重组融合蛋白

摘要： 抑制性免疫检查点PD-1或CTLA-4靶向治疗药物已用于肿瘤的临床治疗,但单一靶点药物会有耐药发生,联合使用同时封闭多个靶点可提高疗效,因此拟构建一个可封闭多个靶点的新型重组蛋白.首先设计并合成了一个由人类PD-1和CTLA-4两个受体的胞外功能域组成并且C端带6×His标签的分泌型重组融合蛋白rPC编码序列,插入真核细胞表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1,稳定转染HEK293细胞,收集细胞培养上清,以亲和方法纯化重组蛋白rPC,通过实时荧光定量PCR检测多个人类肿瘤细胞系中PD-1配体PD-L1、PD-L2和CTLA-4配体CD80、CD86的表达,以选择相对高表达的细胞,利用细胞免疫荧光染色方法检验rPC与肿瘤细胞的结合能力,并用CCK-8法检测rPC是否对肿瘤细胞的生长有影响.结果 表明,重组融合蛋白rPC可由稳定转染表达载体的HEK293细胞表达并分泌,纯化后的rPC可以与PD-1和CTLA-4配体表达相对较高的肺癌细胞NCI-H226结合,并且rPC处理对其生长并无直接影响,与预期一致.成功获得的重组融合蛋白rPC可用于进一步的体内外功能研究,也为今后研发新型多靶点肿瘤免疫治疗蛋白药物打下了坚实的基础.

摘要： C-type lectins are a class of pattern recognition receptor proteins that play an important role in innate immunity.In order to further understand the role of two C-type lectins,ShLec21 and ShLec23 from Sinopotamon honanense,on invertebrate immunity,some coding regions of ShLec21 and ShLec23 genes were linked to pGEX-4T-1 to construct a recombinant expression vector pGEX-4T-1-ShLec21 and pGEX-4T-1-ShLec23.Subsequently,the recombinant expression vector was transformed into BL21 (DE3)competent cells and induced by Isopropyl-β-d-thiogalactoside(IPTG) to express recombinant ShLec2 1-GST and ShLec23-GST fusion protein.The purified protein was used as antigen to immunize Japanese big-eared rabbits.The antiserum was isolated after the four immunization and the antibody titers were detected by ELISA.The results showed that ShLec21 and ShLec23 recombinant fusion proteins were efficiently expressed as inclusion bodies in the presence of 0.2 mmol/L IPTG at 28 °C for 10 h.The antibody titer of the polyclonal antibodies against ShLec21-GST and ShLec23-GST were all above 1 ∶ 100 000.In summary,we successfully carried out prokaryotic expression of ShLec21 and ShLec23 in Sinopotamon honanense,and the first high-titer anti-ShLec21-GST and anti-ShLec23-GST polyclonal antibodies,which provided a powerful tool for a follow-up study on the role of ShLec21 and ShLec23 genes on the innate immunity of Sinopotamon honanense.%C型凝集素是一类模式识别受体蛋白,在先天性免疫中发挥重要作用.为了深入探明河南华溪蟹(Sinopotamon honanense)2种C型凝集ShLec 21和ShLec23在先天性免疫中的作用,研究将ShLec21和ShLec23基因部分编码区序列连接至pGEX-4T-1,构建了重组表达载体pGEX-4T-1-ShLec 21与pGEX-4T-1-ShLec23.随后将重组表达载体转至BL21 (DE3)感受态细胞,经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导,表达重组ShLec21-GST与ShLec23-GST融合蛋白并纯化.再以纯化蛋白作为抗原免疫日本大耳兔,第4次免疫后分离抗血清,并采用ELISA法检测抗体效价.结果显示,在28°C,0.2 mmol/LIPTG,诱导10b条件下,可获得ShLec21-GST和ShLec23-GST重组融合蛋白以包涵体形式高效表达;制备的兔抗河南华溪蟹ShLec21-GST与ShLec23-GST多克隆抗体效价均在1∶100 000以上.研究成功对河南华溪蟹ShLec21与ShLec23进行了原核表达,首次制备了高效价的抗河南华溪蟹ShLec21与ShLec23多克隆抗体,为后续研究ShLec21与ShLec23基因在河南华溪蟹先天性免疫中的作用提供了有力的工具.

