软骨分化

摘要： 背景:基于前期研究,课题组通过蛋白组学和高通量测序筛选出RAB39B基因与骨髓间充质干细胞的增殖、软骨分化可能存在相关性.目的:探讨利用CRISPR/Cas9技术编辑敲除RAB39B基因对骨髓间充质干细胞软骨分化的影响.方法:利用CRISPR/Cas9慢病毒感染方法,构建敲低RAB39B基因稳转细胞系,将兔骨髓间充质干细胞分为正常对照组、空载对照组、RAB39B基因敲除组,通过Western blot鉴定CRISPR/Cas9系统对RAB39B的敲除效果,CCK-8法检测骨髓间充质干细胞增殖活性,流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞凋亡率,qRT-PCR检测骨髓间充质干细胞成软骨分化COLⅡ、COLⅩ基因mRNA表达,Western blot检测骨髓间充质干细胞成软骨分化相关通路RHOA、LIMK、Sox9蛋白表达.结果 与结论:①敲除RAB39B基因质粒的慢病毒感染兔骨髓间充质干细胞48-96 h后荧光显著表达;Western blot检测验证RAB39B基因敲除后骨髓间充质干细胞中RAB39B蛋白表达显著降低(P<0.01);②与正常对照组、空载对照组比较,RAB39B基因敲除组细胞增殖活性显著降低(P<0.01);细胞凋亡率增加(P<0.01);COLⅡ、COLⅩmRNA表达显著降低(P<0.01);RHOA、LIMK、Sox9蛋白表达显著降低(P<0.01);③结果 表明,CRISPR/Cas9系统编辑敲低RAB39B基因后能够抑制骨髓间充质干细胞增殖,同时促进细胞凋亡,降低其软骨细胞分化能力,说明RAB39B基因可能对骨髓间充质干细胞增殖、软骨分化能力产生影响,其具体作用机制有待进一步研究.

摘要： 细胞疗法治疗骨性关节炎疗效确切且安全性较高,其中间充质干细胞作为多能基质细胞,可以从骨组织、脂肪组织、滑膜组织等多种自体和同种异体组织中分离和分化,具有减轻炎症并促进血管生成的作用,目前已逐渐成为治疗骨性关节炎的一种替代细胞疗法。本文就间充质干细胞的来源、给药途径、最佳剂量、注射频率对骨性关节炎患者的疗效做一综述。

摘要： 目的:探究机械加载对骨关节炎小鼠髌下脂肪垫干细胞(IFP-SCs)的动员作用。方法:54只雌性C57BL/6小鼠通过随机数字表法分为对照组(Sham组,n=18)、骨关节炎组(OA组,n=18)、骨关节炎机械加载组(OAL组,n=18)。采用DMM手术建立OA模型,OAL组进行2周的机械加载治疗(条件为1 N,5 Hz,6 min/d)。HE和番红O染色评估小鼠OA模型的软骨损伤程度。免疫荧光、细胞迁移实验、Western印迹等方法检测干细胞的迁移和软骨形成能力。结果:机械加载降低了OA小鼠的国际骨关节炎研究学会(OARSI)评分(t=4.025,P<0.01)。与OA组相比,OAL组IFP-SCS的迁移能力增加(t=-5.142,P<0.001),同时软骨中基质细胞衍生因子(SDF-1)和IFP-SCs中C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)的表达增加(t=-4.403,P<0.01)。此外,机械加载使软骨分化中重要的转录因子SRY相关高迁移率族盒蛋白9(SOX9)上调,促进了IFP-SCs软骨分化(t=-11.170,P<0.01)。结论:机械加载通过促进IFP-SCs迁移和软骨分化,促进骨关节炎小鼠软骨修复。

