浓度肉桂醛对阿萨希毛孢子菌生物膜的形成产生了明显的抑制作用.结论 肉桂醛能够抑制阿萨希毛孢子菌生长及其生物膜形成.

摘要： 目的 观察调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在播散性阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)病小鼠模型中的表达,初步探讨Foxp3+调节性T细胞在播散性毛孢子菌病发病机制中可能发挥的作用.方法 50只雄性BALB/c小鼠随机分为试验组和对照组,每组25只,分别于尾静脉接种阿萨希毛孢子菌悬液和生理盐水.接种后第3,7,14,21及28天,流式细胞仪检测两组小鼠脾脏单个核细胞悬液中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比率;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组小鼠脾脏Foxp3 mRNA水平表达情况.结果 试验组小鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比率及Foxp3 mRNA表达随着感染进程先增高后下降至正常水平.接种后第3、28天,试验组小鼠脾脏单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的比例与对照组差异无统计学意义(P>0.05);接种后第7、14及21天调节性T细胞的比例较对照组明显上升,差异有统计学意义(P0.05);接种后第7、14、21天与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 阿萨希毛孢子菌可以诱导小鼠体内CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在感染中后期表达增高,调节性T细胞可能参与调节播散性毛孢子菌病的免疫应答.

摘要： 65岁男性患者,类风湿关节炎病史20余年,4年前右小腿出现瘙痒性红斑、丘疹及斑块, 2个月前斑块上出现疼痛性溃疡及结痂.皮肤科情况:右小腿下1/3处暗红色斑块、结痂及多个圆形溃疡.皮损组织病理示局部表皮坏死,坏死区真皮中、下层白细胞碎裂性血管炎,坏死区边缘表皮海绵水肿,真皮浅层毛细血管管壁增厚、数量增多.溃疡分泌物真菌学检查示阿萨希毛孢子菌阳性.皮损切片六铵银(GMS)染色浅表痂皮中见菌丝、孢子及芽生孢子.诊断:类风湿关节炎右小腿溃疡继发阿萨希毛孢子菌定植.口服伊曲康唑联合外用药及抗风湿治疗后溃疡愈合.

摘要： 患者以"双足3、4趾趾间皮肤溃疡5月余"为主诉于2015年4月20日入本院.5月前患者左足3、4趾趾间皮肤出现小水疱及皮肤浸渍糜烂,伴轻度瘙痒,未予特殊诊治.约1周后右足对称部位出现同样皮损,就诊于当地医院,给予复发多粘菌素B外涂,无明显好转,皮损继续扩大,曾就诊于多家医院,给予复方多粘菌素B、百多邦、多种抗真菌药膏(特比萘芬乳膏、联苯苄唑乳膏、酮康唑乳膏、咪康唑乳膏等)及中药制剂外用、红光治疗(具体不详)等,均无明显疗效.近1月口服"雷公藤片1片3/日",创面无明显变化,为求进一步诊治来我科就诊.门诊以"双足趾溃疡待查"收入院.本例患者的特殊之处在于健康成年男性的阿萨希毛孢子菌的浅表感染，该患者无基础疾病，无免疫功能受损，无外伤影响，无冶游史。皮损表现为初起水疤及浸溃糜烂，后形成溃疡，经多种外用抗真菌药物治疗无效果，最终手术彻底切除溃疡后自体皮移植封闭创面，围手术期未行任何抗真菌治疗，为临床上治疗慢性顽固性抗真菌治疗无效的浅表真菌感染提供了另外可行的治疗方法。

摘要： 目的:探讨重症监护病房老年尿路感染患者尿液分离阿萨希毛孢子菌的基因分型及其药敏特征,为临床治疗提供依据.方法:共收集2009年1月—2012年1月尿路感染阿萨希毛孢子菌10株,设计序列特异性引物对其基因进行鉴定,并采用微量肉汤稀释法和E-test法对其进行药敏实验.结果:基因型别鉴定结果显示,10株阿萨希毛孢子菌以Ⅳ型基因为主,占70％,其次分别为Ⅲ型(20％)和Ⅰ型(10％)；体外药敏结果显示,各菌株对两性霉素B、氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、5’-氟胞嘧啶均为敏感,其中伏立康唑的最低抑菌浓度最小,且部分菌株对伊曲康唑呈现剂量依赖性敏感.结论:重症监护病房老年尿路感染患者尿液阿萨希毛孢子菌基因型别以Ⅳ型为主,三唑类药物对其具有显著疗效,其中,以伏立康唑效果最佳.