摘要： 背景结核病疫苗可通过阻断传播达到控制全球结核病蔓延的目的。目前惟一已上市的疫苗——卡介苗并不能对已感染结核分枝杆菌者提供足够的保护。葛兰素史克公司从两种免疫原性结核分枝杆菌抗原（Mtb32A和Mtb39A）中提取M72重组融合蛋白，配合AS01佐剂系统[是一种包含单磷酸酰脂质A（3-O-desacyl-4＇-monophosphoryl lipid A,MPL）和皂素QS-21的脂质体佐剂]，研发了新疫苗M72／AS01E。该疫苗的Ⅱ期临床试验表明其安全性可接受。

摘要： 目的 对拥有独立自主知识产权的世界原创原研注射用重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白(rHSA/EPO)创新药开展临床前药效学、药代动力学和安全性评价研究.方法 通过对动物体内外试验研究,观察rHSA/EPO升红细胞(网织红细胞)作用.药效学研究观察rHSA/EPO对小鼠、食蟹猴以及不同的大鼠肾性贫血模型的红细胞生成影响.药代动力学研究则是对rHSA/EPO不同剂量、单次、多次给药大鼠与食蟹猴后的药代/毒代进行研究.毒理学研究通过rHSA/EPO给予小鼠、大鼠和食蟹猴后,观察其一般毒性以及生殖毒性等反应,从而对安全性做出评价.结果 药效学研究结果显示rHSA/EPO可刺激小鼠、大鼠和食蟹猴生成红细胞,升高网织红细胞计数(Ret%),同时对药物或肾切除造成损伤所致的肾性贫血大鼠模型,rHSA/EPO每周或者每2周给药一次,与阳性对照药rhEPO每周给药3次均显示出显著的治疗作用,且较rhEPO具有明显的长效性.药代动力学研究结果显示rHSA/EPO在食蟹猴体内的半衰期平均值约为53.34 h,比rhEPO的平均半衰期7.16 h要长,rHSA/EPO不与血浆蛋白结合,不易透过血脑屏障,主要排泄器官为肾,在动物体内的吸收和消除均慢于rhEPO.毒理学研究结果显示rHSA/EPO以100、300、1000μg/kg单次皮下注射给予ICR小鼠,对其中枢神经系统功能无影响,以25、100、400μg/kg单次皮下注射给予食蟹猴,对其呼吸与心血管系统无明显影响,单次皮下注射给予SD大鼠和食蟹猴未见明显毒性反应,最大耐受剂量分别为10 mg/kg和4 mg/kg,rHSA/EPO未见胚胎毒性和致畸性.食蟹猴及大鼠重复给药毒性试验可见与药理学作用相关的即红细胞增多引起的血液生化、骨髓造血和(或)胃肠、肾脏的一些变化,停药后可见恢复趋势,给药后3周可产生抗rHSA/EPO的结合抗体IgG.大鼠体内产生的抗体较食蟹猴的强,与受试物中含有HSA相关,因而在大鼠重复给药毒性试验中也就出现由于抗体的产生中和了体内的EPO,进而可见严重贫血现象.结论 rHSA/EPO具有显著的升红作用,表现出长效特征,总体安全性好,毒性表现与常规rhEPO产品相似,没有出现新的不良反应.研究结果可为rHSA/EPO临床试验研究提供参考,并具有重要的指导意义.%Objective To evaluate and study in animals for the efficacy, pharmacokinetics and safety of recombinant human serum albumin/erythropoietin fusion protein as a bio-better innovation long-acting drug in pre-clinic. Methods The increase of red blood cells for rHSA/EPO was observed byin vitro andin vivo animal experinments. Effects of rHSA/EPO on the erythropoiesis in mice, cynomolgus monkeys and in different renal anemia rat models were studied from pharmacodynamics. Pharmacokinetics studies were conducted to study the kinetics of rHSA/EPO in rats and cynomolgus monkeys after different doses, single dose, multiple drug administration. The general toxicity and reproductive toxicity of rHSA/EPO in mice, rats and cynomolgus monkeys were studied, and the safety evaluation was made. Results The results from pharmacodynamic studies showed that rHSA/EPO stimulatee mice, rats and monkeys to erythropoiesis, increased reticulocyte count Ret%. At the same time, rHSA/EPO and rhEPO (the positive contro) both exerted obvious curative effect and rHSA/EPO showed more long-acting than rhEPO did in anemia rat model caused by drugs or nephrectomy at rHSA/EPO administered every 1 weeks or once every 2 weeks and rhEPO administered 3 times weekly. From pharmacokinetic studies, the average half-life of rHSA/EPO in the cynomolgus monkeys was about 53.34 hours, much longer than the average half-life of rhEPO at 7.16 hours. rHSA/EPO did not bind to plasma proteins, not easily penetrated the blood-brain barrier, and the main excretory organ was kidney. Furthermore, its body absorption and elimination in animals were slower than the rhEPO. The results from toxicological studies displayed that there was no effects on the central nervous system function after rHSA/EPO was given subcutaneously at the single dose of 100 μg/kg, 300 μg/kg, 1000 μg/kg in ICR mice and no obvious effect on the respiratory and cardiovascular system after cynomolgus monkeys subcutaneously administered with a single dose of 25 μg/kg and 100 μg/kg, 400 μg/kg. No obvious toxicity was observed in SD rats and cynomolgus monkeys subcutaneously given a single injection and then the maximum tolerated dose were 10 mg/kg and 4 mg/kg, respectively. rHSA/EPO showed no embryo toxicity and teratogenicity. The changes of the blood biochemistry, bone marrow and/or gastrointestine, kidney in cynomolgus monkeys and rats with repeated dose toxicity test were associated with pharmacological effects on erythropoiesis and showed recovery trend after drug withdrawal. Anti-rHSA/EPO antibody IgG was produced for 3 weeks after the drug given. Antibodies in rats were produced more easily than that in monkeys because rHSA/EPO contained HSA, for which severe anemia was also occurred due to antibody neutralizing EPO in repeated dose toxicity study. Conclusions rHSA/EPO increases the reticulocytes with the long-acting characteristics of the overall good safety. Furthermore, its toxicity is similar with conventional rhEPO products without new adverse reactions. The results of the studies can provide references and important guiding significances for the clinical trial of rHSA/EPO.

