酪醇

摘要： 目的:建立LC-MS/MS法测定比格犬血浆中红景天苷及其代谢物酪醇的浓度,并应用于药动学研究。方法:血浆样品经氯仿、苯酚和异戊醇混合溶剂萃取,Shimadzu Shim-pack Velox PFPP色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)分离,以水(A相)-含20%乙腈的甲醇溶液(B相)为流动相,梯度洗脱(0~1 min,12%B;1~2.5 min,12%~85%B;2.5~3.5 min,85%B;3.5~3.6 min,85%~12%B;3.6~5 min,12%B)5 min,流速为0.3 ml/min,柱温40°C。采用电喷雾离子源(ESI),负离子多反应监测模式(MRM)进行质谱监测,离子对:红景天苷m/z 299.1→118.9、酪醇m/z 137.0→105.9、内标天麻素m/z 285.1→122.9。测定比格犬口服和静脉注射红景天苷后的主要药动学参数。结果:红景天苷在10~10000 ng/ml,酪醇在1~1000 ng/ml范围内线性良好,日内和日间精密度RSD均<12.9%。口服给药后,红景天苷和酪醇的AUC0~t分别为(19600±4870)和(946±188)ng·h·ml^(-1),AUC_(0~∞)分别为(19700±4880)和(2280±1780)ng·h·ml^(-1),c_(max)分别为(8890±2650)和(132±44.3)ng/ml,t_(1/2)分别为(1.85±0.69)和(40.3±45.1)h;静脉注射给药后,红景天苷和酪醇的AUC0~t分别为(5960±882)和(127.0±32.4)ng·h·ml^(-1),AUC_(0~∞)分别为(6000±887)和(157.0±31.6)ng·h·ml^(-1),c_(max)分别为(9210±1900)和(42.0±12.3)ng/ml,t_(1/2)分别为(0.976±0.156)和(4.46±2.42)h。结论:本方法简单、高效,专属性好,灵敏度高,可用于红景天苷及其代谢物酪醇在比格犬体内的药动学研究。

摘要： 分别利用糖基转移酶Yj iC、YdhE、Yoj K的过表达载体电转化地衣芽胞杆菌DW2,相应获得重组菌株ID02、ID03和ID04,并借助pgcA和gtaB基因强化菌株ID02中的UDP-葡萄糖代谢途径来获得重组菌株ID05,研究了基因改造及发酵条件对淫羊藿次苷D2产量的影响.结果表明,Yj iC、YdhE、Yoj K均可糖基化酪醇合成淫羊藿次苷D2,且三者酶催化活性依次减弱;强化UDP-葡萄糖代谢途径并不能促进淫羊藿次苷D2的合成;经正交试验优化后的发酵培养基中NH4 Cl为3 g/L、磷酸缓冲盐为75 mmol/L,菌株ID02在此条件下发酵48 h时相应的淫羊藿次苷D2的产量可达到4010 mg/L.

摘要： 羟基酪醇是重要精细化学品,作为天然抗氧化剂被广泛应用于食品、医药领域.利用合成生物学技术生产羟基酪醇具有重要意义.本文克隆并功能鉴定了来源于大肠杆菌Escherichia coli BL21的羟化酶编码基因HpaBC,结果表明该酶的两个亚基均能成功表达并能催化酪醇生成羟基酪醇.通过CRISPR-Cas9技术将由tac启动子调控的HpaBC基因表达盒整合到前期构建的酪醇高产菌株YMG5A*R基因组中,同时删除副产物乙酸的合成途径,获得大肠杆菌代谢工程菌株YMGRD1H1.摇瓶发酵实验结果表明,重组菌株能够直接利用葡萄糖生产羟基酪醇,产量达到1.81 g/L,同时发现几乎没有副产物积累.5L发酵罐规模的流加补料发酵实验表明,羟基酪醇最高产量达到2.95 g/L,是目前文献报道以葡萄糖从头合成羟基酪醇的最高水平.通过系统改造大肠杆菌,实现了羟基酪醇的大量合成,为进一步构建具有工业应用潜力的羟基酪醇细胞工厂奠定了基础,也为拓展芳香族化合物的微生物制造路线提供了有益的参考.

