链霉亲和素

摘要： 目的 观察化学发光技术中链霉亲和素磁珠浓度对发光信号的影响.方法(1)在全自动化学发光分析仪中夹心法模式和竞争法模式分别使用其混合试剂和高值/低值混合血清,夹心法采用β-HCG测量程序,竞争法模式采用Prog测量程序,观察在不同浓度磁珠中的光信号变化;(2)在分光光度计上620 nm波长测量不同浓度磁珠的吸光度和透光率;(3)在全自动化学发光分析仪中测量一定量的发光物质在不同浓度磁珠中的光信号强度;与磁珠浓度0 mg/mL相比,差异超过10％认为会导致较大差异.结果(1)随着磁珠浓度的增加,光信号呈现为上升期、平台期和下降期.(2)磁珠浓度越大,吸光度越大,透光率越小.(3)当磁珠浓度在夹心法模式中0.36 mg/mL、在竞争法模式中>0.72 mg/mL时,磁珠浓度越大,光信号越弱,磁珠浓度与光信号水平呈负相关(夹心法R 2=0.8377,竞争法R 2=0.8943).结论 应用磁珠的化学发光技术中,磁珠浓度增大或减少过多均可导致光信号减弱,使夹心法项目检测结果假性降低而竞争法项目检测结果假性升高.

摘要： 目的 通过竞争法一步法原理,建立一种检测人血清抗甲状腺球蛋白抗体(anti-TgAb)的电化学发光免疫分析(ELICA)方法.方法 将样本、三联吡啶钌标记抗体和生物素标记甲状腺结合球蛋白(thyroglobulin,Tg)抗原三者共同孵育形成抗体-抗原复合体,再加入链霉亲和素包被的磁微粒与该复合物共同孵育形成钌标记抗体-生物素抗原-链霉亲和素磁颗粒复合物,通过磁场固定洗涤去除游离物质;然后加入三丙胺得到相对光子强度(relative light units,RLU).检测该方法的灵敏度、线性范围、精密度、准确度及稳定性,并与罗氏公司的anti-TgAb检测试剂盒进行对比.结果 anti-TgAb的最低检测限为5 IU/mL,线性范围为10～1000 IU/mL,准确度为0.900～1.100,批内变异和批间变异均小于5％.与罗氏公司anti-TgAb检测试剂盒的相关系数r=0.996(n=50),稳定性测试(37°C,8d)中,各项性能指标变异程度均符合标准[线性相关系数r=0.9998,准确度低值0.94,准确度高值0.93,批内精密度(CV)高值3.77％,低值4.34％].结论 该方法各项性能指标(灵敏度、精密度、准确度、稳定性等)均能达到临床检测要求,可供临床检测使用.

摘要： 目的 建立测定人血清游离甲状腺素(FT4)的电化学发光免疫分析方法.方法 为检测人血清游离甲状腺素(FT4),将样本和生物素标记的FT4抗原竞争性结合三联吡啶钌标记的抗体,形成的免疫复合物和链霉亲和素包被的磁珠反应,形成了抗原抗体复合物,该免疫复合物通过磁珠吸附到电极上,未结合的物质被清洗掉,随即在三丙胺激发缓冲液的环境下,检测相对光子强度(relative light units,RLU).根据标准品的RLU数值绘制标准曲线,从而检测出待测样品中的FT4浓度.结果 本方法中,最低检测限为0.30 pmol/L,批内变异小于10％,批间变异小于15％,准确度为90％-110％,线性范围为0.30-100 pmol/L.与罗氏公司FT4检测试剂盒(电化学发光法)平行检测血清样本中FT4浓度,其相关系数为r=0.99(n=44).将试剂盒经过37°C、8天热处理后,各项指标都达到了标准.结论 该方法检测FT4浓度具有高灵敏度、高准确度、线性范围广、稳定性好等优点,所有指标皆符合临床检测的要求.

摘要： 中国研究用核磁共振生物传感器快速检测牛乳中沙门氏菌快速、灵敏地检测食源性病原体对食品安全具有重要意义。中国研究人员研制了一套核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)生物传感器,该生物传感器基于链霉亲和素(streptavidin,SA)-生物素体系和邻羧甲基壳聚糖(O-carboxymethyl chitosan,O-CMC)靶标、元素钊(gadolinium,Gd)探针,将NMR技术、生物免疫技术与膜过滤技术相结合,快速检测牛乳中沙门氏菌。

