蛋白质芯片

摘要： 目的建立一种简便快速的一步式心血管疾病标志物蛋白质即时检测(POCT)芯片系统。方法利用光化学反应,在环烯烃共聚物薄片(COC)上合成具有抗非特异性吸附的聚乙二醇甲醚甲基丙烯酸酯(PEGMEMA)层,在接枝后的表面进行非接触式的喷墨打印,形成抗体微阵列。使用紫外光进行引发,探索了不同光照时间和不同聚合物单体浓度下改性COC薄片表面的接触角角度以及聚合物接枝密度的变化。利用原子力显微镜和红外光谱仪表征了光化学反应改性后COC薄片表面的微观形貌和化学结构,并对比了光化学反应改性前后薄片表面的非特异性蛋白吸附情况。进一步探索了合适的抗体喷墨打印浓度及辅剂条件,并在接枝后的表面打印了心血管损伤生物标志物生长刺激表达基因2蛋白(ST2)的固定型捕获抗体和荧光标记的可溶解型抗体。结果当聚合物单体的质量分数为30%,光照时长为4 min时,接触角降到最低为38.5°,接枝密度达到最大为68.47μg/cm^(2)。原子力显微镜和红外光谱仪表征均证明了PEGMEMA层的成功引入。表面接枝PEGMEMA层降低了COC薄片的非特异性蛋白吸附量。当固定型捕获抗体为80 mg/L时,固定效率最高。与不同相对分子质量的聚乙二醇(PEG)相比,海藻糖作为辅剂时可溶解型检测抗体与固定型捕获抗体的识别效率更高。当ST2为10 mg/L时,可以观察到溶解后固定斑处有检测抗体结合。结论通过光化学反应,在COC薄片表面接枝了抗非特异性吸附的PEGMEMA,在接枝后的薄片表面喷墨打印检测所需的抗体试剂,用简易快捷的方法制备形成了一种能够实现一步式检测的蛋白质芯片,可灵活应用于多种场景下心血管疾病标志物蛋白的快速检测,助力心血管精准医学发展。

摘要： 哮喘和变应性支气管肺曲霉菌病(allergic bronchopulmonary aspergillosis,ABPA)的临床表现相似,极易造成因漏诊、误诊而延误治疗.为提高这两种疾病诊断的准确性,运用蛋白芯片技术,分别检测哮喘患者、ABPA患者和正常对照受试者的血清蛋白质;经过生物信息软件分析,筛选出具有诊断价值的候选蛋白质生物标志物;利用多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)质谱和酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),对候选靶标进行单一样本扩大数量和验证;并采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,评估候选蛋白质生物标志物的诊断价值.研究发现:与正常对照组比较,哮喘组有7个差异表达蛋白质,ABPA组有15个差异表达蛋白质;与哮喘组比较,ABPA组有15个差异表达的蛋白质.MRM法的验证结果显示:与正常对照组比较,哮喘组的SERPINF2、C6和HABP2蛋白呈现显著性差异表达,ABPA组的SERPINF2和F10呈现显著性差异表达;ABPA组与哮喘组比较,CPN2和IGLL5呈现显著性差异表达.ELISA法验证结果表明:ABPA患者血清的CSF1蛋白质水平明显低于哮喘患者的,而TNFRSF10C蛋白质水平明显高于哮喘患者的.ROC曲线结果显示:与正常对照组比较,哮喘组差异蛋白质C6的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.914,敏感度为73.3%,特异性为99.9%,ABPA组F10的ROC曲线AUC为0.871,敏感度为80.0%,特异性为85.7%;与哮喘组比较,ABPA组中CPN2和IGLL5联合诊断的AUC为0.867,敏感度为86.7%,特异性为80.0%.由此可见,新筛选出的蛋白质生物标志物与哮喘或ABPA的发生发展密切相关,具有诊断与鉴别诊断的潜能.

