DNA重组技术

摘要： 目的 体外制备人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M(TOX-IgM)抗体,并验证加入J链对IgM抗体蛋白聚体、效价及稳定性的影响.方法 从美国国家生物信息中心数据库获取抗体的重链可变区、轻链可变区以及J链序列,通过DNA重组技术分别将TOX抗体轻重链可变区和人源恒定区进行拼接,构建人鼠嵌合IgM表达载体,转染HEK 293F细胞进行表达.观察J链相关效应.结果 J链有利于抗体聚体形成(聚体占比由11.3％提升至75.5％),抗体效价由1:40提升至1:160;在37°C热稳定性实验及反复冻融实验中,TOX-IgM(J+)稳定性与TOX-IgM(J-)相当.通过酶联免疫吸附试验鉴定蛋白活性,本实验成功制备人鼠嵌合TOX-IgM抗体,经聚丙烯酰胺凝胶电泳还原显示,重链大小约为75000,轻链大小约为25000,符合预期;效价、稳定性、基质效应均满足需求.结论 在连接链J链(15000蛋白)存在下,IgM抗体更易形成五聚体,即5个IgM单体通过二硫键和J链彼此之间相互连接,且经评价效价和稳定性均有了明显提升.

摘要： 目的 构建低氧诱导型的血管内皮生长因子(VEGF)真核表达载体,建立体外递送方法并对其效能进行鉴定.方法 应用基因重组技术,在真核表达载体pGL4.73[hRluc/SV40](pSV)启动子上游插入促红细胞生成素(EPO)增强子,构建低氧诱导型表达载体(pEPO-SV),以海肾荧光素酶(Rluc)为下游报告基因;随后以VEGF165基因取代Rluc插入到pEPO-SV质粒,同时将其插入到pSV质粒作为对照,分别获得pEPO-SV-VEGF和pSV-VEGF表达载体;在体外分别将表达Rluc或VEGF165的质粒转染人胚肾293T细胞,在正常和低氧条件下处理24h和48h后,通过Rluc或VEGF165的表达对所构建载体的低氧诱导功能进行鉴定;然后基于聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米颗粒建立质粒的细胞内递送方法,并在体外细胞缺氧模型中对上述低氧诱导型真核表达质粒的效能进行鉴定.结果 在质粒构建中,分别通过酶切、PCR扩增和DNA测序证实了EPO增强子和VEGF165基因的成功插入与正确性.表达Rluc或VEGF165的质粒分别转染293T细胞后,正常培养条件下报告基因Rluc(其一质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为2448.24±158.51和3173.97±379.92,其二质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为55500.00±3237.05和51193.18±866.32)及目的基因VEGF165表达差异无统计学意义(P>0.05),而在低氧情况下Rluc(氯化钴低氧下,质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为4857.70±1223.28和16432.64±1618.73;低氧培养箱中,质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为2504.45±213.20和17274.35±685.60)及VEGF165表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),表明所构建的pEPO-SV和pEPO-SV-VEGF质粒具有典型的低氧诱导表达活性.利用PLGA纳米颗粒在体外293T细胞中进行pEPO-SV与pSV递送后,在正常培养条件下与低氧条件下报告基因Rluc的表达变化与上述一致,即正常培养条件下,处理24h与48h后pSV、pEPO-SV质粒的荧光表达值分别为149.44±4.01、127.09±15.05与1074.91±114.78、1064.56±137.48;低氧条件下,处理24h和48h后pSV、pEPO-SV质粒的荧光表达值分别为3265.34±440.00、8828.87±637.03与3202.06±33.43、9114.75±292.06.结论 成功建立了典型的低氧诱导型VEGF真核表达系统，并建立了有效的体外递送方法；这一低氧诱导型表达载体及递送方法在缺血、缺氧等组织损伤疾病中可能具有重要的应用前景.

摘要： 本文综述了以DNA重组技术为代表的分子生物学技术在重组抗体方面的应用.

