裸鼠移植瘤

摘要： 目的:探讨重组人血管内皮抑制素(恩度)与放疗不同联合对A549肺腺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的影响。方法:采用A549肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为空白对照组(d 1~d 14注射0.9%氯化钠溶液),恩度组(d 1~d 14注射恩度)、恩度联合放射治疗组(联合组),联合组分为联合1组(d 1~d 14注射恩度+d 1、d 3放疗),联合2组(d 1~d 14注射恩度+d 5、d 7放疗)和联合3组(d 1~d 14注射恩度+d 9、d 11放疗),治疗14天。测量小鼠体重和移植瘤体积变化,计算抑瘤率。治疗结束后第10天处死裸鼠,作肿瘤组织病理学观察,免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)表达及微血管密度(MVD)。结果:从治疗第7天起空白对照组肿瘤体积明显增大,生长曲线陡直,恩度组肿瘤体积增速次之,联合组肿瘤生长较缓慢,其中联合2组肿瘤体积增加最慢。裸鼠处死后测量显示,肿瘤质量和体积恩度组小于空白对照组,联合各亚组小于空白对照组和恩度组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:重组人血管内皮抑制素联合放射治疗对A549肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的抗肿瘤效果明显优于单用重组人血管内皮抑制素,可能与恩度能有效减少肿瘤组织血供,增敏放疗作用有关。

摘要： 目的探讨姜黄素(CUR)衍生物溴苯基CUR(GL63)对人胆管癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测GL63对人胆管癌RBE细胞增殖的影响;采用流式细胞法检测GL63对RBE细胞凋亡和周期的影响;建立人胆管癌裸鼠移植瘤模型,随机将裸鼠平均分为对照组、低浓度GL63组、高浓度GL63组各10只,分别给予生理盐水和10、20μmol/L GL63处理裸鼠。记录各组肿瘤重量和体积变化,并计算抑瘤率;对移植瘤组织进行病理学检测。Western印迹检测细胞中各蛋白表达情况。结果GL63能显著抑制人胆管癌RBE细胞生长,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞发生凋亡,且呈浓度和时间依赖性。低、高浓度GL63组瘤重、瘤体积均明显小于对照组,抑瘤率明显高于对照组(P<0.05)。苏木素-伊红(HE)染色显示,低、高浓度GL63组肿瘤较对照组分化明显高,免疫组化显示,低、高浓度GL63组肿瘤细胞增殖抗原(PCNA)表达明显降低(P<0.05)。Western印迹结果显示,低、高浓度GL63组磷酸化酪氨酸激酶(p-JAK)2、磷酸化信号转导和转录活化因子(p-STAT)3蛋白表达与对照组相比显著下降(P<0.05)。下游通路中B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达明显下降,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-2蛋白表达明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论GL63可促进胆管癌细胞凋亡,抑制其增殖和侵袭作用,从而抑制裸鼠移植瘤的生长。

摘要： 目的:分析甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(Mus81)在乳腺癌组织中的表达水平,观察Mus81基因敲减对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和裸鼠移植瘤形成能力的影响。方法:从TCGA数据库下载乳腺癌样本基因表达数据,应用perl及R软件整理数据筛选出每个样本Mus81基因表达量。通过慢病毒介导的小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)技术构建Mus81基因敲减的MDA-MB-231乳腺癌细胞系(即Mus81敲减组)和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞系,以实时定量PCR法检测Mus81基因的敲减效率,再以MTT检测实验、克隆形成实验、细胞流式检测及实时定量PCR法检测两组MDA-MB-231细胞的生长、增殖、细胞周期分布、凋亡水平及Mus81下游基因表达水平。最后,向BALB/c裸鼠右侧腋下注射Mus81基因敲减组和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞,观察Mus81基因沉默对MDA-MB-231细胞在裸鼠中成瘤能力的影响。结果:Mus81基因在乳腺癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织(P<0.05)。Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞中Mus81基因的表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05),Mus81基因的敲减效率达70.7%。较之阴性对照组,Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞的生长速度明显减缓(P<0.05);形成的细胞克隆数也明显下降(P<0.05);细胞凋亡水平、G2/M期细胞比例则明显升高(P<0.05)。STC2等Mus81下游基因的表达水平在两组MDA-MB-231细胞间也有明显差异(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示,Mus81基因敲减组形成的裸鼠瘤体体积和重量均明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:Mus81基因在乳腺癌组织中的表达明显升高,且可能通过调控STC2等下游基因的表达促进三阴性乳腺癌细胞的生长增殖及裸鼠体内成瘤能力并抑制其凋亡,提示其可能是一个潜在的乳腺癌治疗靶点。