摘要： 目的：研究γ-干扰素(IFN-γ)对小鼠巨噬细胞株RAw264.7吞噬、杀伤阿萨希毛孢子菌(Trichospororasahii，T．asahii)的作用，探讨IFN-γ临床治疗T．asahii感染的可能性。方法：不同浓度(10、100、1000U/ml)的γ-干扰素与RAW264.7细胞共孵育18h后，分别与T．asahii临床株共培养45min、4h(不加γ-干扰素组为对照组)。45min后在显微镜下观察RAw264.7细胞吞噬T．asahii的情况，即计数吞噬个数及计算吞噬率。4h后检测RAW264.7细胞的杀伤活性，即检测每毫升中T．asahii的菌落形成单位(CFU/ml)，计算生长抑制率。结果：当IFN-γ(10、100、1000U/ml)时，小鼠巨噬细胞株RAw264.7吞噬T．asahii的个数分别为25.12±1.81、35.88±3.56、52.12±3.23，吞噬率依次为25.12％、35.88％、52.12％，与对照组13.62±2.39比较具有显著性差异(P<0.01)。每毫升中T．asahii的菌落形成单位分别为58.62±4.89、45。50±3.02、34.62±4.24。生长抑制率依次为25.21％、41.95％、55.83％，与对照组68.12±3.39比较具有显著性差异(P<0.01)。结论：IFN-γ呈剂量依赖性地增强RAW264.7细胞吞噬、杀伤T．asahii的活性，各组之间的差异具有显著性意义(P<0.01);IFN-γ可增强RAW264.7细胞对T．asahii的吞噬、杀伤作用。

摘要： 研究阿萨希毛孢子菌是否具有极性生长特征以及从极性生长角度探讨T.asahii形成菌丝和关节菌丝的内在机制,有可能在T.asahii致病机制研究方面开辟一个新的方向,并为抗真菌药物设计提供新的靶位,本实验应用FM4-64和Filipin两种荧光染剂对T.asahii进行特异的荧光染色,以此来分析T.asahii是否具有极性生长特征以及极性生长的特点.

摘要： 目的：探讨重症监护病房老年尿路感染患者尿液分离阿萨希毛孢子菌的基因分型及其药敏特征,为临床治疗提供依据.方法：共收集2009年1月～2012年1月尿路感染阿萨希毛孢子菌10株,设计序列特异性引物对其基因进行鉴定,并采用微量肉汤稀释法和E-test法对其进行药敏实验.结果：基因型别鉴定结果显示,10株阿萨希毛孢子菌以Ⅳ型基因为主,占70％,其次分别为Ⅲ型(20％)和Ⅰ型(10％);体外药敏结果显示,各菌株对两性霉素B、氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、5′-氟胞嘧啶均为敏感,其中伏立康唑的最低抑菌浓度最小,且部分菌株对伊曲康唑呈现剂量依赖性敏感.结论：重症监护病房老年尿路感染患者尿液阿萨希毛孢子菌基因型别以Ⅳ型为主,三唑类药物 对其具有显著疗效,其中,以伏立康唑效果最佳.

