质粒稳定性

摘要： 通过对以pET-22b质粒为载体,大肠杆菌BL21为宿主构建的产天冬氨酸转氨酶的重组菌BL21/pET-aspC,质粒稳定性与重组菌产酶活性的发酵条件优化,对比了不同发酵条件对基因工程菌菌体生长、质粒稳定性和转氨酶酶活性的影响,得到较工程菌常用LB培养基更利于工程菌生长的培养基CSN。考察了该培养基主要成份玉米浆、酵母粉和柠檬酸钠对重组菌生长及质粒稳定性的影响。优化后,该发酵体系的发酵成本为LB培养基的10%,外源基因的质粒稳定性得到明显改善,重组菌生物量与天冬氨酸转氨酶活性显著提高。优化后培养体系成本低廉,发酵稳定,适于基因工程菌的大规模工业化生产发酵使用。

摘要： 为了分析猪源大肠杆菌中mcr-1阳性不可接合类噬菌体质粒pD72-mcr-1与blaCTX-M-55阳性可接合的F33:A-:B-质粒pD72-F33融合形成的共整合质粒pD72C的生物学特性,评估该融合质粒对mcr-1传播的潜在作用,本实验采用生长曲线测定、质粒稳定性实验、竞争性实验和接合实验,测定了融合质粒pD72C和亲本质粒pD72-F33对宿主菌的适应性、融合能力和扩散能力.结果表明:融合质粒pD72C在无抗生素的环境中能稳定传代9 d,对宿主菌有适应性优势,且比亲本质粒pD72-F33具有更好的竞争优势;该融合质粒表现出较高的融合频率和接合频率,说明该融合质粒能够扩展菌株的耐药谱并促进粘菌素耐药基因mcr-1的传播.

摘要： N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,NeuAc)作为营养化学品和药物中间体在保健品和医药领域具有广泛的应用.为了提升重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)合成NeuAc的产量,首先利用NeuAc生物传感器(NeuAc-Biosensor)调控抗生素抗性基因表达,在抗生素存在条件下将细胞生长与NeuAc合成相关联.进而通过增加抗生素浓度进行适应性进化,促进NeuAc合成效率提升.研究结果显示,当利用NeuAc-Biosensor分别调控壮观霉素抗性基因(spc)和红霉素抗性基因(erm)时,高产菌株能够在较高抗生素浓度条件下生长.通过在培养过程中逐步增加抗生素浓度开展适应性进化,结果表明采用壮观霉素和红霉素进行双抗性适应性进化时,进化获得的菌株中假阳性率(产量未提高的菌株比例)为46.7％,显著低于采用壮观霉素或红霉素单一抗生素进化获得的菌株中假阳性率(73.3％和66.7％).通过适应性进化与发酵验证得到1株NeuAc产量为(3.16±0.19)g/L的菌株,产量比出发菌株提高了31.7％.为进一步解决发酵过程中重组B.subtilis质粒丢失的问题,通过将必需基因folB(编码二氢喋呤醛缩酶,dihydroneopterin aldolase)插入携带NeuAc合成途径关键酶编码基因重组质粒并且敲除基因组中的folB基因,质粒的丢失率由34.1％下降至11.8％.该研究提升了重组B.subtilis合成NeuAc的产量和稳定性,为重组B.subtilis发酵法生产NeuAc奠定了基础.

摘要： 鉴于 ε-聚赖氨酸发酵过程对抗生素压力条件的依赖,尝试基于Ⅱ型毒素-抗毒素系统(relBE2sca)构建无选择压力下稳定表达 ε-聚赖氨酸的淀粉酶产色链霉菌表达系统:将抗毒素基因relB2sca与 ε-聚赖氨酸合成酶基因pls克隆至表达载体,并导入淀粉酶产色链霉菌pls缺失突变株,将毒素基因relE2sca整合至淀粉酶产色链霉菌的染色体(突变株YY3),获得包含 ε-聚赖氨酸稳定表达的突变株YY1.经过多次传代,相比对照组,在不含抗生素压力条件下,突变株YY1依然能够稳定地合成 ε-聚赖氨酸.毒素蛋白RelE2sca的表达会导致变铅青链霉菌、阿维链霉菌和链霉菌FR-008等常用链霉菌异源表达宿主的死亡,提示基于Ⅱ型毒素-抗毒素系统(relBE2sca)可作为一种通用的遗传标记.