摘要： 目的 探讨自组装纳米多肽水凝胶负载干细胞对新西兰兔软骨缺损的修复作用.方法 构建自组装纳米多肽水凝胶,利用扫描电镜技术检测丝素蛋白支架的结构,培养兔源性骨髓间充质干细胞(BMSC),流式细胞仪检测第2代BMSC表面蛋白CD34、CD45、CD90和CD105表达,活细胞/死细胞双重染色检测水凝胶与BMSC的生物相容性,CCK-8法检测BMSC增殖情况检测,实时定量PCR检测水凝胶对BMSC的蛋白聚糖(AGN)、Ⅱ型胶原a1(COL2a1)、成软骨分化调控基因Sox-9 mRNA的表达,分析水凝胶对BMSC成软骨分化的影响,并利用甲苯胺蓝染色评估水凝胶对兔软骨缺损的修复效果.结果 原子力显微镜观察功能化自组装多肽可以形成纳米纤维网状结构;第2代BMSC表面蛋白结果显示CD105阳性和CD45阴性的比例为91.22％,而CD90阳性和CD34阴性的比例为95.10％.生物相容性检测示兔BMSC在自组装水凝胶中生长状态稳定,以绿染的活细胞为主.CCK-8法检测示BMSC复合水凝胶组在培养3 d时增殖能力高于BMSC组(P<0.001).PCR检测示空白组、水凝胶、诱导液组和水凝胶与诱导液混合组的AGN、COL2a1、Sox-9 mRNA表达在第2～4周比较差异均有统计学意义(P均<0.001),有水凝胶的环境更有利于BMSC成软骨分化.甲苯胺蓝染色结果显示水凝胶负载干细胞对软骨缺损的修复作用优于BMSC组和缺损对照组(P均<0.05).结论 自组装纳米多肽水凝胶负载BMSC对软骨缺损的修复具有明显的促进作用.

摘要： 目的 探究芳香烃受体(AhR)对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)增殖和软骨分化能力的影响.方法 用AhR-homo-1432 inhibitor和AhR-homo-1432 inhibitor阴性对照转染hUC-MSCs,设为si-AhR组和si-NC组.在转染hUC-MSCs后的第1、3、5、7天,CCK-8法测定细胞活力;软骨分化诱导培养hUC-MSCs 7 d,实时荧光定量PCR和Western blot检测软骨分化标志物SOX-9和COL2A1 mRNA和蛋白的表达;阿利新蓝染色检测蛋白聚糖的表达.结果 与si-NC组比较,si-AhR组AhR的mRNA和蛋白水平表达降低,表明转染成功.CCK-8实验结果显示,与si-NC组比较,转染后的第5天和第7天si-AhR组hUC-MSCs活力增强.经软骨分化诱导培养后,与si-NC组比较,si-AhR组hUC-MSCs的SOX-9和COL2A1 mRNA和蛋白表达升高;阿利新蓝染色结果显示,si-AhR组hUC-MSCs表达的蛋白聚糖含量较si-NC组增多,染色更深,软骨分化能力增强.结论 抑制AhR表达可促进hUC-MSCs的增殖和软骨分化.

摘要： 骨性关节炎(OA)是危害老年人健康的常见肌肉骨骼系统疾病,主要特征为软骨退化和骨赘形成.OA发病机制复杂,机械负荷重及细胞外基质分解代谢和合成代谢之间不平衡为其主要机制.长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸由RNA聚合酶Ⅱ合成的非编码RNA调控分子,在表观遗传水平、转录水平和转录后水平多层次调控基因的表达,并日渐成为治疗各种疾病的靶点,许多lncRNA在调节软骨形成及软骨稳态中发挥着重要作用.因此,本文将lncRNA在OA发生发展中的最新研究进展及作用的分子机制进行综述,为治疗OA提供诊断和治疗的新思路.

摘要： 目的 观察长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨分化的影响,并探讨其机制是否与Notch通路有关.方法 分离、培养大鼠BMSCs,并经倒相差显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测表面标志物表达鉴定证实.将第3代BMSCs分为对照组、p-EGFP-C1组(转染p-EGFP-C1空载体质粒)、p-EGFP-C1-lncRNA GAS5组(转染p-EGFP-C1-lncRNA GAS5过表达质粒)、p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组[转染p-EGFP-C1-lncRNA GAS5过表达质粒+100 ng/mL Notch信号通路特异性阻断剂2,4-二氨基-5-苯噻唑(DAPT)],采用qRT-PCR法检测各组细胞lncRNA GAS5表达.各组细胞进行软骨分化诱导,HE染色观察细胞形态及数量,免疫细胞化学法检测Ⅱ型胶原纤维α1(COL2a1)、蛋白聚糖(Aggrecan)阳性表达率,Western blotting法检测Notch1和兔抗Split多毛增强子1(Hes-1)蛋白表达.结果 p-EGFP-C1-lncRNA GAS5组、p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组细胞lncRNA GAS5相对表达量均明显高于对照组、p-EGFP-C1组(P均<0.05).各组细胞均呈软骨细胞形态改变,即呈三角或多角形,细胞核为蓝紫色,细胞质和细胞外基质为红色,成团生长;p-EGFP-C1-lncRNA GAS5组与p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组软骨细胞数量明显多于对照组和p-EGFP-C1组,以p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组软骨细胞数量最多.与对照组及p-EGFP-C1组比较,p-EGFP-C1-lncRNA GAS5组及p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组细胞COL2a1、Aggrecan阳性表达率均升高,Notch1、Hes-1蛋白相对表达量均降低,且p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组变化更明显(P均<0.05).结论 lncRNA GAS5可通过抑制Notch通路激活来促进BMSCs的软骨分化.

