转基因番茄

摘要： 背景:转基因植物可食性疫苗是以植物作为载体,将外源性基因整合到植物基因组当中,进一步激活动物或人体免疫系统以获得特异性免疫能力。但外源性基因的持续低表达量一直无法达到满意的免疫效果。目的:用分子生物学技术检测转基因番茄植株中pacA-ctxB融合基因表达及目的蛋白的表达量,为进一步观察可食用防龋疫苗的防龋效果提供研究基础。方法:①提取转基因番茄叶片总DNA,PCR检测外源性融合基因pacA-ctxB,实验分组3组:阳性对照组为质粒p2355-EPC10;空白对照组为普通番茄1株(红抗219);转基因组为转基因番茄9株;②BCA法检测转基因番茄果肉中总蛋白的水平;Western blot证实转基因番茄果实中PAcA/CTB目的蛋白的表达,目的蛋白检测分组2组:转基因组为表达外源性嵌合基因的转基因番茄5株(PCR检测阳性);空白对照组为普通番茄1株;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测转基因番茄果实中PAcA/CTB目的蛋白浓度。结果与结论:①PCR扩增结果可见9株转基因番茄中有5株出现约1.7 kb特异性扩增条带,占总检测植株的55%;②转基因番茄总蛋白为3.15 g/L;Western blot可见PCR检测为阳性的转基因番茄蛋白提取样本在分子质量约为58 kD处均出现了高密度条带,非转基因番茄蛋白样本未见特异条带;ELISA测得目的蛋白表达量约4.12 mg/L,占番茄可溶性总蛋白的0.13%;③结果说明,外源性融合基因pacA-ctxB能够在番茄植株中表达及产生目的蛋白。

摘要： 背景:转基因植物可食性疫苗是以植物作为载体,将外源性基因整合到植物基因组当中,进一步激活动物或人体免疫系统以获得特异性免疫能力.但外源性基因的持续低表达量一直无法达到满意的免疫效果.目的:用分子生物学技术检测转基因番茄植株中pacA-ctxB融合基因表达及目的蛋白的表达量,为进一步观察可食用防龋疫苗的防龋效果提供研究基础.方法:①提取转基因番茄叶片总DNA,PCR检测外源性融合基因pacA-ctxB,实验分组3组:阳性对照组为质粒p2355-EPC10;空白对照组为普通番茄1株(红抗219);转基因组为转基因番茄9株;②BCA法检测转基因番茄果肉中总蛋白的水平;Western blot证实转基因番茄果实中PAcA/CTB目的蛋白的表达,目的蛋白检测分组2组:转基因组为表达外源性嵌合基因的转基因番茄5株(PCR检测阳性);空白对照组为普通番茄1株;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测转基因番茄果实中PAcA/CTB目的蛋白浓度.结果 与结论:①PCR扩增结果可见9株转基因番茄中有5株出现约1.7 kb特异性扩增条带,占总检测植株的55％;②转基因番茄总蛋白为3.15 g/L;Western blot可见PCR检测为阳性的转基因番茄蛋白提取样本在分子质量约为58 kD处均出现了高密度条带,非转基因番茄蛋白样本未见特异条带;ELISA测得目的蛋白表达量约4.12 mg/L,占番茄可溶性总蛋白的0.13％;③结果 说明,外源性融合基因pacA-ctxB能够在番茄植株中表达及产生目的蛋白.

摘要： 议题背景随着科学技术的发展和当今社会的高标准、高需求,越来越多的转基因产品流入了社会。转基因棉花的问世减少了虫害,提高了产量;转基因番茄延长了保存时间;转基因玉米迎合了大家的不同口味需求;转基因大豆抵抗病虫害、减少使用除草剂,增加了维生素、脂肪和蛋白质的含量……随着转基因产品的大量出现,人们的态度是褒贬不一。

摘要： 虾青素是自然界中抗氧化活性最强的生物活性物质,随着植物基因工程技术的发展,以植物尤其是经济作物作为生物反应器生产虾青素已成为国内外研究的热点.本研究利用超临界二氧化碳萃取技术从转基因工程番茄中提取虾青素,萃取温度50°C,萃取压力35MPa,萃取2.5h的情况下,虾青素的提取率可达95％,此方法用料安全,提取率高,非常适合转基因工程番茄虾青素的提取.此外,转基因工程番茄中含有高营养价值的番茄红素和β-胡萝卜素.在虾青素的最佳提取条件下,番茄红素提取率为82％,β-胡萝卜素提取率为89％.本研究为转基因工程番茄产业化提取虾青素奠定了技术基础.