摘要： 酪醇是橄榄苦苷、红景天苷和羟基酪醇等许多重要价值天然产物的前体物质,建立一个酪醇高产的平台菌株具有重要意义.由于大肠杆菌(Escherichia coli)具有繁殖速度快、易于基因操作等优点,该研究选择E.coli BL21(DE3)作为宿主菌株.通过在质粒pRSFDuet-1中应用组成型启动子PcspA过量表达来自荷兰芹的芳香醛合成酶(aromatic aldehyde synthase,AAS),得到105.97 mg/L酪醇.在敲除苯丙氨酸竞争途径(pheA)、丙酮酸竞争途径(ptsG、crr、pykF)及对羟基苯乙酸(feaB)竞争途径以及解除反馈抑制(tyrR)的菌株中过量表达AAS,获得1055.36 mg/L酪醇.为了进一步强化代谢流,对E.coli来源的乙醇脱氢酶AdhE、AdhP、YahK及FrmA和酿酒酵母来源的Adh6进行了筛选.结果表明,酿酒酵母来源的Adh6表现最佳的脱氢酶活性,产生了1516.86 mg/L酪醇,产量提升了43.73％.基于启动子组合调控策略平衡代谢流,酪醇产量达到1810.46 mg/L,提升了19.40％.最后,对培养基中碳源浓度、氮源浓度以及CaCO3浓度进行优化,得到2120.58 mg/L酪醇,产量提升了17.13％.研究结果为后续采用发酵法生产酪醇和相关的下游产物奠定了良好的基础.

摘要： 目的:建立超高效液相色谱-光电二极管阵列检测器(UPLC-PDA)法同时测定红景天中的红景天苷、酪醇、没食子酸和咖啡酸的含量方法,并对19批正品、地标品、习用品和市售品进行质量分析和评价。方法:采用ACE Excei 2 C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,2 um),流动相为0.1%磷酸水-乙腈,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为30°C,进样体积为5μL,检测波长为275 nm。结果:指标性含量测定结果分析显示红景天苷及其苷元酪醇之间存在相互转化;红景天生长期在5年左右最适采收;在根中红景天苷含量高于根茎中;市售小花红景天中红景天苷含量基本在检测线以下。结论:采用UPLC-PDA所建立的含量测定方法快速、科学,准确。分析结果可对红景天质量进行初步评价,同时也为红景天的采收加工、扩大新药源、质量评价提供依据。

摘要： 目的 研究毛蕊花糖苷、松果菊苷及酪醇等苯乙醇苷类化合物对高原低氧大鼠认知功能损伤的保护作用及机制.方法 采用八臂迷宫训练大鼠认知能力,随机取72只训练成功的大鼠并分为6组:常氧空白组(蒸馏水,2 ml/200 g)、低氧模型组(蒸馏水,2 ml/200 g)、毛蕊花糖苷组(150 mg/kg)、松果菊苷组(150 mg/kg)、酪醇组(150 mg/kg)及红景天苷组(150 mg/kg),每组12只.连续灌胃给药7 d.第4天给药后,除常氧空白组置于常氧(海拔1500 m)外,其余组置于大型模拟高原低氧环境动物实验舱(海拔7500 m,72 h).低氧暴露前后八臂迷宫测试(海拔4000 m)评价其认知功能,HE染色观察海马组织病理学改变,并测定相关组织中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,PCR及West-ern印迹法检测海马组织中PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α信号通路相关mRNA及蛋白表达.结果 与常氧空白组相比,低氧组大鼠记忆相关指标错误率显著升高(均P<0.01),低氧模型组海马结构明显损伤,海马组织ROS、MDA及血清MDA显著升高(均P<0.01),海马组织和血清GSH含量、SOD活性显著降低(均P<0.01),PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α信号通路被抑制(P<0.01);与低氧模型组相比,各给药组对大鼠相关指标均有改善作用,其中酪醇组的效果最好,大鼠记忆错误率有所下降(P<0.01),海马结构损伤减轻,海马组织ROS、MDA及血清MDA含量都呈现不同程度的降低(P<0.01),海马组织和血清GSH含量、SOD活性呈现不同程度的升高(P<0.01),PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α信号通路相关mRNA及蛋白表达有所改善(P<0.01).结论 毛蕊花糖苷、松果菊苷、酪醇及红景天苷对高原低氧认知功能损伤有一定的保护作用,其中酪醇效果最明显.其机制可能与抑制组织损伤、抗氧化应激及改善PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α信号通路有关.

