DNA杂交

摘要： 为研究大肠杆菌的高灵敏快速检测方法,建立一种基于萘酰亚胺标记的DNA探针和磁性四氧化三铁氧化石墨烯分离的大肠杆菌O157:H7检测方法.将标记萘酰亚胺的ssDNA(单链DNA)作为捕获探针吸附在磁性氧化石墨烯表面,当目标ssDNA存在时,捕获探针与之部分杂交,利用磁场将目标ssDNA捕获并富集.然后加入释放探针完成杂交,使标记荧光的捕获探针从磁性氧化石墨烯的表面释放出来,通过测定溶液荧光强度可以实现大肠杆菌O157:H7的高灵敏检测.实验结果表明:在一定条件下,O157:H7数量的对数值和荧光强度与空白值荧光强度的比值(F/F0)呈线性关系,线性范围为150~1.5×106个/mL,经过富集后检出限可达100个/mL.该方法灵敏度高,检出限低,耗时较短,操作简单,为致病菌的高灵敏检测提供新思路.%A novel sensitive assay was investigated for the highly sensitive and rapid detection of Escherichia coli O157:H7. It was based on magnetic Fe3O4/graphene oxide (MGO) and DNA probes which was modified by 4-N-aminoethyl-N- hydroxyethyl-1,8-naphthalimide (AHA). First, the ssDNA labelled with AHA was employed as a capture probe and adsorbed on the surface of MGO. When the target ssDNA appeared, capture probe hybridized with it in part. Then target ssDNA was fished and enriched via external magnetization. Afterwards, a solution of release probe was added to the magnetic particles to complete the hybridization which resulted in separating the AHA from MGO. The results show that the linear relationship is found between logarithm value of E.coli and the ratio of fluorescence intensities (F/F0) from 150 to 1.5×106 /mL. The detection limit is 100 cfu/mL. The highly sensitive, rapid and simple means is demonstrated to be a noble tool for the detection of pathogenic bacteria.

摘要： 目的：了解北京市房山区妊娠期女性HPV感染情况及型别分布情况特点。方法利用基因芯片技术对产科门诊598例妊娠期女性及妇科门诊1077例非妊娠期女性宫颈脱落细胞学标本进行基因分型。结果在598例妊娠期女性中 HPV阳性者182例（30．43％），其中高危型别140例（76．92％）；主要型别为HPV52、16型，分别占14．84％、9．34％；单一感染143例（78．57％）。在1077例非妊娠期女性中 HPV阳性者587例（54．50％），高危型别439例（74．79％）；主要型别为 HPV16、52型，分别占12．61％、10．05％；单一感染462例（78．71％）。结论高危型别、单一感染为常见类型，HPV52、16为主要感染亚型。

摘要： 以分离自陕西成熟猕猴桃的6株嗜酸耐热菌为研究对象,对这6株分离菌以及4株相应的标准菌株进行了猕猴桃汁污染能力评估,并对分离菌与标准菌株的常规生理生化指标进行了测定和对比分析.通过气质联用对不同菌株特征污染代谢产物形成能力检测、绘制热死亡曲线进行的抗热性差异检测,以及通过API鉴定系统进行碳源代谢谱分析和通过基因组DNA杂交实验复性速率测定,对嗜酸耐热菌群菌株的生物多样性进行评测.结果表明,分离菌株产污染物愈创木酚量可达10.56 ～ 34.74μg/L,在猕猴桃汁中D90°C值达到27.1 ～ 34.2 min,z值达到12.14 ～ 13.66°C;API实验结果表明,分离菌株与标准菌有3～19项糖代谢结果差异,与文献报道相应菌种不同菌株中有7 ～22项糖代谢差异;6株分离菌与标准菌DNA杂交率在74.75％ ～ 104.79％之间.实验结果表明:分离自陕西地产猕猴桃果汁的6株本土脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)具有潜在污染猕猴桃果汁的能力,并具有一定的生物多样性.