摘要： 为了进一步研究SlWDR204的功能,克隆了番茄的SlWDR204基因,通过亚细胞定位为研究其功能提供线索,并通过农杆菌介导法,利用RNAi技术获得SlWDR204基因下调的转基因植株.干旱胁迫试验表明,转基因番茄对干旱胁迫更加敏感,说明SlWDR204基因正向调控植物对干旱的响应,这一发现为分子育种提供了新的靶标基因,并为阐明植物抗旱的分子机理奠定了基础.

摘要： The proteins encoded by the biggest type of disease-resistant genes(R) in plants contain coiled-coil(CC) and nucleotide-binding site(NBS) and leucine-rich repeat(LRR) domain structure.R genes are famous for its disease resistance.In this paper, DDI3 gene was screened out by means of yeast two-hybrid, which had interaction with functional DDB1 gene and contained the CC-NBS-LRR structure.It was predicted to have disease resistance of R gene and involved in plant disease resistance.The DDI3 overexpression vector was constructed and transferred into the wild type tomato plants through agrobacterium-mediated transformation, and the positive transgenic plants with high expression of DDI3 were obtained.By the pathogen inoculation experiment, the apparent plant disease and statistical number of bacterial colonies were observed.It is found that the resistance of transgenic plants is obviously higher than that of wild type tomato.DDI3 gene functioning as a resistance is a very good method to improve the disease resistance of tomato, which is a new attempt in the improvement of the disease resistance of tomato by using gene engineering technology.DDI3 also interacts with tomato DDB1 gene, providing a new direction to the research on the function of DDB1 in plant disease resistance.%植物中最大的一类抗病基因(R)编码的蛋白质含有卷曲螺旋结构(coiled-coil,CC) 、核苷酸结合位点(nucleotide-binding site,NBS)和富含亮氨基酸的重复序列(leucine-rich repeat,LRR)结构域.R基因以抗病著称.文章通过酵母双杂筛选方式获得了DDI3基因,该基因与番茄中重要功能基因DDB1具有相互作用,而又含有CC-NBS-LRR结构,预测具有R基因抗病性,参与植物抗病.研究中构建了DDI3过表达载体并通过根瘤农杆菌介导转化到野生型番茄中,筛选获得DDI3高表达的阳性转基因株系.通过病菌接种实验,观察植株发病情况和统计细菌菌落数,结果发现,转基因植株的抗病性明显高于野生型番茄.DDI3基因对提高番茄的抗病性有很高的价值,为采用基因工程方法改良番茄植株抗病性做出新的尝试,同时又与番茄DDB1基因具有相互作用,对研究DDB1基因在参与植物抗病途径中的功能研究提供新的方向.