摘要： 近年来，人口老龄化和经济增长这两大因素再次为生物制药行业的持续增长加足马力。生物制药行业发展向好，生物制药也不甘落后。作为生物制药枝术，生物制药技术是70年代初伴随着DNA重组技术和淋巴细胞杂交瘤技术的发明和应用而诞生的。40多年来，其飞速发展为医疗业、制药业开辟了广阔的市场前景，也有效地改善了人们的生活。

摘要： 有效教学是针对当前课堂教学存在低效教学、无效教学，甚至负效教学情况而提出的教学理念[1]。所谓“有效”，主要是指通过教师在一段时间的教学后，学生所获得的具体进步或发展。因此，学生有无进步或发展是教学有没有效益的唯一指标。以最低或较低的课堂教学投入，而获得最大的教育质量，实现投入和产出比率的最大化[2]。实施有效的课堂教学要求教师具有热情和可信任感的行为和意识，能积极期望每个学生的成功，与教师自身驾驭课堂的素质，课堂上教学方法、学生的学习方式及各种媒体的恰当使用等等分不开[3]。把有效课堂教学作为一种理念，作为一种价值追求才能更好地实现有效教学。

摘要： 美国FDA批准Spark治疗药公司的voretigene neparvovec-rzyl （Luxturna）用于治疗罕见的遗传性致盲性视觉丧失。此病是由于双侧基因RPE65变性，造成视网膜感光细胞（色素细胞）逐渐丧失功能并坏死。此药使用腺病毒载体，用DNA重组技术修饰，递送正常的RPE65基因至视网膜细胞以恢复视力。视网膜下注射给药，先给一侧眼用药，至少6d后再给他侧眼治疗，并应口服泼尼松抑制对此药的免疫反应。

摘要： Biotechnology and bioengineering were the two easily confused concept of biology , so characterizing the two words was aid to teaching and construction fields .The present paper analyzed the different expression of the two items .It comprehended the two items from two angles of field of science and construction of field , clarified their connotation and relation , and then analyzed the relation of biotechnology with the other items i.e.life science, molecular biology, synthetic biology, and biomedical engineering.Finally, it also discussed the connotation and relations of bioengineering and biomedical engineering .%生物技术和生物工程是两个容易混淆的生物学名词，厘清两个名词对于生命科学与工程的教学工作和学科建设均有裨益。首先分析了两个名词的不同表述内容；其次从学科层面和专业建设角度对两个名词进行分析，解读了它们的内涵及关系，在此基础上分析了生命科学、分子生物学、合成生物学与生物技术的关系；最后探讨了生物工程与生物医学工程两个专业的内涵关联性。

摘要： DNA重组技术是生物工程的核心,也是现代生物学的一个重要部分,自从诞生之日起就获得了极大地关注,获得了快速地发展.DNA重组技术是基于细胞水平或分子水平的一种生物技术,所以进行基因重组就必然有着一套相应的工具,它们的发现和发展对于DNA重组技术具有着至关重大的意义.本文主要介绍DNA重组技术的基本工具,并且对于该工具的原理以及相应的作用都进行了论述.最后对于DNA重组技术基本工具的未来进行了展望.

摘要： 猪瘟(classical swine fever，csF)是由猪瘟病毒(classicalswine fevel,virus，CSFV)引起的猪的急性、热性、高度接触性传染病，严重危害养猪业。目前用来防治猪瘟的疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE。疫苗和法国Tlaireval疫苗川。在我国，猪瘟弱毒疫苗的应用一定程度上控制了该病的暴发与流行，但是目前尚没有方法可以区别猪瘟疫苗免疫抗体和野毒感染抗体，猪瘟的隐性感染和散发仍然严重影响我国养猪业。因此，现有的传统疫苗已不能适应新形势的需要，研究和开发新型猪瘟疫苗是未来研究的方向。近年来，分子生物学技术的迅速兴起和发展，为新型猪瘟疫苗的研究和开发奠定了基础。

摘要： 猪瘟(classical swine fever，csF)是由猪瘟病毒(classicalswine fevel,virus，CSFV)引起的猪的急性、热性、高度接触性传染病，严重危害养猪业。目前用来防治猪瘟的疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE。疫苗和法国Tlaireval疫苗川。在我国，猪瘟弱毒疫苗的应用一定程度上控制了该病的暴发与流行，但是目前尚没有方法可以区别猪瘟疫苗免疫抗体和野毒感染抗体，猪瘟的隐性感染和散发仍然严重影响我国养猪业。因此，现有的传统疫苗已不能适应新形势的需要，研究和开发新型猪瘟疫苗是未来研究的方向。近年来，分子生物学技术的迅速兴起和发展，为新型猪瘟疫苗的研究和开发奠定了基础。

