酵母表达

摘要： 构树(Broussonetia papyifera(Linn.)L’Hert.ex Vent)是我国重要的扶贫攻坚树种,在矿区植被恢复中占有重要地位。为探究构树的抗镉响应适应分子机制,筛选优良抗逆基因,研究结果从构树中克隆获得一条bHLH转录因子(命名为BpbHLH149)基因,对其基本生物信息、Cd胁迫响应及转化酵母的功能进行分析,预测BpbHLH149响应镉的功能。结果显示:基因开放读码框(ORF)长630 bp,推导蛋白的分子质量为22968.42 u,含有209个氨基酸,理论等电点为11.35。在150μmol·L^(-1)CdCl_(2)处理下,BpbHLH149基因被显著诱导,在12 h时BpbHLH149在根中的表达相对于对照上调了18.2倍。转入BpbHLH149的酵母在Cd胁迫下表现出比对照更高的生存活性。当CdCl_(2)质量分数高于0.6%时,转基因酵母的生长活力是对照的1.54~1.71倍。表明BpabHLH149基因具有响应镉胁迫的能力,且能提高酵母的抗性,BpabHLH149基因可作为构树逆境应答的重要候选基因。

摘要： 目的:设计以PGAP为启动子的组成型质粒,构建高效表达重组猪胰蛋白酶原的毕赤酵母X33菌株,获得重组猪胰蛋白酶.方法:首先将质粒转化大肠杆菌DH5α,提取质粒,电转化至毕赤酵母X33,表达重组猪胰蛋白酶原,经肠激酶激活,纯化提取得到重组猪胰蛋白酶.结果:筛选到高效表达重组猪胰蛋白酶原的毕赤酵母X33菌株,获得了重组猪胰蛋白酶.结论:以PGAP为启动子的质粒,转化毕赤酵母X33后表达的重组猪胰蛋白酶原避免了补加甲醇带来的危害,且操作方便,大大缩短了周期,提高了生产效率,避免了动物源性污染.

摘要： 在植物的生长发育中,植物表皮蜡质能够保护植物免受外来生物和非生物胁迫的侵害。TaTAA1a编码脂肪酰基辅酶A还原酶,在花药绒毡层细胞中该基因有助于脂肪醇物质的产生。为探究TaTAA1a是否参与小麦叶片表皮蜡质成分中初级醇的生物合成,本研究从低蜡小麦品系CP98(11)中克隆了TaTAA1a基因,并将其命名为TaFAR10。TaFAR10的开放阅读框为1524 bp,编码一个具有507个氨基酸的蛋白。序列比对发现,TaFAR10与TaFAR4、TaTAA1c、TaFAR5具有相似的功能结构域。系统进化树分析表明,TaFAR10、TaFAR4、TaTAA1c亲缘关系较近,并且与拟南芥的AtFAR4聚为一类。酵母异源表达结果显示,TaFAR10具有催化C18:0脂肪醇合成的功能。另外TaFAR10呈现组织特异性表达,在旗叶、苗期叶片、叶鞘、穗下茎、颖壳、茎节、芒、花药和根中均表达,其中,在旗叶和苗期叶片中表达量最高。在ABA、干旱、PEG、冷胁迫条件下,TaFAR10的表达量呈下降趋势,表明TaFAR10不能受非生物胁迫诱导。该研究为深入了解小麦表皮蜡质脂肪醇合成的分子机制具有重要的参考价值。

