间接竞争ELISA

摘要： 该研究设计合成了一种胭脂红半抗原,分别采用重氮化法和戊二醛法将半抗原与载体蛋白偶联制备人工抗原,通过免疫Bal b/c小鼠及杂交瘤技术成功筛选制备了胭脂红高特异性单克隆抗体,与苋菜红、柠檬黄等结构类似物无交叉反应。基于该抗体建立了间接竞争酶联免疫分析方法用于检测食品中胭脂红残留。该方法对胭脂红的半抑制浓度(IC_(50))和检出限(IC_(10))分别为10.1 ng/mL和0.98 ng/mL,线性范围为2~50 ng/mL。将该方法应用于山楂条和雪碧中胭脂红的快速检测,样品加标回收率分别为93.0%~113%和93.0%~100%,相对标准偏差分别为9.7%~12%和3.2%~3.9%。结果与HPLC-UV方法一致,表明该方法可用于食品中痕量胭脂红的快速筛查。

摘要： 目的:建立检测环丙沙星药物残留的酶联免疫分析方法。方法:采用活泼酯法制备免疫原环丙沙星-牛血清蛋白偶联物、同源包被原环丙沙星-鸡卵清蛋白偶联物、异源包被原氧氟沙星-鸡卵清蛋白偶联物。采用紫外吸收光谱法扫描鉴定人工抗原是否偶联成功。用免疫原免疫新西兰大白兔得到多克隆抗体,对其性能进行鉴定。通过间接竞争酶联免疫分析方法筛选最佳包被原,对抗体和包被原的最佳工作浓度、封闭液浓度等条件进行优化,建立检测环丙沙星的检测方法。最后对方法特异性和准确度进行评价。结果:同源包被比异源包被效果好。当包被原稀释8000倍,抗体稀释4000倍时,对环丙沙星的检测灵敏度最高,半抑制浓度IC_(50)为0.16 ng/mL,检测限IC_(10)为0.012 ng/mL。除诺氟沙星外,对其余几种环丙沙星类似物的交叉反应率均在15%以下,鱼肉、禽蛋样品的添加回收率范围为80%~105%。结论:该检测方法对环丙沙星、诺氟沙星具有较强的特异性及较高的灵敏度,可用于水产品、禽蛋中环丙沙星、诺氟沙星的快速检测。

摘要： 以合成沙丁胺醇(SAL)完全抗原为基础获得针对SAL的多克隆抗体,建立检测SAL的间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定基础.为此,分别用混合酸酐法和活化酯法制备SAL-BSA免疫原和SAL-OVA检测原,免疫新西兰大白兔获得SAL多抗血清,建立检测SAL ic-ELISA检测方法.结果显示,成功合成了 SAL-BSA和SAL-OVA,其偶联比分别为17 ∶ 1和6.4 ∶ 1;免疫后兔血清抗体效价为1 ∶ 102 400,所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(IC50)为24.84 μg/L,最低检测限(IC10)为0.78 μg/L,线性范围IC20～IC80为 3.16μg/L～80.1 μg/L;精密度(CV)％＜10％,回收率在98％～110％之间.特异性鉴定结果显示,SAL多抗血清除与侧链上含有叔丁基官能团的结构类似物具有较强的交叉反应外,不存在与其他同类分子的交叉反应.以上结果表明,成功建立了检测SAL的ic-ELISA检测方法,为进一步开发SAL快速检测试剂盒奠定了基础.

摘要： 为了对动物性食品中氯霉素(CAP)进行快速检测,以CAP与卵清蛋白(OVA)偶联合成的CAP-OVA为包被抗原,CAP为竞争的半抗原,通过优化反应条件,建立间接竞争ELISA检测方法.结果显示:最佳包被抗原质量浓度为0.25μg/mL,单克隆抗体稀释倍数为1:32000,酶标二抗稀释倍数为1:4000,最低检测限为1.01 ng/mL,批内和批间变异系数分别为3.80％和6.30％,建立的回归方程为y=-10.7x+66.042(R2=0.9969),建立了快速检测氯霉素残留的间接竞争ELISA法.

摘要： 为了对动物性食品中氯霉素(CAP)进行快速检测,以CAP与卵清蛋白(OVA)偶联合成的CAP-OVA为包被抗原,CAP为竞争的半抗原,通过优化反应条件,建立间接竞争ELISA检测方法.结果显示:最佳包被抗原质量浓度为0.25μg/mL,单克隆抗体稀释倍数为1∶32000,酶标二抗稀释倍数为1∶4000,最低检测限为1.01 ng/mL,批内和批间变异系数分别为3.80%和6.30%,建立的回归方程为y=-10.7x+66.042(R2=0.9969),建立了快速检测氯霉素残留的间接竞争ELISA法.

