辣根过氧化酶

摘要： 目的:制备以辣根过氧化物酶为载体蛋白的布洛芬人工抗原,并快速测定其偶联比、酶催化活性,进而应用于尿液中布洛芬的检测.方法:利用活化酯法将布洛芬与载体蛋白辣根过氧化物酶偶联,制备布洛芬的人工抗原,采用生物质谱法完成人工抗原偶联比的测定,并对酶催化活性进行了验证.结果:布洛芬人工抗原偶联比为5,辣根过氧化物酶的催化活性未受到任何影响,可以应用于尿液中布洛芬的检测.结论:以酶作为载体蛋白的人工抗原兼具免疫原和酶催化的双重性质,为免疫分析提供了一种新的简单可行方法.%OBJECTIVE To prepare ibuprofen artificial antigen and fast determine the coupling ratio of ibuprofen and biological macromolecules.METHODS The ibuprofen artificial antigen was prepared by using active ester method to couple ibuprofen to horseradish peroxidsae (HRP),and its coupling ratio was determined by using biological mass spectrometry method.Also,the original catalytic activity of the artificial antigen was verified.RESULTS The coupling ratio of ibuprofen artificial antigen was five and the catalytic activity of the artificial antigen was the same as that of HRP.CONCLUSION The operation is simple by using the biological mass spectrometric method to determine the coupling ratio of artificial antigen.The coupling ratio of ibuprofen and HRP can get only within a few seconds.Furthermore,the antigen has catalytic activity so it can provide a simple and feasible method for immunoassay.

摘要： 采用分步法将仿生硅化与脂质体技术相结合,模拟细胞微结构,以卵磷脂为原料,制备脂质体微囊,以胺类为诱导剂,在其表面硅化形成氧化硅壳层,实现对葡萄糖氧化酶(GOx)与辣根过氧化酶(HRP)双酶固定.研究了超声时间、诱导剂PDADMA用量、硅前驱体水解液(TMOS)用量、Triton X-100浓度等因素对固定化酶活性影响.结果表明,在200 μL PDADMA、0.7 mL TMOS、超声50 min制得的固定化酶活性最高,能迅速硅化形成直径200 nm左右的球形微囊.在此优化条件下制备的固定化酶经重复使用7次,依然达到初始催化酶活的61.46％,经一个月冷藏后酶活仍能达到最初的74.1％.可见,经过固定化,双酶系统的稳定性得到了显著提高.

摘要： 研制了一种基于碳纳米管(CNT)、纳米CeO2、壳聚糖(CHIT)有机-无机复合膜作为固定基质的酶生物传感器,该复合膜结合了无机碳纳米管、纳米CeO2和有机材料壳聚糖的优点,固定的辣根过氧化酶较好的保持了其生物活性.在优化测试条件下,连续加入相同量的H2O2,该传感器对H2O2的浓度变化产生迅速灵敏的响应,当过氧化氢溶液浓度在3.2×10-6～2.0×10-3 mol/L之间变化时,电极对其浓度成线性关系,相关系数为0.978.该生物传感器具有响应速度快、灵敏度高、重现性好等特点,可用于实际样品的检测.

摘要： 根据介孔MOF孔径与生物大分子尺寸相当以及二者存在有机相容性匹配的特点,采用介孔分布在15～50 nm的多级孔MOF材料IPD-mesoMOF-3为载体成功实现了对辣根过氧化物酶的固定化,并评价其酶活性.紫外可见光谱、氮气物理吸附及X射线粉末衍射实验结果表明:多级孔材料IPD-mesoMOF-3可以有效吸附辣根过氧化物酶,实验固载量为28.1 mg·g-1;在中性条件下,运用邻苯二胺作为色原底物,用固定化辣根过氧化酶催化其与过氧化氢反应,获得良好的酶催化效果,说明IPD-mesoMOF-3是辣根过氧化物酶较为理想的固载材料.

摘要： 首先采用溶液聚合法制备丙烯酸甲酯-丙烯酸共聚物(PMACAA),借助静电纺丝技术制备PMACAA纳米纤维膜,利用EDC/NHS活化羧基,共价结合法固定化辣根过氧化物酶(HRP).SEM和FT-IR分别对纤维形貌和化学特性进行表征,研究了固定化时间对载酶量的影响,HRP固定化前后的pH稳定性、热稳定性、重复使用性、储存稳定性,并探究了固定化HRP对4-硝基苯酚(PNP)的去除率.结果表明:固定化HRP的纤维直径增加,固定化HRP最大载酶量达到88.27mg/g,固定化HRP稳定性和重复使用性都得到很大提高,重复4次使用后酶活性仍保持在初始活性的76％,与游离酶对PNP去除率(82％)相比,固定化HRP表现出更高的去除率(52％).