摘要： 目的调查和分析杭州市萧山区浙江萧山医院体检中心女性中人乳头瘤病毒(H PV)感染以及基因亚型分布状况，为预防HPV感染和宫颈癌防治提供依据。方法利用DNA杂交技术检测本院体检中心女性标本，并进行基因分型。结果在2240例样本中HPV感染者311例，感染率为13.88%，其中高危亚型检出232例，占感染者的74.59%，低危亚型54例，占17.36%；同时感染高危亚型和低危亚型的25例，占8.04%；单一感染254例，占感染者的81.67%，两重感染42例，占13.50%，逸三重的多重感染15例，占4.82%。23个亚型中52型最多，其次为43和16型，各年龄段感染率无显著性差异(>0.05)。结论萧山地区健康体检女性HPV总感染率为13.88%，单一感染为本地区常见类型，以HPV52、43和16为主要感染亚型。%Objective To study the infection status and genotypes of 23 genotypes of human papil omavirus ( HPV) in Hangzhou City,Xiaoshan district,and to provide theoretical basis for preventing and treating uterine cervical cancer. Methods 2240 samples were detected for HPV genotypes by using DNA hybridization technique. Results 311 cases were HPV, with the positive rate of 13.88%,232 cases belonged to high-risk type only, with the ratio of 74.59%in HPV positive cases, 54(17.36%) cases for low-risk type, 25(8.04%) cases were mixed with high-risk type and low-risk type. Subtype HPV52 occupied the first of al high-risk types, fol owed by subtype HPV43 and HPV16. 254 cases were the single HPV genotype, with the ratio of 81.67%in HPV positive cases, 42 (13.50%) cases were double HPV genotypes, and 15 (4.82%) cases were more than three. By the comparison in accordence with the disparity in age section,masculine gender rate in the groups with various age has no significance dif erence after the chi-square test. Conclusion Healthy check-up women in Xiaoshan area HPV the total infection rate was13.88%. Single genotype is the most common HPV infection type,and HPV52、HPV43 and HPV16 are the major subtypes.

摘要： 据报道，近日，国家纳米科学中心丁宝全课题组在市基金一市科研院联合基金（“核酸纳米结构作为高效抗肿瘤光热转换材料运输载体的研究”）及其他科技计划资助下，利用DNA折纸纳米结构作为模板，通过DNA杂交作用搭载具有DNA短链修饰的金纳米棒，在活体水平使用该组合结构进行肿瘤细胞光热杀伤实验，发现其较普通金棒具有明显增强的细胞水平光热治疗效果（约提高3倍），

摘要： 目的 研究23种HPV基因亚型在天津地区女性中的感染状况以及亚型分布特征,为预防HPV感染和宫颈癌防治提供依据.方法 利用DNA杂交技术检测妇科门诊样本,并进行基因分型,比较不同亚型流行病学的特点.结果 3350例样本中HPV感染者l 048例,感染率为31.28％,其中高危亚型检出652例,占感染者的62.21％,低危亚型229例,占21.85％,同时感染高危亚型和低危亚型的167例,占15.93％.各年龄组均以单重感染为主,其次为二重感染.在5个年龄组中,≤25岁年龄段感染比例最高.23个亚型中以16型最多,其次为58型和56型.结论 天津地区女性HPV感染以单重感染为主,高危亚型的感染具有一定优势；高危亚型中,HPV16、58和56为主要感染亚型.%Objective To study the prevalence and molecular epidemiological characteristics of 23 genotypes of human apillomavirus (HPV) inTianjin,and to provide theoretical basis for preventing and treating uterine cervical cancer.Methods All samples were detected for HPV genotypes by using DNA hybridization technique,and the molecular epidemiological characteristics of 23 HPV types were compared.Results Among the 3 350 samples,1 048 cases were HPV,with the positive rate of 31.28％; 652 cases belonged to high-risk type only,accounting for 62.21％ of HPV positive cases; 229 (21.85％) cases belonged to low-risk type,while 167 (15.93％) cases were mixed with high-risk type and low-risk type.Subtype HPV16 occupied the first of all high-risk types,followed by subtype HPV58 and HPV56.The most common HPV infection in 5 age groups was single genotype,followed by double HPV genotypes.Compared with other age groups,the infection rate of the group with age ≤25 years old was the highest.HPV16 genotype was the most common HPV infection type,and HPV58 and HPV56 are the major subtypes.Conclusion The most common HPV infection is single genotype in Tianjin.The predominate high risk subtype are HPV16,HPV58 and HPV56.