摘要： [目的]建立β2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法,为动物食源性β2-受体激动剂类药物残留的快速检测提供技术支持.[方法]以沙丁胺醇多克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA的检测条件,建立一种快速检测猪尿中沙丁胺醇、卡布特罗、西布特罗、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、克伦潘特、可尔特罗、吡布特罗、马喷特罗、比托特罗与妥布特罗等12种β2-受体激动剂类药物的间接竞争ELISA检测方法.[结果]建立的β2-受体激动剂类药物间接竞争ELISA检测方法的最佳反应条件为:37°C,抗原以1∶10 000倍包被1h,抗体以1∶40 000稀释作用40 min,酶标抗体以1∶20 000稀释作用40 min.采用建立的间接竞争ELISA最佳反应条件对猪尿中的β2-受体激动剂类药物残留进行检测,结果表明12种β2-受体激动剂类药物在0.1～20 μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.952;检出限为0.15 μg/L,定量限为0.5 μg/L;在0.5与1.0 μg/L的添加浓度下,回收率为68.4％～114.2％,批内、批间RSD分别为0.4％～10.1％和0.4％～12.5％.[结论]所建立的β2-受体激动剂类药物残留ELISA检测方法操作简单、快速,灵敏度高,适用于猪尿中β2-受体激动剂药物的筛选与检测.

摘要： [目的]本研究旨在建立一种简单、快速检测猪肉中氯丙嗪(CPZ)残留量的方法。[方法]以CPZ-牛血清白蛋白(BSA)为包被抗原,自制鼠抗CPZ单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测猪肉中CPZ含量的间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),同时优化检测条件并对该方法进行评价。[结果]采用自行制备的特异性鼠抗CPZ单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,优化得到最佳反应条件:抗原包被稀释倍数为1∶10000,单克隆抗体浓度为1μg·mL-1,酶标二抗稀释倍数为1∶1000,最低检测限为0.51 ng·mL-1,线性检测范围为1.37~111.11 ng·mL^-1。线性回归直线方程为y=-1.2526x+2.8532,相关系数(R 2)为0.9866,总变异系数(CV)为6.97%,空白猪肉添加回收率为96.90%~118.79%。[结论]建立的间接竞争ELISA方法特异性强,灵敏度、精密度、准确度和重现性良好,可用于猪肉组织中CPZ残留的快速检测。

摘要： 本发明公开了一种检测糠氨酸的间接竞争ELISA方法。本发明利用糠酸和氯化亚砜合成糠氨酸半抗原，然后将该半抗原与载体蛋白进行偶联，得到糠氨酸人工完全抗原，进而制备其糠氨酸多克隆抗体，并基于抗原抗体特异性识别建立了检测糠氨酸的间接竞争ELISA方法，该方法是利用糠氨酸多克隆抗体作为结合抗体，糠酸人工完全抗原作为包被原建立的。该方法具有快速、灵敏、准确等优点，特别适用于现场大量样品的快速检测，为乳品中糠氨酸的快速检测开辟了一种新路径，提供了一种新的检测手段。

摘要： 区分新城疫病毒样颗粒疫苗免疫血清与野毒感染血清的间接竞争ELISA方法及试剂盒，属于病毒检测领域。本发明以NP蛋白为免疫抗原，以单克隆抗体为抗体诊断试剂，利用棋盘法对包被抗原及单抗浓度进行优化，对包被时间、一抗浓度及孵育时间、二抗浓度及孵育时间等条件优化；根据工作浓度将免疫抗原包被于ELISA孔中，同时以不同稀释倍数的样本血清与固定稀释倍数的单克隆抗体混合后进行阻断实验，将混合物与固相抗原结合作用，再以辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG为二抗继续孵育，用TMB显色液显色，加入2M硫酸溶液终止反应。本发明可有效移除传染源，消灭持久疫源地的存在，为新城疫的净化提供理论依据，具有检测灵敏、准确，操作简便及特异性强的优点。

摘要： 本发明公开了一种检测动物源性食品中头孢类抗生素的间接竞争ELISA试剂盒及其应用，包括包被有包被原的酶标板、头孢类抗生素标准品、头孢类抗生素通用抗体、酶标记二抗、稀释缓冲液、洗涤缓冲液、底物显色液和反应终止液；头孢类抗生素通用抗体能特异性识别头孢氨苄、头孢拉定、头孢羟氨苄、头孢哌酮、头孢唑啉或头孢噻肟，不能识别青霉素钠。本发明制备出一种头孢类抗生素通用抗体，该通用抗体和大部分头孢类抗生素均有较高的交叉反应率，而对于同含有β‑内酰胺环的结构类似物青霉素钠却几乎没有交叉反应，表明该通用抗体具有较高的特异性。采用该通用抗体制备的试剂盒具有敏感度高、检测药物种类多、成本低、操作简单、检测时间短的优点。

摘要： 本发明提供一种龙胆苦苷的人工抗原制备及间接竞争ELISA检测的建立方法，采用琥珀酸酐法对药用有效成分龙胆苦苷进行结构修饰，获得半抗原羧基化龙胆苦苷；分别利用混合酸酐法，将羧基化的龙胆苦苷与两种载体蛋白BSA和OVA偶联制备得到相应的两种人工抗原；并通过动物免疫制备抗龙胆苦苷抗体，基于此抗体建立了灵敏度较好、特异性较强的龙胆苦苷‑ELISA检测方法。为龙胆苦苷的检测开辟了新路径，提供了新思路和新技术，为快速寻找新药源和快速鉴别药材真伪提供了平台。