摘要： 目的:研究洋川芎内酯A(SEA)联合表柔比星(EPI)干预膀胱癌5637细胞的作用机制,探讨SEA对EPI敏感性的影响。方法:采用CCK-8试剂盒检测人输尿管上皮永生化细胞SV-HUC-1和人膀胱癌细胞5637的细胞活力,选用人膀胱癌细胞5637进行后续实验,计算半数抑制浓度(IC50值)。将细胞随机分为对照组、SEA低剂量组(SEA10组)、SEA中剂量组(SEA20组)、SEA高剂量组(SEA40组)、EPI单独处理组(EPI组)和联合处理组(SEA40+EPI组)。流式细胞仪检测细胞凋亡;CCK-8试剂盒检测细胞光密度(OD)值;免疫蛋白质印迹法(Western blot)检测多药耐药关联蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)、拓扑异构酶-Ⅱ(Topo-Ⅱ)蛋白水平。建立裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、SEA药物组、EPI药物组和SEA+EPI组,并采用相应药物灌胃进行干预。检测肿瘤体积;Western blot检测裸鼠移植瘤模型MRP1、增殖细胞核抗原(PCNA)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白水平。结果:体外实验结果表明,与对照组比较,SEA20组、SEA40组和EPI组细胞凋亡率升高,OD值降低,MRP1、LRP蛋白水平降低,Topo-Ⅱ蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与EPI组比较,SEA40+EPI组细胞凋亡率升高,OD值降低,MRP1、LRP蛋白水平降低,Topo-Ⅱ蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。体内实验结果表明,与对照组比较,SEA药物组和EPI药物组裸鼠肿瘤体积缩小,PCNA蛋白水平降低、cleaved caspase-3蛋白水平升高,SEA药物组MRP1水平降低,EPI药物组MRP1水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与EPI药物组比较,SEA+EPI组裸鼠肿瘤体积缩小,MRP1、PCNA蛋白水平降低,cleaved caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SEA可通过抑制膀胱癌5637细胞增殖,诱导细胞凋亡,下调MRP1、LRP蛋白表达,上调Topo-Ⅱ蛋白表达,抑制裸鼠移植瘤肿瘤生长,从而增强对EPI的敏感性。

摘要： 目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocate-chin-3-gallate,EGCG)对卵巢癌移植瘤生长的影响及可能的机制.方法 将卵巢癌裸鼠移植瘤分成5组,给予不同浓度的EGCG(10,30,50 mg·kg-1)干预,阴性对照组(NC)给予生理盐水(0.2 mL/只),阳性对照给予紫杉醇(Paclitaxel)(5 mg·kg-1).肝脏组织进行HE染色.实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和Western blot方法 检测裸鼠移植瘤组织中血管生成因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nu-clear antigen,PCNA)的mRNA水平和蛋白水平的表达.结果 EGCG可以抑制移植瘤的生长以及VEGF和PCNA的表达(P<0.05).肝脏切片结果 显示,紫杉醇组肝细胞核固缩,肝小叶之间出现明显间隙,而EGCG高剂量(50 mg·kg-1)组无明显变化.结论 EGCG抑制卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤的生长,其可能机制与抑制VEGF和PCNA的表达有关.

摘要： 目的 探讨下调RACK1 基因表达对口腔鳞癌细胞生长及放射敏感性的影响.方法 构建RACK1基因的shRNA载体,通过脂质体转染技术将其转入口腔鳞癌HSC-3细胞,G418筛选得到稳定转染细胞.荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测细胞中RACK1mRNA和RACK1 蛋白表达水平;CCK8实验检测细胞生长能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;克隆形成实验检测下调RACK1 表达联合X射线照射对细胞增殖能力的影响.构建裸鼠移植瘤模型,观察下调RACK1 基因表达联合X射线照射对口腔鳞癌的生长抑制作用.结果 RT-PCR和Western blot结果显示转染后HSC-3细胞RACK1mRNA相对表达量明显降低(P＜0.05),RACK1 蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).CCK8实验结果显示下调RACK1 表达可抑制HSC-3细胞生长(P＜0.05),联合X射线照射使细胞凋亡率明显升高(P＜0.05),外侵袭穿透细胞数显著减少(P＜0.05).克隆形成实验结果显示shRACK1组的存活分数低于对照组,放射增敏比为1.37(D0值比).裸鼠移植瘤实验显示shRACK1组照射后瘤体生长缓慢,瘤体体积减小幅度低于对照组(P＜0.05),瘤体质量低于对照组(P＜0.05).结论 下调RACK1 表达可以增强口腔鳞癌细胞的放射敏感性,为提高口腔鳞癌放射敏感性研究提供新思路.