摘要： 蛋白质组学不断发展,需要我们更新技术,以便更大规模、高效地研究蛋白质,蛋白质芯片的诞生,很好地解决了这一问题。蛋白质芯片由载体、以及载体上的固定蛋白组成,是对蛋白质进行高通量检测的新技术。由于蛋白质芯片操作简单,可同时检测多种蛋白质,且检测灵敏度高,具有较高的特异性,在科学研究领域应用十分广泛。本文从蛋白质芯片的介绍、应用、前景与展望三个方面对蛋白质芯片展开综述。

摘要： 输入性疟疾已是我国疟疾防控的主要危险因素,如何对入境人员进行疟疾快速筛查是急需解决的难题.蛋白质芯片已被广泛应用于高通量筛选和诊断,本研究尝试构建了表面等离子共振技术(Surface plasmon resonance,SPR)蛋白芯片用于恶性疟疾的快速检测.采用聚乙二醇高分子处理的特异性吸附表面,以恶性疟疾特异性抗原富组氨酸蛋白Ⅱ (Histidine-rich protein Ⅱ,HRP2)作为捕获探针,建立疟疾的微阵列芯片,并对芯片的最佳抗原固定浓度,检测的灵敏性和特异性,以及抗干扰能力进行了分析.该芯片可成功应用于恶性疟疾的筛查,具有无标记、即时快速的特点,与荧光定量PCR法相比,两种方法在敏感度和特异性方面无统计学差异.研究结果为一步研制疟疾分型鉴定蛋白质芯片奠定了基础,有利于对入境人员进行疟疾快速筛查.

摘要： 目的 探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路在白杨素抗炎抗氧化作用中的机制.方法 分别用0、5、10、15、30、60、120、240μg/mL白杨素处理RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测细胞活力.用白杨素预处理细胞2 h,加入脂多糖(100 ng/mL)分别刺激0、10、30 min,1、2、4、8、16 h,运用蛋白质芯片进行相关信号分子的筛选.用白杨素(10、30、60μg/mL)孵育细胞2 h后,加入脂多糖刺激18 h,ELISA法检测IL-6,MCP-1和TNF-α的释放量;Griess法检测NO浓度;DCFH-DA荧光探针法检测ROS水平.设立空白对照组,白杨素(60μg/mL)单独处理组,脂多糖(100 ng/mL)单独刺激组,以及白杨素和脂多糖联合处理组,RT-PCR法检测iNOS和COX-2的mRNA的表达量.分别用脂多糖(100 ng/mL),N-乙酰-半胱氨酸(NAC)(20μmol/L)或白杨素(10、30、60μg/mL)单独或共处理细胞后,用Western blot检测炎症相关通路p-AKT、p-PRAS40、p-mTOR、mTOR、p-P70S6k、p-S6RP、S6RP的表达水平.结果 白杨素剂量在60μg/mL内,对细胞活力基本无影响(P>0.05);白杨素能够降低脂多糖刺激诱导的IL-6,MCP-1,TNF-α和炎症介质NO的释放量(P<0.01),抑制iNOS和COX-2的蛋白表达量和mRNA的表达水平(P<0.01);蛋白质芯片筛选结果提示,脂多糖能够激活AKT/mTOR信号通路,而白杨素抑制其信号分子的活化,Western blot结果进一步验证了蛋白质芯片的结果(P<0.01);白杨素显著下调内源性ROS的生成;运用NAC清除细胞内ROS后,炎症蛋白iNOS和COX-2的表达量下调(P<0.05),而AKT/mTOR通路的活化被阻断(P<0.05).结论 白杨素通过抑制上游信号分子ROS的合成,进而抑制AKT/mTOR信号通路的活化,调控核糖体的翻译过程,下调促炎细胞因子和炎症介质的合成和释放,发挥抗炎作用.

