裂解酶

摘要： 透明质酸酶能够将透明质酸聚糖降解成具有抗氧化等生物活性的低分子量寡糖。微生物来源透明质酸酶具有酶学性质多样和易于重组表达等特点,是开发透明质酸酶的研究热点。通过基因组测序获得一个潜在的金黄色葡萄球菌来源透明质酸裂解酶基因hylS,将其进行了大肠杆菌BL21(DE3)异源重组表达,并对重组酶进行了酶学特性和酶解产物抗氧化性分析。纯化后的重组酶rHylS的最适pH和温度分别为5.0和45°C;专一性降解透明质酸,比活是(1.6×10^(5)±5.4)U/mg;降解透明质酸产生低分子量的不饱和寡糖,属于内切透明质酸裂解酶;酶解产物对ABTS、DPPH、超氧阴离子和羟自由基清除能力显著高于未酶解的高分子量透明质酸,且与浓度呈正相关。金黄色葡萄球菌来源的透明质酸裂解酶HylS酶学性质优良,可用于生产具有抗氧化性低分子量的不饱和透明质酸寡糖。

摘要： 随着抗生素的广泛使用,伴随产生的耐药菌株被相继报道。耐药菌的感染已经成为国内外关注的重点问题,因此急需寻找新的治疗方法。而新型抗生素的研发不仅费时费力,若使用不当还会引起一轮新的耐药基因的产生。此时,噬菌体因为它的特异性、高效性和易获取等优点重新受到人们的关注。与抗生素杀菌机制不同,噬菌体通过侵入宿主菌释放特殊酶类从而裂解细菌结构并杀死宿主菌。噬菌体对清除生物膜也有一定的作用,也不容易产生耐药突变。但有研究显示噬菌体存在抗菌谱过窄,同时可能携带并传播耐药基因,甚至可能引起机体的免疫反应等问题。本文对噬菌体的发现、感染机制、优缺点及应用前景等方面展开讨论。

摘要： 玉米大斑病在美洲、欧洲、亚洲和大洋洲等冷凉玉米种植区都可发生,流行年份常常造成大面积减产,有时还会加重玉米根腐、茎腐等病的发生和危害程度。研究玉米大斑病菌高效原生质体的制备是防治工作的关键。玉米大斑病菌在无性生长过程中迅速产生黑色素,使原生质体难以分离。测试不同浓度的细胞壁降解酶纤维素酶和蜗牛酶的酶组合,判断不同温度、菌龄、培养基对原生质体分离效果的影响。结果表明,菌株的培养形态和菌丝的生长状态显著影响原生质体的分离效率,20 mg/mL纤维素酶+20 mg/mL蜗牛酶混合酶液在26°C下能够有效分离玉米大斑病菌的原生质体。

摘要： 变异链球菌作为主要致龋病原菌之一,其在牙菌斑生物膜中的过度增殖,是龋病发生发展的重要原因。细菌病毒——噬菌体可特异性感染细菌并有效降解细菌生物膜,因此变异链球菌噬菌体可能用于防治龋病。基于噬菌体的疗法已在多个领域进行临床应用,但变异链球菌噬菌体在龋病中的应用仍处于探索阶段。本文对变异链球菌噬菌体在龋病防治方面的应用进行综述,旨在为龋病的临床预防工作提供新的思路。文献复习结果表明,活噬菌体制剂具有特异性强、亲和力高以及安全性良好的优点,但由于其结构较不稳定,可以通过冻干、喷雾干燥、添加稳定性增强剂等方式,或将噬菌体并入软膏、可生物降解聚合物基质或微粒中加工成较稳定的制剂,在一定程度上提高稳定性;噬菌体产生的裂解酶可以消化细菌细胞壁,从而释放组装好的噬菌体颗粒,其在裂解生物膜中也同样表现优异;通过噬菌体展示技术筛选出针对致龋病原体的抗原结合片段库,利用抗原结合片段的被动免疫也可达到防治龋病的目的。然而,噬菌体的宿主范围狭窄,因此在临床龋病防治工作中可以通过噬菌体联合传统治疗或其他药物使用,或使用多种噬菌体的鸡尾酒治疗。