摘要： 主要研究了基因工程大肠杆菌发酵生产酮基还原酶的发酵特性.结果表明,发酵12 h菌体浓度达到最大,发酵12～22 h菌体浓度稳定;发酵液pH值先平稳后急速上升至pH值8.6左右,之后趋于平稳;6～10h达到碳氮源利用高峰,14h后氨基酸态氮含量略微回升;乙酸于10h质量浓度最大,10～12 h迅速下降后趋于平稳;酶活于12h达到最大值92.9 U/mL,之后,利用流加氨苄的对照罐发酵,验证了发酵特性曲线的可靠性,菌体质粒稳定性得到提升,最大酶活优化为125.2 U/mL.此研究对于产酮基还原酶的基因工程菌进一步的发酵优化具有指导意义.

摘要： 为了进一步研究基因工程菌E．coli BL21（DE3）／pET－29a－cct在培养基中传代50次过程中菌种的稳定性，通过将菌体和菌落的形态、质粒的稳定性、质粒酶切图谱和重组CCT酶的表达量及活性作为指标进行考察，来评价该工程菌的稳定性。结果显示，重组CCT酶基因的工程菌在转接50次的过程中质粒稳定性高，其保有率为90％，表达产物可达发酵液总蛋白的15％以上。该菌在第50代后仍具有转化活性，说明工程菌转化活性稳定。

摘要： 通过对产普鲁兰酶的重组大肠杆菌E． coli BL21（DE3）／pET28a-s-pul菌株在发酵过程中质粒稳定性和普鲁兰酶生成量的考察，发现不同宿主对质粒稳定性及酶活性有重要影响。本文利用E． coli BL21（DE3）pLysS菌株为宿主，构建重组菌E． coli BL21（DE3）pLysS／pET28a-s-pul，通过控制外源蛋白的本底表达，提高了重组菌株的质粒稳定性。优化发酵培养基和发酵条件以后，重组菌产普鲁兰酶能力由480 U／mL提高至627 U／mL，增幅为30．6％。研究结果认为，严格控制外源蛋白的本底表达，是改善重组菌稳定性的重要方法之一。%It was found that different host bacteria would seriously affect the plasmid stability and pullulanase activity by investigating the recombinant E. coli BL21 (DE3)/pET28a-s-pul producing pullulanase. In this study,a recombinant E. coli BL21(DE3)pLysS/pET28a-s-pul was constructed with a new strain named E. coli BL21(DE3)pLysS,which suc-cessfully controlled the basal expression and improved the plasmid stability. After optimizing the medium and fermentation conditions,the pullulanase activity was enhanced from 480 U/mL to 627 U/mL with an increase of 30. 6%. The results of this research illustrated that strictly controlling the basal expression of the foreign protein was one of the important methods to improve the stability of recombinant bacteria.

摘要： 研究了碳源、温度、溶氧、pH值及外源丙酮酸氧化酶表达对重组大肠杆菌DH5α/pSML?PyOD质粒稳定性的影响. 结果表明,以甘油为碳源,37 °C,装液量10%~15%条件下重组菌质粒稳定性最好. 当发酵过程中体系pH值在6~7之间时,质粒稳定性较高,但当pH提高至7.5时,质粒稳定性会有所下降,重组菌在低pH值条件下有利于产丙酮酸氧化酶. 外源蛋白表达使得重组菌质粒稳定性有所下降.%The influences of carbon resource, temperature, DO, pH and heterologous pyruvate oxidase expression on the plasmid stability of the recombinant E.coli DH5α/pSMLPyOD were investigated. The results show that glycerol, 37°C and the ratio of 10-15% medium to volume of the flask (v) were the optimum conditions for the plasmid stability during the process of recombinant E.coli DH5α/pSMLPyOD cultivation, that the recombinant could retain high plasmid stability in pH6-7 and that heterologous PyOD expression decreased the plasmid sta?bility apparently.

摘要： 为将外源基因导入小单孢菌,建立小单孢菌(Micromonospora)与大肠杆菌两亲接合转移方法,将包含小单孢菌内源质粒pJTU112复制区的4.7kb片段插入质粒pOJ260的BamHⅠ酶切位点,构建了能在大肠杆菌和小单孢菌中复制的穿梭载体pSCU207,将质粒pSCU207转化大肠杆菌ET12567/pUZ8002,再与小单孢菌LXH20进行两亲接合转移,挑取接合转移子,并进行验证。结果表明:质粒pSCU207通过大肠杆菌与小单孢菌新鲜菌丝之间接合转移导入小单孢菌中,并可稳定遗传;大肠杆菌与小单孢菌新鲜菌丝之间的最佳接合转移体积是40μL和400μL。

摘要： 从工程应用的角度研究L-苏氨酸生产菌TRFC的质粒稳定性,在培养过程中考察选择压力、溶氧及残糖浓度等操作参数对质粒稳定性的影响.结果表明该菌具有较好的结构稳定性和分裂不稳定性,在无选择压力和操作条件控制不当的情况下,质粒有一定程度的丢失.