摘要： 目的 探讨骨髓间充质干细胞中Jag1对骨骼发育的影响并分析其可能的作用机制.方法 杂交得到基因型为Prrx1-Cre;Jag1f/f的基因敲除小鼠,并选择Jag1f/f小鼠作为同窝对照,记录小鼠体重并分析其变化趋势.取10 d小鼠股骨进行Micro CT扫描,分析骨量、 骨小梁数量、 骨小梁厚度和分离度数据.苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,H/E)染色观察股骨生长板部位组织学变化.免疫荧光染色观察Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、 Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,ColⅡ)、 Ⅹ型胶原(CollagenⅩ,ColⅩ)的表达情况.体外分离并培养骨髓间充质干细胞,提取蛋白,Western blot检测细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,Erk1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白磷酸化水平.结果 经实时荧光定量PCR检测,构建的Prrx1-Cre;Jag1f/f基因型小鼠在骨髓间充质干细胞中以较高的效率敲除了Jag1.Prrx1-Cre;Jag1f/f小鼠发育迟缓,随着出生时间增长,与对照鼠相比体重明显下降,并于出生后20 d左右死亡.Micro-CT扫描结果显示Prrx1-Cre;Jag1f/f小鼠股骨骨量、 骨小梁数量、 骨小梁厚度显著下降.Prrx1-Cre;Jag1f/f小鼠生长板软骨层变薄(P<0.05),成骨细胞、 早期软骨细胞及肥大软骨细胞的数量均显著下降(P<0.05).Western Blot结果显示骨髓间充质干细胞中Erk1/2蛋白磷酸化水平显著下降,JNK蛋白磷酸化水平显著上升.结论 在Prrx1标记的骨髓间充质干细胞中敲除Jag1可抑制成骨、 软骨分化,这一作用可能通过抑制Erk1/2信号通路,激活JNK信号通路而实现.

摘要： 目的 探讨脂肪间充质干细胞复合骨软骨一体化支架修复兔骨软骨缺损的效果及其临床应用的可能性和优势.方法 成年新西兰大白兔构建骨软骨缺损动物模型.A组为空白对照组,仅做缺损手术;B组为骨软骨一体化支架组,植入不含细胞的支架;C组为负载脂肪间充质干细胞的骨软骨一体化支架组.术后6、12周取材,进行大体观察,根据国际软骨修复协会(ICRS)组织学评分标准评分,HE染色和番红O-固绿染色进行组织学评估.结果 术后6周,一体化支架组与ADSCs复合一体化支架组的ICRS评分显著高于空白对照组(P<0.05);术后12周,一体化支架组与ADSCs复合支架组的ICRS评分仍显著高于空白对照组(P<0.05),且ADSCs复合一体化支架组的评分显著高于一体化支架组(P<0.05).HE染色、甲苯胺蓝与番红O-固绿染色表明,一体化支架组和ADSCs复合一体化支架组的修复明显优于空白对照组,且ADSCs复合一体化支架组的修复较一体化支架组更优.结论 骨软骨一体化支架能够促进兔膝关节骨软骨缺损的修复,但修复效果有限.ADSCs能够明显提高支架的作用,ADSCs复合一体化支架是此次动物实验中最佳的骨软骨修复方式.