摘要： 目前,由于肿瘤特异性抗原难预测以及这些新抗原能否通过激活性通路被抗原呈递细胞有效摄取等问题还未解决,使得现有肿瘤疫苗的临床治疗并没有达到预期效果,同时,肿瘤细胞抗原的高度唾液酸化修饰会诱发机体产生抑制性免疫应答.因此,本研究尝试利用链霉亲和素(Streptavidin,SA)与生物素(Biotin)之间几乎不可逆的非共价结合原理,将生物素标记至肿瘤细胞抗原的唾液酸修饰位点,然后与结合有SA的激活性内吞受体的配体进行交联来制备肿瘤疫苗.首先,构建并表达能靶向树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的重组蛋白SA-mIgG1Fc.其次,叠氮修饰的非天然糖通过代谢掺入途径标记CT26.WT结肠癌细胞抗原的糖基化修饰位点,利用生物正交反应使肿瘤抗原的叠氮修饰位点共价缀合生物素,获得生物素化广谱肿瘤抗原(Biotinylated broad-spectrum tumor antigen,Biotin-TAg).最后,将SA-mIgG1Fc与Biotin-TAg按最佳交联比进行交联,从而获得结肠癌肿瘤疫苗,并对其含有的特异性抗原进行检测.结果显示,利用基因工程方法成功表达出SA-mIgG1Fc,并获得能与SA结合的Biotin-TAg,将SA-mIgG1Fc与Biotin-TAg按最佳交联质量比为1:48进行交联,从而制备出具有靶向性和稳定性的结肠癌肿瘤疫苗,同时检测出制备的肿瘤疫苗中有特异性抗原胰岛素样生长因子1受体(Insulin-like growth factor 1,IGF-1R).本研究在方法学上为研制新型肿瘤疫苗奠定了基础.

摘要： 目前,由于肿瘤特异性抗原难预测以及这些新抗原能否通过激活性通路被抗原呈递细胞有效摄取等问题还未解决,使得现有肿瘤疫苗的临床治疗并没有达到预期效果,同时,肿瘤细胞抗原的高度唾液酸化修饰会诱发机体产生抑制性免疫应答.因此,本研究尝试利用链霉亲和素(Streptavidin,SA)与生物素(Biotin)之间几乎不可逆的非共价结合原理,将生物素标记至肿瘤细胞抗原的唾液酸修饰位点,然后与结合有SA的激活性内吞受体的配体进行交联来制备肿瘤疫苗.首先,构建并表达能靶向树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的重组蛋白SA-mIgG1Fc.其次,叠氮修饰的非天然糖通过代谢掺入途径标记CT26.WT结肠癌细胞抗原的糖基化修饰位点,利用生物正交反应使肿瘤抗原的叠氮修饰位点共价缀合生物素,获得生物素化广谱肿瘤抗原(Biotinylated broad-spectrum tumor antigen,Biotin-TAg).最后,将SA-mIgG1Fc与Biotin-TAg按最佳交联比进行交联,从而获得结肠癌肿瘤疫苗,并对其含有的特异性抗原进行检测.结果 显示,利用基因工程方法成功表达出SA-mIgG1Fc,并获得能与SA结合的Biotin-TAg,将SA-mIgG1Fc与Biotin-TAg按最佳交联质量比为1:48进行交联,从而制备出具有靶向性和稳定性的结肠癌肿瘤疫苗,同时检测出制备的肿瘤疫苗中有特异性抗原胰岛素样生长因子1受体(Insulin-like growth factor 1,IGF-1R).本研究在方法学上为研制新型肿瘤疫苗奠定了基础.

摘要： 本文主要研究了基于量子点/多孔硅光子晶体制备生物传感器的可行性及其在生物检测中的实际应用.功能化多孔硅光子晶体器件与链霉亲和素连接形成生物特征元件.固定浓度的量子点标记的生物素与链霉亲和素发生特异性反应.多孔硅光子晶体的高反射带隙位于量子点发射荧光峰处,使得量子点的荧光信号得到放大.多孔硅光子晶体传感器的检测灵敏度明显提高,使检测限达到pM量级.

摘要： 链霉亲和素(Streptavidin,STV)和生物素(Biotin)之间的非共价相互作用很强,已被运用到包括分子生物学、免疫学以及生物技术领域.STV与Biotin间优异的结合能力与其结构密切相关,晶体解析结果证明STV是一个四聚体蛋白.原子力显微镜技术(Atomic Force Microscopy,AFM)可以在液体环境下获得生物单分子的形貌信息,对结构和功能的研究具有非常重要的作用.然而,由于STV分子小而柔软,获得高分辨的AFM图像极其困难.本研究利用DNA折纸可寻址的特点,将Biotin定位修饰在折纸上,选择性地将STV固定在折纸设定的位置上,实现了对单个STV分子的高分辨成像,观察到了单个STV呈"沙漏形"结构,与其晶体结构符合性较好.同时,我们注意到STV形貌易受成像力的影响,可能与STV分子的柔性相关.这种基于DNA折纸的高分辨成像方法,简单、方便,为研究生物分子形貌和功能提供了新思路.

