转基因油菜

摘要： 转基因油菜是我国转基因生物安全监管的重要对象,为了解决检测机构常常面临的标准物质(样品)缺乏困境,统计我国批准进口和正在申请安全证书的11个转基因油菜品种,分析分子特征和相应的检测标准方法,确定每个转基因油菜品种的检测靶标序列.将11个转基因油菜品种的检测靶标序列通过基因合成的方法融合构建到pUC18载体上,研制出阳性质粒分子pYCID-1905,为转基因油菜的转化体鉴定检测提供了通用的阳性对照分子.结果发现,该质粒分子可同时用作国家标准(GB/T)、农业农村部公告、进出口检验检疫标准(SN/Y)和欧盟标准中普通PCR方法和实时荧光PCR方法的阳性对照,可以解决转基因油菜检测中缺乏标准样品的难题.

摘要： 转基因油菜(Brassica napus)NS-B50027-4是由澳大利亚-新西兰食品标准局批准的含有高比例的ω3脂肪酸和LC-ω3脂肪酸油菜新品种,到目前为止尚无文献报道对该转基因油菜新品种的检测方法,因此需要建立针对该品种的定性定量检测方法.本研究根据油菜内参基因HMG(high mobile group protein)和转基因油菜NS-B50027-4的A02染色体分别设计了引物和探针,利用普通PCR和实时荧光定量PCR技术分别测定引物和探针的特异性、灵敏度、准确性,从而确定该检测方法的检测限.实验结果表明,设计的两种引物都只能扩增出靶标,hmg引物的检测限能达到5 copies/μL,A02dn2引物的检测限达到1 copies/μL.因此,建立的转基因油菜NS-B50027-4的定性定量检测方法具有高度的特异性和选择性,优异的灵敏度和准确性.该研究结果为转基因油菜NS-B50027-4的定性定量检测提供了技术支持.

摘要： 为建立一种快速鉴定抗草甘膦转基因油菜的方法,以抗草甘膦转基因油菜品系及后代分离群体为研究材料,利用不同草甘膦浓度滤纸平板进行种子发芽,观察抗性材料和非抗性材料幼胚抗性反应表型,并通过PCR和苗期草甘膦处理进行抗性验证。结果表明,利用0.5~1 g/L的草甘膦溶液处理的抗性材料胚根根毛生长正常,而非抗性材料胚根生长迟缓且光滑无根毛;利用该浓度的处理BC1和F2抗性分离群体,幼胚根毛有无性状分离比符合1:1和3:1,幼胚个体的基因组PCR扩增结果与根毛有无呈共分离。通过观察在该浓度草甘膦发芽处理后的幼胚根毛有无,可有效区分抗草甘膦转基因油菜的抗性和非抗性材料。本研究建立的鉴定方法不仅能够对抗草甘膦油菜材料进行快速、准确鉴定,而且能保证材料成活,对抗草甘膦转基因油菜育种和种子纯度鉴定提供技术参考。

摘要： 旨在建立油菜中转基因成分的快速筛查方法,服务于农业转基因生物安全监管.根据转基因油菜常用转化遗传元件信息建立转基因油菜的筛查策略,并使用定性PCR法检测.结果表明,利用CaMV35S启动子、NOS终止子、bar基因、at基因、CP4-epsps基因和NPT Ⅱ基因6个靶标元件的组合,理论上可筛查92％的已知商业化转基因油菜转化事件.该方法的检测灵敏度达到1 g/kg,可对油菜中的大多数转化事件进行快速、高灵敏度的筛查.%To establish a rapid screening method for genetically modified (GM) rapeseed and apply in the safety supervision of agricultural transgenic organisms,we developed a screening strategy and tested by using qualitative PCR method in this study based on the inserted genetic elements of commercial GM rapeseed.The results showed that combination of CaMV35S promoter,NOS terminator,bar gene,pat gene,CP4-epsps gene and NPT Ⅱ gene as screening target elements could screen 92％ of commercial genetically modified (GM) rapeseed,and the detection sensitivity was 1 g/kg.In conclusion,the screening strategy was a very valuable tool which it could quickly screen out GM rapeseed detection with high sensitivity and specificity.