摘要： 猪瘟(classical swine fever，csF)是由猪瘟病毒(classicalswine fevel,virus，CSFV)引起的猪的急性、热性、高度接触性传染病，严重危害养猪业。目前用来防治猪瘟的疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE。疫苗和法国Tlaireval疫苗川。在我国，猪瘟弱毒疫苗的应用一定程度上控制了该病的暴发与流行，但是目前尚没有方法可以区别猪瘟疫苗免疫抗体和野毒感染抗体，猪瘟的隐性感染和散发仍然严重影响我国养猪业。因此，现有的传统疫苗已不能适应新形势的需要，研究和开发新型猪瘟疫苗是未来研究的方向。近年来，分子生物学技术的迅速兴起和发展，为新型猪瘟疫苗的研究和开发奠定了基础。

摘要： 猪瘟(classical swine fever，csF)是由猪瘟病毒(classicalswine fevel,virus，CSFV)引起的猪的急性、热性、高度接触性传染病，严重危害养猪业。目前用来防治猪瘟的疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE。疫苗和法国Tlaireval疫苗川。在我国，猪瘟弱毒疫苗的应用一定程度上控制了该病的暴发与流行，但是目前尚没有方法可以区别猪瘟疫苗免疫抗体和野毒感染抗体，猪瘟的隐性感染和散发仍然严重影响我国养猪业。因此，现有的传统疫苗已不能适应新形势的需要，研究和开发新型猪瘟疫苗是未来研究的方向。近年来，分子生物学技术的迅速兴起和发展，为新型猪瘟疫苗的研究和开发奠定了基础。

摘要： Gsα是研究最多、与临床关系最密切的一种G蛋白,其主要功能是将受体接受的信号转导给腺苷酸环化酶,使AC激活.同时也可直接作用于离子通道而发挥作用.本文采用DNA重组技术,将这3种Gsα缺失体基因在大肠杆菌中进行了克隆、表达,以便了解这3种异常缺失体的表达特征,深入研究其生物学功能.

摘要： Gsα是研究最多、与临床关系最密切的一种G蛋白,其主要功能是将受体接受的信号转导给腺苷酸环化酶,使AC激活.同时也可直接作用于离子通道而发挥作用.本文采用DNA重组技术,将这3种Gsα缺失体基因在大肠杆菌中进行了克隆、表达,以便了解这3种异常缺失体的表达特征,深入研究其生物学功能.

摘要： Gsα是研究最多、与临床关系最密切的一种G蛋白,其主要功能是将受体接受的信号转导给腺苷酸环化酶,使AC激活.同时也可直接作用于离子通道而发挥作用.本文采用DNA重组技术,将这3种Gsα缺失体基因在大肠杆菌中进行了克隆、表达,以便了解这3种异常缺失体的表达特征,深入研究其生物学功能.

摘要： Gsα是研究最多、与临床关系最密切的一种G蛋白,其主要功能是将受体接受的信号转导给腺苷酸环化酶,使AC激活.同时也可直接作用于离子通道而发挥作用.本文采用DNA重组技术,将这3种Gsα缺失体基因在大肠杆菌中进行了克隆、表达,以便了解这3种异常缺失体的表达特征,深入研究其生物学功能.

摘要： 本发明提供了一种用于构建DNA重组片段的不基于PCR的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区，所述方法包括下述步骤：A)鉴定所述靶DNA中用于遗传元件的所需插入位点；B)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点上游的所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定上游同源区的5'范围；C)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点下游的同一所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定下游同源区的3'范围；D)合成侧接区基因盒，其引起所述上游和下游半位点的并置，从而导致形成侧接有所述上游和下游同源区的所选限制性内切核酸酶的完整限制性位点；以及E)将所述侧接区基因盒插入到包含用于操作所述靶DNA的遗传元件的质粒载体中，在所述质粒载体上提供所述必需的侧接同源区，用于在所述所需插入位点处在所述靶DNA内的重组。

摘要： 本发明提供了含有编码狂犬病病毒抗原的插入DNA顺序的重组腺病毒DNA顺序和结合该DNA顺序的重组体腺病毒。;本发明还提供了含有有效量的重组体腺病毒和药物上可接受的赋形剂的疫苗和使哺乳动物对由狂犬病病毒诱发的疾病产生免疫能力的方法，包括将病毒或疫苗施用于哺乳动物。