摘要： 表达外源α-淀粉酶的重组酿酒酵母菌株在生长静止期表现出质粒稳定性增加的趋势,当培养过程中脉冲流加天然氮源酵母膏形成其浓度震荡时这一现象得到重现,恒流量流加营养物结合酵母膏浓度震荡的高密度培养方案使质粒保持率稳定在90﹪以上,最大菌体密度、最大α-淀粉酶活力分别达到36.4g/L和207.6U/mL.

摘要： 质粒是基因重组技术中最常用载体之一,然而在微生物工业生产过程中,常常出现重组质粒不稳定发生突变或者丢失的现象,极大地影响了质粒上目的基因表达产物的产量,是一个亟待解决的既有理论意义又有实际应用价值的重要问题.质粒不稳定性主要分为结构不稳定性和分离不稳定性两类,本文从质粒稳定性影响因素、提高稳定性策略及其在代谢工程领域的应用等方面综述国内外质粒稳定性相关研究进展,为工业菌种稳定性改造和微生物发酵提供理论依据.重组质粒不稳定常常发生突变或者丢失的现象，可以分为两类：结构不稳定性和分离不稳定性。质粒特性，宿主种类，培养条件等在一定程度上影响质粒的稳定性。从这些影响因素出发，发展了提高质粒稳定性的策略，如添加抗生素等选择压力筛选，分离后的筛选等等。已有许多成功应用于代谢工程领域质粒稳定性提高的实例，研究质粒稳定性的方法也在不断更新。但由于基因工程菌株的随机性和可变性大,且发酵过程受许多因素的影响, 要在生产过程中使质粒保持稳定,仍存在许多问题需要解决。理想的质粒稳定表达系统需要能够抵御发酵生产过程中所遇到的酸、高温、高渗透压等逆境条件，并保持质粒的拷贝数目。质粒稳定性问题是微生物工业发展的瓶颈之一，对此问题的研究具有重要的理论意义和实际生产价值。

摘要： 高拷贝质粒pcDNA3.1+在鼠伤寒沙门氏菌SL7207中不稳定.通过去除pcDNA3.1+中氨苄青霉素抗性基因(bla基因)的启动子序列,仅保留其核糖体结合位点,构建了新质粒pmcDNA3.1+.SL7207(pmcDNA3.1+)在含与不含氨苄青霉素的培养基中均能稳定保留其质粒.SL7207(pmcDNA3.1+)的β-内酰胺酶活力明显低于SL7207(pcDNA3.1+),且接种SL7207(pmcDNA3.1+)的液体培养基中的氨苄青霉素不易被降解.腹腔接种小鼠7d后,脾脏中SL7207(pmcDNA3.1+)的质粒稳定性仍保持在95％以上,而SL7207(pcDNA3.1+)免疫后第3d 99％丢失质粒.所以,通过降低bla基因的表达水平,为解决高拷贝质粒在沙门氏菌中的稳定性问题提供了新方法.

摘要： 以聚氨酯泡沫为固定化截体,在三相流化床中研究了hEGF重组E.COLI JM101的发酵性能.研究结果表明聚氨酯泡沫是hEGF重组菌的良好载体,固定化后菌体的菌体密度、质粒稳定性和hEGF产量分别比对照提高了2.1倍,9倍和1.5倍.固定化重组菌的二阶段培养结果表明,经过约60小时的培养,菌体密度和目的产物的产量基本上保持恒定,hEGF产物仍可达到140mg/L,质粒稳定性维持在20﹪以上,实现了重组菌的连续培养.