摘要： 表达纯化梅毒螺旋体重组融合蛋白,研究其抗原性和免疫原性,为梅毒诊断试剂和疫苗研究提供新候选抗原.合成梅毒螺旋体重组融合蛋白Tp0453-TpF1-Tp0965基因,转入大肠杆菌中进行表达;镍柱纯化重组融合蛋白,western blot鉴定;以重组融合蛋白作为抗原,酶联免疫法(ELISA)检测人血清样本,分析其抗原性;利用该重组融合蛋白免疫新西兰兔,ELISA检测兔血清抗体滴度水平,评价其免疫原性.梅毒重组融合蛋白Tp0453-TpF1-Tp0965在工程菌中成功表达,分子量为50 kD.重组融合蛋白可被梅毒抗体阳性的血清识别,梅毒阴性血清与蛋白无反应.使用重组融合蛋白作为抗原检测人血清梅毒抗体,梅毒患者样本组与非梅毒患者样本组的检测结果存在非常显著性差异.重组融合蛋白免疫兔后,兔血清中可持续检测到高滴度梅毒抗体.梅毒重组融合蛋白Tp0453-TpF1-Tp0965有良好的抗原性和免疫原性,可作为梅毒诊断试剂抗原和梅毒疫苗的候选蛋白.

摘要： 目的 本研究旨在探讨梅毒螺旋体Tp0453-Tp0257重组融合蛋白检测梅毒感染的可能性.方法 用基因合成的方法构建重组pET-28a-Tp0453-Tp0257质粒,重组融合蛋白的鉴定用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,重组融合蛋白作为抗原用于ELISA实验,该蛋白的灵敏度用来自一期、二期、三期和隐性梅毒患者的血清(90例)进行评估,其特异性用正常体检者的血清(120例)评估.结果 Western Blot分析证实了Tp0453-Tp0257重组融合蛋白能与梅毒阳性血清反应.该蛋白对梅毒诊断的总灵敏度为97.8％、总特异性为100.0％.结论 本实验Tp0453-Tp0257重组融合蛋白作为新的梅毒特异诊断的候选抗原,取得较好的实验效果,有望进入临床推广使用.

摘要： 为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-a-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2 ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性.结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照.本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进-步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础.