摘要： 通过多相分类技术对分离自藏南地区土壤的两株根瘤菌进行了分类地位的确定.两株菌CNU8561007与CNU85000012均为革兰氏阴性、好氧的杆状细菌.通过表型特征分析发现二者在多项生理指标上表现一致,由于两菌株来源于不同的地理位置,二者在表型特征上也存在少许差异.经过比较16S rDNA序列发现,两供试菌株的序列相似性为100％,并且与Rhizobum yanglingense,R.loessernse,R.mongolense,R.gallicum表现出了极高的相似性,4种看家基因atpD,recA,glnⅡ和danK的系统发育分析与16S rDNA序列分析的结果相吻合,一致显示与两供试菌株遗传距离最近的模式种为Rhizobum yanglingense,通过DNA同源性分析和DNA G+C mol％测定,最终将这两菌株归入到Rhizobum yanglingense中,两菌株在BOX指纹图谱上的差异表明了它们为同种内的不同菌株.

摘要： 随着结构基因组与功能基因组研究不断深入,基因的分离及分析发挥着越来越重要的作用。DNA传感器与传统的检测技术相比具有快速、灵敏、操作简单的特点,并具有分子识别功能。但是传统的DNA传感器仍具有对假阳性杂交判断不灵敏的缺点。本文利用三明治结构在金电极表面组装端基标记二茂铁基团的DNA,利用线性扫描伏安法检测DNA在电极表面的电化学行为,判断杂交及其是否为假阳性杂交。该方法操作简单,且不需要完全一致的组装和杂交效率就可以得到靶标分子的匹配信息。

摘要： 随着结构基因组与功能基因组研究不断深入,基因的分离及分析发挥着越来越重要的作用。DNA传感器与传统的检测技术相比具有快速、灵敏、操作简单的特点,并具有分子识别功能。但是传统的DNA传感器仍具有对假阳性杂交判断不灵敏的缺点。本文利用三明治结构在金电极表面组装端基标记二茂铁基团的DNA,利用线性扫描伏安法检测DNA在电极表面的电化学行为,判断杂交及其是否为假阳性杂交。该方法操作简单,且不需要完全一致的组装和杂交效率就可以得到靶标分子的匹配信息。

摘要： 随着结构基因组与功能基因组研究不断深入,基因的分离及分析发挥着越来越重要的作用。DNA传感器与传统的检测技术相比具有快速、灵敏、操作简单的特点,并具有分子识别功能。但是传统的DNA传感器仍具有对假阳性杂交判断不灵敏的缺点。本文利用三明治结构在金电极表面组装端基标记二茂铁基团的DNA,利用线性扫描伏安法检测DNA在电极表面的电化学行为,判断杂交及其是否为假阳性杂交。该方法操作简单,且不需要完全一致的组装和杂交效率就可以得到靶标分子的匹配信息。

摘要： 随着结构基因组与功能基因组研究不断深入,基因的分离及分析发挥着越来越重要的作用。DNA传感器与传统的检测技术相比具有快速、灵敏、操作简单的特点,并具有分子识别功能。但是传统的DNA传感器仍具有对假阳性杂交判断不灵敏的缺点。本文利用三明治结构在金电极表面组装端基标记二茂铁基团的DNA,利用线性扫描伏安法检测DNA在电极表面的电化学行为,判断杂交及其是否为假阳性杂交。该方法操作简单,且不需要完全一致的组装和杂交效率就可以得到靶标分子的匹配信息。

摘要： 随着结构基因组与功能基因组研究不断深入,基因的分离及分析发挥着越来越重要的作用。DNA传感器与传统的检测技术相比具有快速、灵敏、操作简单的特点,并具有分子识别功能。但是传统的DNA传感器仍具有对假阳性杂交判断不灵敏的缺点。本文利用三明治结构在金电极表面组装端基标记二茂铁基团的DNA,利用线性扫描伏安法检测DNA在电极表面的电化学行为,判断杂交及其是否为假阳性杂交。该方法操作简单,且不需要完全一致的组装和杂交效率就可以得到靶标分子的匹配信息。

摘要： 以5端巯基修饰的DNA作为捕获探针,3端羧基四甲基罗丹名(TAMRA)修饰的DNA作为检测探针,纳米金作为捕获DNA的基体和荧光淬灭剂,本文提出了一种新型的荧光淬灭纳米传感器.