摘要： AtPGH,a kind of predicted glycoside hydrolase in Arabidopsis thaliana,was detected for the biochemical activity.Firstly,the heterologous AtPGH-His protein was express by Pichia pastoris and purified using Ni-Sephaore.Secondly,the activities of sucrase and sucrose synthase of the recombinant protein were detected by 3.5-dinitrosalicylic acid method and resorcin method,respectively.The results showed that AtPGH-His recombinant protein had both sucrase and sucrose synthase activity.Blast results showed that AtPGH has very low sequence homology with the sucrase gene and sucrose synthase gene known to Arabidopsis thaliana.The results showed that AtPGH might be a new sucrose-metabolizing enzyme with double enzyme activity in Arabidopsis thaliana.%为了检测拟南芥AtPGH基因—一个推测为糖苷水解酶的基因的生化活性,利用酵母真核表达系统对该基因进行了体外表达,经纯化后获得AtPGH-His重组蛋白.进一步利用3.5-二硝基水杨酸法和间苯二酚法分别检测了该重组蛋白的蔗糖酶与蔗糖合酶活性.结果发现:AtPGH-His重组蛋白既有蔗糖酶活性,也有蔗糖合酶活性.比对拟南芥已知的蔗糖酶基因和蔗糖合酶基因,发现AtPGH与这2个家族的基因序列同源性均很低.推断AtPGH是拟南芥中一个新的具有双重酶活性的蔗糖代谢酶.

摘要： 抗蛇毒血清作为抗蛇伤中毒特效药,其生产和临床应用上的局限导致很多伤者得不到及时救治.PLI(phospholipase A2 inhibitors)是蛇自身表达的解毒蛋白,它可以抑制蛇毒主要毒素PLA2进行自我保护.我们实验室前期在华游蛇中分离到一个PLIγ,它对蛇毒PLA2酶活性和出血毒均有强抑制效果.本研究通过酵母对华游蛇PLIγ进行表达.将PLIγ连接到pPICZαA表达载体,重组质粒通过电转化方式导入毕赤酵母GS115.在30 °C、250 r·min-1条件下,使用终浓度0.5%甲醇对筛选的转化子进行诱导,连续培养120 h,每隔24 h收集发酵液上清,用Western Bolt检测PLIγ表达水平,确定72 h为最佳诱导时间.采用镍柱亲和层析分离纯化PLIγ,SDS-PAGE检测纯度.活性实验表明:重组PLIγ对五步蛇蛇毒PLA2酶活的抑制效率为84%,并可以有效抑制其出血毒性.体外免疫共沉淀表明重组PLIγ与蛇毒sPLA2 IB和IIA型均存在直接相互作用.%Anti-venom is the sole specific drug for treatment of snakebite envenomation.However,the limitations in production and clinical application hamper their timely administration on patients.Phospholipase A2 inhibitors (PLI) are antitoxic proteins that commonly expressed in liver of snake,exert self-protection by blocking PLA2s,the main toxin of snake venom.We had demonstratedthat the PLIγ,which we isolated from serum,was highly effective to attenuate enzymatic activity and hemorrhage toxicity of snake venom PLA2.This study described the eukaryotic expression of PLIγ in yeast.The PLIγ gene was cloned and linked to vector pPICZαA.The recombinant plasmid was introduced in Pichia pastoris GS115 by electroporation.Positive yeast clones were cultivated at 30°C and 250prm for 120h,and subjected to 0.5% methanothel of final concentration to induce PLIγ expression.Fermentation broth was collected at 24 hours interval for the detection of PLIγ level using western blot.As a result,72h was consideredasthe optimum inducement time.The His6 tagged PLIγ was purified on Ni-NTA column with imidazole elution,and examined by SDS-PAGE.The recombinant PLIγ showed a good inhibition to D.acutus venom PLA2's enzymatic activity at a rate of 84% and also significant relieve to hemorrhage symptom of the crude venom.In addition,the PLIγ interacts directly with bothⅠB andⅡA venom PLA2s using co-immunoprecipitation in vitro.