摘要： 澳大利亚：澳大利亚基因技术监管办公室（OGTR）于最近分别批准了转基因油菜NS—B50027—4和转基因棉花SYN-1R102—7用于食品、饲料以及商业种植。

摘要： 基于微滴式数字PCR平台,建立了一种在同一个微滴反应体系中同时检测油菜样品中两种靶标序列的双重微滴式数字PCR(duplex-ddPCR)定量分析方法.试验结果表明,内参基因和品系特异性基因均能特异性扩增出来,所建立的RF1品系duplex-ddPCR方法特异性好.在单位体系内参和外源基因拷贝数位于18～23077的区间内可以呈现出良好的线性,r2=0.999.经验证,本方法的定量检测限(LOQ)和最低检测限(LOD)分别为18拷贝/反应和3.7拷贝/反应.精密度试验结果表明两组浓度的DNA样品所得到的平行试验结果的标准偏差(relative standard deviations,RSD)介于8.40％～24.50％,准确度试验结果显示标准偏差RSD值介于5.97％～ 12.64％,均达到了对方法精密度RSD和准确度RSD小于25％的要求.综上所述,本研究所建立的duplex-ddPCR定量分析方法可用于转基因油菜RF1的定量检测.

摘要： With the commercialization of genetically modified organism (GMO) and large scale of rapeseed imported to China, it was essential to manage and control existing risks.In this paper, genetically modified rapeseed Ms8 was prepared including analysis on preparation, purity, homogeneity, stability and certified value.The results showed that the homogeneity of endogenous gene and exogenous gene of reference molecule was well.No other selective specific gene had been amplified by PCR.Short term stability of reference molecule was obviously changed which were stored at room temperature for 14 days, and long term stability of reference molecule was more than 6 months.The certified value of exogenous gene of reference molecule determined by microspectrophotometric method and digital PCR method was similar.Thus, pMs8 can be used as reference material, and the reference molecule is suitable for the rapid identification of modified rapeseed Ms8 in unknown samples.%随着转基因产品的大规模商业化和我国大规模进口油菜籽,有效管控存在的风险显得非常必要和有意义,试验研究了质粒标准分子pMs8的研制过程,包括质粒分子的构建、纯度分析、特异性检测、均匀性检验、稳定性考察、定值.结果表明,该质粒分子标准物质的内源基因和外源基因的均匀性良好,没有扩增出所选的其他特异性基因,短期稳定性在14 d(处理温度大于25 °C)发生显著变化,长期稳定性大于6个月,两种方法对外源基因拷贝数的定值结果相近,因此,pMs8是有准确量值的质粒标准分子.可替代性研究结果表明,其可替代基因组作为转基因油菜Ms8定量的阳性标准.

摘要： [目的]全球转基因植物及其产品的数量和种类越来越多,迫切需要可同时精准高效检测多个转化载体的检测方法.[方法]针对RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5个转基因油菜品系的侧翼序列及油菜内源基因cruciferinA(CruA)序列设计多重聚合酶链式反应特异性引物,通过对转基因油菜、转基因大豆、转基因玉米、转基因水稻、转基因棉花等不同作物进行PCR扩增来测试所选择的引物特异性,优化多重PCR反应引物的浓度,用所建立的检测体系对不同混合比例的转基因油菜进行多重PCR扩增来测试所建立的检测方法的灵敏度.[结果]通过测试,仅在含有目标样品中检测出阳性结果,灵敏度达0.05%,表明所建立的6重PCR检测方法可同时精准检测RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5种转基因油菜转化载体.[结论]所建立的6重转基因油菜转化体特异性PCR检测方法通量高、特异性好、灵敏度高,符合有关转基因产品检测的要求,可作为转基因油菜检测的有效方法.