摘要： 研究背景:2000年以前,国内尚无播散性毛孢子菌病及其相关基础研究报道.2000年,我院收治了一例患者,成功从患者体内分离出菌株—阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii),患者被确诊为我国首例播散性毛孢子菌病.近几年,我们围绕该病的诊断、治疗及病原学进行了系列研究.研究目的:明确T.asahii是该病例的致病菌;明确播散性毛孢子菌病诊断依据及有效治疗方案;确立T.asahii的分离方法和鉴定特征.研究内容:临床研究:播散性毛孢子菌病的诊断、治疗、护理;病原学研究:T.asahii真菌培养特征、超微形态学、致病性研究;免疫学研究:与T.asahii感染防御相关的重要细胞因子及免疫相关基因研究.研究方法:1、诊断研究:临床特征观察;组织病理学检查;病原真菌分离、鉴定,包括形态学及超微结构观察、生化实验、DNA序列分析.2、治疗研究:临床抗真菌治疗观察;小鼠模型治疗实验观察;免疫疗法.3、护理研究:播散性毛孢子菌病的综合护理:高热护理、静脉输液及血管护理、心理治疗及护理、皮损及粘膜护理.4、真菌学研究:DNA序列分析;扫描电镜、透射电镜观察;动物致病性实验研究;不同培养条件下该菌的生长特征观察.5、免疫学研究:T.asahii与健康人单核细胞混合培养;利用基因芯片观察小鼠T.asahii皮肤感染的基因差异表达.结果:成功诊断及治疗了国内首例播散性毛孢子菌病患者;分离出我国第一株阿萨希毛孢子菌,并被国家菌种库收藏;通过我们的研究,建立了规范有效的治疗方案,为今后本病的治疗提供了依据;通过小鼠播散性毛孢子菌病模型的建立,探讨了T.asahii感染条件、途径、脏器播散及抗真菌治疗情况;对T.asahii进行生物学培养条件及超微形态学研究为临床提供了诊断了鉴别诊断的依据;通过T.asahii与健康人单核细胞混合培养以及基因芯片研究,探讨了细胞因子、补体激活、干扰素诱导等在本病发生发展中所起重要作用,为免疫治疗提供依据.

摘要： 本发明涉及微生物技术领域，具体公开了聚六亚甲基双胍在抑制、杀灭红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及白念珠菌中的应用。本发明提供了聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭红色毛癣菌中的应用、聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭须癣毛癣菌中的应用、聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭犬小孢子菌中的应用、聚六亚甲基双胍在抑制和/或杀灭白念珠菌中的应用。本发明扩大了聚六亚基双胍的应用范围，并为制备由上述真菌引起的疾病的药物、抗真菌医疗器械或抗真菌医用材料提供了新思路。

摘要： 本发明公开了一种毛孢子菌检测试剂盒及其制备方法，毛孢子菌检测试剂盒包含毛孢子菌捕获抗体包被的酶标板、毛孢子菌检测抗体、标准品、样本稀释缓冲液、包被缓冲液、封闭缓冲液、底物溶液及终止液。本发明利用多克隆毛孢子菌捕获抗体包被酶标板，使用高度特异性ELISA结合标准真菌培养方法证明了毛孢子菌特异性多抗(pAb)在混合培养物中区分T.asahii与其他酵母病原体的准确性，以及本发明中捕获抗体与可与毛孢子菌特异性结合。

摘要： 本发明属现代农业领域。P.indica厚垣孢子，其特征是，所述P.indica厚垣孢子如下发酵方法获得：培养基接种P.indica摇瓶培养72h获得培养液，按体积比1:10接种到灭菌的发酵罐中，继续培养96h后，加入0.3‑0.5wt％的Ca(OH)2培养48h，诱导产生厚垣孢子。P.indica孢子菌剂，其有效成分为P.indica厚垣孢子。本发明还公开了上述P.indica孢子菌剂的制备方法。本发明制备的P.indica孢子菌剂可以在作物根际定殖共生，促进农作物的生长，提高作物产量。

摘要： 本发明提供一种尖端赛多孢子菌、土曲霉、构巢曲霉的引物探针及其应用，提供了针对检测尖端赛多孢子菌、土曲霉、构巢曲霉的引物探针，且这些引物探针针对尖端赛多孢子菌、土曲霉、构巢曲霉的ITS的特异性区域设计，可结合数字PCR技术快速实现尖端赛多孢子菌、土曲霉、构巢曲霉的快速检测。