摘要： In this study,based the homologous sequence of glutamine synthetase (contig48)screened out from young root cDNA library,we designed primers and cloned its full length (named as GS1-2,GenBank accession number:JQ925873.1)using SMART RACE.The results indicated that:(1)the full-length cD-NA of GS1-2 is 1710 bp with an open reading frame (ORF)of 1071 bp,encoding 356 amino acids with deduced molecular weight of 39 .3 kD and theoretical pI value of 5 .65 .The result of amino acid sequence a-lignment in NCBI indicated that it has high similarity with the cloned theanine synthetase from Anj i white tea.(2)The gene was cloned into prokaryotic expression vector pET-32a and pMAL-c5x,which was fur-ther transformed into Escherichiacoli Rosetta and BL21 to induce fusion protein with IPTG,respectively. The SDS-PAGE results showed that:after induction with IPTG,an insoluble inclusion body would be pro-duced in E.coli Rosetta using the pET-32a expression vector,while a soluble protein could be induced in E.coli BL21 (DE3 )using the pMAL-c5 x expression vector.(3 )After the yeast expression vector pYES-DEST52-CsGS1-2 was constructed by Gateway technology,the gene was expressed in Saccharomycescere-visiae (WAT11),and with addition of substrates in medium,the glutamine concentration in strains with pYES-GS1-2 vector transformant was twice as high as that containing the pYES empty vector transfor-mant using UPLC-MS analysis.The preliminary result suggested that the GS1-2 is capable of synthesizing glutamine instead of theanine.%在实验室前期构建cDNA幼根文库获得谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS,EC 6.3.1.2)同源序列(contig48)的基础上设计引物,通过SMART RACE技术克隆了该基因cDNA全长序列(命名为GS1-2,GenBank登录号:JQ925873.1).结果显示:(1)GS1-2基因全长为1710 bp,开放阅读框长1071 bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子质量为39.3 kD,理论等电点为5.65;核酸序列分析表明,GS1-2基因与从安吉白茶中克隆的茶氨酸合成酶基因相似性为99%.(2)将GS1-2基因克隆至原核表达载体pET-32a和pMAL-c5x,转化至大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,pET-32a-CsGS1-2转至Rosetta中诱导表达的蛋白与预测蛋白大小一致,主要以包涵体形式存在;而pMAL-c5 x-CsGS1-2转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达可产生可溶性蛋白.(3)进一步构建茶树GS1-2酵母表达载体pYES-DEST52-CsGS1-2并转化至酿酒酵母(WAT11)菌液中,添加底物(谷氨酸钠100μmol/L和盐酸乙胺500μmol/L)震荡培养并离心,UPLC-MS测定酶反应产物结果初步表明,目的蛋白不能催化盐酸乙胺和谷氨酸钠合成茶氨酸,但可以合成谷氨酰胺.

摘要： 目的:通过基因工程技术构建霍乱毒素B亚基(CTB)与人Aβ42的融合基因,并进行表达鉴定.方法:将融合基因克隆到酵母表达载体pYES2中,并将鉴定正确的重组载体通过乙酸锂转化法转入野生型酵母菌株INVSc1.筛选阳性转化株,并将其诱导表达,通过Western blot检测融合蛋白CTB-Aβ42.结果:成功构建了CTB-Aβ42融合基因的酵母表达载体,并且可以有效表达融合蛋白.结论:本研究为进一步研制有效的抗阿尔茨海默症药物提供了一种新思路,具有一定的理论和应用价值.

摘要： DREB蛋白能特异地与DRE(dehydration responsive element)顺式作用元件结合,从而调控下游多个与逆境相关基因的表达,在植物对多种逆境胁迫的应答反应中起重要调节作用。为了研究刚毛柽柳ThDREB基因是否具有抗逆功能,将Th DREB基因插入到酵母表达载体p YES2中构建成重组载体,转入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中获得重组型酵母。分别比较转ThDREB基因酵母和转空载体对照酵母在山梨醇、H_2O_2、CdCl_2、NaCl、Na_2CO_3、MgCl_2、-20°C胁迫处理之后的存活能力。结果显示,ThDREB基因能有效提高转基因酵母的抗干旱、盐、碱、氧化、重金属及低温胁迫的能力,表明Th DREB基因可能参与了柽柳多种抗逆调控过程。