摘要： 通过对世界转基因油菜田间试验数据库的数据统计分析,揭示转基因油菜研究的特点和发展趋势,旨在为中国转基因油菜的研究和产业化发展提供参考.采用EXCEL"数据透视表与数据透视图"软件,对世界转基因油菜的田间试验数据库进行统计分析.结果表明,截至2007年,世界转基因油菜田间试验累计达5 211次,涉及20余种性状和100多家公司或研究机构.1987～2008年间,转基因油菜以加拿大为主,占世界总量的83.69％,美国位居第二位,占4.84％.中国中间试验等级以上的转基因油菜田间试验不到50次,在10个油菜主产国中排列第七位,明显落后于世界发达国家.建议中国加强转基因油菜研究,积极构建转基因油菜安全生产体系,更好地利用转基因技术推动中国油料作物生产的发展.

摘要： 随着转基因作物大面积的商业化种植,转基因作物的生物安全问题受到普遍关注,其中转基因作物与近缘野生种间基因流一直是人们关注和探讨的焦点.转基因油菜因其容易与近缘野生种发生杂交而成为研究转基因作物基因流风险的模式作物之一.本文从以下几个方面评估转基因作物基因流发生的风险:①转基因油菜与其近缘野生种的杂交难易程度:研究发现油菜(Brassica napus)能与B.rapa,B.juncea 等在自然条件下自由杂交.②转基因油菜花粉漂移的距离:最远距离能达到3～5km.③种子在土壤中存活的年限:转基因油菜果荚容易裂开使得种子掉落在土壤中,形成种子库;研究发现最长年限能存活近10年;种子发芽长成自播植物,进一步扩散转基因.④相对适合度和竞争能力:转基因油菜自播植物或杂交后代在自然界的生存取决于他们的相对适合度和竞争能力.⑤发生基因渐渗的后果:基因渐渗可影响植株的形态特征与种群动态变化.

摘要： 转基因甘蓝型油菜(以下简称油菜)已经商业化种植了十多年,主要集中在北美,面积逐年上升,一直稳居全球转基因作物栽培面积第四位.由于其虫媒异交的特点,油菜作物与作物之间,油菜与其野生近缘种之间的基因交流机会比较大,尤其是1998年加拿大田间发现了由花粉流介导的能够抗三种除草剂的自生油菜植物以后,其生态学风险备受关注.基因流包括时间上的和空间上的,田间转基因油菜与非转基因油菜间基因流的研究主要侧重评价花粉传布和作物轮作后,最终非转基因油菜作物种子收获的纯度.而转基因油菜与其野生近缘种间基因流的研究则侧重于转基因逃逸的过程和生态学后果以及转基因在自然界中的存留.在油菜的野生种中,芸薹(或称芜菁)和野生芥菜型油菜与油菜的杂交亲合率最高.相比较而言,油菜与芸薹的杂交亲合度比较高,欧美学者对此的研究比较多.而对于油菜与芥菜之间的基因流,研究则相对比较少.在转基因逃逸过程中,由于油菜的C基因组在芸薹和芥菜中没有同源的染色体,C基因组上的基因向芸薹和芥菜的传递比较难,因此,C基因组被认为是“安全”的转基因位点,能够降低转基因向野生遗传背景发生渐渗的机会.转基因一旦通过杂交进入野生种的基因组中,决定其在野生遗传背景中的存留的因素不仅包括两亲本间的基因组的亲合性,同时也取决于杂回交后代植株的适合度.在转基因油菜对非靶标生物的影响方面,一般也是在三级营养关系的框架内(转基因油菜—害虫—天敌),研究发现寄生蜂倾向于选择对转Bt基因油菜有抗性的小菜蛾,寄生蜂在抗性害虫体内的生长发育不受影响.后续的研究发现,摄食转基因油菜的抗性小菜蛾体内孵化出来的寄生蜂幼虫体内不合任何的Bt蛋白；相反,取食害虫的草蛉幼虫体内却发生了Bt蛋白的富集.文章也介绍了将全球气候变化与转基因油菜生物安全联系起来的一些初步研究进展。