摘要： 目的 探讨炎症相关因子水平与抑郁症的相关性.方法 选取2016年1月至2018年12月在首都医科大学附属北京安定医院门诊就诊的抑郁症患者91例作为抑郁症组,另选取同期从社会招募的91例健康人作为对照组.采用液相悬浮芯片技术检测受试者血浆中31种炎症相关因子的水平,比较两组间的差异,并采用受试者工作特征曲线探讨不同炎症因子对于抑郁症的诊断价值.结果 抑郁症组21.98％的患者有家族史.31种炎症相关因子只有γ干扰素诱导蛋白10和单核细胞趋化因子1水平在抑郁症组中低于对照组(P<0.05).γ干扰素诱导蛋白10和单核细胞趋化因子1联合诊断抑郁症的受试者工作特征曲线下面积为0.642(95％CI 0.561～0.723),敏感度为47.2％,特异度为80.9％.结论 抑郁症患者血浆γ干扰素诱导蛋白10和单核细胞趋化因子1明显降低,可作为抑郁症的潜在诊断生物标志物,但联合应用的诊断价值还有待进一步研究.

摘要： 目的 应用蛋白质芯片技术检测弱精子症患者精浆中的相关性生物标志物.方法 收集45例弱精子症男性患者和38例正常健康志愿者的精液样本,离心获得精浆,运用CM10芯片结合蛋白组学技术对两组精浆样本进行检测,筛查蛋白质峰,经过归一化处理,比较两组间蛋白质图谱表达差异.结果 在相对分子质量在1000-50000Da范围内,CM10蛋白质芯片上共检测到118种有差异的蛋白峰,其中4种有统计学意义(P＜0.05).弱精子症组较正常生育男性精浆蛋白质相比,弱精子症组有2处蛋白峰表达降低(P＜0.05),其蛋白质质荷比(M/Z)为6811.14、15520.4;弱精子症组较正常组有2处蛋白峰表达增高,M/Z为2760.30、14772.0.结论 弱精子症患者精浆中差异蛋白质的发现,其含量变化对探究弱精子症的发病机制具有重要意义.

摘要： 随着人类基因组计划的完成和后基因组时代的到来,利用蛋白质组学的技术手段研究各种生物学过程已经成为当前生命科学领域的一个趋势.而差异蛋白质组学是蛋白质组学研究中必不可少的部分,本文整理了差异蛋白质组学的主要研究方法和应用前景,简要概述了差异蛋白质组学研究的相关技术,如差异凝胶电泳技术、同位素代码标记技术和蛋白质芯片技术等的近期发展情况.

摘要： 本文利用生物素标记蛋白质芯片筛选乳腺癌辅助内分泌治疗敏感与耐药相关蛋白在患者血清中的差异表达,寻找可用于预测乳腺癌内分泌治疗敏感性的血清标志物.结果表明，HER-2及GFRα-2高表达可能参与了乳腺癌内分泌治疗耐药过程，检测乳腺癌患者血清中HER-2和GFRα-2的表达水平有助于及早判断乳腺癌患者对内分泌治疗的敏感性，指导临床实施个体化治疗。蛋白质芯片技术在筛查与乳腺癌的内分泌治疗敏感性存在相关性的血清学标志物方面有较好的临床应用价值。

摘要： 将表面增强拉曼散射(SERS)光谱应用于蛋白质检测、相关的药物筛选以及免疫反应等生物检测领域,目前已有大量的研究报道[1,2].其中基于SERS检测的蛋白质芯片的研究,由于其具有可观的应用前景,吸引了研究者的广泛关注.最近我们以一种高度有序的阵列结构为模板,将蛋白质嵌入其中使其形成有序的阵列,成功制备了一种基于SERS检测的蛋白质芯片基底.基于有序的蛋白质分布具有清晰的边界,我们利用微阵列结构的1 nm范围内的SERS电磁场增强特性,在边界区域检测SERS信号,从而实现了蛋白质芯片的高灵敏SERS检测.