摘要： 真核生物中,DNA甲基化作为表观遗传学修饰的重要手段之一,影响了植物的大量生长发育过程.文章通过生物信息学分析确定番茄中的胞嘧啶甲基转移酶同源基因(SlMET1)并对其进行进化关系的分析;利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术从番茄cDNA中扩增出胞嘧啶甲基转移酶同源基因(SlMET1)全长,构建SlMET1与绿色荧光蛋白融合表达载体,通过在烟草瞬时表达系统,对其进行亚细胞定位;实时定量PCR分析SlMET1基因在番茄不同组织中的表达模式;同时,构建SlMET1与HA标签蛋白融合表达载体,通过免疫共沉淀分析其与DDB1的相互关系.研究结果表明:SlMET1基因在番茄各个时期和组织中都有表达,其中,叶片和花中表达量较高,在果实的变色期和红果时期表达量较低;通过绿色荧光融合蛋白载体的表达,确定SlMET1基因只在番茄细胞核中表达;通过免疫共沉淀分析确定SlMET1和DDB1之间存在相互作用.该研究为研究DDB1以表观遗传学的方式调控植物生长发育过程奠定了理论基础.%DNA methylation is one of the vital epigenetic modifications in eukaryote, which affects the developmental process of the plant.This paper identified the sequence of the tomato SlMET1 through the bioinformatic analysis.The full-length cDNA sequence of SlMET1 gene was cloned by polymerase chain reaction(PCR).The GFP fusion expression vector of SlMET1 gene was constructed and transiently expressed on the Nicotiana benthamiana leaves to find out its subcellular localization.The level of expression of the SlMET1 among the different tissue of tomato was analyzed by realtime qRT-PCR.In addition, SlMET1 was cloned into pBTEX with HA tag, which was used to test the interaction between SlMET1 and DDB1 by the co-immunoprecipitation.The results indicated that expression of SlMET1 was higher in leaves and flowers and lower in fruit that was in mature green(MG) and ripe red(RR) stage.Meanwhile, SlMET1 proteins were located on the nucleus in the plant cell.And the co-immunoprecipitation showed that the SlMET1 interacted with the DDB1.The study can lay the theoretical foundation for the research on regulating plant growth and development with DDB1 by epigenetics modification.

摘要： Fruit-specific overexpression vector of maize BK2L3 was constructed to investigate the effect of gene engineering on fruit firmness and shelf life .The full-length cDNA sequence of maize Zm-BK2L3 gene was amplified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and pBI121-BK2L3 overexpression construction driven by a fruit-specific promoter TFM7 was made to generate Agrobacerium mediated tomato transformants .In view of the transgenic tomatoes and the wild type tomatoes ,the BK2L3 expression in the fruit was analyzed ,the pericarp cell wall structure of fruit at green ripe stage was observed ,and the firmness ,cellulose content and shelf life of fruit at red ripe stage were determined .The result of molecular analysis demonstrated a significant increase of BK2L3 expression in the transgenic tomatoes .The positive transgenic tomatoes displayed enhanced pericarp thickness .The firmness ,cellulose content and shelf life of the transgenic red ripe fruits were higher than those of the wild type species .These results demonstrated that fruit-specific overexpression of maize BK2L3 in tomato could improve fruit quality in terms of cell wall metabolism and shelf life .%文章通过构建玉米 BK2L3基因果实特异表达的过量表达载体，对转基因番茄果实进行研究，实现以基因工程手段延长番茄果实货架期的目的。利用逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction ，RT-PCR）技术从玉米cDNA中扩增出 ZmBK2L3基因全长，导入启动子为果实特异表达的T FM 7植物表达载体pBI121上，经农杆菌介导转入野生型番茄中，获得转基因阳性植株。分别以野生型番茄和转基因番茄为材料，分析 BK2L3在果实中的表达情况，观察绿熟期果实果皮细胞壁结构，测定红熟期果实的硬度、货架期和果皮纤维素质量比。结果表明：转基因番茄果实中 BK2L3的表达量明显高于野生型果实。转基因番茄果实的硬度、果皮纤维素质量比和果皮厚度均比野生型有所提高，果实货架期明显增长。因此， BK2L3基因的过量表达与细胞壁代谢和货架期有关，可改良果实的品质。

摘要： 分别构建了O型口蹄疫病毒China99株结构蛋白VP1基因及结构蛋白前体P1-2A、非结构蛋白3C及部分2B基因(P1-2X3C)的植物表达载体,分别命名为pBin438/VP1及pBin438/P1-2X3C,通过农杆菌介导法转化番茄,对获得的卡那霉素抗性植株进行分子生物学检测,85％的再生植株PCR检测阳性;RT-PCR结果证实VP1、P1-2X3C基因在转基因番茄中能够有效转录;将ELISA和Western blot检测阳性的转基因番茄叶片蛋白提取液经肌肉途径免疫豚鼠,于第3次免疫后28d用100ID50/0.2mL的同源强毒攻击,结果表明口蹄疫病毒VP1、P1-2X3C转基因番茄的表达产物具有良好的免疫原性,豚鼠3免后血清效价可达1∶64～1∶128,攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达4/5和5/5.

