蜡样芽胞杆菌

摘要： 目的调查食源性疾病事件的原因,提出针对性控制措施,为预防类似事件的发生提供依据。方法在学校、医疗机构等进行病例主动搜索,并通过食源性疾病监测系统进行搜索,开展病例个案调查、现场勘察、采集标本进行实验室检测。结果9例患者发病前72 h内共同餐次为6月6日午餐和6月7日午餐,共同食品为某营养配餐公司提供的营养午餐。6月7日午餐留样食品中,盒饭、焦溜虎皮卷、米饭中蜡样芽胞杆菌定量检测结果分别为4.0×10^(5) CFU/g、2.6×10^(5) CFU/g、3.4×10^(5) CFU/g。结论9名学生出现腹痛、腹泻、呕吐等症状的事件,判定为一起由该营养配餐公司提供的6月7日午餐引起的蜡样芽胞杆菌食物中毒。应加大对食品生产经营单位的食品安全监管力度,加强各部门的联防联控,预防食源性疾病发生。

摘要： 以某酒厂污水处理站的活性污泥为原材料,使用微生物筛选和培养技术筛选出若干株微生物,其中编号为WS-16的菌株具有降解氨氮、化学需氧量(COD)生理活性,采用不同接种量和培养时间进行WS-16降解氨氮和COD研究;并对WS-16进行微生物测序。结果证明:不同培养时间菌株WS-16降解污水中COD和氨氮更明显,氨氮从370 mg/L降解到120 mg/L,降解率50%以上;COD从1140 mg/L降解到450 mg/L,降解率50%以上,鉴定WS-16菌株为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)。

摘要： 蜡样芽胞杆菌为人畜共患的食源性条件致病菌。该菌分泌的呕吐毒素与腹泻型肠毒素可致宿主出现呕吐或腹泻的临床症状。毒素的产生及毒性的强弱受多种因素共同调控,毒性较强时可导致宿主发生死亡。目前可知该菌的毒力在逐渐增强,宿主种类也在逐渐增多。本文对蜡样芽胞杆菌的cereulide、Hbl、Nhe、CytK及HlyII等毒素的结构、功能及致病机制进行阐述,以期能为今后蜡样芽胞杆菌的研究提供理论基础。

摘要： 目的:基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系。建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性。结果:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L^(-1),纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56°C时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10^(-1)mg·L^(-1);稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。结论:建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。

摘要： 目的:基于核酸试纸条技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因的方法。方方法法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物并通过克隆转化鉴定PCR产物,建立并组装核酸试纸条,评价核酸试纸条的特异性、灵敏度和稳定性。结果:蜡样芽胞杆菌DNA浓度为300 mg·L^(-1),纯度约为1.60。PCR产物阳性条带经切胶回收、克隆转化和测序比对,与GenBank数据库中已登记的entFM相似性为100%。在pH值7.0条件下,每100μL胶体金溶液加入3.3μg链霉亲和素浓度标记,质控线浓度为1.8 g·L^(-1),检测线浓度为1 g·L^(-1)时,硝酸纤维素膜上质控线与检测线均可与PCR产物反应出现清晰的红色条带。按照最适条件组装成核酸试纸条,PCR产物6μL,样品展开液100μL,检测10 min后可观察结果。核酸试纸条特异性与电泳结果一致,仅蜡样芽胞杆菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌和沙门氏菌皆无交叉反应,为阴性结果;灵敏度检测,核酸试纸条DNA质量浓度同时降至10^(-3)mg·L^(-1)仍可准确检测,普通PCR电泳结果显示DNA质量浓度同时降至10-1mg·L^(-1)出现目的条带,核酸试纸条比普通PCR灵敏度提高100倍;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测稳定性一致。结论:建立的核酸试纸条检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因灵敏度高、特异性强且具有良好稳定性,适用于快速鉴别蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因。

