表达产物

摘要： 从发病的养殖鳗鲡中分离出创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和嗜水气单胞菌(Aeromona shydrophila),提取其基因组DNA,再通过PCR法克隆创伤弧菌外膜蛋白OmpU和嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpⅡ的基因全长.采用融合PCR法体外连接这2个基因表达膜外片段的序列并成功构建了二联表达载体(pGEX-2T-Vibr-Aero-his).在大肠杆菌(BL21)的吸光度A600为0.6~1.0时,采用1.0 mmol/L IPTG诱导剂,16°C过夜诱导表达.表达产物经离心柱亲和层析纯化后获得分子量为82.2 ku的外膜蛋白.蛋白经透析复性后免疫于鳗鲡以测定其血清抗体效价.结果表明,重组蛋白注射组的鳗鲡血清抗体效价在免疫后第14天和第21天显著(P<0.05)高于PBS对照组,第28天和第42天达到极显著(P<0.01)水平.

摘要： 近日，第十八届中国专利奖揭晓，由中国农科院植保所推荐的发明专利《对鳞翅目昆虫高毒力的Bt cry1Ah基因及其表达产物（ZL200410009918．9）》（发明人：张杰、宋福平、黄大防、何康来、韩岚岚）荣获优秀奖。

摘要： 论文中一般在基因首次出现时，使用基因全名。基因的全名不用斜体，也不用希腊字母，如insulin-likegrowthfactors1（胰岛素样生长因子1）。除了首次出现显示基因全名，文中其他位置均可使用基因符号，即基因全名的缩写。

摘要： 蓝舌病病毒（Bluetongue virus，BTV）属呼肠孤病毒科环状病毒属，分子总质量是1．3×107库伦，为分子质量最大的RNA病毒。其基因组为10个节段的双链RNA：其中4个小片段（s7-s10）、3个中片段（M4-M6）、3个大片段（L1-L3），节段基因组分别编码3个非结构蛋白（NS1-NS3）、7个结构蛋白（VP1-VP7）。通过双链RNA基因组以RNA为模板进行体外翻译，同时依据各基因片段及所编码蛋白的相互关系，查清了各基因编码蛋白质和其分子质量及功能。

摘要： 最近有公司推出＂含疫苗的教槽料＂新产品,实现＂不打针也可免疫＂的功能,使得教槽料具有营养、免疫、保健功能,我们追踪该公司,被告知是使用乳酸菌作为抗原递送载体,在三种乳酸菌质粒中分别插入传染性胃肠炎、流行性腹泻和圆环病毒的抗原,并在体外表达产物后,与一些酶和肽制剂添加入教槽料中,原理就是口服了含乳酸菌、

摘要： 伴随着转基因作物种植面积的激增,关于转基因作物及其产品成分对人类健康和生态环境影响的关注度也与日俱增。由于转基因产品长期安全与否尚无定论,广大人民群众对转基因产品的生产和使用存在顾虑。转基因产品检测方法是转基因安全管理的关键因素之一,因此近年来转基因检测方法得到了快速发展和广泛应用。转基因产品的检测方法主要基于外源基因的核苷酸序列和蛋白表达产物。建立在蛋白表达