摘要： 目的 探讨lncRNA UCA1通过调控miR-873-5p表达对体外培养的胶质瘤SHG-44、U87、U251细胞放射敏感性的影响.方法 采用克隆形成实验检测X线照射0、2、4、6、8 Gy SHG-44、U87、U251细胞存活情况,qRT-PCR检测SHG-44、U87、U251细胞中UCA1基因表达.以放射抵抗的U87、U251细胞为研究对象,沉默UCA1表达、过表达miR-873-5p后用克隆形成实验及流式细胞术检测细胞存活分数和细胞凋亡率.双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR检测验证UCA1和miR-873-5p的靶向关系.结果 UCA1在U87、U251细胞中表达上调.沉默UCA1或过表达miR-873-5p可抑制U87、U251细胞存活,并促进细胞凋亡.miR-873-5p是UCA1靶基因,UCA1可负性调控miR-873-5p1的表达.抑制miR-873-5p表达可逆转沉默UCA1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响.沉默UCA1增加射线对胶质瘤细胞U251移植瘤的抑制作用.结论 沉默UCA1通过上调miR-873-5p表达,抑制胶质瘤细胞存活并促进其凋亡,从而提高胶质瘤细胞放射敏感性.

摘要： 目的 探讨Numb基因与前列腺癌发生发展的关联性及其与p53、Notch信号通路之间的关系.方法 通过构建Numb过表达质粒,转染人PC-3细胞(CRPC细胞),建立稳转细胞株并验证,通过CCK-8检测肿瘤细胞的增殖水平;通过免疫印迹检测过表达Numb后对细胞中p53与Notch1的表达影响;将PC-3细胞植入裸鼠皮下,建立人去势抵抗性前列腺癌裸鼠移植瘤模型;计算并绘制肿瘤的生长曲线,通过流式细胞技术检测细胞的生长周期,并对移植瘤进行病理鉴定.结果 过表达Numb可抑制PC-3细胞增殖水平.过表达Numb可抑制PG-3细胞中Notch1表达、促进p53的表达.过表达Numb可抑制裸鼠种植瘤的生长,主要是通过减少PC-3细胞中S期细胞比例,并且免疫组化也证实过表达Numb可抑制肿瘤中Notch1表达并促进p53表达.结论 Numb基因的过表达会促进抑癌基因p53的激活以及癌基因Notch表达下调,抑制前列腺癌的发生发展.

摘要： 目的:探讨绒毛膜癌裸鼠移植瘤模型中的成瘤情况,以及CD105及相关蛋白在移植瘤中表达水平与化疗耐药的相关性。方法:将90只健康BALB/c裸鼠随机分为3组JEG-3细胞(野生型)、JEG-3/CD105 OE(过表达型)与JEG-3/shCD105(敲减表达型),每组30只,建立CD105表达相关的绒癌裸鼠移植瘤模型。甲氨蝶呤单药化疗5天后,比较野生型、过表达型和敲减表达型中各化疗组和对照组移植瘤的质量及体积,并计算抑瘤率。Western blot法和免疫荧光法检测各组裸鼠移植瘤中CD105、BMP9及Smads蛋白水平,ELISA法检测各组裸鼠血清中CD105的水平。结果:各型移植瘤成瘤率均为100%。野生型移植瘤的生长速度均慢于过表达型而快于敲减表达型,差异有统计学意义(P<0.05)。野生型、过表达型、敲减表达型移植瘤的生长抑制率分别为(42.23±2.33)%、(31.03±5.76)%和(56.00±3.15)%;过表达型移植瘤对化疗的耐药性高于野生型、敲减表达型移植瘤,差异有统计学意义(P<0.05)。野生型移植瘤中CD105、BMP9表达水平均低于过表达型而高于敲减表达型,差异有统计学意义(P<0.05)。野生型、过表达型、敲减表达型移植瘤裸鼠血清中CD105浓度分别为(3356.27±453.19)pg/mL、(3661.90±471.09)pg/mL和(3226.91±471.10)pg/mL,过表达型裸鼠血清CD105浓度高于野生型和敲减表达型,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在裸鼠移植瘤模型中证明了移植瘤体中CD105、BMP9表达水平、血清中CD105表达水平与移植瘤的耐药程度具有一致性,为后续绒癌裸鼠移植瘤的耐药性机制研究奠定了基础。

摘要： Wilms'Tumor(肾胚瘤)是一种较为常见的儿科恶性实体肿瘤,加5﹪～25﹪的肾胚瘤患者发生WT-1基因的改变.实验中建立了肾胚瘤的裸鼠移植瘤模型,通过RT-PCR扩增胎儿肾胚瘤和裸鼠移植瘤cDNA并进行序列分析,结果表明建立的肿瘤模型第一代成瘤率为80﹪,第二代为40﹪;扩增产生两个基因片段,其大小分别为402bp和934bp;前两代Wilms'Tumor裸鼠移植瘤cDNA序列没有发生变化.此肿瘤模型可用于肾胚瘤病理研究、化疗药物的筛选或者通过裸鼠移植瘤方法建立肾胚瘤细胞系.