摘要： Objective To study the effects of MF59 in combination with heat-killed BCG ( hBCG) as adjuvant on the immunogenicity of Mycobacterium tuberculosis fusion protein PstS1-LEP.Methods BALB/c mice were divided into six groups from group 1 through group 6.They were immunized with PstS1-LEP+MF59 ( group 1 ) , PstS1-LEP+MF59/hBCG ( group 2 ) , PstS1-LEP+hBCG ( group 3 ) , MF59 ( group 4 ) , PstS1-LEP (group 5) and hBCG (group 6) for three times at intervals of two weeks , respectively.The mice were sac-rificed two weeks after the last immunization .The serum samples were collected for antibodies detection .The splenic lymphocytes and peritoneal macrophages were isolated and cultured with PstS 1-LEP.Indirect ELISA and sandwich ELISA were used to detect PstS 1-LEP-specific antibodies and cytokines in the supernatants of culture , respectively.Results The level of IFN-γ, IL-1β, IgG, IgG1 and IgG2a in group 1 were higher than those in groups 4, 5 and 6 (P<0.05).The level of IL-2 and IL-4 in group 1 were higher than those in groups 4 and 6 (P<0.05).The level of IFN-γ, IL-1β, IL-12, IgG, IgG1 and IgG2a in group 2 were higher than those in groups 4, 5 and 6 (P<0.05).The level of IL-2 was higher in group 2 than that in groups 4 and 6 (P<0.05). The level of IL-4 in group 3 was higher than that in group 4 ( P=0.05 ) .The level of IL-1βin group 3 were higher than that in groups 4 and 5 ( P<0.05 ) .The level of IgG was higher in group 3 than that in groups 4 and 6 (P<0.05).IgG1 level in group C was up-regulated in comparison with that in groups 4, 5 and 6 (P<0.05 ) .Conclusion hBCG as PstS1-LEP adjuvant induces a shift towards Th 2-type immune response , while MF59 induces Th1/Th2-type immune response.The combination of MF59 and hBCG inhibits the secretion of IL-4 by spleen lymphocytes , but enhances the secretion of IL-12 by macrophage .%目的：探讨复合佐剂[MF59和热灭活BCG（hBCG），MF59/hBCG]对结核分枝杆菌重组融合蛋白PstS1-LEP 免疫原性的影响。方法 BALB/c 小鼠分为6组，1组：MF59＋PstS1-LEP；2组：MF59/hBCG＋PstS1-LEP；3组：hBCG＋PstS1-LEP；4组：MF59；5组：PstS1-LEP；6组：hBCG。分别于第0、2、4周皮下免疫小鼠。末次免疫2周后解剖小鼠，PstS1-LEP体外刺激培养脾细胞和腹腔巨噬细胞。间接ELISA检测血清抗PstS1-LEP抗体，夹心ELISA检测培养上清细胞因子含量。结果1组IFN-γ、IL-1β、IgG、IgG1和IgG2a水平显著高于4组、5组和6组（P＜0.05），IL-2和IL-4水平显著高于4组和6组（P＜0.05）。2组IFN-γ、IL-1β、IL-12、IgG、IgG1和IgG2a水平显著高于4组、5组和6组（P＜0.05），IL-2水平显著高于4组和6组（ P＜0.05）。3组IL-4水平显著高于4组（ P＝0.05），IL-1β水平显著高于4组和5组（ P＜0.05），IgG水平显著高于4组和6组（ P＜0.05）， IgG1水平显著高于4组、5组和6组（ P＜0.05）。结论以PstS1-LEP为抗原，hBCG佐剂偏向诱导Th2型免疫反应，MF59佐剂诱导Th1/Th2型免疫反应，MF59和hBCG联合抑制脾细胞分泌IL-4，但增强巨噬细胞分泌IL-12。

摘要： 2014年3月3日，拜耳在日本提交 Eylea （Aflibercept Injection，阿柏西普注射液）用于治疗糖尿病性黄斑水肿（DME）的新药上市许可申请。糖尿病性黄斑水肿是造成劳动年龄糖尿病患者视力丧失的主药原因。Eylea 是一种新型玻璃体内注射用血管内皮生长因子（ VEGF）抑制剂，是一种重组融合蛋白，由 VEFG 受体1和2的胞外区与人体免疫球蛋白 G1的可结晶片段融合而成。两项治疗糖尿病性黄斑水肿（DME）的 III 期试验 VIVID - DME 和VISTA - DME 均达到了研究的主要终点。研究表明治疗52周时，最佳矫正视力（BCVA）从基线的变化，与激光光凝（laser photocoagulation）相比，Eylea 治疗组取得了显着的更大改善。2项试验中，Eylea 治疗组均表现出了相似的 BCVA 改善。