摘要： 本文主要是介绍了利用量子点标记的链霉亲和素为荧光探针，建立了一种检测雌二醇含量的荧光免疫分析的新方法。

摘要： @@己烯雌酚(diethylstilbestrol，简称DES)，是人工合成的雌激素，是人造雌激素中作用较强的一种。DES在促进动物蛋白质的合成代谢、提高动物日增重和减少脂肪等方面效果明显，因此一直被作为一种动物生长促进剂用于猪、牛、羊、鸡等畜禽饲料中。作为一种动物饲料添加剂，DES能够在动物源性食品中，如：肝脏、肌肉、蛋、奶中的残留，可以通过食物链引起少儿的发育早熟和男性女性化，人通过食物长期摄入低剂量的DES能扰乱体内激素平衡，诱发女性乳腺癌、卵巢癌等疾病。为保证人民身体健康，有效遏制滥用DES的违法行为，势必需要建立一种灵敏度高、快速、有效、准确的检测DES的方法。

摘要： 目的 应用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法(BSA-ELISA)建立相思子毒素(Abrin)测定法,并初步应用人工污染香肠及生理盐水样品中相思子毒素回收率的检测.方法 用兔抗相思子毒素多抗包被酶标板,加入待测抗原,并依次加入生物素化鼠抗相思子毒素单克隆抗体、碱性磷酸酶标记的链霉亲合素,用磷酸对硝基苯酯显色.结果 方法的线性范围为5～200 ng/ml,检测下限为5 ng/ml,批内变异系数为1.76％～4.64％,批间变异系数为5.96％～9.04％.结论 该方法简便、快速,特异性、敏感性、重复性均在临床检测可接受范围内,标准曲线线性良好适用于基础研究与临床检验.

摘要： 本发明公开了生物素‑亲和素或链霉亲和素的无微球均相化学发光体系，以及将其用于定量测量抗原或抗体的方法，涉及化学发光体系技术领域，所述的无微球均相化学发光体系包括：生物素标记的抗体或抗原、9,10‑二氢吖啶标定的抗体或抗原、HRP标记的亲和素或链霉亲和素。生物素‑亲和素或生物素‑链霉亲和素的无微球均相化学发光(No Microspheres Honogeneous Luminescent(Biotin‑Avidin/streptavidin))体系不使用微球，是均相体系；引入生物素‑亲和素/链霉亲和素系统，可以大大提高化学发光效率，提高检测灵敏度，实例S100B蛋白最低检测浓度可达到0.015ng/ml；该体系检测过程不需清洗，方便简单，可用于自动免疫均相化学发光系统，POCT及微流控芯片等快速定量分析。

摘要： 本发明揭示了一种亲和兼容性链霉亲和素突变体及其制备方法，所述亲和兼容性链霉亲和素突变体的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:9所示，其核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:10所示，包含4个氨基酸的突变，分别为Y22N、N23Y、S52G、R53D。本发明提供了一种亲和兼容性链霉亲和素突变体及其制备方法，降低了对生物素的亲和力，提高了对生物素衍生物（如2-亚氨基生物素）的亲和兼容性，有利于在生物素化蛋白的分离、纯化，其产物可用作亲和色谱填料制备。

摘要： 一种链霉亲和素和高斯荧光素酶的融合蛋白及其应用，该融合蛋白包括链霉亲和素全长蛋白和高斯荧光素酶全长蛋白或持续发光突变体，链霉亲和素全长蛋白与高斯荧光素酶全长蛋白或持续发光突变体通过柔性肽连接。本发明的融合蛋白能够方便、特异性地识别生物素分子，并具有催化底物氧化发光的功能，便于检测。相对于现有技术中的高斯荧光素酶与链霉亲和素的偶联蛋白，本发明的融合蛋白具有工艺简单，便于生产的优点。

摘要： 本发明公开了生物素‑亲和素或链霉亲和素的无微球均相化学发光体系，以及将其用于定量测量抗原或抗体的方法，涉及化学发光体系技术领域，所述的无微球均相化学发光体系包括：生物素标记的抗体或抗原、9,10‑二氢吖啶标定的抗体或抗原、HRP标记的亲和素或链霉亲和素。生物素‑亲和素或生物素‑链霉亲和素的无微球均相化学发光(No Microspheres Honogeneous Luminescent(Biotin‑Avidin/streptavidin))体系不使用微球，是均相体系；引入生物素‑亲和素/链霉亲和素系统，可以大大提高化学发光效率，提高检测灵敏度，实例S100B蛋白最低检测浓度可达到0.015ng/ml；该体系检测过程不需清洗，方便简单，可用于自动免疫均相化学发光系统，POCT及微流控芯片等快速定量分析。