摘要： 福建省福州市某居民家饲养的观赏型墨西哥钝口螈发生未明原因死亡,为探究其死亡原因,本研究通过对病死钝口螈进行临床解剖观察和细菌分离,并对分离的细菌进行生化试验、药敏试验、动物感染试验、16S rDNA序列分析;在确定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的基础上,进行毒力因子基因扩增和对蝾螈的致病性研究。结果显示,该分离菌为革兰阳性短杆菌,在LB培养基中呈现圆形灰白色菌落,在血琼脂培养基中呈现β溶血。16S rDNA基因序列分析结果显示,该菌为蜡样芽胞杆菌,毒力因子扩增结果显示,该菌携带有hblA、hblB、hblC、hblD、nheA、nheB、nheC、entFM、cytK等至少9种毒力因子;药敏结果显示,该菌对红霉素敏感,对其余测试药物表现不同程度的耐药。人工感染试验结果显示,该菌可造成蝾螈的死亡。病理切片结果显示,该细菌感染后可导致蝾螈皮肤基底层出现坏死和炎性浸润,除皮肤溃疡外,导致肝、肺、肠等多脏器变性、坏死和炎性细胞浸润。综上,本试验从墨西哥钝口螈中分离到1株蜡样芽胞杆菌,并筛选出敏感药物,从而为该类细菌病的诊断和治疗提供了参考依据。

摘要： 该研究探讨了基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪快速鉴别产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的方法。通过对标准品进行分析,重新对特征峰进行定位并测定其灵敏度,并用正交试验分析不同培养条件下检验结果的差异,用优化后的培养条件对49株野生蜡样芽胞杆菌及3株标准菌株进行特异性检验。研究表明,MALDI-TOF MS可检测到产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌中呕吐毒素相应m/z值为1175的[M+Na]^(+)和m/z值为1191的[M+K]^(+)加合物特征峰,具有较高的灵敏度(0.01μg/mL),经极差分析显示,选用MYP培养基30°C培养12 h后的菌落能获得最稳定、响应值高(>104)的检验结果;方法应用验证表明,49株野生菌株中2株含ces基因的蜡样芽胞杆菌均检出,其余未含有ces基因的菌株均未检出。该研究建立的MALDI-TOF MS检测方法能直接快速准确检出产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌,该方法检测特异性强(100%),灵敏度高(0.01μg/mL),对于食品安全事故快速精准分析研判有重要的意义。

摘要： 目的 探寻一种操作简便、结果精确的蜡样芽胞杆菌计数方法.方法 选用3种不同方法[分别为国标法、蜡样芽胞杆菌显色培养基法和BACARA(蜡样芽胞杆菌选择性培养基)法]对乳粉中蜡样芽胞杆菌质控样品及标准菌株菌悬液进行定量检验.运用配对t检验法分别比较显色培养基法、BACARA法与国标法检测蜡样芽胞杆菌计数结果一致性.结果 2种新方法与国标法计算检验结果在统计学上并无明显差异(P>0.05),一致性较好.结论 BACARA法具有快速、简便等优点.

摘要： 目的 比较血流感染(BSI)和食物中毒(FP)来源的蜡样芽胞杆菌的分子特征,建立该菌毒素携带情况和基因分型的数据库.方法 收集2015年1月—2019年6月四川省妇幼保健院住院患儿血液标本中分离的18株蜡样芽胞杆菌,以及同期来自四川省妇幼保健院和四川省疾控中心食物中毒患者粪便标本中分离的21株蜡样芽胞杆菌.采用微量肉汤稀释法检测14种常用抗菌药物敏感性;PCR检测10种毒力基因(hb l A、hb l C、hb l D、nhe A、nhe B、nhe C、ent FM、cyt K、bce T和EM1)的携带情况;ERIC-PCR进行基因分型.结果 39株蜡样芽胞杆菌对青霉素G和氨苄西林的耐药率达到95％以上.BSI来源菌株对复方新诺明的耐药率高于FP来源菌株(P<0.05).所有菌株均至少携带3种毒力基因,BSI来源菌株未见呕吐相关基因.39株蜡样芽胞杆菌分为31个基因型,呈现高度的多样性.结论 BSI和FP来源的菌株在耐药谱、毒力基因谱等分子特征方面存在差异,应加强对该菌的主动监测和溯源.

摘要： 为解决马铃薯收获后茎秆的乱堆乱放、环境污染、浪费能源问题,采用土壤环流驯化法,开展马铃薯茎秆的腐熟还田研究.试验结果表明,从马铃薯种植地块的土著微生物菌筛选出一种茎秆降解菌P-2,7d后能把马铃薯茎秆的内部纤维素完全降解,只剩余部分木质素外壳.通过马铃薯茎秆原位分解技术的推广应用,有利于实现农业的绿色与可持续发展.