摘要： 目的：筛选鉴定抗哮喘基因工程免疫调节剂.方法：卵清蛋白(OVA)免疫小鼠制备哮喘模型,重组融合蛋白MBP-NAP对模型动物的Th1/Th2细胞因子进行干预调控,给药后H&E、PAS染色方法评估MBP-NAP的抗哮喘疗效,检测模型动物支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和IL-4细胞因子水平.结果：成功建立OVA小鼠哮喘模型;亲和层析法纯化的重组融合蛋白MBP-NAP能有效抑制哮喘模型小鼠气道炎症和粘液分泌;与对照组相比MBP-NAP能显著降低BALF中白细胞总数;ELISA检测BALF中IL-4水平结果发现MBP-NAP 10ug组显著降低IL-4水平.结论：重组融合蛋白MBP-NAP能够通过抑制小鼠Th2型细胞因子缓解哮喘症状.

摘要： 目的：原核表达OBR(瘦素受体)近跨膜区重组融合蛋白并进行SD大鼠免疫实验,观察其对SD大鼠脂肪沉积的影响.方法：设计1对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点特异性引物,扩增OBR胞外近跨膜区基因片段(1705-2364bp),经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点之间,构建OBR胞外近跨膜区重组表达质粒并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达,SDS-PAGE电泳分析和westernblotting鉴定表达产物.随后制备OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白并免疫SD大鼠,观察其对SD大鼠体重、采食量、体长、Lee’s指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积、皮下脂肪沉积的影响.结果：SDS-PAGE电泳分析和western blotting鉴定结果显示,在IPTG诱导下OBR胞外近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量约27.6KDa左右的融合蛋白.对SD大鼠免疫OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白后,体重、体长、Lee’s指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积与对照组无明显差异,而采食量显著增加、皮下脂肪细胞体积减小.结论：成功表达西藏小型猪瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白,免疫SD大鼠可促进采食和抑制皮下脂肪沉积.

摘要： 目的:筛选鉴定抗哮喘基因工程免疫调节剂.rn 方法:卵清蛋白(OVA)免疫小鼠制备哮喘模型,重组融合蛋白MBP-NAP对模型动物的Th1/Th2细胞因子进行干预调控,给药后H&E、PAS染色方法评估MBP-NAP的抗哮喘疗效,检测模型动物支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和IL-4细胞因子水平.rn 结果:成功建立OVA小鼠哮喘模型;亲和层析法纯化的重组融合蛋白MBP-NAP能有效抑制哮喘模型小鼠气道炎症和粘液分泌;与对照组相比MBP-NAP能显著降低BALF中白细胞总数;ELISA检测BALF中IL-4水平结果发现MBP-NAP 10μg组显著降低IL-4水平.rn 结论:重组融合蛋白MBP-NAP能够通过抑制小鼠Th2型细胞因子缓解哮喘症状.

摘要： 目的：克隆西藏小型猪OBR基因并原核表达ECD近跨膜区重组融合蛋白。方法：（1）根据猪OBR基因序列(GenBank号：AF092422.1)设计并合成5条特异性引物，以西藏小型猪肝脏组织总RNA为模板，经RT-PCR方法获得了OBR基因ECD（胞外域）和 ICD（胞内域）片段；再以这两片段为模板，利用Overlap PCR法扩增OBR基因全cDNA序列，序列测定后与GenBank上报导的其它动物作同源性比较及亲缘进化树分析。（2）另设计1对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点特异性引物，扩增OBR基因ECD近跨膜区（1705-2364bp），经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点之间，构建重组表达质粒并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达，SDS-PAGE电泳分析和western blotting鉴定表达产物。结果：（1）同源性比较及亲缘进化树分析显示，与广西巴马小型猪、家猪的亲缘性最高（99.6％），其次奶牛（91.1％），再次犬（90.0％），人类为88.3％；（2） SDS-PAGE电泳分析和western blotting鉴定结果显示，在IPTG诱导下OBR基因克隆及ECD近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量约27.6KDa左右的融合蛋白。结论：成功表达西藏小型猪ECD近跨膜区融合蛋白，为下一步研究OBR基因的功能、研究肥胖发病机制、探寻预防与控制肥胖方法奠定基础。