摘要： 本发明揭示了一种亲和兼容性链霉亲和素突变体及其制备方法，所述亲和兼容性链霉亲和素突变体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:9所示，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:10所示，包含4个氨基酸的突变，分别为Y22N、N23Y、S52G、R53D。本发明提供了一种亲和兼容性链霉亲和素突变体及其制备方法，降低了对生物素的亲和力，提高了对生物素衍生物（如2-亚氨基生物素）的亲和兼容性，有利于在生物素化蛋白的分离、纯化，其产物可用作亲和色谱填料制备。

摘要： 本发明公开了一种提高链霉亲和素‑生物素反应体系的化学发光试剂盒抗生物素干扰能力和灵敏度的方法，属于生物技术领域。一种提高链霉亲和素‑生物素反应体系的化学发光试剂盒抗生物素干扰能力和灵敏度的方法，在磁珠稀释液中添加SA磁珠组成磁珠包被物工作液；在酶标记物稀释液中添加碱性磷酸酶标记抗体组成碱性磷酸酶标记物工作液；在生物素标记物稀释液中添加生物素标记抗体组成生物素标记物工作液；将样本、磁珠包被物工作液、生物素标记物工作液顺序加入反应杯，孵育一定时间后，进行反应清洗，再加入碱性磷酸酶标记物工作液反应后进行清洗；本发明通过封闭未与生物素抗体结合的游离SA磁珠，减小非特异性信号，提高检测灵敏度。

摘要： 本发明公开了一种含长链巯基臂的链霉亲和素及制备方法，属于生物医药领域。该含长链巯基臂的链霉亲和素的制备方法包括以下步骤：1)将所述的半胱氨酸型重组核心链霉亲和素溶于适当的缓冲液中，在过量的还原剂作用下暴露半胱氨酸残基后，分离去除过量的还原剂；2)步骤1)所得的溶液，与过量的交联剂反应后，分离去除过量的交联剂；3)步骤2)所得的溶液，在过量的还原剂作用下暴露巯基，分离去除过量的还原剂，即可获得含长链巯基臂的链霉亲和素。本申请制备的含长链巯基臂的链霉亲和素解决了半胱氨酸型重组核心链霉亲和素与载体的键合效率低的问题。

摘要： 本发明涉及基于链霉亲和素包被的纳米微粒单链DNA扩增方法。现有PCR技术适用于双链DNA的扩增和富集，而单链DNA的扩增则存在扩增产物混杂双链DNA、步骤繁琐等缺陷。本发明利用链霉亲和素包被的纳米微粒将生物素标记的PCR扩增引物固定在金属纳米微粒表面，之后进行单链DNA扩增反应。本发明通过生物素与链霉亲和素包被的纳米微粒形成不可逆结合，从而实现单链DNA扩增，可以选择性的获得样品DNA的正链或者反链DNA，简单高效快速，明显改善了单链DNA的扩增效率。

摘要： 本发明公开了可逆结合生物素的链霉亲和素突变蛋白及其应用，突变蛋白为野生型链酶亲和素的44‑47位氨基酸残基为VATR，并将链酶亲和素27位的丝氨酸突变为苏氨酸，或120位的色氨酸突变为组氨酸。突变后的蛋白与Strep tagⅡ结合力增加，提高了其对单Strep和TwinStrep融合蛋白的纯化能力，同时与Biotin的结合减弱，使得Biotin与其作用变得可逆，洗脱后用缓冲液进行简单洗涤再生可再次利用，因此能够更好的用于Biotin修饰蛋白和StreptagⅡ标签蛋白纯化。

摘要： 本发明涉及基于生物素‑链霉亲和素系统的透明质酸酶定量测定方法，属于体外诊断技术领域。本发明提供了一种定量测定样本中透明质酸酶的方法，所述方法先使用偶联有透明质酸酶抗体的磁珠1捕捉样本中的透明质酸酶，然后使用偶联有透明质酸酶抗体的生物素结合捕捉到的透明质酸酶，再使用偶联有荧光标记的链霉亲和素标记生物素，最后根据荧光强度值获得样本中透明质酸酶的浓度；所述方法基于生物素‑链霉亲和素系统，生物素‑链霉亲和素系统可将样本中的透明质酸酶信号放大，以便于检测，因此，所述方法有效提高了透明质酸酶定量测定的准确性和检测限。