摘要： 以原位沉淀法制备的氧化石墨烯/Fe3O4磁性纳米复合颗粒为固定化载体,1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐为交联剂,成功固载了辣根过氧化物酶.探讨了固定化条件对辣根过氧化酶活性的影响以及固定化酶的理化性质,实验结果表明,固定化最佳pH为6、温度为30°C、时间为11h、交联剂浓度为1 mg/L.与游离酶相比,固定化酶具有良好的pH稳定性和热稳定性.最后将固定化酶用于降解水中的苯酚和2,4-二氯酚,并考察了固定化酶的重复利用性.

摘要： 采用原位反相共沉淀法制备了氧化石墨烯/Fe3O4（GO/Fe3O4）复合材料，以其为载体，1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（ EDC）为交联剂运用共价固酶的方法固定了辣根过氧化物酶（ HRP）。采用振动样品磁强计和傅里叶红外光谱对催化剂进行了表征，研究了其对苯酚，2，4-二氧苯酚和两者混合溶液的去除效果，考察了固定化酶去除苯酚和2，4-对氯酚的混合溶液的理化性质和重复使用情况。结果表明：4次循环之后固定化酶还保留50％以上的活性。%Graphene oxide-Fe3 O4 ( GO/Fe3 O4 ) composite was synthesized by an ultrasonic-assisted reverse co-precipitation method, and horseradish peroxidase ( HRP ) was covalently immobilized using 1-ethyl-3-( 3-dimethyaminopropyl ) carbodiimide ( EDC) as a cross-linking agent .The catalysts were characterized by vibrating sample magnetometer and FTIR spectrometer.The immobilized enzyme was used to remove phenol 2,4-dichlorophenol and the mixture of the two in water solution.Finally, the physiochemical properties and reusability of the immobilized enzyme were studied .The results indicated that the immobilized enzyme still retained about 50%of its activity in the fourth cycle .

摘要： 采用混合组装技术，利用植酸胶束(IP6 micelles)的磷酸酯键络合辣根过氧化物酶(HRP)和金纳米粒子(GNPs)，形成了具有生物亲和性的纳米复合材料，保持了辣根过氧化物酶的生物活性，并利用金纳米粒子的高电子密度、介电特性和催化性能，实现了HRP与玻碳电极(GCE)表面的直接电子转移。 Nafion膜的滴加能提高电极的选择性和稳定性。实验过程中借助紫外-可见吸收光谱和透射电子显微镜进行表征，实验结果证明：GNPs的高导电和高催化性能，结合植酸胶束的优良生物相容性和对酶的高负载量的特点，使得吸附在其上的HRP保持活性，制备的生物传感器能对H2O2进行电催化还原。 Nafion/HRP-IP6 micelles-GNPs/GCE对H2O2的线性浓度范围为5×10-7~1.15×10-5 mol/L (线性相关系数r=0.993, n=9)，最低检测限为0.1μmol/L (信噪比S/N=3），米氏常数为0.0024 mmol/L。%A hybrid and bio-compatible sensor constructed with IP6 micelles phosphate bonded horseradish peroxidase and gold nanoparticles. The nano-composite materials not only keep the biological activity of horseradish peroxidase, but also achieve the high electron density, dielectric properties and catalytic performance of gold nanoparticles to facilitate the direct electron transfer. Furthermore, Nafion membrane can improve the selectivity and stability of sensor. The characterizations of UV -visible absorption spectroscopy and transmission electron microscopy showed that the high conductivity and high catalytic properties of nanoparticles together with the excellent biocompatibility and high enzyme loading IP6 micelles made the adsorption of HRP and maintained its activity. Nafion/HRP-IP6 micelles-GNPs/GCE biosensor can electrocatalytically reduce H2O2. The current response with the concentration of H2O2 has a linear relationship within the concentration range of 5×10-7~1.15×10-5 mol/L (linear correlation coefficient r=0.993, n=9), the detection limit was 0.1μmol/L (signal to noise ratio S/N=3), Michaelis constant of 0.002 4 mmol/L.