摘要： 目的：克隆西藏小型猪OBR基因并原核表达ECD近跨膜区重组融合蛋白。方法：(1)根据猪OBR基因序列(GenBank号：AF092422.1)设计并合成5条特异性引物,以西藏小型猪肝脏组织总RNA为模板,经RT-PCR方法获得了OBR基因ECD(胞外域)和ICD(胞内域)片段;再以这两片段为模板,利用Overlap PCR法扩增OBR基因全cDNA序列,序列测定后与GenBank上报导的其它动物作同源性比较及亲缘进化树分析。(2)另设计1对带有BamHI和HindⅢ酶切位点特异性引物,扩增OBR基因ECD近跨膜区(1705-2364bp),经酶切后连接到表达载体pRSETA的BamH I和HindIII两酶切位点之间,构建重组表达质粒并在大肠杆菌E.coliBl。2l(DE3)中表达,SDS-PAGE电泳分析和western blotting鉴定表达产物。结果：(1)同源性比较及亲缘进化树分析显示,与广西巴马小型猪、家猪的亲缘性最高(99.6%),其次奶牛(91.1%),再次犬(90.0%),人类为88.3%；(2)SDS-PAGE电泳分析和westernblotting鉴定结果显示,在IPTG诱导下OBR基因克隆及ECD近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量约27.6KDa左右的融合蛋白。结论：成功表达西藏小型猪ECD近跨膜区融合蛋白,为下一步研究OBR基因的功能、研究肥胖发病机制、探寻预防与控制肥胖方法奠定基础。

摘要： 近年来随着分子生物学和免疫学的发展，免疫中和技术成为了一种调控动物生长、繁殖、肉质的有利手段。动物免疫瘦素重组融合蛋白后，抗体阻断瘦素与瘦素受体结合，瘦素的作用得不到发挥，采食量下降，脂肪生长沉积，引起动物肥胖及与肥胖相关医学并发症出现。瘦素受体上抗原表位很多，不同的受体区域肽片段所产生的抗体与配合物结合时，有可能产生不同的内分泌学效应。大量研究表明使用片段免疫，产生的抗体可以结合到受体胞外区，并可能产生抑制效应或促进效应。一方面，抗体可能阻断瘦索与其受体结合，从而抑制瘦素的各种生物学作用。另一方面，抗体也可能增强结合后的信号传导功能，从而模拟瘦素的作用抑制脂肪生长沉积的作用，这将更好地改善动物肉质及控制肥胖。本文对瘦素及其受体重组融合蛋白的应用进行概述，以分析用免疫瘦素成熟肽重组融合蛋白方法建立人类肥胖症动物模型、临床上利用瘦素受体重组融合蛋白预防与控制肥胖的可行性。

摘要： 为研究重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白(rChIL-6-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对鸡体免疫功能的影响,采用MTS法检测重组融合蛋白在28日龄SPF鸡体内接种后不同天数(dpi)对外周血淋巴细胞(PBLC)中T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞增殖活性的影响,采用流式细胞术检测其对鸡PBLC中CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞百分含量及CD4+/CD8+比值的影响.结果显示,7dpi～35dpi,重组融合蛋白可显著提高机体PBLC中T淋巴细胞和脾脏中B淋巴细胞的增殖活性,二者活性分别高于单一rChIL-2蛋白或单一rChIL-6蛋白对照、低于或接近于rChIL-6蛋白+rChIL-2蛋白混合物.7dpi～21dpi,重组融合蛋白可显著提高CD3+CD4+T淋巴细胞百分含量、降低CD3+CD8+T淋巴细胞百分含量,显著提高CD4+/CD8+比值,其活性显著高于单一rChIL-6蛋白或单-rChIL-2蛋白对照,但与rChIL-6蛋白+rChIL2蛋白混合组差异不显著.结果表明,重组融合蛋白在机体内可显著促进T/B淋巴细胞增殖、提高机体CD3+CD4+T淋巴细胞百分含量和CD4+/CD8+比值,从而增强机体的体液免疫和细胞免疫功能;重组融合蛋白在体内发挥了ChIL-6和ChIL-2的协同作用活性.

摘要： 为研究原核表达的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株和rChIFN-α-Linker-ChIL-2融合蛋白同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV排毒率、带毒时间、在不同组织器官的动态分布及其体液和细胞免疫指标的检测以评价该重组融合蛋白抗IBDV的效果.结果显示:与IBDV攻毒对照组相比,重组融合蛋白与IBDV同时接种组鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间及排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器官带毒时间均显著低对照组.但试验组鸡的IBDV抗体水平于7dpc～42dpc则极显著低于对照组(p＜0.01).然而,其血清中ChIFN-α、ChIFN-γ、ChIL-2、ChIL-6和ChIL-4表达水平(3dpc～21dpc)以及外周血T淋巴细胞(PBLC)增殖活性(7dpc～21dpc)、脾淋巴细胞增殖活性(7dpc～14dpc)均显著高于对照组(p＜0.01).结果表明:融合蛋白可以通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体PBLC和脾淋巴细胞增殖活性等方式增强机体的细胞免疫能力,从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用.