摘要： 背景:应用组织工程方法修复股骨头坏死后的软骨损伤应解决的2个关键因素是种子细胞和支架材料。目的:探讨Bio-gide胶原膜体外与犬骨髓间充质干细胞复合成软骨的可行性。方法:采用全骨髓血离心法结合贴壁筛选法体外分离培养比格犬骨髓间充质干细胞,观察细胞形态学变化,以细胞表面抗原进行鉴定。采用成软骨诱导培养基诱导第3代骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化作为实验组,设置普通培养基培养对照组,MTT比色法测试软骨细胞生长曲线,并行Ⅱ型胶原免疫组织化学和甲苯胺蓝染色等生物学鉴定。将第3代骨髓间充质干细胞与Bio-gide胶原膜体外复合培养行倒置相差显微镜、扫描电镜观察。结果与结论:采用全骨髓血离心法结合贴壁筛选法获得了高纯度高活性的骨髓间充质干细胞,生长状态良好,扩增能力强,并成功诱导分化为软骨细胞。大量骨髓间充质干细胞在Bio-gide胶原膜上贴附增殖并复层生长,细胞与Bio-gide胶原膜逐渐融为一体;在胶原膜的断面可见胞体深出突起相互连接包绕胶原膜,其间有明显细胞基质分泌。表明犬骨髓间充质干细胞可在Bio-gide胶原膜上生长并向软骨细胞分化。

摘要： 目的：探讨透骨消痛颗粒含药血清促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化的影响。rn 方法：取72只4周龄SD大鼠随机分为5组即：透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组和空白对照组，分别以含14g/kg.d、7 g/kg.d、3.5g/kg.d药量的水溶液2ml灌胃,对照组以等量生理盐水2ml灌胃，2次/日，连续给药3天后，腹主动脉采血制备血清。从8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第2代BHSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组，通过透骨消痛颗粒含药血清诱导BHSCs向软骨细胞分化。采用HTT法检测BHSCs增殖和免疫组化检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。rn 结果：透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进BMSCs增殖，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P＜0.01)，中剂量药物浓度时达到最大效应(P＜0.01)，中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异(P＞0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达，与空白对照组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，与软骨诱导剂组相比有显著性差异(P＜0.05)。rn 结论：透骨消痛颗粒含药血清能有效促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化。

摘要： 目的：探讨透骨消痛颗粒含药血清促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化的影响。rn 方法：取72只4周龄SD大鼠随机分为5组即：透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组和空白对照组，分别以含14g/kg.d、7 g/kg.d、3.5g/kg.d药量的水溶液2ml灌胃,对照组以等量生理盐水2ml灌胃，2次/日，连续给药3天后，腹主动脉采血制备血清。从8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第2代BHSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组，通过透骨消痛颗粒含药血清诱导BHSCs向软骨细胞分化。采用HTT法检测BHSCs增殖和免疫组化检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。rn 结果：透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进BMSCs增殖，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P＜0.01)，中剂量药物浓度时达到最大效应(P＜0.01)，中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异(P＞0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达，与空白对照组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，与软骨诱导剂组相比有显著性差异(P＜0.05)。rn 结论：透骨消痛颗粒含药血清能有效促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化。

摘要： 目的：探讨透骨消痛颗粒含药血清促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化的影响。rn 方法：取72只4周龄SD大鼠随机分为5组即：透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组和空白对照组，分别以含14g/kg.d、7 g/kg.d、3.5g/kg.d药量的水溶液2ml灌胃,对照组以等量生理盐水2ml灌胃，2次/日，连续给药3天后，腹主动脉采血制备血清。从8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第2代BHSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组，通过透骨消痛颗粒含药血清诱导BHSCs向软骨细胞分化。采用HTT法检测BHSCs增殖和免疫组化检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。rn 结果：透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进BMSCs增殖，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P＜0.01)，中剂量药物浓度时达到最大效应(P＜0.01)，中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异(P＞0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达，与空白对照组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，与软骨诱导剂组相比有显著性差异(P＜0.05)。rn 结论：透骨消痛颗粒含药血清能有效促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化。

摘要： 目的：探讨透骨消痛颗粒含药血清促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化的影响。rn 方法：取72只4周龄SD大鼠随机分为5组即：透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组和空白对照组，分别以含14g/kg.d、7 g/kg.d、3.5g/kg.d药量的水溶液2ml灌胃,对照组以等量生理盐水2ml灌胃，2次/日，连续给药3天后，腹主动脉采血制备血清。从8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第2代BHSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组，通过透骨消痛颗粒含药血清诱导BHSCs向软骨细胞分化。采用HTT法检测BHSCs增殖和免疫组化检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。rn 结果：透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进BMSCs增殖，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P＜0.01)，中剂量药物浓度时达到最大效应(P＜0.01)，中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异(P＞0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达，与空白对照组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，与软骨诱导剂组相比有显著性差异(P＜0.05)。rn 结论：透骨消痛颗粒含药血清能有效促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化。