摘要： 探讨核桃(Juglans regia)热激蛋白响应温度胁迫的分子调控机理,为核桃防寒工作等提供理论指导.通过对核桃‘香玲,转录组分析获得1个热激蛋白家族基因HSP20(命名为JrHSP20-1)的全长cDNA序列.采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术分析在40,44,48,16,10,6°C胁迫下JrHSP20-1在核桃根、茎、叶中的表达.并将JrHSP20-1构建酵母表达载体PYES2-JrHSP20-1进行温度胁迫功能分析.结果显示,JrHSP20-1基因全长891 bp,编码的蛋白分子量为33.57 KD,含296个氨基酸,理论等电点为5.07.表达分析显示,JrHSP20-1在不同组织均有不同程度的表达;根中,44°C时JrHSP20-1被诱导为对照的2.3倍,48°C时达对照的74.5倍,10°C时被诱导为对照的12.0倍;茎中,48°C时上调最大为对照的300.2倍;叶中,在48°C和16°C胁迫下被诱导较高,分别为对照的82.1,53.8倍.酵母温度胁迫实验发现,在53°C和-20°C胁迫下,重组酵母INVSC1(pYES2-JrHSP20-1)的生命活力及恢复活性明显优于对照酵母INVSC1 (pYES2).得出核桃JrHSP20-1基因的表达具有一定的组织特性,响应于温度胁迫诱导,且JrHSP20-1基因能有效提高转基因酵母对高温和低温的耐受力,表明JrHSP20-1基因是核桃抗寒耐高温的有效候选基因,为进一步研究JrHSP20-1的抗寒功能打下基础.

摘要： 猪囊尾蚴抗原cC1是孙树汉教授在猪囊尾蚴cCDA文库中筛选并命名的一个具有免疫保护作用的人猪共同抗原,也是一个有希望的猪囊尾蚴候选亚单位疫苗.目前已在大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母中获得了高效表达,并对后者进行了表达条件的优化.由于毕赤酵母表达系统优于原核系统,可作为亚单位疫苗的生产制备系统.因此,有必要对猪囊尾蚴抗原cC1毕赤酵母表达产物的特征作进一步的研究,为后期开发生产猪囊尾蚴亚单位疫苗打下良好的基础.

摘要： 通过RT-PCR方法从休哈塔假丝酵母Candida shehatae中得到木糖还原酶(XR)基因XYL1.将该基因连入酵母表达载体pDB的强启动子ADH下,得到重组表达载体pDB-XYL1.通过乙酸锂转化方法将pDB-XYL1转入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中.休哈塔假丝酵母木糖还原酶(XR)基因XYL1的成功表达为后续的利用木糖的重组酿酒酵母的构建奠定了基础.

摘要： Ⅲ型干扰素(Interferon)又称为IFN-λs或IL-28s,是有别于Ⅰ型和Ⅱ型的干扰素新家族成员,同样具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等作用.IFN-λs对经由呼吸道、消化道传播的奶牛病毒性传染病如口蹄疫(FMD)、牛病毒性腹泻病(BVD)均有良好的防护作用,并且与IFN-α相比,具有毒副作用显著降低的特点,因此牛IFN-λs成为抗病毒制剂研发的一个新的关注点.本研究利用毕赤酵母分泌表达系统表达了无冗余氨基酸的重组牛IFN-λ3，并在细胞水平上研究牛IFN-λ对多种病毒的拮抗效果，探索其用于防治牛病毒病的可行性。本文建立了牛IFN-λ3的酵母分泌表达平台，并在细胞水平全面鉴定了牛IFN-λ3的抗病毒活性，证实其与IFN-α活性相当并且具有显著的低毒特性。首先在毕赤酵母表达系统实现了无冗余氨基酸重组牛IFN-λ3的分泌可溶表达，为提高其在酵母上的表达量，参考酵母密码子使用偏好性，同时考虑自由能和二级结构等要素，将已知的牛IFN-λ3基因序列优化成适合酵母表达的最优序列。

摘要： 酵母口服免疫是一种安全，且高效激发机体免疫反应的方法。本研究利用口服MSTN基因整合型酵母表达MSTN蛋白，配合酵母自身是一种天然佐剂和可以在肠道中递呈抗原给树突状细胞的能力，有效引发幼兔机体产生强烈的免疫反应，产生MSTN特异性抗体，使幼兔自身MSTN功能受到抑制，从而促进幼兔的体重增长，这主要是由于MSTN的抑制作用解除，促进了幼兔骨骼肌的生长。口服重组酵母免疫可以作为一种新的多克隆抗体生产方法。