摘要： 近年来由于抗生素的滥用,细菌耐药已成为当前临床感染治疗面临的严峻问题,为解决细菌耐药的问题,科学家们再次把目光转移到被人们质疑甚至遗忘的噬菌体疗法上。噬菌体疗法通过噬菌体这种特殊的病毒及其衍生物可以裂解细菌治疗病原菌感染。噬菌体疗法在细菌耐药性日益严重的今天展现出了其独特的抗菌优势,是目前治疗细菌性感染特别是耐药菌的研究热点。本文对传统的常规噬菌体疗法以及以常规噬菌体疗法为基础演变而来的各种疗法进行了介绍,并分析了他们的优势和缺陷。

摘要： 变异链球菌作为主要致龋病原菌之一,其在牙菌斑生物膜中的过度增殖,是龋病发生发展的重要原因.细菌病毒——噬菌体可特异性感染细菌并有效降解细菌生物膜,因此变异链球菌噬菌体可能用于防治龋病.基于噬菌体的疗法已在多个领域进行临床应用,但变异链球菌噬菌体在龋病中的应用仍处于探索阶段.本文对变异链球菌噬菌体在龋病防治方面的应用进行综述,旨在为龋病的临床预防工作提供新的思路.文献复习结果表明,活噬菌体制剂具有特异性强、亲和力高以及安全性良好的优点,但由于其结构较不稳定,可以通过冻干、喷雾干燥、添加稳定性增强剂等方式,或将噬菌体并入软膏、可生物降解聚合物基质或微粒中加工成较稳定的制剂,在一定程度上提高稳定性;噬菌体产生的裂解酶可以消化细菌细胞壁,从而释放组装好的噬菌体颗粒,其在裂解生物膜中也同样表现优异;通过噬菌体展示技术筛选出针对致龋病原体的抗原结合片段库,利用抗原结合片段的被动免疫也可达到防治龋病的目的.然而,噬菌体的宿主范围狭窄,因此在临床龋病防治工作中可以通过噬菌体联合传统治疗或其他药物使用,或使用多种噬菌体的鸡尾酒治疗.

摘要： 为探索应用于治疗奶牛乳腺炎的噬菌体及裂解酶,从上海某奶牛场污水样品中分离、纯化金黄色葡萄球菌的裂解性噬菌体,分析其生物学特性.采用双层琼脂平板法分离、纯化噬菌体,观察噬菌斑特征;通过电镜观察噬菌体形态特征;测定其裂菌谱、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性,并原核表达相关的裂解酶.结果显示:本研究分离、纯化得到一株噬菌体,命名为vB_SauM_YNP1(YNP1);透射电镜观察YNP1的头部呈二十面体结构,具有收缩性尾部,尾部的末端具有清晰的尾丝以及暴露出的尾管,属于肌尾噬菌体科;该噬菌体的潜伏期为10 min,暴发期为50min,裂解量为71;最佳感染复数为1,能够高效裂解引起奶牛乳腺炎的MRSA菌株,可形成圆形、透明、边缘整齐的噬菌斑,效价为109PFU/mL;基因组测序和比对结果表明,YNP1全基因组全长约为143.5 kb,(G+C)％含量为30.80％;YNP1的基因组中具有编码细菌细胞壁水解酶(裂解酶)的基因,通过原核表达,得到该裂解酶,命名为LysYNP1,平板裂解实验证实该裂解酶能够高效杀死奶牛乳腺炎耐药菌株.结果表明,噬菌体及裂解酶的高效裂菌特性使其在临床治疗奶牛乳腺炎方面具有广阔的应用前景.

摘要： 近年来,随着抗生素的滥用,导致多重耐药性菌株出现的频率加快.因细菌感染导致死亡的人数逐年增多,人类健康面临巨大挑战,因此研制新型抗菌药物刻不容缓.噬菌体裂解酶因其高效的杀菌能力及高度的宿主专一性而成为新一代抗菌制剂的候选之一.其是一种细胞壁水解酶,在双链DNA噬菌体复制后期被合成,通过水解细胞壁肽聚糖上的化学键,从而裂解细菌细胞壁,释放出子代噬菌体.本文系统地介绍了噬菌体裂解酶的研究进展,为相关裂解酶抗菌药物的研发做出有益探索.