摘要： 在生物学的流体中循环的抗-DNA抗体是应用一种给定千碱基对的、适当限定的

摘要： 本发明涉及微生物生产肽或多肽的方法，可以 在一种普通培养基中同时产生出至少有一部分是由 随机合成多聚核甘酸组成的基因，将这样的基因导 入宿主细胞，培养该宿主细胞以便无性繁殖那些随 机基因并导致由其所表达的蛋白质的产生，对所需 的宿主细胞转化体进行鉴别，筛选，分离，然后培养 之，生产出所需的肽或多肽。

摘要： 本发明涉及DNA重组中的或与DNA重组相关的改进，并提供了一种用于构建DNA重组片段的不基于PCR的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区。

摘要： 本发明提供一种突变型Taq DNA聚合酶，其蛋白质序列如SEQ ID NO：3所示；或者对SEQ ID NO：3所示的蛋白质序列进行一个或数个氨基酸的增加、缺失、修饰或突变，且仍具有与SEQ ID NO：3所示序列相当的高浓度蛋白耐受性以及高浓度盐离子耐受性。并公开了其编码DNA序列、重组载体、重组表达细胞及其应用。本发明的突变型的Taq DNA聚合酶与野生型的相比有5个氨基酸突变，具有更好的耐受蛋白、盐离子的能力和SNP分型能力，同时在多重PCR建库方面表现出更好的均一性。

摘要： 本发明提供了一种用于构建DNA重组片段的不基于PCR的方法，所述DNA重组片段具有靶DNA的基于重组的操作所需的与所述靶DNA内的所需遗传操作位点同源的必需的侧接区，所述方法包括下述步骤：A)鉴定所述靶DNA中用于遗传元件的所需插入位点；B)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点上游的所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定上游同源区的5'范围；C)对存在于待靶向用于遗传操作的DNA内所述位点下游的同一所选限制性内切核酸酶的内源的、本源的半位点进行定位，并由此确定下游同源区的3'范围；D)合成侧接区基因盒，其引起所述上游和下游半位点的并置，从而导致形成侧接有所述上游和下游同源区的所选限制性内切核酸酶的完整限制性位点；以及E)将所述侧接区基因盒插入到包含用于操作所述靶DNA的遗传元件的质粒载体中，在所述质粒载体上提供所述必需的侧接同源区，用于在所述所需插入位点处在所述靶DNA内的重组。

摘要： 本发明提供了一种含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA重组母质粒及其制备方法，该微环DNA重组母质粒能在宿主菌内完成位点特异性重组，消除原核质粒元件，形成含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA；本发明还提供了一种含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA及其制备方法和应用，该微环DNA可在宿主细胞内稳定、持久地表达重组嵌合抗原受体基因，是一种高效、安全的基因治疗载体；其次，本发明还提供了一种含有该微环DNA的宿主细胞及其制备方法和应用；此外，本发明还提供了一种重组嵌合抗原受体及其制备方法和应用。

摘要： 本发明包括一种长度为2646bp的核苷酸序列，其中从无色杆菌属CCM4824(古生睾酮丛毛单胞菌子CCM 4824)中得到的该核苷酸序列具有编码青霉素酰化酶的核苷酸序列的特征，最终该序列片断至少由150个核苷酸组成。该序列可用于形成一种DNA结构，最后得到的结构至少有一个调控序列来调控基因表达和具有青霉素酰化酶活性的多肽的产生。该序列可以成为一个含有上述结构、启动子、转译启动信号和转译转录终止信号的重组表达载体的一部分。此外，本发明还涉及一种重组宿主细胞，含有被载体携带或细胞基因组中的核酸，以及一种大肠杆菌菌种BL21，它含有质粒pKXIP1，pKLP3和pKLP6携带的，可以编码青霉素酰化酶的核苷酸序列。

摘要： 使用基因重组技术,用不带电荷并且尺寸小的丝氨酸取代位于去铁铁蛋白的通道3的谷氨酸以及天冬酰酸。接着,用赖氨酸的碱性氨基酸或中性氨基酸取代位于保持部4的谷氨酸。再在保持部导入一个以上的半胱氨酸。由此,能防止带负电荷的(AuCl