摘要： 目的:研究冬至前后不同采收时间女贞子中主要活性成分特女贞苷、红景天苷和酪醇积累量的变化,为合理确定女贞子的最佳采收时间提供实验依据.方法:采用梯度洗脱建立HPLC法同时测定特女贞苷、红景天苷和酪醇的含量,用层次分析法(AHP)确定三种成分含量的权重系数分别为0.581,0.309,0.110,加权综合分析8个采收时间3种成分积累量的变化趋势.结果:特女贞苷、红景天苷和酪醇在各自范围内均呈现良好的线性关系(r>0.9998),加样回收率分别为95.48％,98.52％,95.63％RSD分别为2.25％,1.91％,0.99％(n=5);各成分的综合评分从11月12日开始呈逐渐上升,到12月12日达到峰值后开始逐渐下降的趋势.结论:本试验中最佳的采收时间应该确定在冬至前1个月,此时女贞子性状符合中国药典要求,且各有效成分能达到单产量中含量最大化.

摘要： 以酪醇为原料,通过K-K法合成了3个红景天苷衍生物:苄基酪醇-β-D-葡萄糖苷、苄基酪醇-β-D-半乳糖苷及苄基酪醇-β-D-七乙酰麦芽糖苷,其结构经1 H NMR和13 C NMR表征.采用还原力法及DPPH自由基清除法,考查了化合物的体外抗氧化活性.结果表明:不同浓度的红景天苷及其衍生物均具有还原能力及清除DPPH自由基的活性,且活性强弱与浓度成正比.

摘要： 酪醇是一种苯乙醇衍生物,来源于橄榄油,是一种天然的抗氧化剂,作为一种重要的医药中间体,用于美多心安,羟基酪醇,红景天苷等市场上主要心血管药物的合成.目前,获得酪醇的方法主要有三种:植物提取法、化学合成法、生物合成法.从植物中直接提取酪醇的成本较高,但是产率不高.本研究将已报道的2条外源生物合成酪醇的途径：TDC-TYO途径，PcAAS途径分别导入酿酒酵母中，与酵母内源的Ehrlich途径进行比较分析，发现与TDC-TYO途径及埃里希途径相比，PcAAS催化的酪醇生物合成途径在酿酒酵母中更加有效，可实现酪醇的高效生物合成。在实验菌株BY4741中，导入PcAAS后，酪醇产量由出发株的0.38mg/L提高至75.06±0.40mg/L。进一步对酪醇生物合成的关键反应步骤和乙醇分支途径进行代谢工程改造，酪醇产量分别提高27.06%和19.21%。将该改造策略应用于工业菌株IT中，酪醇产量达到1126.26±107.82mg/L。该重构策略有助于实现酪醇在酿酒酵母中的工业化生产。

摘要： 目的:建立应用小粒径色谱柱快速测定红景天提取物中红景天苷、酪醇和络赛维含量的HPLC测定方法. 方法:色谱柱为HALO C18(4.6mm×150mm,2.7μm);流动相为A,乙腈,B,水(含0.1％甲酸),梯度洗脱(0～5min,A:7％～15％;5～8min,A:15％～18％;8～20min,.A:18％～30％;20～25min,A:30％～40％;25～30min,A:40％～55％);柱温为30°C;流速为0.6mL·min-1;检测波长为280nm;进样量为5μL.结果:红景天苷、酪醇、络赛维15min内达到分离,峰形尖锐对称,线性范围分别为0.41～106.00μg·mL-1,0.42～108.00μg·mL-1,0.38～98.00μg·mL-1,平均加样回收率分别为98.69％,99.21％,98.83％.采用建立的方法进行不同单位提供红景天提取物的多成分测定。 结果:单一采用红景天苷作为质量控制指标,九批样品的差异度较小(RSD=7.95％),如果将酪醇或络赛维引入质量评价体系,则红景天提取物各批次间就存在较大的差异(酪醇,RSD=24.42％;络赛维,RSD=50.55％);但是,同一单位提供的样品间的差异度较小. 结论:建立的小粒径色谱柱-HPLC方法高效、准确,经济,精密度好,灵敏度高,可用于红景天提取物中的红景天苷、酪醇和络赛维的含量的快速同时测定;同时引入多成分的测定方法,可以评价不同厂家提取物质量的差异,并筛选出导致质量差异的成分,为提取物的工艺优化提供参考.

