重组鸡痘病毒

摘要： 为了评价表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)g B基因的重组鸡痘病毒疫苗(rFPV-ILTV g B)的免疫效力,首先将49日龄SPF鸡随机分成5组,以羽毛囊涂抹法攻毒1×10^(2)、1×10^(3)、1×10^(4)EID_(50)鸡痘病毒(FPV)10^(2)株,并设立1组1×10^(3)EID_(50)刺种攻毒对照组和1组PBS对照组,建立鸡痘攻毒模型。接着,将21日龄SPF鸡随机分组,分别以翅部刺种和颈部皮下注射方式免疫2×10^(4)PFU的rFPV-ILTV gB,免疫后第28天,分别使用FPV10^(2)株和ILTV I19株攻毒,统计发病死亡情况。结果表明,FPV10^(2)株的最小感染剂量为1×10^(3)EID_(50),最佳攻毒方式为羽毛囊涂抹;rFPV-ILTV g B经翅部刺种免疫后对ILTV I19和FPV 10^(2)株的攻毒保护率分别为100%和90%,经颈部皮下注射方式免疫后对ILTV I19和FPV 10^(2)株的攻毒保护率分别为90%和40%。本研究建立了可靠的FPV攻毒模型,并证实rFPV-ILTV g B重组活疫苗的翅部刺种免疫对ILTV和FPV攻毒均能提供很好的免疫保护作用。

摘要： 为检测各理化因子对表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的重组鸡痘病毒rFPV-ILTVgB的影响,并探究其在体内体外的遗传稳定性,本研究将rFPV-ILTVgB经热、酸、碱、氯仿、乙醚和胰酶分别处理后,接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)中,测定病毒的半数感染量(TC1D50),结果显示:rFPV-ILTVgB经55°C水浴30 min或60°C水浴15 min可被完全灭活;经pH3～pH9的酸碱作用或经24 h的乙醚作用,病毒滴度变化不明显;经胰蛋白酶或氯仿处理后,病毒滴度下降明显;将rFPV-ILTVgB在CEF中连续培养30代,取第0、5、10、15、20、25、30代rFPV-ILTVgB分别扩增gB基因并测序,通过间接免疫荧光试验鉴定gB蛋白的表达,结果显示:rFPV-ILTVgB能在CEF细胞中稳定传代,gB基因序列在传代过程中未发生任何突变,gB蛋白稳定表达;同时将rFPV-ILTVgB在SPF鸡体内连续传代,结果显示,rFPV-ILTVgB在SPF鸡体内的传代过程中,gB基因的阳性检出率逐渐降低,对鸡体的致病性逐渐降低,不存在毒力返强的可能,符合生物制品的相关要求.本研究选取表达ILTV优势流行株gB基因的rFPV-ILTVgB,首次从分子生物学和遗传学等角度研究该疫苗候选株,为后续该疫苗的生产、运输提供参考.

摘要： 目前,病毒疫苗研究分为全病毒灭火疫苗、重组活载体疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗等,每种类型疫苗都有自身的优势和特点,就重组活载体疫苗中的重组鸡痘疫苗研究进展进行阐述,以期对疫苗的研究提供参考.

摘要： 为了提高表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡瘟病毒批间生产毒液效价的稳定性,本实验对鸡胚成纤维细胞接种密度进行了研究.结果 显示:在病毒增殖阶段,细胞最佳接种密度区间为2.8～3.6×106之间.

摘要： 根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescript Ⅱ SK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;合成反向串联表达盒:p7.5-MCS 1-SV40-MCS 2-P11,将表达盒插入质粒pTK的MCS位点,筛选获得阳性质粒pTKS;在鸡痘病毒早期启动子P7.5后的MCS 1处插入MDPV VP3基因,晚期启动子P11后的MCS 2处插入EGFP BGH pA,从而构建MDPV VP3基因重组鸡痘病毒转移载体pTKS-VP3-EGFP,对构建好的转移载体进行酶切和测序鉴定.将转移载体pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经RT-PCR和绿色荧光蛋白基因表达鉴定了MDPV VP3基因的表达,为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础.