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种人绒毛膜癌裸鼠原位移植瘤模型的构建方法，包括步骤：S1.培养人绒毛膜癌JAR细胞：S2.选取雌性裸鼠，于裸鼠右侧腹股沟部位注射人绒毛膜癌JAR细胞悬液200ul；待肿瘤生长至体积达到2cm

摘要： 本发明公开了一种以放线菌素FGR制备用于治疗人宫颈癌细胞Hela裸鼠皮下移植瘤的药物的应用，所述放线菌素FGR的给药剂量为每kg裸鼠体重0.05‑0.2g。本发明的有益效果为：因体外实验具有一定的局限性，本发明以放线菌次级代谢产物抗癌作用为主旨，对放线菌素FGR进行深入研究，为进一步研究放线菌素FGR在动物体内是否同样具有抗癌功效，本发明将放线菌素FGR运用到人源宫颈癌细胞(Hela)裸鼠异种移植瘤模型中，密切监视记录裸鼠体重、饮食、饮水、瘤体直径及体温等一般生长发育情况，计算裸鼠体重增长率肿瘤体积，相对肿瘤体积、抑瘤率，裸鼠瘤体及脏器做切片，HE染色及透射电镜切片染色，综合衡量放线菌素FGR在患瘤裸鼠体内的效果。

摘要： 本实用新型公开了一种用于研究eIF3b对裸鼠乳腺癌移植瘤抑制作用的接种器，包括注射器，注射器包括针筒、沿针筒内壁滑动的活塞，活塞的上端设置有内部中空的第一推杆，针筒前端的出液口可拆卸连接有接种针头，第一推杆伸出针筒一端的上方滑动连接有伸到第一推杆内的第二推杆，活塞的下端设置有推液柱，贯穿推液柱的下端向上开设有穿过活塞上端的滑孔，第二推杆的下端设置有穿过滑孔的滑针，第一推杆的上端设置有第一压片，第二推杆的上端设置有第二压片，针筒的外壁滑动连接有沿其长度方向滑动且可拆卸的指托。本实用新型一个人就能完成接种工作，在接种时不仅能接种细胞悬液，还能接种肿瘤组织，且不会发生肿瘤组织堵塞接种针头的情况。

摘要： 本实用新型涉及动物试验技术领域，具体是涉及一种裸鼠肺癌皮下移植瘤接种固定装置，主体为无顶面和底面的中空长方体，在四个侧面的连接处设置有滑杆；在主体内部沿水平面方向设置有固定板；在主体的顶面通过滑杆滑动连接有上固定台，上固定台与固定板和主体的四个侧面共同构成大小可调的上室舱；在主体的底面通过滑杆滑动连接有下固定台，下固定台与固定板和主体的四个侧面共同构成大小可调的下室舱；在主体的前侧面与固定板同水平面处开设有裸鼠颈部吻合口；在主体的后侧面与固定板同水平面处开设有裸鼠尾部吻合孔。本实用新型结构新颖，简单实用，可以有效解决现有技术中对裸鼠肺癌皮下移植瘤接种多方位注射的操作繁琐问题。

摘要： 本发明公开了Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系及裸鼠移植瘤模型构建方法。一种Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系，保藏名为Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系GIST‑1210，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号:CCTCC NO:C201502。由Imatinib耐药的胃肠道间质瘤（GIST）组织行原代细胞培养,建立了GIST‑1210耐药细胞系。倒置显微镜下呈互不重叠的单层，细胞生长呈成纤维细胞状，为长梭型。GIST‑1210在药物浓度在0.05‑3µM之间时对细胞系的生长基本没有明显影响，3‑10µM时受到轻度影响。GIST‑1210耐药移植瘤主要由上皮样细胞组成，免疫组化CD117阴性表达。荧光原位杂交（FISH）结果显示GIST‑1210细胞未见KIT或PDGFRA基因扩增。本发明通过建立胃肠道间质瘤Imatinib耐药的细胞系作为平台来揭示GIST的耐药机制、逆转耐药以及开发和评价新的抗癌药物等。