摘要： 目的：探讨透骨消痛颗粒含药血清促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化的影响。rn 方法：取72只4周龄SD大鼠随机分为5组即：透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组和空白对照组，分别以含14g/kg.d、7 g/kg.d、3.5g/kg.d药量的水溶液2ml灌胃,对照组以等量生理盐水2ml灌胃，2次/日，连续给药3天后，腹主动脉采血制备血清。从8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第2代BHSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组，通过透骨消痛颗粒含药血清诱导BHSCs向软骨细胞分化。采用HTT法检测BHSCs增殖和免疫组化检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。rn 结果：透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进BMSCs增殖，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P＜0.01)，中剂量药物浓度时达到最大效应(P＜0.01)，中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异(P＞0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达，与空白对照组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，与软骨诱导剂组相比有显著性差异(P＜0.05)。rn 结论：透骨消痛颗粒含药血清能有效促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化。

摘要： 目的：探讨透骨消痛颗粒含药血清促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化的影响。rn 方法：取72只4周龄SD大鼠随机分为5组即：透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组和空白对照组，分别以含14g/kg.d、7 g/kg.d、3.5g/kg.d药量的水溶液2ml灌胃,对照组以等量生理盐水2ml灌胃，2次/日，连续给药3天后，腹主动脉采血制备血清。从8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第2代BHSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组，通过透骨消痛颗粒含药血清诱导BHSCs向软骨细胞分化。采用HTT法检测BHSCs增殖和免疫组化检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。rn 结果：透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进BMSCs增殖，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P＜0.01)，中剂量药物浓度时达到最大效应(P＜0.01)，中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异(P＞0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达，与空白对照组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，与软骨诱导剂组相比有显著性差异(P＜0.05)。rn 结论：透骨消痛颗粒含药血清能有效促进BHSCs增殖和诱导BHSCs向软骨细胞分化。

摘要： 目的:探讨透骨消痛颗粒含药血清促进BMSCs增殖和诱导BMSCs向软骨细胞分化的影响。rn 方法:取72只4周龄SD大鼠随机分为5组即：透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组和空白对照组，分别以含14g／kg.d、7g／kg.d、3.5g／kg.d药量的水溶液2ml灌胃，对照组以等量生理盐水2ml灌胃，2次/日，连续给药3天后，腹主动脉采血制备血清。从8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第2代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组，通过透骨消痛颗粒含药血清诱导BMSCs向软骨细胞分化。采用MTT法检测BMSCs增殖和免疫组化检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。rn 结果:透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进BMSCs增殖，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P<0.01)，中剂量药物浓度时达到最大效应(P<0.01)，中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异(P＞0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达，与空白对照组相比有非常显著性差异(P<0.01)，与软骨诱导剂组相比有显著性差异(P<0.05)。rn 结论:透骨消痛颗粒含药血清能有效促进BMSCs增殖和诱导BMSCs向软骨细胞分化。

摘要： 目的:探讨透骨消痛颗粒含药血清促进BMSCs增殖和诱导BMSCs向软骨细胞分化的影响。rn 方法:取72只4周龄SD大鼠随机分为5组即：透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组和空白对照组，分别以含14g／kg.d、7g／kg.d、3.5g／kg.d药量的水溶液2ml灌胃，对照组以等量生理盐水2ml灌胃，2次/日，连续给药3天后，腹主动脉采血制备血清。从8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第2代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组，通过透骨消痛颗粒含药血清诱导BMSCs向软骨细胞分化。采用MTT法检测BMSCs增殖和免疫组化检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。rn 结果:透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进BMSCs增殖，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P<0.01)，中剂量药物浓度时达到最大效应(P<0.01)，中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异(P＞0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达，与空白对照组相比有非常显著性差异(P<0.01)，与软骨诱导剂组相比有显著性差异(P<0.05)。rn 结论:透骨消痛颗粒含药血清能有效促进BMSCs增殖和诱导BMSCs向软骨细胞分化。