摘要： 为了探讨不同控水方式对转LetAPX基因番茄产量和营养品质的影响,以野生型(WT),转正义LetAPX(番茄叶绿体类囊体膜抗坏血酸过氧化物酶基因)番茄株系T1-3为试材.测定了不同土壤相对含水量(90±5％、70±5％、50±5％)条件下转基因及野生型番茄植株叶片的APX酶活性,过氧化氢(H202)含量,番茄果实产量,果实糖酸比,果实可溶性蛋白含量、果实维生素C含量及番茄红素含量等.结果表明,在不同土壤相对含水量条件下转基因番茄的APX酶活性和清除H202的能力都显著高于野生型.当土壤相对含水量为70％时,野生型和转基因番茄的产量和品质均较高,此时番茄植株水分利用效率最高.但在土壤相对含水量为50％的胁迫条件下,转基因番茄的产量和营养品质显著高于野生型,其在此时的生产量已达到野生型番茄在土壤相对含水量70％的产量.可见在水分胁迫条件下,过量表达LetAPX基因的转基因番茄具有更强的抗水分胁迫能力,比野生型番茄具有更高的产量和更佳的营养品质.

摘要： 随着番茄基因组研究的不断深入,以及基因工程和生物反应器技术的快速发展,利用番茄生产可食性疫苗已成为研究的热点。番茄以其口感好,可生食且营养丰富等优点,成为研制植物口服疫苗的理想载体。本文主要从植物番茄作为口服疫苗的研究进展等方面进行了综述做了展望。

摘要： ACC合成酶cDNA被反向插入栽体PMON316，通过三亲交配，将表达质粒转移到农杆菌中，采用叶备用法转化番茄子叶，经卡那霉素筛选及分子杂效检测，表明，转基因番匣成熟受抑制乙烯的峰值为政党番茄的25℅～30℅，PG活性有所下降，果实在室温下可贮藏1个多月，品质和其他性状与正常番匣相近。

摘要： 本文对番茄分子标记体系的发展及其应用进行了研究。文章围绕番茄分子标记研究的进展、番茄分子标记辅助育种的前景等进行了论述。

摘要： 本文对番茄分子标记体系的发展及其应用进行了研究。文章围绕番茄分子标记研究的进展、番茄分子标记辅助育种的前景等进行了论述。

摘要： 本文对番茄分子标记体系的发展及其应用进行了研究。文章围绕番茄分子标记研究的进展、番茄分子标记辅助育种的前景等进行了论述。

摘要： 本发明公开了一种创建富含番茄红素番茄新种质的方法。方法步骤如下：1)将含有酵母S-腺苷基蛋氨酸脱羧酶基因cDNA片断接入番茄果实成熟专一性表达启动子之后，构建植物特异性表达载体；2)将上述载体转化的农杆菌LBA4404感染番茄子叶；3)感染后的番茄叶片置于分化培养基上进行分化培养；4)田间种植、多代自交后，形成稳定的转基因自交系。本发明采用番茄果实专一性高效表达的启动子E8，利用这一果实成熟特异表达启动子不仅具有十分特异的果实专一性，而且表达量明显高于通用的组成型表达启动子CaMV 35S。在不影响植株正常生长前提下，提高果实番茄红素代谢酶活性，显著增加成熟果实中番茄红素的含量。

摘要： 本发明涉及番茄种的栽培植物，其包含具有一个或多个突变的acs4等位基因，所述突变导致产生与野生型Acs4蛋白相比acs4蛋白功能丧失或功能降低的突变acs4蛋白。