摘要： 本发明公开了一种Gleevec耐药的胃肠道间质瘤细胞系及其方法及裸鼠移植瘤模型。由Gleevec耐药的胃肠道间质瘤（GIST）组织行原代细胞培养,建立了GIST-916耐药细胞系。GIST-916细胞系有以下特诊：倒置显微镜下呈互不重叠的单层，细胞生长呈成纤维细胞状，为长梭型。GIST-916对Gleevec具有较强的耐药性，在药物浓度在0.05-3μM之间时对细胞系的生长基本没有明显影响，3-5μM时受到轻度影响。GIST-916细胞系包含KIT基因exon11？V559D原发突变和exon13？V654A继发突变。GIST-916耐药移植瘤呈混合细胞型，部分区域可见横纹肌肉瘤分化，横纹肌肉瘤分化区域CD117阴性表达，但是Desmin弥漫阳性表达。本发明通过建立胃肠道间质瘤Gleevec耐药的细胞系作为平台来揭示GIST的耐药机制、逆转耐药以及开发和评价新的抗癌药物等。

摘要： 本发明公开了Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系及裸鼠移植瘤模型构建方法。一种Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系，保藏名为Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系GIST-1210，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC？NO:C201502。由Imatinib耐药的胃肠道间质瘤（GIST）组织行原代细胞培养，建立了GIST-1210耐药细胞系。倒置显微镜下呈互不重叠的单层，细胞生长呈成纤维细胞状，为长梭型。GIST-1210在药物浓度在0.05-3μM之间时对细胞系的生长基本没有明显影响，3-10μM时受到轻度影响。GIST-1210耐药移植瘤主要由上皮样细胞组成，免疫组化CD117阴性表达。荧光原位杂交（FISH）结果显示GIST-1210细胞未见KIT或PDGFRA基因扩增。本发明通过建立胃肠道间质瘤Imatinib耐药的细胞系作为平台来揭示GIST的耐药机制、逆转耐药以及开发和评价新的抗癌药物等。

摘要： 本发明公开了一种Gleevec耐药的胃肠道间质瘤细胞系及其方法及裸鼠移植瘤模型。由Gleevec耐药的胃肠道间质瘤（GIST）组织行原代细胞培养,建立了GIST-916耐药细胞系。GIST-916细胞系有以下特诊：倒置显微镜下呈互不重叠的单层，细胞生长呈成纤维细胞状，为长梭型。GIST-916对Gleevec具有较强的耐药性，在药物浓度在0.05-3μM之间时对细胞系的生长基本没有明显影响，3-5μM时受到轻度影响。GIST-916细胞系包含KIT基因exon11V559D原发突变和exon13V654A继发突变。GIST-916耐药移植瘤呈混合细胞型，部分区域可见横纹肌肉瘤分化，横纹肌肉瘤分化区域CD117阴性表达，但是Desmin弥漫阳性表达。本发明通过建立胃肠道间质瘤Gleevec耐药的细胞系作为平台来揭示GIST的耐药机制、逆转耐药以及开发和评价新的抗癌药物等。

摘要： 本发明涉及动物模型制作技术领域，特别是涉及一种制作裸鼠移植瘤模型的方法，包括如下步骤：选择4～6周龄的裸鼠，在无菌条件下向其接种肿瘤细胞，其中肿瘤细胞的接种量为(0.1～2)x107/200ul/只；种瘤后采用免疫抑制剂加速瘤体生长，其中免疫抑制剂的添加量为(1～2)mg/天/只；继续培养至少5天，即得裸鼠移植瘤模型。本发明解决现有技术中裸鼠移植瘤模型的成瘤成功率较低的问题。本发明的裸鼠移植瘤模型通过多个过程控制，既能拓宽接种种瘤的类型范围，也能提高接种瘤体的成功率。

摘要： 本发明涉及动物模型的构建领域，具体是一种人源黑素瘤细胞A375/DR5稳转株裸鼠移植瘤模型的构建方法及其应用。本发明通过构建人源黑素瘤细胞A375/DR5稳转株裸鼠移植瘤模型，改善原有动物模型中DR5表达差异性大，重现性低，靶向评价困难等问题，为以DR5为靶标的靶向药物评价提供理想的实验动物平台，提高恶性黑素瘤靶向药物临床前研究的可靠性及有效性，具有一定的实际应用价值。也可为其他肿瘤的实验动物研究和抗肿瘤靶向药物的评价提供研究思路和实验依据，具有重要的科学意义。