摘要： 以在中药材补骨脂中分离到的一个具有胰蛋白酶抑制剂活性抗菌抗菌蛋白PscAFP为研究对象。根据其N-端氨基酸序列设计简并引物，采用3'RACE和YADE扩增获得Psc-AFP对应编码序列，命名为PscAFP:然后将其在毕赤酵母中表达，并测定了重组PscAFP的抗菌活性;同时构建其植物表达载体，将其在烟草中表达。结果表明:重组PscAFP对烟草赤星病菌抱子萌发有明显的抑制作用，以Phe-Val-Arg·pNA、Boc-Gly-Pro-pNA、BNPNA、BANA为底物，利用胰蛋白酶水解底物实验发现，重组PscAFP对胰蛋白酶活性有明显的抑制作用;通过根癌农杆菌介导对烟草外植体进行遗传转化并获得了转基因再生植株，转基因烟草接种赤星病菌实验表明，转PscAFP烟草对烟草赤星病抗性有显著的提高。

摘要： 为了鉴定猪血凝性脑脊髓炎病毒(Hemagglutinating Encephalomyelitis Virus，HEV)S1蛋白的细胞膜受体，在毕赤酵母中表达HEV S1蛋白片段，纯化后免疫家兔，获得兔抗HEV-S1蛋白特异性抗体；提取PK细胞膜蛋白，以纯化的S1蛋白代替全病毒，利用改进的病毒铺覆蛋白结合试验(VOPBA)对PK细胞膜受体进行鉴定。结果表明成功构建重组酵母表达质粒，重组酵母菌经诱导表达，在培养基上清中检测到73kDa大小的蛋白；VOPBA结果发现在90kDa处有一条与S1蛋白片段结合的蛋白带。

摘要： 通过提取中国林蛙皮肤总RNA并进行RT-PCR获得抗菌肽基因,根据GenBank中已发表的蛙类的抗菌肽序列进行对比分析,表明所克隆基因为一新的抗菌肽基因-中国林蛙皮肤抗菌肽基因.将该基因克隆到酵母表达载体pPIC9K上,使其准确融合于a交配因子分泌信号之后,电击转化毕赤酵母宿主菌GS115/His-.筛选出的转化子用甲醇作诱导剂进行小瓶发酵,在28-30 °C诱导后,经Tricine SDS-PAGE检测,表达产物可以在a信号因子的引导下分泌到培养基中.且分泌到培养基中的表达产物有抑菌活性.对酵母重组子用酵母染色体DNA的通用引物和目的片段的PCR扩增,结果表明中国林蛙皮肤抗菌肽基因以单拷贝整合到毕赤酵母染色体基因组中并有转录产物的存在.

摘要： 本文通过提取中国林蛙皮肤总RNA并进行RT-PCR获得抗菌肽基因,根据GenBank中已发表的蛙类的抗菌肽序列进行对比分析,表明所克隆基因为一新的抗菌肽基因-中国林蛙皮肤抗菌肽基因.将该基因克隆到酵母表达载体pPIC9K上,使其准确融合于a交配因子分泌信号之后,电击转化毕赤酵母宿主菌GS115/His-.筛选出的转化子用甲醇作诱导剂进行小瓶发酵,在28-30°C诱导后,经TricineSDS-PAGE检测,表达产物可以在a信号因子的引导下分泌到培养基中.且分泌到培养基中的表达产物有抑菌活性.对酵母重组子用酵母染色体DNA的通用引物和目的片段的PCR扩增,结果表明中国林蛙皮肤抗菌肤基因以单拷贝整合到毕赤酵母染色体基因组中并有转录产物的存在.