摘要： 食源性疾病引发的食品安全问题可对人类健康造成严重危害,其中微生物致病菌是引起食源性疾病的最主要因素,近年来国内外由微生物致病菌引起的食品安全事件频发,受到世界各国的高度关注.食品工业中传统防治食源性致病微生物的方法虽可保证微生物方面的安全,但是存在化学防腐剂具有副作用、天然防腐剂抗微生物活性较弱以及大规模抗生素使用带来耐药性等问题,使寻求新的杀菌技术迫在眉睫.噬菌体裂解酶是双链DNA噬菌体复制后期表达,能够裂解细菌细胞壁释放子代噬菌体的一种蛋白水解酶.随着近些年针对噬菌体及其产物展开的研究不断深入,噬菌体裂解酶凭借高度特异性、不影响正常菌群等特性,从治疗人类耐药感染发展到应用于控制污水处理、水产养殖、动物饲料等多个领域中的细菌污染,成为了包括食品安全在内多种应用中有效的抗微生物制剂.

摘要： 噬菌体裂解酶由于生理功能,在医学方面具有广泛用途,本文通过研究噬菌体的生理、其裂解酶灭菌机制,以及利用大肠杆菌为原料进行培养与富集,运用酶的固定化法使噬菌体裂解酶固定化在口罩中,从而增强口罩的杀菌能力、降低人体感染细菌的风险.

摘要： 源自猪链球菌7型溶原性噬菌体编码的裂解酶Ly7917,对猪链球菌多种血清型均具有高效裂解活性.分析显示,Ly7917具有一个N端半胱氨酸-组氨酸依赖型酰胺酶/内肽酶(CHAP)催化结构域和C端SH3b结合结构域,分别发挥催化裂解和结合细菌肽聚糖靶位的功能,但其具体的底物识别和催化机制并不清楚.本文将高度纯化、浓缩后的Ly7917蛋白采用座滴式气相扩散法进行结晶和高通量筛选，成功获得高质量的Ly7917全酶晶体，进而基于上海同步辐射光源(SSRF) BL19U1线站采集、获得完整的衍射数据，衍射质量达1.9 (A)。通过SAD解析相位、phenix精修和coot调校等技术与方法，成功解析了Ly7917的三维晶体结构(PBD code:5D74)，发现一个单晶胞体中含有两个Ly7917分子。在此基础上，成功获得Ly7917与肽聚糖通用底物MDP水解产物的复合物晶体并完成解析(PBD code:5D76)，衍射质量达2.5 (A)。通过解析发现，Ly7917依赖其结合结构域SH3b上的核心氨基酸176A和180R识别并结合肽聚糖靶位，进而基于14Q和17N的辅助将底物递呈至裂解酶活性中心(26C)，发挥裂解酶对底物的切割功能，研究显示，Ly7917主要发挥酰胺酶活性，裂解肽聚糖底物中乙酰胞壁酰与L-丙氨基之间的酰胺键。研究结果为进一步发现、改造和应用噬菌体裂解酶开展临床抗菌研究提供了理论依据。

摘要： 本试验旨在初步探究裂解酶SALy102在小动物临床应用的疗效.试验中纳入皮肤原发或伴发有细菌感染的19只患犬身上的共32处皮损,分为三组:试验组(裂解酶SALy102凝胶)、对照组①(可鲁复合溶葡萄球菌酶凝胶)和对照组②(0.5％甲硝唑溶液)进行治疗.经统计学分析后得出结论:试验组经治疗后总有效率达90.9％,高于对照组①(72.7％),且与对照组②(50.0％)差异显著(P＜0.05).试验中未见不良反应.说明裂解酶SALy102外用治疗皮肤细菌感染效果明显,是一种安全高效的抗菌药物,具有推广应用价值.