摘要： 目的：构建肺炎链球菌StkP／PhpP信号偶联中磷酸酶编码基因phpP原核表达系统，了解表达产物rPhpP磷酸酶活性及类型。方法采用PCR扩增肺炎链球菌ATCC6306株phpP基因并测序。采用常规基因工程技术构建phpP基因原核表达系统。采用SDS-PAGE及凝胶图像分析系统检查rPhpP表达情况及其可溶性，Ni-NTA亲和层析法提纯rPhpP。实时荧光定量RT-PCR检测亚致死量青霉素和头孢噻肟药物作用后phpP基因转录水平变化。采用专业生物信息学软件分析phpP基因序列中磷酸酶功能结构域及其类型。采用丝／苏氨酸磷酸酶检测试剂盒检测rPhpP水解PP2C型磷酸酶活性并测定其酶动力学参数。结果克隆的phpP基因序列与GenBank报道序列完全相同。所构建的phpP基因原核表达系统表达可溶性rPhpP。亚致死量青霉素和头孢噻肟药物作用后phpP-mRNA水平升高。 phpP基因序列中含有PP2Cc磷酸酶结构功能域。提纯的rPhpP能水解PP2C型磷酸酶底物磷酸肽[RRA（pT）VA]且活性随rPhpP浓度增加而升高，其Km 和Kcat值分别为277．35μmol／L和0．71 S－1。结论肺炎链球菌phpP基因表达产物为PP2C型磷酸酶，亚致死量青霉素和头孢噻肟可诱导phpP基因表达上调。%Objective To construct a prokaryotic expression system for expressing the phosphatase-encoding gene phpP in StkP/PhpP signaling couple in Streptococcus pneumonia ( S.pneumoniae) strains, and to further understand the phosphatase activity of the recombinant protein rPhpP.Methods The entire phpP gene of S.pneumoniae strain ATCC6306 was amplified by PCR.The PCR products were sequenced.A prokaryotic ex-pression system for expressing the phpP gene was constructed by the genetic engineering technique.The ex-pressed protein rPhpP and the solubility of rPhpP were assessed by SDS-PAGE and gel image analyzer.Ni-NTA affinity chromatography was performed to purify rPhpP.The changes of phpP gene transcription after the treat-ment with sublethal dosages of penicillin and cefotaxime were determined by real-time fluorescent quantitative RT-PCR.The functional domain in the sequence of the phpP gene and its type was analyzed by bioinformatic softwares.The activity of rPhpP in hydrolyzing the substrate of PP2C phosphotase was measured with Serine/Threonine Phosphotase Assay Kit.The enzyme kinetic parameters of rPhpP were calculated.Results The se-quence of the cloned phpP gene was identical with that reported in GenBank.The rPhpP in soluble form was ex-pressed in the constructed prokaryotic expression system.An increased expression of phpP gene at mRNA level was induced by sublethal dosage of penicillin or cefotaxime.The domain of PP2Cc type phosphatase was detec-ted in the sequence of phpP gene.The purified rPhpP protein could hydrolyze phosphopeptides [ RRA ( pT) VA], a substrate of PP2C type phosphatase, in a dose-dependent manner with Km and Kcat values of 277.35μmol/L and 0.71 S-1 ,respectively.Conclusion The protein encoded by phpP gene of S.pneumoniae was a PP2C type phosphatase.The expression of phpP gene could be enhanced by sublethal dosage of penicillin or ce-fotaxime.

摘要： 正荧光素酶是生物体在有氧气的情况下催化荧光素或者脂肪醛氧化而发光的一类酶,主要来自于自然界能够发光的生物。自从McElmy等人于1956年从萤火虫中首次提取到荧光素酶以后,各国科研人员对荧光素酶展开了广泛的研究。荧光素酶需要三磷酸腺苷(ATP)、无机分子荧光素和氧气作为底物才能产生发光反应。它是一种特殊类型的化学发光反

摘要： 旨在克隆徐淮山羊心脏型脂肪酸结合蛋白（H—FABP）基因的。DNA，探讨其生物信息学功能。通过EGFP融合蛋白对该基因亚细胞水平的表达定位，探究该基因在异种生物体内表达情况，探索制备异种转基因动物的可能性。采用反转录PCR（RT-PCR）方法克隆徐淮山羊H—FABP基因cDNA，进行生物信息学分析，构建其融合表达载体pEGFP—H—FABP。脂质体（LTX）介导基因转染山羊成纤维细胞（GEF），

摘要： 本文应用DNA重组技术把微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)子孢子抗原p23基因克隆人表达载体pMG36e当中，成功构建了具有在干酪乳杆菌(Lactobacillus caseizhang)胞浆中表达的重组载体pMG-p23。并以SDS-PAGE、Westernblotting以及IFAT试验方法，分别在破碎菌体组分和活菌体当中鉴定p23基因表达产物并确定其在细胞中表达的位置。本试验为进一步构建分泌型或锚定型干酪乳杆菌(L.casei zhang)活菌载体奠定了基础。

摘要： 以鹅细小病毒染色体DNA为模板，PCR扩增GPV主要结构蛋白VP2基因，试剂盒回收纯化VP2基因后将其克隆入以氨苄青霉素为选择压力的pGEM-T克隆载体中，再转化E.coli JM109感受态细胞，筛选阳性克隆，提取重组体，进行PCR、酶切鉴定，并对VP2基因进行序列测定;通过酶切、连接将目的基因插入诱导型分泌表达载体pSIP-409，迸一步通过电转化将上述VP2基因的诱导型分泌表达载体重组质粒DNA导入宿主菌NC8，SDS-PAGE电泳及Western blotting分析检测表达情况。结果表明成功的克隆出VP2基因，全长1764bp，并构建重组表达质粒pSIP-409-VP2，其在宿主菌NC8中得以表达，表达产物SDS-PAGE检测，可见约70kD的蛋白，Western blotting分析，该蛋白能与GPV高免血清反应，具有反应原性，从而为乳酸杆菌作为表达载体制备基因工程口服活菌疫苗的研究提供可行性操作平台。