摘要： 本研究利用毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαC来表达犬IFN-α成熟蛋白基因，同时根据酵母系统密码子的偏嗜性，对成熟蛋白基因核苷酸序列进行密码子偏嗜性改造。并采用非洲绿猴肾细胞(Vero)-水疱性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法为基础来测定重组犬α干扰素的效价，同样方法测定了表达产物对PRV和CDV的抑制作用。本次实验实现了犬α干扰素在酵母中的高表达，SDS检测大小约为24ku，比预测分子量大，推测发生了糖基化。表达产物具有较强的种属特异性，在Vero细胞上对PRV具有较高的抗病毒活性，达到了3.6×107U/L，对CDV也有很好的抑制作用。表达量高达到58mg/L，为以后的临床应用研究奠定了基础。

摘要： 本研究利用毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαC来表达犬IFN-α成熟蛋白基因，同时根据酵母系统密码子的偏嗜性，对成熟蛋白基因核苷酸序列进行密码子偏嗜性改造。并采用非洲绿猴肾细胞(Vero)-水疱性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法为基础来测定重组犬α干扰素的效价，同样方法测定了表达产物对PRV和CDV的抑制作用。本次实验实现了犬α干扰素在酵母中的高表达，SDS检测大小约为24ku，比预测分子量大，推测发生了糖基化。表达产物具有较强的种属特异性，在Vero细胞上对PRV具有较高的抗病毒活性，达到了3.6×107U/L，对CDV也有很好的抑制作用。表达量高达到58mg/L，为以后的临床应用研究奠定了基础。

摘要： 本发明涉及改进的酿酒酵母菌株，其特征在于，它们共表达编码真菌来源的糖化酶的基因和编码酿酒酵母糖化变种的糖化酶的基因。本发明还涉及一种用于获得酵母菌株的方法，所述方法包括以下步骤：a)遗传改造酿酒酵母使其共表达编码真菌来源的糖化酶的基因和编码酿酒酵母糖化变种的糖化酶的基因；b)在糊精培养基上培养并发酵步骤a)获得的菌株；c)选择发酵动力学至少等于或大于根据布达佩斯条约于2015年7月9日以保藏号I‑4999保藏于CNCM[法国国家微生物培养物中心]的菌株在相同条件下获得的发酵动力学的菌株。根据本发明的酵母菌株在生产生物乙醇中特别有用。

摘要： 本发明涉及真菌生物技术领域，更具体地涉及真菌物种中的强诱导型基因表达系统，例如红酵母属(Rhodosporidium)属或红酵母属(Rhodotorula)属的物种。

摘要： 本发明属于生物工程领域，提供了一种胞内表达热带假丝酵母脂肪酶的毕赤酵母全细胞催化剂的制备方法：一个经过密码子优化的热带假丝酵母脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母GS115中进行胞内表达，经过初筛和复筛后得到最佳重组菌株3‑1；将重组菌株3‑1用5％的十六烷基三甲基溴化铵进行通透化，冷冻干燥后得到胞内表达热带假丝酵母脂肪酶的毕赤酵母全细胞催化剂。本发明还提供了该胞内表达热带假丝酵母脂肪酶的毕赤酵母全细胞催化剂在合成6‑O‑丁酰澳栗精胺中的应用方法：以四氢呋喃、澳栗精胺、丁酸乙烯酯和胞内表达热带假丝酵母脂肪酶的毕赤酵母全细胞催化剂为原料，在30°C、160r/min条件下进行合成反应。这两种方法简单高效，适于工业应用。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，特别涉及一种用于表达罗伦隐球酵母Rho1 GTP蛋白的酿酒酵母基因工程菌、其构建方法及其应用。一种用于表达罗伦隐球酵母rho1 GTP蛋白的酿酒酵母基因工程菌，其含有如SEQ ID NO：3所述的rho1基因cDNA序列。本发明将罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)rho1基因cDNA序列连接到pYES6/CT质粒载体上，并将重组载体转化到酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中进行高效的表达，实现了rho1基因过表达对于酿酒酵母抗逆性和生防效力的提高作用。

摘要： 本发明涉及蛋白表达技术领域，具体为一种基于毕赤酵母GS115培养的酵母外泌蛋白表达方法，该方法包含有菌株的保存与培养、试剂的配置，方法包含有蛋白质可行性分析构建载体、目的基因的克隆与重组质粒、大肠杆菌感受态的制备转化、毕赤酵母电转感受态的制备转化、蛋白鉴定。该基于毕赤酵母GS115培养的酵母外泌蛋白表达方法，蛋白质可行性分析先构建载体，然后目的基因的克隆与重组质粒，在这一过程中进行大肠杆菌感受态的制备、大肠杆菌感受态的转化、毕赤酵母电转感受态的制备与毕赤酵母感受态电击转化，制备结束过后进行蛋白表达与鉴定、最终进行蛋白表达鉴定，从而得出蛋白可以表达，该种方式进一步加深了人们对于酵母外泌蛋白表达领域的研究。