摘要： 由于抗生素的广泛使用,近些年来病原菌耐药性的产生这一问题越来越严重.目前人们重视这一问题,并且开始着手于寻找一种新型高效可替代性的药物来解决细菌耐药性产生的困境.噬菌体裂解酶作为一种新型的治疗药物得到了研究人员的重视.裂解酶是噬菌体在感染宿主细菌末期表达的蛋白质酶类,它通过水解细菌细胞壁的肽聚糖使细菌裂解.已有实验证明裂解酶在体外能高效且特异性地杀死细菌. 本试验通过临床分离犬皮肤感染灶病原菌并进行裂解酶SALy102对临床分离细菌抑杀试验,初步证实犬皮肤感染灶主要病原菌为伪中间葡萄球菌,且得出裂解酶SALy102对大部分伪中间葡萄球菌有抑杀效果,抑杀浓度在125μg/mL-250μg/mL之间,药效持续时间在2-3小时.

摘要： 为了原核表达鸭疫里默氏菌噬菌体RAP44的裂解酶基因.以噬菌体RAP44的基因组为模板,用PCR方法扩增裂解酶基因,与表达载体pGEX-6P-1连接,将重组质粒转化至Escherichia coli BL21(DE3)中表达,利用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和柱纯化表达蛋白.成功构建了表达载体pGEX-N,转化菌经IPTG诱导后成功表达出了分子量约为37 ku的可溶性重组蛋白.获得了纯化的鸭疫里默氏菌噬菌体裂解酶重组蛋白,为裂解酶的功能研究奠定了基础.

摘要： 猪链球菌2型是重要的人兽共患病原菌,临床菌株多呈严重耐药和多重耐药,应用抗生素治疗面临挑战.本研究基于生物信息学技术,在一株猪链球菌的基因组上发掘出原噬菌体编码的裂解酶基因,通过对该基因的扩增、克隆和原核表达,获得了具有裂菌活性的重组蛋白,分子量约30kDa.该酶对多重耐药的猪链球菌2型、7型、9型、马链球菌兽疫亚种以及金黄色葡萄球菌呈现高效、广谱的裂解活性,但不裂解大肠杆菌等动物正常菌群.其最适裂菌温度为37°C,对pH不敏感,在pH4.5-8.5的条件下均具有较强的裂菌活性.该酶的热稳定性高,在4°C放置1个月或-80°C反复冻融10次后仍具有高裂菌活性.在确认该酶体外裂菌活性的基础上,进而基于BALB/C小鼠模型进行了裂解酶的体内抗感染研究,分别采取腹腔注射和肌肉创口感染两种途径感染小鼠,感染所用菌株为猪链球菌2型HA9801.结果显示,在腹腔注射lOxLD50菌液后30分钟通过腹腔注射给药,裂解酶治疗组与青霉素G治疗组的小鼠存活率均为100％(10/10),而对照组存活率为40％ (4/10),另有研究发现腹腔感染后越早治疗存活率越高,感染后3小时以内进行治疗均有显著疗效,并且裂解酶治疗后3小时,与对照组相比,小鼠血液内细菌数量下降至少4个数量级,降低到最小致死浓度以下,且比抗生素具有更显著的杀菌效果.同时建立了小鼠肌肉创口感染猪链球菌的模型,在创口感染后5小时,可在血液中检测到高水平的猪链球菌,通过腹腔注射裂解酶进行治疗,可使得血液中细菌迅速消失,效力可以持续20小时左右.上述结果提示裂解酶具有良好的体内外抗猪链球菌2型感染的能力,具有开发成为新型抗菌制剂的潜力.

摘要： 金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌,能引起多种感染性疾病.前期研究表明,噬菌体裂解酶LysGH15在对金黄色葡萄球菌引起的疾病治疗方面表现出巨大潜力.为了揭示其高效裂解活性的作用机制,本研究对LysGH15进行了蛋白质结晶条件的筛选.未能筛选到LysGH15全长蛋白结晶的条件,通过小角散射分析确定了LysGH15在溶液状态下的表面构象,表明其具有很大的柔性,解释了为何无法获得其晶体.进一步对LysGH15的两个催化活性域CHAP和amidase-2片段分别进行了表达和纯化,通过晶体条件筛选,成功获得了这两个片段的蛋白质晶体,并通过优化使晶体质量得到了进一步的提高,达到了下一步x-衍射的要求.通过本研究,为后续LysGH15的CHAP和amidase-2片段三维结构的解析奠定了基础.