摘要： 本发明公开了一种基于数字PCR技术检测耶氏肺孢子菌的试剂盒及检测方法，属于病原微生物检测技术领域。本发明所述试剂盒包括特异性扩增引物、荧光探针、阳性质控品、阴性质控品和检测试剂，其中，所述特异性扩增引物包括正向引物和反向引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～NO.2所示；所述荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述阳性质控品为含有耶式肺孢子菌基因保守区域的重组质粒，保守区域的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明所述试剂盒和检测方法具有灵敏度高、特异性强，可对复杂生物样本中低丰度的核苷酸进行定性和定量检测的优点，有助于实现临床肺孢子菌肺炎的早期、快速、精确定量检测。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了一种检测阿萨希毛孢子菌的DNA探针。本发明所述检测阿萨希毛孢子菌的DNA探针具有序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，其检测阿萨希毛孢子菌特异性强，灵敏度高达0.04ng。本发明还提供包含所述DNA探针的基因芯片。采用本发明所述基因芯片可实现对可能含阿萨希毛孢子菌的样品的高通量、自动化及快速检测，特异性强，可保证检测结果的精确性，具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明提供了一株丙烯酰胺酶的菌株——阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii)2-1，及其在制备丙烯酸中的应用。所述阿萨希毛孢子菌2-1保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市珞珈山武汉大学，430072，保藏日期2010年01月19日，保藏编号CCTCC No：M 2010017。本发明通过筛选得到一株产酰胺酶的新菌株，经过诱变改良得到酰胺酶酶活明显提高的诱变菌株，并以此突变菌株来生物法制备丙烯酸，代替化学合成的方法。具有转化率高，环境友好，过程绿色等优点。同时该菌株可以利用高毒的脂肪氰类化合物、丙烯酰胺水解成毒性较小酸类物质，为处理工业废水中脂肪睛、酰胺类化合物一种最经济、最有效的方法，因此本发明在环境治理上也具有重要的现实意义。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了一种检测阿萨希毛孢子菌的DNA探针。本发明所述检测阿萨希毛孢子菌的DNA探针具有序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，其检测阿萨希毛孢子菌特异性强，灵敏度高达0.04ng。本发明还提供包含所述DNA探针的基因芯片。采用本发明所述基因芯片可实现对可能含阿萨希毛孢子菌的样品的高通量、自动化及快速检测，特异性强，可保证检测结果的精确性，具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明提供了一株丙烯酰胺酶的菌株——阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii)2-1，及其在制备丙烯酸中的应用。所述阿萨希毛孢子菌2-1保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市珞珈山武汉大学，430072，保藏日期2010年01月19日，保藏编号CCTCC No：M2010017。本发明通过筛选得到一株产酰胺酶的新菌株，经过诱变改良得到酰胺酶酶活明显提高的诱变菌株，并以此突变菌株来生物法制备丙烯酸，代替化学合成的方法。具有转化率高，环境友好，过程绿色等优点。同时该菌株可以利用高毒的脂肪氰类化合物、丙烯酰胺水解成毒性较小酸类物质，为处理工业废水中脂肪睛、酰胺类化合物一种最经济、最有效的方法，因此本发明在环境治理上也具有重要的现实意义。

摘要： 本发明提供了一种基于高分辨率熔解曲线鉴别五种毛孢子菌的方法，所述五种毛孢子菌为阿萨希毛孢子菌、皮瘤毛孢子菌、真皮毛孢子菌、Trichosporon montevideense和Trichosporon dohaense，所述方法使用一对能同时鉴别上述五种毛孢子菌的特异性引物对，以待测样品DNA为模板，建立高分辨率熔解曲线反应体系，采用高分辨率熔解曲线反应程序，同时连续检测荧光强度，以荧光信号对温度的一阶负导数为纵坐标，温度为横坐标，得到熔解曲线图。本发明方法无需进行后续PCR产物电泳检测与测序，简化操作流程，提高检测效率，并有较高的灵敏度和特异性。