摘要： 本发明公开了一种创建富含番茄红素番茄新种质的方法。方法步骤如下：1)将含有酵母S－腺苷基蛋氨酸脱羧酶基因cDNA片断接入番茄果实成熟专一性表达启动子之后，构建植物特异性表达载体；2)将上述载体转化的农杆菌LBA4404感染番茄子叶；3)感染后的番茄叶片置于分化培养基上进行分化培养；4)田间种植、多代自交后，形成稳定的转基因自交系。本发明采用番茄果实专一性高效表达的启动子E8，利用这一果实成熟特异表达启动子不仅具有十分特异的果实专一性，而且表达量明显高于通用的组成型表达启动子CaMV 35S。在不影响植株正常生长前提下，提高果实番茄红素代谢酶活性，显著增加成熟果实中番茄红素的含量。

摘要： 本发明涉及番茄种的栽培植物，其包含具有一个或多个突变的acs2等位基因，所述突变导致产生与野生型Acs2蛋白相比acs2蛋白功能丧失或功能降低的突变acs2蛋白。

摘要： 本发明涉及包含具有一个或多个突变的rin等位基因的番茄种的栽培植物，所述突变导致产生与野生型Rin蛋白相比具有降低的活性的突变rin蛋白。

摘要： 本发明涉及番茄种的栽培植物，其包含具有一个或多个突变的acs4等位基因，所述突变导致产生与野生型Acs4蛋白相比acs4蛋白功能丧失或功能降低的突变acs4蛋白。

摘要： 本发明提供一种提高含虾青素转基因番茄产量和转基因番茄中虾青素含量的方法，包括播种、施肥、遮阴、标记、果实采后处理、冻干、含量测定步骤，以含虾青素的转基因番茄为研究材料，使转基因番茄在全光照下生长，并在花期喷施0.02％的番茄灵溶液。提供喷施0.02％的番茄灵溶液提高虾青素工程番茄的虾青素含量的方法，以及用全光照生长提高虾青素工程番茄产量的方法。本发明具有方法简单，操作性强等优点，可为虾青素工程番茄的虾青素高积累技术及产业化带来较高的经济效益。

摘要： 本发明提供一种提高含虾青素转基因番茄产量和转基因番茄中虾青素含量的方法，包括播种、施肥、遮阴、标记、果实采后处理、冻干、含量测定步骤，以含虾青素的转基因番茄为研究材料，使转基因番茄在全光照下生长，并在花期喷施0.02％的番茄灵溶液。提供喷施0.02％的番茄灵溶液提高虾青素工程番茄的虾青素含量的方法，以及用全光照生长提高虾青素工程番茄产量的方法。本发明具有方法简单，操作性强等优点，可为虾青素工程番茄的虾青素高积累技术及产业化带来较高的经济效益。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测番茄转基因元件和品系的引物对组合、试剂盒及检测方法。所述的检测番茄常用的转基因元件及转基因品系的引物对组合包括以扩增11种常用番茄转基因元件、1种转基因品系特异性序列以及1种番茄内参基因Sl_LAT52的引物组。本发明还涉及检测番茄转基因元件和品系的试剂盒与检测方法。本发明技术方案操作简单，检测效率高，检验对象全面，具有较高的检测特异性、准确度和灵敏性等特点；可用于转基因番茄及其制品的大规模检测，具有较好的应用前景。

摘要： 一种表达降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素融合基因的转基因番茄的制备方法，涉及一种转基因番茄的制备方法。本发明是要解决目前降钙素基因相关肽与鲑鱼降钙素的来源有限且价格昂贵的问题。方法：一、将番茄种子浸泡消毒；二、洗净后放入1/2MS培养基上，光照培养得番茄幼苗；三、取幼苗子叶中部为外植体，接种于预培养培养基；四、制备转化用的侵染液；五、侵染，转入共培养培养基；六、转至脱菌培养基，再转至筛选培养基上，培养至外植体上长出抗性芽，将抗性芽转接到生根培养基上，炼苗，植入土中获得再生苗，鉴定，获得的阳性植株即为转基因番茄。本发明利用转基因植物表达sCT和hαCGRP融合基因，安全、生产成本低、易于操作。