摘要： 本试验通过重组表达的方法获得具有生物学活性的金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LyK。以噬菌体cDNA为模板，通过PCR扩增获得编码LyK的DNA，将其定向克隆至表达载体pET-15b中，构建重组表达载体pET-1 5b-LyK，将pET-15b—LyK转入BL21(Codon Plus)进行表达。经Ni柱纯化后检测其抗茵活性。结果表明，噬菌体裂解酶对金黄色葡萄球菌(包括MRSA)均有明显的裂解活性，并且能够清除金黄色葡萄球菌的生物被膜。

摘要： 噬菌体及其裂解酶作为针对细菌性感染疾病的新型治疗制剂,可以特异性的杀灭病原菌,具有很大的应用潜力.本研究主要概述了噬菌体及其裂解酶的研究现状及其最新的应用策略.

摘要： 以PCR方法扩增得到弗氏柠檬酸细菌(Citrobacter freundii)ATCC 8090中酪氨破酚裂解酶的结构基因tpl,与带强启动子T5的表达载体pQE30T连接后构建质粒pQTTPL,并转化到E.coli M15中进行表达,所表达的酶经镍亲和柱HiTrap、Sephadex G-75凝胶过滤、凝血酶切除组氨酸标签后再通过镍亲和柱HiTrap三步纯化后,得到SDS-PAGE单一谱带的纯酶,比酶活3.32U/mg,该酶最适pH 7.8,最适温度30°C,在40°C以下和pH7.0-8.4之间保持较好的稳定性,Fe2+、Mg2+对酶有明显的激活作用,Ba2+、Pb2+、Mn2+、Ni2+、Sn2+、Co3+、Cu2+对酶活有不同程度的抑制作用.而K+和Ca2+的作用可以忽略不计,以L-酪氨酸为底物时,该酶的Km和为Vmax分别为0.25 mmol/L和2.39μmol/(mg·min)。

摘要： 本文对井冈霉亚基胺A C-N键裂解酶的分离纯化进行了研究。结果表明，井冈霉亚基胺A通过其C-N键裂解酶的催化裂解可得到糖苷酶抑制剂井冈胺和井冈霉胺。由假单胞菌6904产生的井冈霉亚基胺AC-N键裂解酶经硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose离子交换层析、SephadexG-100凝胶层析,得到了酶活较高的纯酶,提纯倍数为25.6倍。

摘要： 本发明涉及微生物技术领域，特别涉及产褐藻胶裂解酶菌株、褐藻胶裂解酶及其应用。本发明提供了一种产褐藻胶裂解酶菌株HB182678，该菌株的分类为红树林球菌属(Mangrovicoccus)，该菌所产的褐藻胶裂解酶具有较广泛的pH稳定性。本发明还提供了一种褐藻胶裂解酶及其制备方法，以及上述菌株HB182678和褐藻胶裂解酶在降解褐藻中的应用，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种褐藻胶裂解酶突变基因、褐藻胶裂解酶突变体、含该突变体的工程菌及构建方法和应用。本发明还公开利用基因工程的技术方法，将该新褐藻胶裂解酶的突变基因克隆到大肠杆菌表达载体上，获得可异源表达该酶的大肠杆菌重组菌株，用该菌株异源表达来制备的褐藻胶裂解酶突变体mAlgNJU‑03，具有降解褐藻酸钠制备褐藻酸钠寡糖并改变了寡糖聚合度的功能。本发明提供的褐藻胶裂解酶突变体mAlgNJU‑03可广泛应用于化工、农业、食品、饲料添加、医药及海藻遗传工程等领域。

摘要： 本发明涉及裂解酶和编码该裂解酶的DNA、含该DNA的载体以及用于不对称合成(S)‑苯基乙酰基甲醇的方法。根据本发明提供裂解酶，其中在相对于巴氏醋杆菌野生型修饰的蛋白ApPDC‑E469G中在位置543中的色氨酸被比色氨酸较不占空间的氨基酸置换。此外，根据本发明提供编码所述裂解酶的脱氧核糖核酸。通过本发明的裂解酶，可以由反应物苯甲醛和丙酮酸或乙醛以至少94%的对映体过量制备(S)‑苯基乙酰基甲醇。