摘要： 目的：研究SD大鼠主动免疫瘦素融合蛋白后，对其体内脂肪沉积的影响。方法：（1）SD大鼠分为两组（n=30）。在实验第1、第20、第40天，对照组（A组）免疫 KLH蛋白，实验组免疫leptin(B组)。（2）每次免疫前采血并分离血清备用，实验期间每隔一周测定日采食量、体重和体长并计算Lee’s指数。（3）在实验第50天对所有大鼠采血、安乐死、分离腹脂肪并计算腹脂率。（4）采集肝脏组织制作冰冻切片，油红O染色观察肝脏脂肪沉积情况；采集皮下脂肪组织制作石蜡切片，HE染色比较皮下脂肪沉积情况。结果：（1）对SD大鼠主动免疫瘦素融合蛋白抗原后，成功激发免疫反应，使免疫鼠产生较高的抗瘦素抗体滴度抗体浓度，而对照组无特异免疫反应。（2）免疫瘦素组体重、Lee’s指数和腹脂率高于对照组。（3）采食量组间差异不明显。（4）组织切片观察结果显示，免疫瘦素组肝脏、皮下脂肪沉积较对照组多。结论：对SD大鼠免疫瘦素后，促进了皮下、腹部、肝脏脂肪沉积，为下一步利用瘦素重组融合蛋白制作人类肥胖症、非酒精性脂肪肝动物模型提供了研究基础。

摘要： 本实验通过肽扫描技术,利用原核表达载体pGEX-6p-1将重组表达质粒中的pET-30-gp85片段分段亚克隆并在大肠杆菌中成功表达后,用ALV-J gp85特异性单抗2D5株对分段表达的蛋白进行免疫分析.结果显示特异性单抗识别抗原表位区域为蛋白N端138aa-159aa.进一步合成小肽进行表位映射,精确定位了抗原表位关键氨基酸序列为N'-LRDFIAKWKSDDLLIRPYVNQS-C',并找到导致表位抗原性改变的关键氨基酸.对进一步分析ALV-J gp85结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法或表位疫苗具有重要意义.

摘要： 本发明提供了一种表达重组神经营养因子融合蛋白的方法、重组神经营养因子融合蛋白及其应用，属于功能蛋白技术领域。本发明通过构建高表达载体，使用细胞表达系统，筛选高表达细胞株，获得了高生物学活性、二聚体GDNF/BDNF重组蛋白，解决了市面上重组GDNF/BDNF表达量低、价格昂贵、生物学活性低等缺点。获得的GDNF/BDNF对于后续神经生长和发育等方面的基础研究与临床级细胞培养具有非常重要的意义。

摘要： 本发明公开了一种融合碳端的重组蛛丝蛋白及其制备方法与基于重组蛛丝蛋白的载药微球，属于蛋白制备领域。融合碳端的重组蛛丝蛋白由8个重复核心序列和碳端序列组成，重组蛛丝蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。为了实现重组蛛丝蛋白的简易表达，本发明将该重组蛛丝蛋白MaSp2(8R)+CT克隆在载体pCold I上，实现了无需克隆甘氨酸‑tRNA的编码序列就能成功诱导表达了重组蛛丝蛋白，并提供了纯化载体pCold I上重组蛛丝蛋白的方法。本发明提供的基于重组蛛丝蛋白的载药微球，相比于现有的载药微球，毒性更小，载药率和释放率更高，具有很好的应用前景。

摘要： 本发明公开一种融合蛋白DAMP4‑IGF‑1的基因序列。本发明还公开一种融合蛋白DAMP4‑IGF‑1及其制备方法。本发明还公开融合蛋白DAMP4‑IGF‑1的基因序列的重组表达载体、转基因细胞系统或转基因重组菌。本发明公开一种转基因重组菌。本发明公开一种宿主细胞。本发明公开上述基因序列、上述的重组表达载体、转基因细胞系统或转基因重组菌在生产融合蛋白DAMP4‑IGF‑1中的应用。本发明利用新型融合标签DAMP4在枯草芽孢杆菌中与IGF‑1进行融合表达，利用DAMP4的特殊性质对融合蛋白进行加热纯化。