摘要： 目的:探讨透骨消痛颗粒含药血清促进BMSCs增殖和诱导BMSCs向软骨细胞分化的影响。rn 方法:取72只4周龄SD大鼠随机分为5组即：透骨消痛颗粒的水提物高剂量组、水提物中剂量组、水提物低剂量组、醇提物组和空白对照组，分别以含14g／kg.d、7g／kg.d、3.5g／kg.d药量的水溶液2ml灌胃，对照组以等量生理盐水2ml灌胃，2次/日，连续给药3天后，腹主动脉采血制备血清。从8只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs，体外传代培养，取第2代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组，通过透骨消痛颗粒含药血清诱导BMSCs向软骨细胞分化。采用MTT法检测BMSCs增殖和免疫组化检测Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达。rn 结果:透骨消痛颗粒含药血清各组均能促进BMSCs增殖，与空白对照组相比均有非常显著性差异(P<0.01)，中剂量药物浓度时达到最大效应(P<0.01)，中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异(P＞0.05)。透骨消痛颗粒含药血清能增强Ⅱ型胶原在细胞分化过程中的表达，与空白对照组相比有非常显著性差异(P<0.01)，与软骨诱导剂组相比有显著性差异(P<0.05)。rn 结论:透骨消痛颗粒含药血清能有效促进BMSCs增殖和诱导BMSCs向软骨细胞分化。

摘要： 本发明涉及用于诱导软骨细胞分化或使软骨组织再生的组合物，其包含来源于正分化成软骨细胞之干细胞的外排体作为活性成分；涉及用于诱导软骨细胞分化的培养基组合物、用于使软骨组织再生的注射制剂和用于治疗软骨病症的药物组合物，其所有都包含所述组合物；并且涉及用于治疗软骨病症的方法。根据本发明的一个具体实施方案，用于诱导软骨细胞分化或软骨再生的组合物包含来源于正分化成软骨细胞之干细胞的外排体作为活性因子。在干细胞分化期间分泌的外排体包含与软骨细胞分化有关的生长因子以及与干细胞增殖和再生有关的基因和蛋白质，并且因此根据所述组合物使受损的软骨组织再生的诱导是优异的。此外，使用外排体作为细胞源性载剂，所述组合物稳定且快速地将活性物质递送到细胞中，同时使常规细胞治疗剂的副作用最小化。因此，通过借助用于预防和治疗软骨病症的可注射组合物进行简单操作可以减轻患者的疼痛，并且在操作之后可以持续且有效地治疗软骨病症。

摘要： 本发明提供一种可以使在体外培养中等去分化而软骨特性减弱的去分化型软骨细胞有效且容易地再分化成原来的软骨细胞的去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化用培养基和去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化方法。所以，本发明提供用于使去分化而软骨特性减弱的去分化型软骨细胞向原来的软骨细胞再分化并含有胰岛素和从BMP-2及其类似物中选择的至少一种的去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化用培养基，和通过使用该去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化用培养基、培养去分化型软骨细胞，来使该去分化型软骨细胞向原来的软骨细胞再分化的去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化方法。上述去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化用培养基更优选含有T3的方式。

摘要： 本发明涉及用于诱导软骨细胞分化或使软骨组织再生的组合物，其包含来源于正分化成软骨细胞之干细胞的外排体作为活性成分；涉及用于诱导软骨细胞分化的培养基组合物、用于使软骨组织再生的注射制剂和用于治疗软骨病症的药物组合物，其所有都包含所述组合物；并且涉及用于治疗软骨病症的方法。根据本发明的一个具体实施方案，用于诱导软骨细胞分化或软骨再生的组合物包含来源于正分化成软骨细胞之干细胞的外排体作为活性因子。在干细胞分化期间分泌的外排体包含与软骨细胞分化有关的生长因子以及与干细胞增殖和再生有关的基因和蛋白质，并且因此根据所述组合物使受损的软骨组织再生的诱导是优异的。此外，使用外排体作为细胞源性载剂，所述组合物稳定且快速地将活性物质递送到细胞中，同时使常规细胞治疗剂的副作用最小化。因此，通过借助用于预防和治疗软骨病症的可注射组合物进行简单操作可以减轻患者的疼痛，并且在操作之后可以持续且有效地治疗软骨病症。

摘要： 本发明提供一种可以使在体外培养中等去分化而软骨特性减弱的去分化型软骨细胞有效且容易地再分化成原来的软骨细胞的去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化用培养基和去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化方法。所以，本发明提供用于使去分化而软骨特性减弱的去分化型软骨细胞向原来的软骨细胞再分化并含有胰岛素和从BMP－2及其类似物中选择的至少一种的去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化用培养基，和通过使用该去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化用培养基、培养去分化型软骨细胞，来使该去分化型软骨细胞向原来的软骨细胞再分化的去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化方法。上述去分化型软骨细胞向软骨细胞的再分化用培养基更优选含有T3的方式。