摘要： 本发明公开一种聚半乳糖醛酸裂解酶基因、重组表达载体、菌株、聚半乳糖醛酸裂解酶及其制备方法，所述聚半乳糖醛酸裂解酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明旨在解决现有技术中聚半乳糖醛酸裂解酶的耐高温性差、表达量低、酶活低的问题。

摘要： 本发明提供了一种褐藻胶裂解酶、分泌褐藻胶裂解酶的宿主细胞及其应用，所述褐藻胶裂解酶具有(I)、(II)所示的氨基酸序列中任意一个：(I)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；(II)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过1‑20个氨基酸残基的取代、缺失或添加而获得的氨基酸序列，且获得的氨基酸序列具有褐藻胶裂解酶的活性。本发明中，将褐藻胶裂解酶全基因进行截短，降低分子量，显著提高了宿主细胞对褐藻胶裂解酶的表达量，分泌的褐藻胶裂解酶活性高、稳定性好、对褐藻酸钠的降解能力强。

摘要： 一种嗜热碱性果胶裂解酶基因、工程菌、嗜热碱性果胶裂解酶及其应用，属于生物工程技术领域。该工程菌的保藏编号为CGMCC No.11460，分类命名为大肠埃希氏菌Escherichia coli，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年9月29日。本发明主要公开嗜热碱性果胶裂解酶，最适反应温度为70°C，最适Ca

摘要： 本发明提供了一种裂解酶在制备低聚原花青素中的应用以及蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，涉及生物转化技术领域。所述裂解酶的氨基酸序列为SEQIDNO.1～5中的一种。蒸汽爆破联合裂解酶制备低聚原花青素的方法，包括以下步骤：葡萄籽用水浸泡后进行爆破处理，得到爆破样品；对所得爆破样品进行脱脂，得脱脂样品；将所得脱脂样品和提取液混合进行提取，得到高聚原花青素粗提物；将所得高聚原花青素粗提物和裂解酶混合，无氧条件下反应，得低聚原花青素。本申请所述制备低聚原花青素的方法具有高聚原花青素降解工艺简单、反应条件温和、环境污染小以及低聚原花青素得率高等优点。

摘要： 本发明涉及微生物技术领域，特别涉及产褐藻胶裂解酶菌株、褐藻胶裂解酶及其应用。本发明提供了一种产褐藻胶裂解酶菌株HB182678，该菌株的分类为红树林球菌属(Mangrovicoccus)，该菌所产的褐藻胶裂解酶具有较广泛的pH稳定性。本发明还提供了一种褐藻胶裂解酶及其制备方法，以及上述菌株HB182678和褐藻胶裂解酶在降解褐藻中的应用，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种褐藻胶裂解酶突变基因、褐藻胶裂解酶突变体、含该突变体的工程菌及构建方法和应用。本发明还公开利用基因工程的技术方法，将该新褐藻胶裂解酶的突变基因克隆到大肠杆菌表达载体上，获得可异源表达该酶的大肠杆菌重组菌株，用该菌株异源表达来制备的褐藻胶裂解酶突变体mAlgNJU‑03，具有降解褐藻酸钠制备褐藻酸钠寡糖并改变了寡糖聚合度的功能。本发明提供的褐藻胶裂解酶突变体mAlgNJU‑03可广泛应用于化工、农业、食品、饲料添加、医药及海藻遗传工程等领域。

摘要： 本发明提供了一种褐藻胶裂解酶、分泌褐藻胶裂解酶的宿主细胞及其应用，所述褐藻胶裂解酶具有(I)、(II)所示的氨基酸序列中任意一个：(I)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；(II)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过1‑20个氨基酸残基的取代、缺失或添加而获得的氨基酸序列，且获得的氨基酸序列具有褐藻胶裂解酶的活性。本发明中，将褐藻胶裂解酶全基因进行截短，降低分子量，显著提高了宿主细胞对褐藻胶裂解酶的表达量，分泌的褐藻胶裂解酶活性高、稳定性好、对褐藻酸钠的降解能力强。