摘要： 近年来电化学免疫传感器飞速发展,它具有免疫反应的高选择性和电化学分析的高灵敏性,广泛应用于医疗生物等领域.然而这种免疫反应没有电信号发生,大都通过酶标氧化还原蛋白而产生电流信号.但由于辣根过氧化酶(HRP)的氧化还原活性中心深埋在酶分子内部,其与电极表面间的距离超过了电子能以足够快的速率进行转移的距离,在通常情况下难以与电极之间进行直接电子转移,因此,为了酶在电极表面发生可逆或准可逆的直接电子转移反应,探索合适的电极材料和修饰方法是非常重要的. 本文分别研究了辣根过氧化酶、标记在抗体中的辣根过氧化酶在修饰了二氧化钛纳米管的玻碳电极表面的直接电化学行为,二氧化钛纳米管能够有效的促进HRP的直接电子传递,固定在TiO2/GC电极表面的HRP能保持其对H2O2还原的生物电催化活性,为抗原抗体的免疫反应信号的选择奠定了基础.

摘要： 近年来,氧化还原酶的直接电子转移反应引起了越来越多研究者的兴趣,这些研究不仅可以获得酶的热力学和动力学性质等方面的重要信息,而且对生物催化剂酶在生物传感器和生物燃料电池等方面的应用具有十分重要的指导意义.本文研究了纳米层状水滑石固定的辣根过氧化酶(HRP)在玻碳电极(GC)上的直接电化学行为,以及对底物H2O2的催化行为.

摘要： 本文利用溶胶-凝胶法制备壳聚糖/二氧化硅杂化材料对辣根过氧化酶进行固定,研制电流型过氧化氢生物传感器.

摘要： 酚类化合物是一类原型质毒物,会与细胞原浆中的蛋白质作用,使人和动物中毒。本文选取氧化石墨烯(GO)/四氧化三铁(Fe3O4)复合材料为载体,1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)为交联剂来固定HRP,将固酶的复合材料用来去除苯酚. 据文献报道GO与Fe304都具有类酶的催化活性，但本文采用过氧化氢的量相比于其他文献中使用量太小，所以GO与Fe304的活性没有体现出来，GO/Fe304复合物几乎没有活性。固HRP酶的GO/Fe304对苯酚的去除率只有9%，而加入PEG后，苯酚的去除率达到了95%。HRP与酚类物质反应时容易受到生成的中间产物苯氧自由基的攻击而失活，加入对苯氧白由基亲和力更强的PEG来保护HRP，从而提高苯酚的去除率。由于制备的HRP/GO/Fe304具有超顺磁性，回收方便，催化活性高，可用于酚类的处理。

摘要： 氧化还原蛋白在电极表面的直接电化学是研究生命活动（如光合作用和呼吸作用）中电子传递过程的重要工具，此外，氧化还原蛋白的直接电化学在生物传感器、生物催化及生物燃料等领域也发挥着巨大的潜能。链接化学是2001年度诺贝尔化学奖获得者斯克里普斯（Scripps)研究所的巴利·夏普莱斯（K.B.Sharpless）教授在2000年首先提出的通过杂原子连接快速、100%可靠而又具有选择性地合成新化合物的一套合成方法，该反应条件温和、产率高、生物兼容性好，为研究新的表面修饰方法提供了极大的便利；电化学还原芳香族重氮化合物具有良好的稳定性，简便易操作且易于控制所成膜的覆盖率和密度，被广泛泛用于功能化固体界面（如碳，硅和各种金属）。

摘要： 本文合成了胺基硅烷磁性纳米粒子(A-SMNPs)，并将其用于辣根过氧化酶(HRP)的固定。实验成功制备了PDDA/HRP/A-SMNPs/GCE修饰电极，并运用电化学阻抗(EIS)，循环伏安和安培检测等方法研究了过氧化氢(H2O2)在该修饰电极上的电化学行为。在优化的实验条件下，该传感器对H2O2具有响应快、稳定性好和选择性良好的特点。

摘要： 本文以介孔碳CMK-3为载体，辣根过氧化物酶为研究对象，利用顺序注射-紫外可见分光系统，研究了固定化酶的在线制备和实时活性评价。结果表明：在最佳条件下在线制备的固定化辣根过氧化物酶，对0.1mmol/L-10mmol/LH2O2的催化表现出良好的线性关系，且与底物邻苯二胺的亲和性较强，米式常数Km=2.28mmol/L。