摘要： 目的：测定红景天苷和酪醇的油水分配系数,研究二者肠吸收动力学. 方法:采用摇瓶法测定不同pH条件下红景天苷和酪醇的油水分配系数;采用大鼠原位肠循环灌注法研究红景天苷和酪醇的肠吸收动力学. 结果:在人工胃液、人工肠液和pH为2.5、3、4、5、6、6.8、7、7.6、8的磷酸盐缓冲液中,红景天苷的油水分配系数分别为0.12,0.06,0.12,0.07,0.10,0.13,0.09,0.14,0.06,0.10,0.12;酪醇的油水分配系数分别为9.49,9.23,13.99,8.64, 16.86,10.60,8.94,8.85,7.94,6.84,7.41;红景天苷(31.35 mg·kg-1)在大鼠小肠内几乎不吸收,酪醇(12.20 mg·kg-1)小肠吸收较好,其吸收速率常数(ka)为0.591±0.083 h-1,半衰期(t1/2)为1.19±0.15h,每小时百分吸收率(A％)为37.11±2.06％. 结论:红景天苷在不同pH条件下的logP为负值,酪醇的logP为正值,依据经典理论推测两者分属吸收较差与吸收较好物质;在体肠吸收实验证实,红景天苷在大鼠小肠中几乎不吸收,酪醇吸收较好,可以用油水分配系数预测大鼠小肠吸收.

摘要： 目的：探讨不同月份不同炮制方法对长沙地区女贞子中红景天苷和酪醇含量的影响。rn 方法：用HPLC测定红景天苷和酪醇的提取浓度作比较，评价月份及炮制方法对女贞子的影响。rn 结果：女贞子炮制后红景天苷及酪醇含量均升高。rn 结论：月份及炮制方法对女贞子活性成分含量有影响。

摘要： 建立了红景天软胶囊质量的标准。采用TLC法鉴别方中红景天；用HPLC法测定红景天软胶囊中红景天苷的含量。结果表明，在TLC色谱中可检出红景天苷、酪醇的特征斑点；红景天苷在1.6-5.8μg范围内与峰面积有良好的线性关系，r=0.9996(n=5)，平均回收率为99.27%，RSD为0.7%。该方法准确可靠，专属性强，能简便有效的控制该制剂的质量。

摘要： 本文论述了近年来,继人参、刺五加之后发现红景天类药物不仅有类似的功能,而且在某些方面更优于前两种药物,如人参兴奋作用过强,刺五加能不仅有抗缺氧、抗寒冷、抗疲劳、抗微波辐射等明显功能,而且还有提高工作效率、延缓机体衰老、防治老年疾病等功能.

摘要： 本发明公开了表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌及构建方法及应用，一种表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌，所述大肠杆菌含有并能够表达ARO10、HpaBC和UGT基因。本发明的重组大肠杆菌酪氨酸通路相关基因进行了过表达，能够显著提高羟基酪醇、羟基酪醇‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷和羟基酪醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的产量，其中羟基酪醇产量可达401mg/L、羟基酪醇‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的产量可达406mg/L，羟基酪醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的产量可达928mg/L，为其大规模工业生产应用奠定了基础。

摘要： 本发明公开了用于生产天然酪醇的菌株及天然酪醇的制备方法，该菌株为酵母菌Saecharomyces sp.OMK‑58，该菌株可用于生产天然酪醇。天然酪醇的制备方法是利用该菌株，采用微生物发酵法生产。发酵法包括菌种活化、种子培养、发酵、提取等步骤。本发明方法低温低压，比较安全，操作简单，污染少，是一个安全环保的生产方法。

摘要： 本发明公开了异源代谢途径生产酪醇及羟基酪醇的方法。所述产羟基酪醇的宿主中导入了羟基酪醇生产的代谢途径。更确切的说，是在宿主中高效表达了氨基转移酶(Aminotransferase)，酮酸脱羧酶(Ketoacid decarboxylase)，醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase)来生产酪醇，再引入4‑羟基苯乙酸羟化酶(4‑Hydroxyphenylacetate hydroxylase)来生产羟基酪醇。这些酶所编码的基因构建在表达质粒上或者整合到基因组上。将酶所编码的基因导入宿主中，结果得到了可以利用葡萄糖，甘油，酪氨酸等生产羟基酪醇的生产宿主，同时本发明还公开了一种双相培养的方法，使得羟基酪醇的生产更为高效。