摘要： 本发明公开了一种利用间接竞争ELISA高通量快速筛查多种内分泌干扰物的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤：采用多孔板通过间接竞争ELISA检测双酚A、雌二醇和壬基酚；多孔板中，部分孔用于检测双酚A、部分孔用于检测雌二醇、部分孔用于检测壬基酚；作为包被原的双酚A抗原的包被浓度为0.18‑0.2μg/mL；作为一抗的双酚A抗体的工作浓度为0.8‑1μg/mL；作为包被原的雌二醇抗原的包被浓度为3.1‑3.2μg/mL；作为一抗的雌二醇抗体的工作浓度为9‑10μg/mL；作为包被原的壬基酚抗原的包被浓度为0.3‑0.4μg/mL；作为一抗的壬基酚抗体的工作浓度为2‑3μg/mL。本发明操作简便，无需对抗体进行标记，可以实现多种内分泌干扰物的同时检测。本发明非常适用于水环境中内分泌干扰物的快速检测。

摘要： 本发明涉及一种基于铂包金纳米粒子与碳点间接竞争荧光ELISA检测小分子的方法，该方法为：使用铂包金纳米粒子标记IgG，并将此复合物作为信号放大物，该复合物可催化加入的显色剂，产生催化氧化产物，并淬灭引入体系中碳点的荧光，最后通过用多功能酶标仪检测碳点荧光强度的变化来实现对小分子物质的定量检测。与现有技术相比，本发明利用铂包金纳米粒子与荧光碳点的性质，拓展了铂包金纳米粒子在荧光检测体系中的应用，提高了ELISA检测的灵敏度，解决了传统商业ELISA中天然酶易受环境影响、成本高的缺点。将铂包金纳米粒子应用于小分子的间接竞争ELISA中，丰富了铂包金纳米粒子在小分子免疫检测方法中的应用，为其商业化应用提供了依据。

摘要： 本发明公开了一种检测糠氨酸的间接竞争ELISA方法。本发明利用糠酸和氯化亚砜合成糠氨酸半抗原，然后将该半抗原与载体蛋白进行偶联，得到糠氨酸人工完全抗原，进而制备其糠氨酸多克隆抗体，并基于抗原抗体特异性识别建立了检测糠氨酸的间接竞争ELISA方法，该方法是利用糠氨酸多克隆抗体作为结合抗体，糠酸人工完全抗原作为包被原建立的。该方法具有快速、灵敏、准确等优点，特别适用于现场大量样品的快速检测，为乳品中糠氨酸的快速检测开辟了一种新路径，提供了一种新的检测手段。

摘要： 区分新城疫病毒样颗粒疫苗免疫血清与野毒感染血清的间接竞争ELISA方法及试剂盒，属于病毒检测领域。本发明以NP蛋白为免疫抗原，以单克隆抗体为抗体诊断试剂，利用棋盘法对包被抗原及单抗浓度进行优化，对包被时间、一抗浓度及孵育时间、二抗浓度及孵育时间等条件优化；根据工作浓度将免疫抗原包被于ELISA孔中，同时以不同稀释倍数的样本血清与固定稀释倍数的单克隆抗体混合后进行阻断实验，将混合物与固相抗原结合作用，再以辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG为二抗继续孵育，用TMB显色液显色，加入2M硫酸溶液终止反应。本发明可有效移除传染源，消灭持久疫源地的存在，为新城疫的净化提供理论依据，具有检测灵敏、准确，操作简便及特异性强的优点。

摘要： 本发明公开了一种检测动物源性食品中头孢类抗生素的间接竞争ELISA试剂盒及其应用，包括包被有包被原的酶标板、头孢类抗生素标准品、头孢类抗生素通用抗体、酶标记二抗、稀释缓冲液、洗涤缓冲液、底物显色液和反应终止液；头孢类抗生素通用抗体能特异性识别头孢氨苄、头孢拉定、头孢羟氨苄、头孢哌酮、头孢唑啉或头孢噻肟，不能识别青霉素钠。本发明制备出一种头孢类抗生素通用抗体，该通用抗体和大部分头孢类抗生素均有较高的交叉反应率，而对于同含有β‑内酰胺环的结构类似物青霉素钠却几乎没有交叉反应，表明该通用抗体具有较高的特异性。采用该通用抗体制备的试剂盒具有敏感度高、检测药物种类多、成本低、操作简单、检测时间短的优点。

摘要： 本发明公开了一种采用间接竞争ELISA法检测动物源性过敏原牛血清白蛋白，属于分析检测领域。该方法采用BSA作为包被抗原及标准品，筛选高特异性、高纯度的抗BSA单克隆抗体作为一抗，羊抗鼠IgG辣根过氧化物(HRP)标记抗体为二抗，四甲基联苯胺(TMB)为底物，建立敏感、特异的间接竞争ELISA，并用数学方法对结果进行分析。该方法特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于过敏原BSA的快速检测。