摘要： 在大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１（ｐＢＲ３２２）的分批补料培养中，采用正交设计的试验方法，考究过程参数温度、ｐＨ、溶解氧（ＤＯ）和补料速率对培养末期细胞密度和对数期比生长速率的影响，获得一较优的培养条件组合，结果细胞密度提高５．８ｇ／Ｌ以上，比生长速率达到０．７３／ｈ。同时在培养过程中考究了质粒稳定性和β－内酰胺酶。

摘要： 采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F.通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-F)。体内体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-F在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-F.将重组菌SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)分别以1×109CFU剂量两次口服免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可产生针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和黏膜抗体。重组菌以5×109CFU剂量两次口服免疫4日龄SPF鸡,免疫鸡产生的针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和小肠黏膜抗体效价水平与空载体组之间存在显著性差异。免疫保护试验结果显示,SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组的免疫保护率均与空载体组之间存在显著性差异,且SL7207(pmcDNA3.1-F)免疫组的保护率较SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组提高了20.0％,说明稳定携带新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌具有良好的免疫原性和免疫保护性。

摘要： 采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F.通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-F)。体内体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-F在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-F.将重组菌SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)分别以1×109CFU剂量两次口服免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可产生针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和黏膜抗体。重组菌以5×109CFU剂量两次口服免疫4日龄SPF鸡,免疫鸡产生的针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和小肠黏膜抗体效价水平与空载体组之间存在显著性差异。免疫保护试验结果显示,SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组的免疫保护率均与空载体组之间存在显著性差异,且SL7207(pmcDNA3.1-F)免疫组的保护率较SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组提高了20.0％,说明稳定携带新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌具有良好的免疫原性和免疫保护性。

摘要： 采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F.通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-F)。体内体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-F在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-F.将重组菌SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)分别以1×109CFU剂量两次口服免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可产生针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和黏膜抗体。重组菌以5×109CFU剂量两次口服免疫4日龄SPF鸡,免疫鸡产生的针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和小肠黏膜抗体效价水平与空载体组之间存在显著性差异。免疫保护试验结果显示,SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组的免疫保护率均与空载体组之间存在显著性差异,且SL7207(pmcDNA3.1-F)免疫组的保护率较SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组提高了20.0％,说明稳定携带新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌具有良好的免疫原性和免疫保护性。

摘要： 采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F.通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-F)。体内体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-F在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-F.将重组菌SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)分别以1×109CFU剂量两次口服免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可产生针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和黏膜抗体。重组菌以5×109CFU剂量两次口服免疫4日龄SPF鸡,免疫鸡产生的针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体和小肠黏膜抗体效价水平与空载体组之间存在显著性差异。免疫保护试验结果显示,SL7207(pmcDNA3.1-F)和SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组的免疫保护率均与空载体组之间存在显著性差异,且SL7207(pmcDNA3.1-F)免疫组的保护率较SL7207(pcDNA3.1-F)免疫组提高了20.0％,说明稳定携带新城疫病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌具有良好的免疫原性和免疫保护性。

摘要： 本发明公开了抗毒素SO_1445或其编码基因在提高质粒在宿主细胞中的稳定性中的应用。所述的抗毒素SO_1445，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码所述的抗毒素SO_1445的抗毒素基因SO_1445，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明从希瓦氏菌MR‑1中克隆得到抗毒素基因SO_1445，发现引入抗毒素基因SO_1445的重组质粒的稳定性相较空质粒显著增加。本发明不仅有望减少抗生素在生产以及科学研究中的使用，同时为稳定质粒在细菌宿主中的存在提供了新的方法与策略。

摘要： 本发明提供一种高稳定性假病毒颗粒及其制备所用的质粒载体和方法。所述假病毒颗粒内含有诺如病毒的核酸片段，所述核酸片段能用于作为检测诺如病毒的靶标。所述质粒载体含有包括Qbeta噬菌体的成熟酶编码基因、衣壳蛋白编码基因、包装位点序列以及所述核酸片段对应的cDNA序列在内的DNA片段。所述方法包括构建所述质粒载体，然后将质粒载体在大肠杆菌细胞中进行转录和/或翻译，接着分离纯化得到假病毒颗粒。通过本发明的方法可以制备内含能用于作为检测靶标的诺如病毒核酸片段的假病毒颗粒，其具有无传染性、拷贝数高、稳定性好等优点。