摘要： 目的：检测各理化因素对重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp的影响，为临床前研究奠定基础。方法：将重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp经热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声破碎、紫外线照射处理后，接种于CEF细胞，通过测定TCID50观察重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp毒力活性的变化，由此分析这些理化因素对重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp的影响。结果与结论：重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp不耐高温，在55°C作用45 min或60°C作用15 min即可完全灭活；但是其对酸和乙醚具有一定的耐受性，在pH值为3~9的范围内，pH值的变化对病毒滴度无明显影响；同时紫外线照射无法使得培养基中的病毒粒子完全灭活；该病毒对氯仿、胰蛋白酶较为敏感，二者均可使病毒滴度下降；在适应的条件下，重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp对超声波具有一定的耐受性。%Objective: To detect the influence of rFPVHg-Hp which was disposed by physical and chemical factors and provide a foundation for the following clinical study. Methods: The CEF cells were infected by the rFPVHg-Hp which was disposed by heat, acid-base, ether, chloroform, trypsin, ultrasonic waves and ultraviolet rays, and then inspected the changes in virus titer to analyze the influence of rFPVHg-Hp which was disposed by these physical and chemical factors. Results & Conclusion: The results showed that rFPVHg-Hp was sensitive to heat. It was com⁃pletely inactivated by 55°C, 45 min or 60°C, 15 min. rFPVHg-Hp was tolerant of acid-base and ether, and the titer of rFPVHg-Hp was not significantly affected when the pH was changed in a range of 3~9. The virion in the medium was not completely inactivated by ultraviolet rays, and the titer of rFPVHg-Hp was reduced by chloroform and tryp⁃sin. rFPVHg-Hp was tolerant of ultrasonic waves in the right conditions.

摘要： 为筛选新的高效的鸡痘病毒(FPV)中外源基因的插入位点,本研究选择FPV ORF161与ORF162之间的基因间隔区作为重组位点,构建表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的转移载体,以表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组FPV (rFPV-gB)为亲本病毒,通过在鸡胚成纤维细胞(CEF)中同源重组,并经过蚀斑纯化筛选获得能够稳定表达gfp报告基因的重组病毒,命名为rFPV-gB161gfp.将rFPV-gB 161 gfp与亲本病毒连续传代20代,每5代进行荧光显微镜观察、PCR检测及复制动力学比较,结果表明重组病毒遗传稳定性良好,而且重组病毒与亲本病毒生长特性一致.本研究鉴定的新外源基因插入位点为构建多价重组FPV疫苗奠定了基础.

摘要： 目的:构建并筛选表达猴免疫缺陷病毒(SIV)Env蛋白的重组鸡痘病毒(FPV),并对其进行鉴定.方法:设计引物,通过PCR技术扩增SIV env基因,将其连接到pMD18-T载体上,测序正确后将其克隆入本实验室自行构建的FPV穿梭载体pTKET中,获得重组质粒pTKET-SIV env,然后将其与FPV282E4株共转染原代鸡胚成纤维细胞进行同源重组,以增强型绿色荧光蛋白为筛选标记,通过噬斑筛选获得重组病毒,应用PCR、RT-PCR、Western印迹对重组病毒进行鉴定和遗传稳定性分析.结果:通过10次噬斑筛选,PCR检测表明目的基因已整合到重组FPV基因组中,RT-PCR、Western印迹结果表明SIV Env蛋白在感染细胞内表达且具有抗原性;连续传代20次,PCR、RT-PCR、Western印迹均能检测到外源基因的整合、转录和表达,且未能扩增出FPV-TK基因,表明重组病毒遗传稳定性良好,且病毒已经纯化.结论:获得表达SIV Env蛋白的重组FPV,为进一步免疫试验研究奠定了基础.

摘要： @@%为检测重组病毒的环境安全性,将构建的重组病毒免疫小鼠、豚鼠、仔猪、犊牛,通过PCR、中和抗体、病毒分离培养等方法,对接种动物饲养环境中的水、土壤及粪便进行基因检测和病毒分离培养；将重组病毒分别与粪便、土壤、水等比混合后分别置于37°C、4°C、-20°C下,研究其存活能力.结果表明:重组鸡痘病毒饲养环境中的水、土壤、粪便中未检测出病毒基因,重组鸡痘病毒在自然条件下存活时间短,免疫重组鸡痘病毒的动物不能将病毒传染给亲密接触的同居动物,不会污染环境和威胁人类健康.