摘要： 研究蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)毒力相关的基因及与宿主相互作用的机制成为热点。前期研究应用体内表达技术(IVET)鉴定了B.cereus ATCC 14579菌株侵染大蜡螟过程中特异表达的启动子20多种，其中的B1启动子在昆虫中肠中侵染的早期表达。研究表明B. cereus中的磷酸糖信号传导与运输途径涉及了5个基因的功能，表现出一种新的调控机制，对于芽抱杆菌族和梭状芽胞杆菌的宿主适应性具有重要的意义。

摘要： 矿区土壤环境中,高浓度的重金属会对微生物的生长产生毒害作用.金是一种稀有的、惰性的贵金属元素.自然界中的单质金在氯化物、硫代硫酸盐和有机配体等作用下可形成可迁移的金离子.例如,植物的根系分泌物可通过改变土壤pH或产生的有机配体使金发生溶解.而微生物则可通过氧化还原硫化物和含铁化合物,新陈代谢过程中产生的铵盐、硫代硫酸盐、氰化物、碘化物以及有机酸溶解金.金的硫代硫酸盐和氯化物是自然界中金的主要化合物.游离态的金离子对生物体具有很强的毒性.微生物可通过络合作用、外排作用或还原沉淀等作用进行解毒。这类微生物在金矿区具有明显的生态优势，可在含高浓度金离子的环境下生存繁衍。识别与金相关的微生物，了解分布在金矿区的微生物种类，深入探究微生物与金相互作用的过程及机制可探究微生物对矿床的生物指示作用，可帮助更好地探测自然环境中金的异常，进而确定金属矿的位置，为生物找矿提供理论依。

摘要： 本文拟通过对2株从酱油渣中分离并以其中糖类物质为碳源生存的蜡样芽孢杆菌进行基因组学研究,首先提取全基因组DNA并纯化后,构建质量合格测序文库进行Solexa基因组重测序,获得基因组序列后对其测序质量进行评估,利用mapping分析研究2株菌各自的变异基因,并找到其共有变异基因,并对共有变异基因进行COG注释、GO功能注释及KEGG生物学通路分析,在基因功能分析的基础上找出决定其耐盐能力的关键基因,探索其耐盐机制,为酱油渣的综合利用创造条件,同时进一步为微生物在食品发酵过程中的各种耐盐机制研究提供重要依据.

摘要： 本研究一方面首次对全国各地区的食品展开食源性致病菌污染调查，另一方面建立一种可靠的方法鉴定蜡样芽孢杆菌，同时对收集到的菌株分子分型，旨在揭示此类细菌的群体的分布规律及遗传多样性。为建立国内食品安全监控体系、保证国内的食品安全、保障人民身体健康提供重要的理论支撑。同时为其资源的开发利用奠定理论基础。

摘要： 本发明公开了一种快速鉴定蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌的核酸检测方法。本发明收集尽量多的公共数据库和前期研究中蜡样芽胞杆菌族群菌株基因组，对已有的菌株分类信息进行真实性确证分析，比较基因组和泛基因组方法挖掘公共数据库中蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)和苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)可区分靶标，利用本组实验菌株验证和筛选区分蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌的特征性分子靶标，包括选取分子靶标ispD基因序列中不同的SNP位点设计引物，引物对的筛选，分别以蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌为模板进行HRM实验，获得对应菌株的特征性熔解曲线信息，实现对蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌的准确鉴别。

摘要： 本发明公开了一种荧光原位杂交检测蜡样芽胞杆菌与枯草芽孢杆菌的方法，该方法通过菌株培养收集、洗涤、固定、杂交、洗脱和荧光显微观察等程序，能快速区分开蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌这类形态相似的菌株，本发明方法操作简单，时间短，适用于食品等领域中蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的快速检测鉴定，为食品行业提供一定的技术方法支持。

摘要： 本发明公开了一种快速鉴定蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌的核酸检测方法。本发明收集尽量多的公共数据库和前期研究中蜡样芽胞杆菌族群菌株基因组，对已有的菌株分类信息进行真实性确证分析，比较基因组和泛基因组方法挖掘公共数据库中蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)和苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)可区分靶标，利用本组实验菌株验证和筛选区分蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌的特征性分子靶标，包括选取分子靶标ispD基因序列中不同的SNP位点设计引物，引物对的筛选，分别以蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌为模板进行HRM实验，获得对应菌株的特征性熔解曲线信息，实现对蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌的准确鉴别。