摘要： 本文以介孔碳CMK-3为载体，辣根过氧化物酶为研究对象，利用顺序注射-紫外可见分光系统，研究了固定化酶的在线制备和实时活性评价。结果表明：在最佳条件下在线制备的固定化辣根过氧化物酶，对0.1mmol/L-10mmol/LH2O2的催化表现出良好的线性关系，且与底物邻苯二胺的亲和性较强，米式常数Km=2.28mmol/L。

摘要： 本文以介孔碳CMK-3为载体，辣根过氧化物酶为研究对象，利用顺序注射-紫外可见分光系统，研究了固定化酶的在线制备和实时活性评价。结果表明：在最佳条件下在线制备的固定化辣根过氧化物酶，对0.1mmol/L-10mmol/LH2O2的催化表现出良好的线性关系，且与底物邻苯二胺的亲和性较强，米式常数Km=2.28mmol/L。

摘要： 本文以介孔碳CMK-3为载体，辣根过氧化物酶为研究对象，利用顺序注射-紫外可见分光系统，研究了固定化酶的在线制备和实时活性评价。结果表明：在最佳条件下在线制备的固定化辣根过氧化物酶，对0.1mmol/L-10mmol/LH2O2的催化表现出良好的线性关系，且与底物邻苯二胺的亲和性较强，米式常数Km=2.28mmol/L。

摘要： 本发明公开了一种测定辣根过氧化酶的酶催化氧化钠米银-石墨炉原子吸收光谱法，测定步骤为：1、先制备HRP的标准体系，用石墨炉原子吸收分光光度计测定其吸光度为Ab；2、制备不加HRP的空白对照体系，测定其吸光度为A0；3、计算ΔA＝Ab-A0；4、以ΔA与HRP的浓度关系作工作曲线；5、制备检测体系，加入的为含有HRP但不知浓度的被测物，并测定其吸光度为ΔA；6、根据工作曲线，求出被测物的HRP的浓度。本发明的优点是：具有较好的选择性，灵敏度高，反应条件容易达到，填补了原子吸收光谱法不能测定HRP这一空白。

摘要： 本发明公开了一种利用水溶性InP/ZnS QDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法，包括：步骤一、配制不同浓度的含水溶性InP/ZnS QDs的辣根过氧化酶的标准溶液，检测标准溶液的荧光强度，得到标准溶液的荧光光谱图，建立辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与所有标准溶液的荧光强度的差值与辣根过氧化酶浓度间的线性关系；步骤二、配制含水溶性InP/ZnSQDs的辣根过氧化酶的样品溶液，检测样品溶液的荧光强度，通过线性关系确定样品溶液中辣根过氧化酶的浓度。本发明以水溶性InP/ZnS QDs为探针，利用辣根过氧化酶猝灭水溶性InP/ZnS QDs荧光的特性，对辣根过氧化酶浓度进行检测，检测过程简单方便，灵敏度高、检测限低，可实现实辣根过氧化酶浓度的在线原位快速灵敏检测。

摘要： 本发明提供了一种孔状石墨烯‑辣根过氧化酶修饰玻碳电极的制备方法。该方法首次采用银纳米粒子刻蚀石墨烯制得孔状石墨烯，并将其作为基质负载辣根过氧化酶来修饰玻碳电极。首先，用“一锅法”制得银纳米粒子‑石墨烯复合材料，然后用硝酸除去银纳米粒子，即得到孔状石墨烯。再将辣根过氧化酶固定在孔状石墨烯上制成修饰电极，用循环伏安法对H2O2进行检测。本发明提供的制备孔状石墨烯的方法简单、易操作，且孔状石墨烯具有良好的化学惰性和生物相容性。此方法制得的孔状石墨烯‑辣根过氧化酶修饰电极对H2O2的还原具有很好的电催化活性。

摘要： 本发明公开了一种测定辣根过氧化酶的酶催化氧化钠米银－石墨炉原子吸收光谱法，测定步骤为：1.先制备HRP的标准体系，用石墨炉原子吸收分光光度计测定其吸光度为Ab；2.制备不加HRP的空白对照体系，测定其吸光度为A0；3.计算ΔA＝Ab－A0；4.以ΔA与HRP的浓度关系作工作曲线；5.制备检测体系，加入的为含有HRP但不知浓度的被测物，并测定其吸光度为ΔA；6.根据工作曲线，求出被测物的HRP的浓度。本发明的优点是：具有较好的选择性，灵敏度高，反应条件容易达到，填补了原子吸收光谱法不能测定HRP这一空白。