摘要： In this study, we investigated the genetic stability of the recombinant fowlpox virus (rFPV) co-expressing cytokine IL6 genes and HA gene of H5 subtype avian influenza virus (rFPV-AJH5AIL6) for evaluating its possibility for product. The rFPV was grown in chicken embryo fibroblast (CEF) and harvested at different time points. The growth curve and sizes of plaque diameters of rFPV were sirrolaT as that of wild type strain. The rFPV-AIH5AIL6 was then passaged in CEF for the 20 passages. The 5th, 10th, 20th passages of rFPV-AJH5AIL6 were selected for PCR amplification, sequence, and determination of genes expression. Sequencing analysis of HA gene and IL-6 gene showed that there was no any mutation in HA gene after CEF passage, while there was one amino acid mutant at the stop code in IL-6 gene at the 20th passages of rFPV-AIH5AIL6, but the mutation did not affect activity of the protein. The expression of IL-6 and HA gene in vitro were confirmed by RT-PCR and indirect immunofluorescence assay. The plaques of rFPV-AIH5AIL6 from selected four passages were all blue after the agar cover containing X-gal. These data indicate that rFPV-AIH5AIL6 has a good genetic stability.%为评价共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒(rFPV-AH5AIL6)的遗传稳定性,本研究将其接种CEF,绘制生长曲线.结果显示,该重组病毒与亲本病毒的生长速度及蚀斑大小一致；在CEF 连续培养20代,取第0代、5代、10代、20代重组病毒PCR扩增HA和Ⅱ-6基因进行鉴定,显示HA基因无核苷酸突变,IL-6基因在第20代时有1个氨基酸发生突变,但不影响该蛋白的功能区；间接免疫荧光试验证明所选代次病毒均能够表达HA蛋白,RT-PCR试验表明各代次病毒均可以表达鸡IL-6基因；通过蓝斑鉴定重组病毒纯度,结果显示所有蚀斑均为蓝斑.因此,该重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性,符合兽医生物制品的生产要求.

摘要： 根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescriptⅡSK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;合成反向串联表达盒:p7.5-MCS1-SV40-MCS2-P11,将表达盒插入质粒pTK的MCS位点,筛选获得阳性质粒pTKS;在鸡痘病毒早期启动子P7.5后的MCS1处插入MDPV VP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA,从而构建MDPV VP3基因重组鸡痘病毒转移载体pTKS-VP3-EGFP,对构建好的转移载体进行酶切和测序鉴定.将转移载体pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经RT-PCR和绿色荧光蛋白基因表达鉴定了MDPV VP3基因的表达,为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础.

摘要： 建立了一种简易的携带Lacz基因重组鸡痘病毒(rFPV)活疫苗的x-gal染色空斑计数法。rFPV接种次代鸡胚成纤维细胞(cEF)72 h后,加2 mL／L戊二醛固定液室温固定15 min,再加500μ/mLx—gal染色液37°C过夜,倒置显微镜下直接计数蓝染空斑。染色空斑计数法的空斑数是不染色直接计数法的1．6～3．3倍。该方法在重组鸡痘病毒活疫苗研究及其工业化生产检验中具有较大的应用价值。

摘要： 目的：通过对real-time PCR反应条件的优化，建立重复性好，特异性、敏感性高的标准品和标准曲线。方法：将重组鸡逗病毒rFPV-F-VP0，分别接种CEF细胞传代20代次，提取1、5、 10、15、20代次重组鸡逗病毒的基因组，同时优化荧光定量PCR反应条件，根据病毒FHN和FVP0核酸序列，设计合成特异性引物，构建制备标准DNA模板。结果：各代次外源基因的拷贝数均不相同，对照FPV没有检测到外源基因拷贝数，检测引物TKsF/TKsR在各代次重组毒中没有检测到TK基因的表达，证明通过5-溴脱氧核糖尿苷(BrdU)加压筛选的鸡逗病毒构建正确。结论：为阐明重组鸡痘病毒的免疫机理和进一步的临床应用研究提供了理论基础。