摘要： 高尿酸血症是恶性血液病和肿瘤的并发症特别在化疗过程能造成人的肾脏功能衰竭.因为大量肿瘤细胞坏死会引起核酸释放增加,尤其是化疗后,血中核酸代谢产物尿酸明显增加,使血尿酸水平增高,而肿瘤伴发急性肾功能衰竭时,减少了尿酸排出,从而进一步加重了高尿酸血症.预防和治疗高尿酸血症的常规方法是利尿、碱化尿液和使用黄嘌呤氧化酶抑制剂(别嘌呤醇).但这些方法作用缓慢,且效果不明显.尿酸酶制剂能迅速降低血液中尿酸的浓度,解除高尿酸血症避免造成肾脏功能衰竭,故研制新型尿酸酶制剂具有重要意义.本研究旨在表达与人体相容性较好的猪尿酸酶并对表达产物进行化学修饰,为开发可用于人类高尿酸血症治疗药物打下基础.

摘要： 为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力，运用重叠延伸PcR技术，在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen，HBcAg)基因的23 1位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点，构建HBcAg修饰基因(Modified HBc，mHBc)表达质粒pET-mHBc。然后，将5epis基因定向插入到该表达质粒mHBc基因中，获得嵌合基因mHBc-5epis表达质粒pET-mHBc-5epis，并在大肠杆菌中表达。用sDS-PAGE分析，重组嵌合蛋白的分子量约为29kDa，表达量约占菌体总蛋白的47.6%;在westem-blotting试验中，重组嵌合蛋白与mDV抗体反应形成1条特异性蛋白带。将重组菌超声破碎后，用电镜观察，可见重组嵌合蛋白呈病毒样颗粒(VLP)，直径约60 nm～80 nm;用IBDV抗体夹心ELISA检测，抗原效价达到2.0×102。本研究成功构建了5epis与HBcAg嵌合基因，在大肠杆菌中高效表达了具有IBDV抗原反应性的重组嵌合蛋白并形成了VLP，具有成为颗粒化表位型IBD基因工程疫苗的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种植物花器官优势表达基因

摘要： 本发明公开了人促甲状腺素受体胞外区氨基端基因表达产物及制备方法和该产物在酶免技术中的应用。本发明的目的在于将TSHR-ecd cDNA分为三段(hTSHR-N端、hTSHR-C端和hTSHR-M段)分别进行、特别是对hTSHR-N端进行基因克隆、表达载体构建、E.coli原核表达，并进一步以此基因工程片段蛋白为抗原建立TRAb(包括TSAb、TSBAb)ELISA检测技术。为今后进一步TSHR抗原决定簇的研究开辟新的途径并最终转化为TSAb、TSBAb临床诊断试剂盒奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种人的细胞间粘附分子-1膜外I-III功能区基因表达产物及其制备方法和该产物在放免技术中的应用，属于基因工程技术领域。将ICAM-1膜外I-III功能区编码基因重组到表达型质粒pET42a中，并将其转化入原核表达菌中，纯化获得表达产物GST-ICAM-1；以此作为抗原，免疫家兔后获得兔抗人的多克隆抗体。这样制备的人的细胞间粘附分子-1膜外I-III功能区基因在原核系统的中表达产物较真核系操作简便，更易于纯化，价格便宜，产率高。在国内外率先研制出人血清sICAM-1放射免疫分析技术，并初步应用于临床检测，对于判断Graves’病的疗效、停药和复发具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种小麦分蘖性状相关基因TaTAC1、其表达产物、其表达载体及应用，以解决小麦分蘖性状相关基因缺乏的技术问题。本发明提供一种小麦分蘖性状相关基因TaTAC1，其所在基因组核苷酸序列，其全长cDNA核苷酸序列，其CDS核苷酸序列。提供一种小麦分蘖性状相关基因TaTAC1的突变型，其CDS核苷酸序列。还提供一种小麦分蘖性状相关基因编码的蛋白的氨基酸序列。设计一种由上述基因构建的表达载体，并由上述的表达载体构建的重组菌。将上述基因在制备转基因植物细胞、植物育种中应用。本发明有助于揭示小麦株型的分子遗传基础，对利用基因工程技术改良小麦株型起到重要作用，为高产小麦新品种培育提供新思路。