摘要： 随着基因工程技术的发展，人们愈来愈倾向于通过基因工程的手段改良油菜的产量、品质及抗逆性。因此，建立良好的油菜转化体系至关重要。本文建立油菜转基因的受体系统及筛选标记，总结油菜转基因方法，提出油菜转基因研究中的问题与展望。

摘要： 本文采用45Ca同位素示踪的方法，以油菜为研究材料，考察转基因植物细胞中钙的含量和分布情况，以了解我校在国内外率先发现的TT1耐热基因是否引起植物细胞中钙钾离子的含量和分布变化。结果表明转入耐热基因后的油菜，强化了油菜对钙离子吸收的调控能力。这种对钙离子的调控能力可能是该耐热基因在油菜中能起到抗逆性作用机理的一个方面。

摘要： 水孔蛋白属于膜内蛋白家族，是实现水分跨膜运输的功能性通道蛋白，它们参与了植物生理活动的方方面面。本文从依赖外源生长素和细胞分裂素培养的人参细胞系出发，通过驯化、筛选获得了不依赖任何外源激素培养的细胞系。通过抑制差减杂交和cDNA文库的筛选，克隆了在无激素培养条件下生长的人参细胞系中特异表达的液泡膜水孔蛋白基因PgTIP1。通过在拟南芥中过表达PgTIP1后发现，过表达PgTIP1拟南芥的根长增加、叶细胞变大、开花时间早于野生型对照。

摘要： 通过分期播种和在人工生长箱中种植，鉴定转基因不育系在不同温度条件下的育性表现，结果表明该不育系的不育性十分稳定，不育度非常彻底，且不育系在不同温度条件下自然开放授粉结实正常，表明利用转基因油菜HCN-19转育的不育系具有实用价值，为选育转基因杂交油菜奠定了基础。

摘要： 本文利用下胚轴侵染和花序浸染两种方法来将农杆菌介导的玉米C4型PEPC光合相关基因导入到甘蓝型油菜中，分析了其光合生理表现，为利用C4高光效基因提高油菜产量和品质进行了探讨。

摘要： 本文利用下胚轴侵染和花序浸染两种方法来将农杆菌介导的玉米C4型PEPC光合相关基因导入到甘蓝型油菜中，分析了其光合生理表现，为利用C4高光效基因提高油菜产量和品质进行了探讨。

摘要： 本文利用下胚轴侵染和花序浸染两种方法来将农杆菌介导的玉米C4型PEPC光合相关基因导入到甘蓝型油菜中，分析了其光合生理表现，为利用C4高光效基因提高油菜产量和品质进行了探讨。

摘要： 本发明公开了一种八倍体油菜转基因方法以及在基因编辑中的应用，属于遗传育种技术领域。本发明首次建立八倍体油菜农杆菌介导的转基因方法，将基因编辑载体成功的转化到具有诱导能力的八倍体油菜中，并将具有基因编辑元件活性的花粉直接对母本授粉，进而直接对其进行基因编辑，克服了基因编辑对于遗传转化的依赖性，直接通过授粉的方式对难于进行遗传转化的育种材料进行基因编辑，获得染色体倍性和母本一致双单倍体材料，且获得突变体材料不含有转基因元件，突变效率高达100％。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及油菜耐旱基因BnNAC129及其用于制备耐旱转基因植物的应用，本发明提供的油菜耐旱基因BnNAC129、其编码产物BnNAC129蛋白、含有耐旱基因BnNAC129的植物的制备方法可应用到耐旱转基因作物育种中以提高其耐旱性，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种基因BnaCYP705a12在油菜素内酯生物合成以及转基因植物培育中的应用。本发明首次提供了基因BnaCYP705a12在油菜素内酯生物合成中的应用，所述基因BnaCYP705a12的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中油菜素内酯生物合成基因BnaCYP705a12、其编码产物BnaCYP705a12蛋白、含有油菜素内酯生物合成BnaCYP705a12基因片段的表达载体可以用于生产油菜素内酯生物合成缺陷转基因作物，以获得新的种质资源，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种八倍体油菜转基因方法以及在基因编辑中的应用，属于遗传育种技术领域。本发明首次建立八倍体油菜农杆菌介导的转基因方法，将基因编辑载体成功的转化到具有诱导能力的八倍体油菜中，并将具有基因编辑元件活性的花粉直接对母本授粉，进而直接对其进行基因编辑，克服了基因编辑对于遗传转化的依赖性，直接通过授粉的方式对难于进行遗传转化的育种材料进行基因编辑，获得染色体倍性和母本一致双单倍体材料，且获得突变体材料不含有转基因元件，突变效率高达100％。