摘要： 本研究采用DNA嵌入荧光染料SYBR GreenⅠ，针对共表达鸡新城疫和鸡传染性法氏囊炎病毒基因的重组鸡痘病毒rFPV-FHN, rFPV-FVPO，根据外源基因序列设计并合成特异性real-time PCR引物，通过real-time PCR的方法检测鸡痘重组病毒rFPV-FHN,rFPV-FVPO外源基因的拷贝数，分析不同代次重组鸡痘病毒的外源基因在鸡胚成纤维细胞中的转录水平和表达情况，从而准确得出外源基因在宿主细胞中的整合情况，为阐明重组鸡痘病毒的免疫机理与进一步的临床应用研究提供试验数据。

摘要： 将FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C基因单一/共同插入到鸡痘病毒载体pUTA-2和pUTA-16LacZ中，构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2P1和pUTAL3CP1。分别与鸡痘病毒282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞，经RT-PCR、IFA及Wcstern杂交等方法筛选后成功获得携带有FMDV免疫原基因的两株重组鸡痘病毒株vUTA2P1和vUTAL3CP1，应用2株重组鸡痘病毒株免疫小鼠，经对免疫小鼠脾细胞中T细胞亚类计数、脾细胞CTL杀伤活性以及FMDV抗体的检测。证明这2株重组鸡痘病毒可以诱导小鼠产生明显的细胞免疫和体液免疫反应。以鸡痘病毒为载体进行FMD基因工程活载体疫苗的研究为FMD的最终防治探索一种新的候选疫苗。

摘要： 将FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C基因单一/共同插入到鸡痘病毒载体pUTA-2和pUTA-16LacZ中，构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2P1和pUTAL3CP1，分别与鸡痘病毒282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞，经RT-PCR，IFA及Western杂交等方法筛选后成功获得携带有FMDV免疫原基因的两株重组鸡痘病毒株vUTA2P1和vUTAL3CP1，应用2株重组鸡痘病毒株免疫小鼠，经对免疫小鼠脾细胞中T细胞亚类计数、脾细胞CTL杀伤活性以及FMDV抗体的检测，证明这2株重组鸡痘病毒可以诱导小鼠产生明显的细胞免疫和体液免疫反应，以鸡痘病毒为载体进行FMD基因工程活载体疫苗的研究为FMD的最终防治探索一种新的候选疫苗。

摘要： 本文旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后，在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)及单表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-12LSH5A)分别免疫SPF鸡和商品鸡，检测量组疫苗诱导的免疫效力。结果：3种重组鸡痘病毒在SPF鸡产生较高的HI抗体效价及100%的免疫保护；在HI母源抗体效价为2.45的商品鸡体内基因缺失株重组病毒比rFPVLP-12LsH5A易于清除，抗体上升缓慢而且免疫28 d后HI抗体效价较低，免疫保护率低，分别为16.7%和23.3%；在母源HI抗体效价为0的商品鸡体内基因缺失株重组病毒免疫后产生的抗体效价高，免疫28 d后分别达到3.50和3.17。结果表明在商品鸡体内母源抗体影响下，缺失ORP073或ORF214基因的重组鸡痘病毒产生的免疫效力降低。

摘要： 目的：研制预防IBDV的重组鸡痘病毒活载体疫苗。 方法：将NDV F和HN基因分别插入到病毒转移载体pMTB18的双向启动子的下游，构建鸡痘病毒转移载体pMTB18-F-HN。然后通过脂质体转染法将重组质粒与鸡痘病毒(HPV)284E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)，进行同源重组。将收获的病毒通过Brdu连续加压筛选，挑斑纯化病毒后进行PCR、RT-PCR、IFA鉴定，并确定重组病毒的遗传稳定性。 结果：成功构建了转移载体质粒pMTB18-F-HN和重组鸡痘病毒rFPV-FHN。 结论：成功获得了重组鸡痘病毒，遗传稳定性良好。