摘要： 一种辣根过氧化酶复合凝胶光子晶体传感器和方法，通过将作为识别分子蛋白质的辣根过氧化酶HRP与作为不干扰识别的支架蛋白质牛血清白蛋白BSA进行复合，使得原本难以凝胶化的辣根过氧化酶HRP能够通过交联剂戊二醛GA交联而成复合蛋白质水凝胶以嵌合光子晶体阵列中的胶体颗粒，从而可以利用辣根过氧化酶HRP与过氧化氢的类过氧化氢酶反应导致的凝胶体积(胶体颗粒间距)变化和该胶体颗粒间距变化导致的光子晶体阵列衍射出的德拜环直径变化对被测物中的过氧化氢含量实现灵敏无标记可视化检测。

摘要： 本发明属于细胞染色以及试剂盒的技术领域，具体涉及一种HDN染色液及其用于辣根过氧化酶特异性显色的试剂盒。所述试剂盒包括HDN染色液，所述HDN染色液包括双氧水、缓冲液、硫酸镍铵、3,3’二氨基联苯胺以及氯化铵；所述试剂盒的免疫组织化学的方法如下：1）取被检活性组织切片，固定；2）用一抗检测欲发现的抗原或抗体；3）染色：将所得组织切片浸入HDN染色液中，待组织切片的阳性检测物呈现深紫蓝色；4）清洗组织切片；5）封片，观察组织切片。采用HDN染色液进行染色，得到的试剂盒的敏感度相比常法高10倍以上，可以显示常法染不出的物质，可以减少假阴性结果，避免漏诊。非阳性物质不染色，可以避免假阳性结果。

摘要： 本发明提供了一种基于辣根过氧化酶标记适体传感器的OTA化学发光检测方法，该技术方案基于核酸适配体的高亲和性，利用OTA与报告序列竞争结合OTA适体，从而得到了待测OTA浓度与磁性微球表面报告序列固定量的负相关关系。最后通过对磁性微球表面固定的报告序列进行HPR标记，以HRP作为检测探针进行化学发光检测。利用HRP催化鲁米诺体系产生化学发光的原理，建立磁性微球表面HRP固定量与化学发光强度的对应关系，在保证检测精度的基础上拓宽了适用的OTA浓度范围。

摘要： 本发明公开了一种基于电化学定量检测辣根过氧化酶的方法；该方法充分利用HRP生物酶具有特异性催化特定氧化底物和还原底物发生酶促反应的特点，结合电化学方法检测反应产物在特征峰电位产生的电流峰值，可以建立HRP和电流峰值的线性关系，从而实现了HRP电化学方法检测，该检测方法具有快速、简单、准确、灵敏、特异性等优点。

摘要： 本发明公开了一种利用水溶性InP/ZnS QDs探针检测辣根过氧化酶浓度的方法，包括：步骤一、配制不同浓度的含水溶性InP/ZnS QDs的辣根过氧化酶的标准溶液，检测标准溶液的荧光强度，得到标准溶液的荧光光谱图，建立辣根过氧化酶浓度为零的标准溶液的荧光强度与所有标准溶液的荧光强度的差值与辣根过氧化酶浓度间的线性关系；步骤二、配制含水溶性InP/ZnSQDs的辣根过氧化酶的样品溶液，检测样品溶液的荧光强度，通过线性关系确定样品溶液中辣根过氧化酶的浓度。本发明以水溶性InP/ZnS QDs为探针，利用辣根过氧化酶猝灭水溶性InP/ZnS QDs荧光的特性，对辣根过氧化酶浓度进行检测，检测过程简单方便，灵敏度高、检测限低，可实现实辣根过氧化酶浓度的在线原位快速灵敏检测。

摘要： 本申请提供一种辣根过氧化酶蛋白标记试剂盒，包括纸质盒体，盒体内设置托盘，托盘上设置海绵拖，海绵拖上设置若干用于放置反应容器的第一凹槽；盒体的顶板对应各个第一凹槽分别设置预撕裂孔；盒体的前侧面设置矩形的预撕裂窗。本申请的有益效果是：将反应容器预先放置在第一凹槽内，实验时将预撕裂孔撕开形成通孔，实验试剂通过通孔滴入反应容器中，同时将预撕裂窗撕开，便于操作者观察反应容器内的试剂反应情况；将反应容器放置在海绵拖内可以对反应容器起到良好的减震缓冲作用，而且由于海绵拖的柔性特征使得同一第一凹槽可以兼容放置不同尺寸的反应容器；在海绵拖的下方设置托盘可以收集多余的试剂，防止盒体被污染。