摘要： 本发明公开了肝脏F蛋白原核表达产物及其制备方法和该表达产物在医学检验中的应用，属于基因工程技术领域。本发明在PCR中采用鼠上游引物序列；5′P－CGG CAT ATG TAC TGG GAC TGG GAC AAA GGA CCA AAGCCT－3′鼠下游引物序列：5′P－TCC AGA CCT CAC ACC GTT－3′；人上游引物序列：5'－GTACTGGGACAAAGGACCAAAGCC－3'，人下游引物序列：5'－GATCTGGGAAGGCATCTTTACTCG－3'。其蛋白诱导表达条件是在含有氨卞青霉素和氯霉素的LB培养基中，培养含质粒pET15b－F的表达菌BL21DE3pLysS至OD

摘要： 本发明公开了一种植物花器官优势表达基因JAZ‑10、其表达产物、表达载体及应用，旨在促进当前雄性不育、种子败育植物品种的构建或筛选等技术的深入发展。本发明鉴定出一个可调控植物生殖器官发育的基因JAZ‑10，构建了其过表达载体和CRISPR/Cas9载体，并分别转化获得对应过表达株系和基因敲除植株；经花器官的显微观察表明，JAZ‑10能够调控植物子房心皮、雄蕊和柱头毛的发育，其在分子育种、杂交育种、杂种优势、种子败育植物品种的构建或筛选等方面具有重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了人促甲状腺素受体胞外区氨基端基因表达产物及制备方法和该产物在酶免技术中的应用。本发明的目的在于将TSHR－ecd cDNA分为三段(hTSHR－N端、hTSHR－C端和hTSHR－M段)分别进行、特别是对hTSHR－N端进行基因克隆、表达载体构建、E.coli原核表达，并进一步以此基因工程片段蛋白为抗原建立TRAb(包括TSAb、TSBAb)ELISA检测技术。为今后进一步TSHR抗原决定簇的研究开辟新的途径并最终转化为TSAb、TSBAb临床诊断试剂盒奠定基础。

摘要： 本发明公开了人促甲状腺素受体胞外区羧基端基因表达产物及制备方法和该产物在酶免技术中的应用。本发明的目的在于将TSHR－ecd cDNA分为三段(hTSHR－N端、hTSHR－C端和hTSHR－M段)分别进行、特别是对hTSHR－C端进行基因克隆、表达载体构建、E.coli原核表达，并进一步以此基因工程片段蛋白为抗原建立TRAb(包括TSAb、TSBAb)ELISA检测技术。为今后进一步TSHR抗原决定簇的研究开辟新的途径并最终转化为TSAb、TSBAb临床诊断试剂盒奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种人的细胞间粘附分子－1膜外I－III功能区基因表达产物及其制备方法和该产物在放免技术中的应用，属于基因工程技术领域。将ICAM－1膜外I－III功能区编码基因重组到表达型质粒pET42a中，并将其转化入原核表达菌中，纯化获得表达产物GST－ICAM－1；以此作为抗原，免疫家兔后获得兔抗人的多克隆抗体。这样制备的人的细胞间粘附分子－1膜外I－III功能区基因在原核系统的中表达产物较真核系操作简便，更易于纯化，价格便宜，产率高。在国内外率先研制出人血清sICAM－1放射免疫分析技术，并初步应用于临床检测，对于判断Graves’病的疗效、停药和复发具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30的表达载体和表达产物及其构建制备方法，涉及一种可高效表达眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R的表达载体的构建与表达。眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R的表达载体由DAMP4载体蛋白，通过linker分别连接眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30N端到C端、C端到N端基因构建PET‑28a‑DAMP4‑F‑OH30、PET‑28a‑DAMP4‑F‑OH30R。通过该表达载体在TSsetta(DE3)Chemically Competent Cell表达感受态细胞中诱导表达可溶性产物和高效纯化可溶性表达产物的方法，从而获得有活性的体外抗菌肽OH‑CATH30和OH‑CATH30R表达产物。该方法实现了抗菌肽OH‑CATH30从N‑C和从C—N的原核表达，实验流程简单易行，获得的重组抗菌肽在纯化后不经任何处理即具有明显的抑菌活性，经凝血酶酶切之后抑菌活性有了明显的提高。