摘要： 根据文献设计2对引物，PCR扩增FPV复制非必需区中外源基因插入位点两侧翼的片段，分别克隆到pUC19和DSK质粒中，并命名为pFP1和pFP2根据文献设计引物，PCR扩增鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的GB基因的编码区。将GB基因克隆到质粒pFP1中获得重组质粒pFP1-GB；用酶切质粒pEGFP，得到GFP片段并克隆到质粒pFP2中,得到重组质粒pFP2-GFP。双酶切pFP1-GB得到FP1-GB片段，并克隆到质粒pFP2-GFP中，得到重组质粒pFP1GB-FP2GPF。酶切质粒pE／L-7．5，获得背向连接的2个鸡痘病毒启动子片段——PE／L-7．5，并将该片段克隆到重组质粒pFP1GB-FP2GPF获得重组质粒pGB-GFP，该质粒即为鸡痘病毒的转移质粒。在质粒pGB-GFP中，2个背向连接的启动子被克隆到的GB和GFP基因之间，分别启动GB和GFP基因的表达。经酶切和测序鉴定pGB-GFP，启动子PE／L和P7．5已分别正确地插入到GB和GFP基因之间，分别启动外源表达基因GB和筛选标记基因GFP的表达，从而证明已获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因重组鸡痘病毒转移载体DGB-GFP。该载体为下一步获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因的重组鸡痘病毒奠定基础。

摘要： 重组鸡痘病毒vUTAL3CP1是本实验室所构建的,表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因的活载体疫苗。本实验以vUTAL3CP1为研究对象,通过临床观察、病理组织学检测、病毒培养等方法检测在猪体内毒性,病毒存留时间；利用PCR方法检测重组鸡痘病毒的核酸在猪体内分布及存留时间；采用免疫组化方法,对病毒蛋白消长规律进行了研究,进一步验证其生物安全性,为后期大动物试验提供必要的基础数据。

摘要： 本发明公开了一种表达鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组鸡痘病毒活载体疫苗。本发明在鸡痘病毒转移载体pSY681的基础上，构建重组感染性克隆pSY681‑VP1‑LacZ‑VP2，在CEF细胞内pSY681‑VP1‑LacZ‑VP2与FVP毒株基因通过同源臂发生同源重组获得rFPV‑VP1‑VP2。所述rFPV‑VP1‑VP2病毒株可以诱导机体产生抗CAV的有效抗体，起到免疫保护作用；子代鸡获得高水平的抗CAV的有效抗体可以很好的抵抗CAV强毒的侵袭，起到免疫保护作用。

摘要： 本发明属于生物技术领域，主要涉及一种表达鸡4型腺病毒(FADV4)fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用。所述载体以pMD19T‑Simple载体为基础，TA克隆位点插入FADV4fiber2基因、lacz基因，以及用于同源重组的鸡痘病毒的基因组复制非必须片段LTYB和RTYB。所述方法包括步骤如下：质粒pMD‑TYB；构建质粒pMD22；构建质粒pMD22‑lacz；构建中间载体pMD22‑TYB‑lacz；扩增FADV4 fiber2基因；构建重组鸡痘病毒转移载体pMD22‑TYB‑lacz‑F4；将转移载体pMD22‑TYB‑lacz‑F4与鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞，鉴定选出阳性，继续传代培养；鉴定重组鸡痘病毒的表达效果。本发明构建的重组鸡痘病毒转移载体为研制高效的表达鸡4型腺病毒的重组鸡痘病毒基因工程活载体疫苗奠定基础。

摘要： 本发明涉及一种表达传染性喉气管炎病毒gB基因、其重组鸡痘病毒及构建方法和应用。本发明所述传染性喉气管炎病毒gB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用本发明所述传染性喉气管炎病毒gB基因构建得到的重组鸡痘病毒与商品化的重组鸡痘基因工程疫苗相比，具有更为显著的免疫保护水平，且能克服传统弱毒活疫苗毒力返祖和潜伏感染等缺陷。