摘要： 本发明公开了一种藻蓝蛋白/嵌合降钙素融合基因、融合蛋白、重组质粒、转基因酿酒酵母及应用。本发明将构建得到的线性rDNA2‑leu2‑Ppgk‑cpcB/5hsCT‑rDNA1片段以rDNA为同源重组位点介导整合到亮氨酸缺陷型酿酒酵母中获得转基因酵母BY4742‑LPB5，实现了外源基因在酿酒酵母细胞内的高效稳定表达，大大提高了降钙素的表达稳定性，且消除了抗生素等选择标记给后期工业化生产带来的环境污染不良影响或食品安全性问题。酿酒酵母生产周期短，发酵技术成熟，安全性好，且转基因酿酒酵母不需要蛋白提取、切割加工和纯化等繁琐工艺就可以直接口服，极大地降低了工业化生产成本。

摘要： 本发明提供一种含干扰素α的融合蛋白，该融合蛋白由以下模块依次串联得到：猪血清白蛋白rpoALB、冠状病毒nsp5切割位点nsp5 site、干扰素α融合蛋白IFNα依次串联构成；本发明还提供表达所述融合蛋白的重组菌株以及上述融合蛋白的制备方法。本发明的rpoALB‑nsp5 site‑IFNα融合蛋白，抗病毒活性高，半衰期长，可以降低感染病毒后仔猪的发病率和死亡率。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种辅助蛋白，为氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的蛋白，或为与氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白具有85％以上同源性的蛋白，还公开了包含该辅助蛋白的重组融合蛋白、重组表达载体以及该重组融合蛋白的制备方法。本发明的优点在于，该辅助蛋白可用于生产多种氨基酸个数为20‑80个和/或等电点范围为3‑9的小分子多肽；该重组融合蛋白表达于细胞内，破壁后在4°C‑100°C均可稳定存在于上清液中，具有较佳的热稳定性，可在60°C‑100°C通过热破壁法即可获得大量重组融合蛋白，简化重组融合蛋白的提取流程，降低成本，再在合适条件下通过酶切割或化学切割使辅助蛋白与目的多肽断裂，即可获得稳定而有活性的目的多肽。

摘要： 本发明涉及重组融合蛋白，该蛋白质含有和末端标记物融合的2e志贺菌毒素(Stx2e)亚基因Stx2e片段，该末端标记物的大小约相当于该片段或该片段一部分的大小。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种辅助蛋白，为氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的蛋白，或为与氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白具有85％以上同源性的蛋白，还公开了包含该辅助蛋白的重组融合蛋白、重组表达载体以及该重组融合蛋白的制备方法。本发明的优点在于，该辅助蛋白可用于生产多种氨基酸个数为20‑80个和/或等电点范围为3‑9的小分子多肽；该重组融合蛋白表达于细胞内，破壁后在4°C‑100°C均可稳定存在于上清液中，具有较佳的热稳定性，可在60°C‑100°C通过热破壁法即可获得大量重组融合蛋白，简化重组融合蛋白的提取流程，降低成本，再在合适条件下通过酶切割或化学切割使辅助蛋白与目的多肽断裂，即可获得稳定而有活性的目的多肽。

摘要： 本发明属于融合蛋白技术领域，公开了一种辅助蛋白，为氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的蛋白，或为与氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白具有85％以上同源性的蛋白，还公开了包含该辅助蛋白的重组融合蛋白、重组表达载体以及该重组融合蛋白的制备方法。本发明的优点在于，该辅助蛋白可用于生产多种氨基酸个数为20‑80个和/或等电点范围为3‑9的小分子多肽；该重组融合蛋白可分泌至宿主细胞外，在4°C‑100°C均可稳定存在于上清液中，具有较佳的热稳定性，可在60°C‑100°C通过热破壁法即可获得大量重组融合蛋白，简化重组融合蛋白的提取流程，降低成本，再在合适条件下通过酶切割或化学切割使辅助蛋白与目的多肽断裂，即可获得稳定而有活性的目的多肽。

摘要： 本发明涉及重组融合蛋白,该蛋白质含有和末端标记物融合的2e志贺菌毒素(Stx2e)亚基因Stx2e片段,该末端标记物的大小约相当于该片段或该片段一部分的大小。