摘要： 本发明公开一种转伴矿景天SpHMA2基因的重金属超富集转基因工程油菜的创制方法，包括：克隆伴矿景天中SpHMA2基因；以植物表达载体为基础，构建包含强启动子、筛选基因的转化载体，将所述SpHMA2基因通过同源重组方法插入所述转化载体，获得超量表达双元载体；将所得超量表达双元载体通过根癌农杆菌转入油菜下胚轴切段中，培育转基因苗并筛选转基因阳性植株；其中，转基因受体植株为甘蓝型油菜K407品种。本发明提供的培育方法可解决野生重金属富集植株耐性有限、成长缓慢、生物量小、生长环境特殊以及重金属重返等问题。本发明还提供一种转伴矿景天SpHMA2基因的重金属超富集转基因工程油菜的创制方法中所得的重金属超富集转基因植株在土壤重金属修复中的应用。

摘要： 本发明公开了一种非转基因抗除草剂油菜突变型基因，所述突变型基因仅在

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及油菜耐旱基因BnNAC129及其用于制备耐旱转基因植物的应用，本发明提供的油菜耐旱基因BnNAC129、其编码产物BnNAC129蛋白、含有耐旱基因BnNAC129的植物的制备方法可应用到耐旱转基因作物育种中以提高其耐旱性，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开一种转蜈蚣草PvACR2基因的重金属超富集转基因工程油菜的创制，包括：克隆蜈蚣草中PvACR2基因；以植物表达载体为基础，构建包含强启动子、筛选基因的转化载体，将所述PvACR2基因通过同源重组方法插入所述转化载体，获得超量表达双元载体；将所得超量表达双元载体通过根癌农杆菌转入油菜下胚轴切段中，培育转基因苗并筛选转基因阳性植株；其中，转基因受体植株为甘蓝型油菜K407品种。本发明提供的培育方法可解决野生重金属富集植株耐性有限、成长缓慢、生物量小、生长环境特殊以及重金属重返等问题。此外，本发明还提供一种转蜈蚣草PvACR2基因的重金属超富集转基因工程油菜的创制中所得的重金属超富集转基因植株在土壤重金属修复中的应用。

摘要： 本发明公开了一种定量检测转基因油菜籽及其加工产品中转基因成分含量的检测方法和检测试剂盒。该方法包括：(i)抽提DNA；(ii)将抽提的DNA作为模板，用(a)PEP特异性引物对和(b)外源基因特异性引物对分别进行PCR扩增；(iii)将各扩增产物分别与第一探针和第二探针杂交，并测定杂交所产生的可检测信号；(iv)分析测定数据，从而定量地检测出油菜籽或其加工产品中转基因成分含量。本发明可准确、简便地定量检测油菜籽及其加工产品中转基因成分。

摘要： 本发明公开了一种定量检测转基因油菜籽及其加工产品中转基因成分含量的检测方法和检测试剂盒。该方法包括：(i)抽提DNA；(ii)将抽提的DNA作为模板，用(a)PEP特异性引物对和(b)外源基因特异性引物对分别进行PCR扩增；(iii)将各扩增产物分别与第一探针和第二探针杂交，并测定杂交所产生的可检测信号；(iv)分析测定数据，从而定量地检测出油菜籽或其加工产品中转基因成分含量。本发明可准确、简便地定量检测油菜籽及其加工产品中转基因成分。