摘要： 以5端巯基修饰的DNA作为捕获探针,3端羧基四甲基罗丹名(TAMRA)修饰的DNA作为检测探针,纳米金作为捕获DNA的基体和荧光淬灭剂,本文提出了一种新型的荧光淬灭纳米传感器.

摘要： 以5端巯基修饰的DNA作为捕获探针,3端羧基四甲基罗丹名(TAMRA)修饰的DNA作为检测探针,纳米金作为捕获DNA的基体和荧光淬灭剂,本文提出了一种新型的荧光淬灭纳米传感器.

摘要： 以5端巯基修饰的DNA作为捕获探针,3端羧基四甲基罗丹名(TAMRA)修饰的DNA作为检测探针,纳米金作为捕获DNA的基体和荧光淬灭剂,本文提出了一种新型的荧光淬灭纳米传感器.

摘要： 建立了一种基于羧基聚苯乙烯小珠的DNA检测方法,根据荧光的变化检测目标DNA序列.本方法无需标记,操作相对简单.由于为以聚苯乙烯小珠为载体使其可以进一步运用于流式细胞仪分析中,这对检测灵敏度的提高具有较好的效果.

摘要： 本发明公开了一种用于靶向杂交捕获的修饰性DNA杂交探针的制备方法主要方法为：制备DNA模板，PCR扩增，纯化PCR产物；对纯化后的PCR产物进行USER酶切割以及T4 DNA聚合酶末端平滑化，Lambda核酸外切酶水解产物的双链DNA中一条带有5′端磷酸化的单链，从而获得带有生物素标记的单链DNA；磁珠富集法纯化带有生物素标记的单链DNA，得修饰性DNA杂交探针。本发明极大了降低了生产成本、使用范围广，包括任意物种基因组的外显子区域、内含子区域、线粒体区域以及内含子区域等。所获得的DNA杂交探针可以应用于二代测序靶向文库的构建以及测序。

摘要： 本发明涉及DNA三向节活化的杂交链式反应用于尿嘧啶DNA糖基化酶的高灵敏检测。本发明以DNA糖基化酶UDG为模型，开发了发夹重构的识别机制，将DNA修饰酶对底物的作用转化为杂交链式反应的触发过程，从而引起DNA的自组装过程，并实现了通用性DNA纳米器件的构建。该器件能够用于DNA修饰酶(尤其是UDG)的高灵敏检测和抑制剂筛选，具有潜在的应用价值。

摘要： 本发明涉及基于DNA三向节活化的杂交链式反应用于DNA甲基化转移酶的高灵敏检测。本发明以DNA甲基化转移酶M.SssI为模型，开发了酶保护切割识别机制，将酶对底物的作用转化为杂交链式反应的触发过程，从而引起DNA的自组装过程，并实现了通用性DNA纳米器件的构建。该器件能够用于DNA修饰酶(尤其是DNA甲基化转移酶)的高灵敏检测和抑制剂筛选，具有潜在的应用价值。