摘要： 本发明属于生物技术领域，主要涉及一种表达鸭2型腺病毒(DADV2)fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用。所述载体在pMD19T‑Simple载体TA克隆位点插入含有鸡痘病毒的早晚期启动子LP2EP2启动下的DADV2fiber2基因、P11启动子启动下的lacz基因，以及用于同源重组的鸡痘病毒的基因组复制非必须片段LTYB、RTYB。所述转移载体的构建方法，包括如下步骤：构建质粒pMD‑TYB；构建质粒pMD22；构建质粒pMD22‑lacz；构建中间载体pMD22‑TYB‑lacz；构建转移载体pMD22‑TYB‑lacz‑DFB2；对所得转移载体pMD22‑TYB‑lacz‑DFB2进行效果验证。本发明构建的重组鸡痘病毒转移载体为研制高效的表达鸭2型腺病毒的重组鸡痘病毒基因工程活载体疫苗奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法。以鸡痘病毒基因组为模板扩增TK基因的同源重组臂TKL、TKR，并将其连接成带有多克隆位点MCS的TK片段，再连入骨架质粒，得质粒pTK；合成反向串联表达盒S，并将其插入质粒pTK中，得质粒pTKS；在早期启动子P7.5后的MCS1处插入VP3基因，晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA，即得目的转移载体pTKS‑VP3‑EGFP。将pTKS‑VP3‑EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞后，经RT‑PCR和荧光蛋白检测VP3能够正常表达。本发明为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

摘要： 本发明涉及一种鸡痘病毒通用转移载体、重组鸡痘病毒及其制备方法。即以鸡痘病毒作为材料，通过PCR方法对其的一个复制非必需区片段进行扩增、克隆得到载体pPCI。利用禽痘病毒早晚期复合启动子构建绿色荧光蛋白(GFP)基因表达盒，并在其两侧分别引入loxP序列，一同插入到pPCI，获得通用转移质粒载体pHBP。将其与鸡痘病毒基因组DNA共转染CEF，获得重组病毒rFPVGFP。将其基因组DNA与表达Cre酶的质粒DNA共转染CEF筛获重组病毒rFPV。本发明的pHBP可插入其它目的基因，筛获的重组禽痘病毒不含有GFP基因，解决了重组病毒基因组中含有报告基因问题，大大方便了目的基因重组禽痘病毒的构建。

摘要： 本发明公开了一种表达鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组鸡痘病毒活载体疫苗。本发明在鸡痘病毒转移载体pSY681的基础上，构建重组感染性克隆pSY681‑VP1‑LacZ‑VP2，在CEF细胞内pSY681‑VP1‑LacZ‑VP2与FVP毒株基因通过同源臂发生同源重组获得rFPV‑VP1‑VP2。所述rFPV‑VP1‑VP2病毒株可以诱导机体产生抗CAV的有效抗体，起到免疫保护作用；子代鸡获得高水平的抗CAV的有效抗体可以很好的抵抗CAV强毒的侵袭，起到免疫保护作用。

摘要： 本发明属于生物技术领域，主要涉及一种表达鸡4型腺病毒(FADV4)fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用。所述载体以pMD19T‑Simple载体为基础，TA克隆位点插入FADV4fiber2基因、lacz基因，以及用于同源重组的鸡痘病毒的基因组复制非必须片段LTYB和RTYB。所述方法包括步骤如下：质粒pMD‑TYB；构建质粒pMD22；构建质粒pMD22‑lacz；构建中间载体pMD22‑TYB‑lacz；扩增FADV4 fiber2基因；构建重组鸡痘病毒转移载体pMD22‑TYB‑lacz‑F4；将转移载体pMD22‑TYB‑lacz‑F4与鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞，鉴定选出阳性，继续传代培养；鉴定重组鸡痘病毒的表达效果。本发明构建的重组鸡痘病毒转移载体为研制高效的表达鸡4型腺病毒的重组鸡痘病毒基因工程活载体疫苗奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种鸡传染喉气管炎重组鸡痘病毒活疫苗用明胶保护剂，包括以下组分：明胶、蔗糖和灭菌注射水，其中，每100ml明胶保护剂中，包括4.25g明胶和25g蔗糖，余量为灭菌注射水。使用该明胶保护剂的鸡传染喉气管炎重组鸡痘病毒活疫苗易于溶解，外观均匀平整，易脱落。

摘要： 本发明涉及一种表达传染性喉气管炎病毒gB基因、其重组鸡痘病毒及构建方法和应用。本发明所述传染性喉气管炎病毒gB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用本发明所述传染性喉气管炎病毒gB基因构建得到的重组鸡痘病毒与商品化的重组鸡痘基因工程疫苗相比，具有更为显著的免疫保护水平，且能克服传统弱毒活疫苗毒力返祖和潜伏感染等缺陷。