摘要： 本发明涉及一种生产酪醇及羟基酪醇的酵母及构建方法，属于有机化合物制备技术领域，将PcAAS和ADH序列导入酵母BY4741，得到生产酪醇的PcAAS‑ADH重组酵母；在所述PcAAS‑ADH重组酵母中导入pdc1基因敲除盒、tyrA表达盒得到生产酪醇的PcAAS‑ADH‑Δpdc1‑tyrA重组酵母；将HpaBC的DNA序列导入PcAAS‑ADH‑Δpdc1‑tyrA重组酵母，得到生产羟基酪醇的PcAAS‑ADH‑HpaBC‑Δpdc1‑tyrA重组酵母。在酵母BY4741中构建酪醇或羟基酪醇生物合成途径，提高酪醇或羟基酪醇的产量。

摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌及其生产酪醇、羟基酪醇或红景天苷的方法，所述重组大肠杆菌为在宿主菌中表达了酪醇合成途径酶融合体来生产酪醇，再引入4‑羟基苯乙酸3‑羟化酶生产羟基酪醇，引入糖基转移酶生产红景天苷；Spy(或Snoop)环化还可通过热处理以增加细胞的通透性，避免细胞的传质限制。通过模块共培养因将长代谢途径分割成多个途径、并可利用不同宿主细胞进行表达，减轻了对宿主细胞的代谢负担；而且不同途径可选用各自最合适的宿主细胞进行表达；可通过调整模块菌的比例来控制模块的适配性；即插即用，容易组装成不同途径以合成不同产物。还能避免代谢中间物和目标产物毒性的影响。

摘要： 本发明公开了用于生产天然酪醇的菌株及天然酪醇的制备方法，该菌株为酵母菌Saecharomyces sp.OMK‑58，该菌株可用于生产天然酪醇。天然酪醇的制备方法是利用该菌株，采用微生物发酵法生产。发酵法包括菌种活化、种子培养、发酵、提取等步骤。本发明方法低温低压，比较安全，操作简单，污染少，是一个安全环保的生产方法。

摘要： 本发明公开一种能产生酪醇和羟基酪醇的强化大曲及制备方法及用途，属于白酒酿造技术领域，所述大曲的制备方法为包括（1）筛选菌种、（2）培育菌种和（3）制作强化大曲。本发明筛选产生酪醇和羟基酪醇活性次级代谢产物的特殊微生物，通过强化发酵方法制备强化大曲，将强化大曲应用于白酒酿造过程中，生产出富含酪醇和羟基酪醇健康功能因子的白酒。

摘要： 本发明公开了异源代谢途径生产酪醇及羟基酪醇的方法。所述产羟基酪醇的宿主中导入了羟基酪醇生产的代谢途径。更确切的说，是在宿主中高效表达了氨基转移酶(Aminotransferase)，酮酸脱羧酶(Ketoacid decarboxylase)，醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase)来生产酪醇，再引入4‑羟基苯乙酸羟化酶(4‑Hydroxyphenylacetate hydroxylase)来生产羟基酪醇。这些酶所编码的基因构建在表达质粒上或者整合到基因组上。将酶所编码的基因导入宿主中，结果得到了可以利用葡萄糖，甘油，酪氨酸等生产羟基酪醇的生产宿主，同时本发明还公开了一种双相培养的方法，使得羟基酪醇的生产更为高效。

摘要： 本发明涉及一种生产酪醇及羟基酪醇的酵母及构建方法，属于有机化合物制备技术领域，将PcAAS和ADH序列导入酵母BY4741，得到生产酪醇的PcAAS‑ADH重组酵母；在所述PcAAS‑ADH重组酵母中导入pdc1基因敲除盒、tyrA表达盒得到生产酪醇的PcAAS‑ADH‑Δpdc1‑tyrA重组酵母；将HpaBC的DNA序列导入PcAAS‑ADH‑Δpdc1‑tyrA重组酵母，得到生产羟基酪醇的PcAAS‑ADH‑HpaBC‑Δpdc1‑tyrA重组酵母。在酵母BY4741中构建酪醇或羟基酪醇生物合成途径，提高酪醇或羟基酪醇的产量。

摘要： 本发明公开了表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌及构建方法及应用，一种表达羟基酪醇和羟基酪醇葡萄糖苷的大肠杆菌，所述大肠杆菌含有并能够表达ARO10、HpaBC和UGT基因。本发明的重组大肠杆菌酪氨酸通路相关基因进行了过表达，能够显著提高羟基酪醇、羟基酪醇‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷和羟基酪醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的产量，其中羟基酪醇产量可达401mg/L、羟基酪醇‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的产量可达406mg/L，羟基酪醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的产量可达928mg/L，为其大规模工业生产应用奠定了基础。