摘要： 核酸外切酶保护DNA探针杂交DNA微阵列芯片检测DNA结合蛋白，提出了一种检测DNA结合蛋白的新方法，其特征在于运用该方法检测DNA结合蛋白包括如下步骤：(a)制备蛋白质结合DNA探针、PCR引物和Tag－DNA微阵列芯片；(b)蛋白质结合DNA探针与DNA结合蛋白结合；(c)核酸外切酶酶切；(d)PCR扩增及标记；PCR产物与Tag－DNA微阵列芯片杂交检测。本发明提出的“核酸外切酶保护DNA探针杂交DNA微阵列芯片检测DNA结合蛋白”检测DNA结合蛋白的特点是，不需对蛋白质进行任何化学修饰及标记，可同步对多种DNA结合蛋白进行高通量检测，检测灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种用于DNA测序文库杂交捕获的杂交缓冲液，包括以下体积份数的组分：2×SSC 25份、1×Denhardt’s 1份、质量百分比浓度为0.5％的SDS 9份、质量百分比浓度为10％的硫酸葡萄糖14份。本发明的试剂配方简单，易于获得，成本较低且稳定易于保存；杂交流程方法简单，易于操作，不需要特殊的仪器；杂交效果好，背景值低，从而提高了样本捕获的效率；方法简单易行，不需要额外的试剂和操作，既减少了杂交时间过长所带来的成本损失也缩减了工艺流程的时间。

摘要： 本发明公开了一种用于靶向杂交捕获的修饰性DNA杂交探针的制备方法主要方法为：制备DNA模板，PCR扩增，纯化PCR产物；对纯化后的PCR产物进行USER酶切割以及T4？DNA聚合酶末端平滑化，Lambda核酸外切酶水解产物的双链DNA中一条带有5′端磷酸化的单链，从而获得带有生物素标记的单链DNA；磁珠富集法纯化带有生物素标记的单链DNA，得修饰性DNA杂交探针。本发明极大了降低了生产成本、使用范围广，包括任意物种基因组的外显子区域、内含子区域、线粒体区域以及内含子区域等。所获得的DNA杂交探针可以应用于二代测序靶向文库的构建以及测序。

摘要： 本发明公开了基因组DNA测序文库液相杂交诱捕富集溶液及杂交方法，所述的杂交富集溶液包含磷酸钠缓冲液，柠檬酸钠缓冲液(SSC)，SDS，EDTA及Denhardt溶液。本发明的杂交溶液及相应杂交方法成本较低，简便易行，有效缩短了杂交时间，并能够精准的提取所需要的DNA片段，减小背景值对信号值所产生的影响，优化杂交靶向富集效果。

摘要： 本发明涉及一种固相DNA芯片杂交液及杂交方法。它是由NaCl，Na-MES，EDTA，SDS原料组成；其NaCl 717mm，Na-MES 400mm，EDTA 100μm，SDS 0.2％(w/v)本杂交液主要成分包括：NaCl，Na-MES，EDTA，SDS。杂交时只需将标记的PCR产物烘干，用已预热好的杂交液与去离子水1∶1混合溶解，然后将其加入孵育室孵育即可。本发明的方法简便易行，可以提高杂交温度，有效地缩短杂交时间。通过使用本杂交液可以很好的控制杂交时产生的背景值，提高杂交信号，减小背景值对信号值所产生的干扰，优化杂交效果。

摘要： 本发明提供了一种用于核酸原位杂交信号放大的单链DNA制备方法，属于分子生物学技术领域。所述制备方法包括：以基因识别引物、第一磷酸化环化引物和DNA连接酶为原料，进行连接反应；连接反应完成后加入Bst DNA聚合酶和dNTP，进行滚环扩增反应，反应温度为45‑55°C，反应时间为1‑3h，获得用于核酸原位杂交信号放大的单链DNA；其中，所述第一磷酸化环化引物包含片段C，所述C的局部片段与第一荧光探针的核酸片段序列相同；或者，所述C的局部片段与二级放大单链DNA的局部片段核苷酸序列相同。该方法具有经济实用、步骤简单和灵敏度高的优点。本发明还提供一种用于核酸原位杂交信号二级放大的单链DNA制备方法。

摘要： 本发明涉及DNA三向节活化的杂交链式反应用于尿嘧啶DNA糖基化酶的高灵敏检测。本发明以DNA糖基化酶UDG为模型，开发了发夹重构的识别机制，将DNA修饰酶对底物的作用转化为杂交链式反应的触发过程，从而引起DNA的自组装过程，并实现了通用性DNA纳米器件的构建。该器件能够用于DNA修饰酶(尤其是UDG)的高灵敏检测和抑制剂筛选，具有潜在的应用价值。