摘要： 提供了用于表达甲酸脱氢酶(FDH)和经修饰的苯丙氨酸脱氢酶(PDHmod)的双顺反子质粒。

摘要： 叙述了基于负载在氧化铝上的钴的费托催化前体的制备方法，所述氧化铝任选地含有多达10wt％的二氧化硅，所述方法包括：a)用硅化合物处理氧化铝，所述硅化合物选自具有通式(I)Si(OR)4－nR’n的那些，其中n为1～3，其中，R’选自具有1～20个碳原子的伯烃基；其中，R选自具有1～6个碳原子的伯烃基；b)干燥并随后煅烧在步骤(a)结束时所得到的改性的载体，从而获得硅烷化载体；c)随后将钴沉积到在步骤(b)结束时所得到的硅烷化载体上；d)干燥并随后锻烧在步骤(c)结束时所得到的负载的钴，从而获得所述最终的催化前体；上述最终的催化前体中衍生自具有通式(I)的化合物的SiO2含量为4.5～10wt％。

摘要： 本发明提供了一种含有猪溶血素基因的质粒遗传稳定性的检测方法及应用，属于生物工程领域。本发明通过复苏培养含有猪溶血素基因质粒的宿主菌菌液，并进行连续多代的传代培养，间隔一定的代数取样并检测，通过检测人工保藏的含有猪溶血素基因质粒的宿主菌的遗传稳定性，为研究猪溶血素基因提供可靠的支撑和保障；将上述检测方法应用到猪溶血素基因培养中，也可以为猪溶血素基因的研究和培养提供参考和借鉴，具有重要的应用价值。

摘要： 本发明提供了一种猪链球菌细胞外因子基因的质粒遗传稳定性的检测方法及应用，属于生物工程领域。本发明通过复苏培养猪链球菌细胞外因子基因的质粒的宿主菌菌液，并进行连续多代的传代培养，间隔一定的代数取样并检测，通过检测人工保藏的猪链球菌细胞外因子基因的质粒的宿主菌的遗传稳定性，为研究猪溶血素基因提供可靠的支撑和保障；将上述检测方法应用到猪链球菌细胞外因子基因的质粒研究中，也可以为猪溶血素基因的研究和培养提供参考和借鉴，具有重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了抗毒素SO_1445或其编码基因在提高质粒在宿主细胞中的稳定性中的应用。所述的抗毒素SO_1445，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码所述的抗毒素SO_1445的抗毒素基因SO_1445，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明从希瓦氏菌MR‑1中克隆得到抗毒素基因SO_1445，发现引入抗毒素基因SO_1445的重组质粒的稳定性相较空质粒显著增加。本发明不仅有望减少抗生素在生产以及科学研究中的使用，同时为稳定质粒在细菌宿主中的存在提供了新的方法与策略。

摘要： 本发明提供一种高稳定性假病毒颗粒及其制备所用的质粒载体和方法。所述假病毒颗粒内含有诺如病毒的核酸片段，所述核酸片段能用于作为检测诺如病毒的靶标。所述质粒载体含有包括Qbeta噬菌体的成熟酶编码基因、衣壳蛋白编码基因、包装位点序列以及所述核酸片段对应的cDNA序列在内的DNA片段。所述方法包括构建所述质粒载体，然后将质粒载体在大肠杆菌细胞中进行转录和/或翻译，接着分离纯化得到假病毒颗粒。通过本发明的方法可以制备内含能用于作为检测靶标的诺如病毒核酸片段的假病毒颗粒，其具有无传染性、拷贝数高、稳定性好等优点。

摘要： 本发明提供了一种提高大肠杆菌裂解过程中质粒稳定性的方法。具体步骤如下：1）菌体重悬，所述重悬液含二糖类化学物质；2）碱裂解；3）中和；4）澄清；5）浓缩换液；6）分子筛层析；7）制剂换液。本发明的工艺简便，通过在菌体重悬液中添加一定浓度的二糖（如蔗糖、海藻糖等），保护大肠杆菌碱裂解过程中的超螺旋质粒，进而简化下游层析纯化工艺，并提高质粒回收率，方便快捷，适于推广应用。

摘要： 本发明公开了一种化学诱变酿酒酵母基因工程菌提高重组质粒稳定性的方法，包括如下步骤：1）化学诱变；2）筛选；3）PCR检测质粒稳定性；4）诱导表达与活性检测。本发明通过化学诱变剂硫酸二乙酯诱变酿酒酵母基因工程菌株，用含有五氟尿嘧啶的培养基筛选，致死淘汰能利用培养基中尿嘧啶的细胞，得到不能利用培养基中尿嘧啶的突变体。该突变体只能或基本只能使用质粒本身基因合成尿嘧啶，因而在非选择培养基中仍然维持质粒稳定性，极大降低了培养基成本，克服了制约利用酿酒酵母基因工程菌大规模生产抗菌肽的关键难题之一。