摘要： 本发明涉及具有异源海藻糖酶基因的遗传工程改造的酵母，以及使用此类酵母的发酵方法。所述酵母能够以足以将大量海藻糖转化为葡萄糖的量表达海藻糖酶，从而提高发酵中产物的收率，和/或减少或消除对向所述发酵中添加外源海藻糖酶的需要。所述酵母还可包含其它异源基因，用于表达可用于提高收率和/或减少或消除对向所述发酵中添加外源酶的需要的酶。

摘要： 本发明公开一种汉逊酵母特异性表达载体的构建及在提高乙肝病毒表面抗原在汉逊酵母表达量的方法，属于生物工程技术领域，构建：步骤1，从真核汉逊酵母菌株ATCC34438或其衍生菌种基因组DNA，设计特异性引物，PCR扩增，分别调取MOX基因启动子MOXp和终止子MOX‑TT；步骤2，将毕赤酵母表达载体pPICZC上的启动子AOX1和终止子AOX‑TT，分别替换成MOX基因启动子MOXp和终止子MOX‑TT，即得汉逊酵母表达载体pHPZF1.0。采用本发明所述方法，可以获得的乙型肝炎表面抗原汉逊酵母酵母工程菌株能够以甲醇诱导型方式稳定和高效地表达HBsAg重组蛋白，适用于规模化生产HBsAg重组蛋白。

摘要： 本发明公开了一种应用酵母表达系统表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的方法。所述方法包括：1)表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的酵母菌种的构建；2)采用摇瓶发酵或者发酵罐进行诱导培养；3)蛋白纯化。本发明提供了一种新的sST2重组蛋白表达和纯化方法，通过酵母表达系统表达sST2重组蛋白，利用发酵罐技术提高产量，并且证明酵母源sST2具有良好的生物学活性，稳定性良好，应用验证显示其可以作为sST2化学发光检测试剂盒校准品。此外，本发明还建立了一种全新的表达量检测方法，完成了诊断试剂盒的应用验证，解决了目前sST2规模化生产方面的多个难点，能够满足诊断试剂领域对sST2需求，为sST2规模化生产提供新思路。

摘要： 本发明公开一种汉逊酵母特异性表达载体的构建及在提高乙肝病毒表面抗原在汉逊酵母表达量的方法，属于生物工程技术领域，构建：步骤1，从真核汉逊酵母菌株ATCC34438或其衍生菌种基因组DNA，设计特异性引物，PCR扩增，分别调取MOX基因启动子MOXp和终止子MOX?TT；步骤2，将毕赤酵母表达载体pPICZC上的启动子AOX1和终止子AOX?TT，分别替换成MOX基因启动子MOXp和终止子MOX?TT，即得汉逊酵母表达载体pHPZF1.0。采用本发明所述方法，可以获得的乙型肝炎表面抗原汉逊酵母酵母工程菌株能够以甲醇诱导型方式稳定和高效地表达HBsAg重组蛋白，适用于规模化生产HBsAg重组蛋白。

摘要： 本发明公开了一种应用酵母表达系统表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的方法。所述方法包括：1)表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的酵母菌种的构建；2)采用摇瓶发酵或者发酵罐进行诱导培养；3)蛋白纯化。本发明提供了一种新的sST2重组蛋白表达和纯化方法，通过酵母表达系统表达sST2重组蛋白，利用发酵罐技术提高产量，并且证明酵母源sST2具有良好的生物学活性，稳定性良好，应用验证显示其可以作为sST2化学发光检测试剂盒校准品。此外，本发明还建立了一种全新的表达量检测方法，完成了诊断试剂盒的应用验证，解决了目前sST2规模化生产方面的多个难点，能够满足诊断试剂领域对sST2需求，为sST2规模化生产提供新思路。