摘要： 本发明公开了一种基于MALDI‑TOFMS的蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌快速鉴定方法。它是以50S核糖体蛋白L30、50S核糖体蛋白L31typeB和30S核糖体蛋白S20作为特征蛋白。本发明利用蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌的全基因组测序信息指导MALDI‑TOFMS特征峰的筛选和鉴定，获得能准确区分蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌的MALDI‑TOFMS特征峰，结果准确可靠，为MALDI‑TOFMS区分近缘物种提供思路。

摘要： 本发明公开了一种荧光原位杂交检测蜡样芽胞杆菌与枯草芽孢杆菌的方法，该方法通过菌株培养收集、洗涤、固定、杂交、洗脱和荧光显微观察等程序，能快速区分开蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌这类形态相似的菌株，本发明方法操作简单，时间短，适用于食品等领域中蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的快速检测鉴定，为食品行业提供一定的技术方法支持。

摘要： 本发明提出一种食品中蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的快速检测方法，步骤有：1、称取样品获得典型菌落；2、MALDI‑TOF MS检测；2.1、点样；在靶板的微孔上分别点典型菌落、PCS II标准溶液、Cereulide标准溶液各1μL，形成点样微孔，液滴干燥后，依次覆盖1μL 70％甲酸、1μL HCCA基质溶液后进行检测；2.2、参数设置；2.3、仪器校正；2.4、数据采集及分析；用flexanalysis软件进行分析，若存在m/z1175和m/z1191两个特征峰，结果为阳性，表明检测到样品中含有呕吐毒素。本发明基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析方法，直接分析培养后获得的菌株，对呕吐毒素进行定性鉴别，具有快速高效、灵敏度高和特异性强的特点。

摘要： 本发明公开了一种非诊断目的双抗夹心酶联免疫检测蜡样芽胞杆菌的方法，本发明利用合成Cu/CeO2纳米颗粒作为模拟酶，替代HRP与二抗标记(偶联)，其具有辣根过氧化物酶(HRP)活性。进一步以抗B.cereus的单克隆抗体作为捕获抗体(包被抗体)，抗B.cereus的多克隆抗体作为检测抗体，Cu/CeO2纳米颗粒作为模拟酶标记二抗，建立了B.cereus的夹心ELISA分析方法，该方法具有灵敏度高、特异型好、成本低、操作简单，其用于食品中蜡样芽胞杆菌B.cereus的快速、高通量、低成本检测。

摘要： 本发明涉及芽胞杆菌技术领域，具体公开了一种噬菌体及其应用，本发明的噬菌体为蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)，所述蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)已于2020年9月18日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 61196‑B1。本发明的噬菌体对携带多重毒力基因和多重耐药性的蜡样芽胞杆菌具有特异性裂解效果，同时具有良好的热稳定性、pH稳定性、离子浓度和有机溶剂耐受性，本发明的噬菌体可作为单一抑菌制剂或组合其他病原菌噬菌体构成抑菌制剂用于抑制蜡样芽胞杆菌的生长。

摘要： 本发明提供了一株产蛋白酶的蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus SAU‑Q1及其应用，属微生物技术领域。从白酒大曲中分离得到一株产蛋白酶的蜡样芽胞杆菌，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏号为CGMCC No.24721，保藏日期为2022年4月19日。菌株SAU‑Q1在固体培养基产蛋白酶的活力为1733.16 U/g；酶蜡样芽胞杆菌SAU‑Q1分别在90°C、pH 4.0和16%氯化钠浓度下菌体存活率依然可以达到71.31%、30.21%、22.14%。将菌株SAU‑Q1应用于白酒大曲的强化实验，试验组蛋白酶活提高了10%，试验组白酒大曲的的曲香味更浓。菌株SAU‑Q1在白酒大曲、食醋醋曲中具有良好的应用潜力。

摘要： 本发明涉及一种用于蜡样芽胞杆菌检测的试剂盒及其应用，该试剂盒包括RPA扩增反应体系和CRISPR‑Cas13a蛋白酶检测体系；其中，RPA扩增反应体系包括RPA扩增引物对，CRISPR‑Cas13a蛋白酶检测体系包括sgRNA、Cas13a蛋白和探针。本发明还提供了对应的检测方法，通过该试剂盒在恒温条件下即可实现对蜡样芽胞杆菌的检测，具有检测时间短、操作简便、检测条件温和、无需昂贵的专业仪器辅助等优点。该试剂盒和对应的检测方法具有良好的应用前景，有潜力应用于临床检测。