摘要： 本发明公开了脐带间充质干细胞成软骨分化、成软骨分化培养基。蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白为软骨特异性基质产物，对照诱导组hUC‑MSCs在基础诱导培养基的诱导下出现了明显的成软骨分化，L‑酪氨酸衍生物1、2诱导组比对照诱导组中蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白含量更高，说明L‑酪氨酸衍生物1、2诱导组中的L‑酪氨酸衍生物1、2可以进一步促进hUC‑MSCs成软骨分化，且具有剂量效应。由此可见，L‑酪氨酸衍生物1、2具有在体外促进脐带间充质干细胞成软骨分化的作用，可以用于制备促进脐带间充质干细胞成软骨分化的培养基。

摘要： 本发明公开了一种可用于软骨损伤修复的具有软骨分化潜能的组织工程脂肪干细胞片层的制备方法，本发明通过制备特定培养体系，采用细胞片层培养技术获取的ASCs片层是含有细胞外基质的完整片状结构，并具有软骨向分化潜能。由于移植到体内的只有由纯细胞构成的组织，避免了支架等载体的使用以及其所带来的不良反应。而ASCs片层保留了细胞外基质，含有离子通道、生长因子受体和连接蛋白等重要的细胞表面蛋白，细胞间可以更好的保持功能的协调一致，具有传统组织工程技术不可比拟的优点。完整的片层结构有利于细胞在移植部位的存留，大大提高了细胞的利用率和转移细胞的活性。

摘要： 本发明公开了一种活性成分诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化的用途和成软骨诱导分化培养基。本发明发现，烟酸肌醇酯具有体外诱导人骨髓间充质干细胞hBMSCs向软骨细胞分化的作用，还可以促进人骨髓间充质干细胞hBMSCs体外增殖，因而可以用于制备促进骨髓间充质干细胞增殖并诱导其成软骨分化的培养基。

摘要： 本发明公开了脐带间充质干细胞成软骨分化、成软骨分化培养基。蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白为软骨特异性基质产物，对照诱导组hUC‑MSCs在基础诱导培养基的诱导下出现了明显的成软骨分化，L‑酪氨酸衍生物1、2诱导组比对照诱导组中蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白含量更高，说明L‑酪氨酸衍生物1、2诱导组中的L‑酪氨酸衍生物1、2可以进一步促进hUC‑MSCs成软骨分化，且具有剂量效应。由此可见，L‑酪氨酸衍生物1、2具有在体外促进脐带间充质干细胞成软骨分化的作用，可以用于制备促进脐带间充质干细胞成软骨分化的培养基。

摘要： 本发明公开了一种可用于软骨损伤修复的具有软骨分化潜能的组织工程脂肪干细胞片层的制备方法，本发明通过制备特定培养体系，采用细胞片层培养技术获取的ASCs片层是含有细胞外基质的完整片状结构，并具有软骨向分化潜能。由于移植到体内的只有由纯细胞构成的组织，避免了支架等载体的使用以及其所带来的不良反应。而ASCs片层保留了细胞外基质，含有离子通道、生长因子受体和连接蛋白等重要的细胞表面蛋白，细胞间可以更好的保持功能的协调一致，具有传统组织工程技术不可比拟的优点。完整的片层结构有利于细胞在移植部位的存留，大大提高了细胞的利用率和转移细胞的活性。

摘要： 本发明涉及包含干细胞或其培养物和无软骨细胞破碎物的用于促进软骨分化的复合物、通过利用该复合物制备软骨的方法、通过该方法制备的软骨、包含用于预防或治疗关节病的复合物的药物组合物、利用该组合物预防或治疗关节病的方法、包含制备的软骨细胞的用于诱导软骨细胞分化的组合物、以及利用制备的软骨细胞制备软骨的方法。本发明中提供的包含干细胞或其培养物和无软骨细胞破碎物的用于促进软骨分化的复合物不仅在体内被分化成软骨细胞而无副作用，而且因分化的软骨细胞中产生的旁分泌效应促进体内存在的固有干细胞分化成软骨细胞，从而有效地再生损伤的软骨，并且广泛地用于治疗包括软骨损伤的关节病。