摘要： 蛋白质芯片技术是采用微阵列方法,对样品蛋白进行高通量、高灵敏度、高特异性的分析技术，实践证明，蛋白质芯片在食品安全分析方面具有较好的应用前景。病原微生物是食品生物性污染的最主要因素，也是引发人体食源性疾病的主要原因，蛋白质芯片技术在微生物领域的应用目前主要表现在两个方面。第一，开展微生物蛋白质组学研究，揭示蛋白质作用新的机理，开发未知蛋白质资源;第二，利用已知蛋白质分子的性质，通过蛋白质与其他生物活性分子的相互作用，实现对不同微生物的检测。农产品中高农兽药残留不仅是化学性危害的主要因素，而且对人体具有潜在的慢性危害。兽药残留蛋白芯片检测系统可同时检测动物组织中的多种残留，实现了多种兽药残留的高通量快速筛查，提高了检测效率。转基因食品在取得巨大经济效益同时，其安全性问题已引起社会各界的广泛关注。利用转基因食品因含有转基因技术导入的外源基因和外源基因在受体内的表达产物，外源基因最终是以蛋白质或多肽形式得以表达，通过对蛋白质芯片设计不同探针阵列、使用特定分析方法可使该技术在此方面具有较高应用价值，是未来转基因食品安全检测的主要发展方向，不断发展和完善蛋白质芯片技术可对转基因食品进行定性检测。作为食品原料的农作物和动物等发生病害后，也会给人类带来的危害，在农业上，蛋白质芯片可用来筛选高产、抗虫、抗病、经济价值高的作物。在畜牧业，蛋白质芯片根据显色位置的不同可判断出为何种抗体阳性，从而诊断出相应的疾病。

摘要： 蛋白质芯片作为一种迫切需要的微型化、集成化、高通量、简便快速的蛋白质分析技术，自诞生至今引起了广泛而深切的关注，并已经取得了长足的研究进展。但其在实际应用中却暴露出诸多缺陷，其中一个方面就是灵敏度不足，主要原因是缺少高灵敏探针。我们应用水溶性量子点（QD）制备了一种新型蛋白质纳米探针，并将其与微流控网格技术相结合，首次构建了一种微纳集成的蛋白质芯片1。与传统的有机荧光染料探针相比，量子点纳米探针大幅度提高了蛋白质芯片的分析灵敏度，并且因为量子点探针耐光漂，检测结果可以长期保存。微流控网格技术的引入使得蛋白质阵列的构建更加简易，而且因为反应液在微通道中的流动，不仅提高了芯片的反应效率，还大幅降低了背景信号，改善了信噪比。在此基础上，利用不同尺寸量子点宽吸收、窄发射的特点，我们又构建了多色量子点纳米探针，实现了多种蛋白质标志物的多色芯片检测2。

摘要： 蛋白质芯片是继基因芯片后发展起来的生物检测技术。它的出现将从根本上改 变生物医学实验和诊断等多方面的现状，并表现了良好的前景。对蛋白质芯片的应用进展 进行了综述，同时对其存在问题进行了分析。

摘要： 用PEG化磷脂膜修饰蛋白质芯片的二氧化硅表面,通过调节PEG的含量,考察磷脂膜对蛋白非特异性吸附的抑制,以及对蛋白分子固定的影响.结果表明,经过PEG化磷脂膜修饰的二氧化硅表面,可以显著抑制蛋白的非特异性吸附,并通过功能化的PEG分子有效固定配基及其抗体.

摘要： 目的：建立一种非标记、多指标的登革热快速检测方法,应用于口岸卫生检疫的血清样本检测. 方法：采用寡聚乙二醇高分子为芯片的表面基质,以抗登革热IgM,IgG和抗登革热NS1抗体分别作为捕获探针,建立登革热的多指标微阵列芯片.采用表面等离子共振检测技术的技术手段,建立登革热的快速检测平台,并对平台的相关性能进行评估(包括特异性、灵敏度等). 结果：该技术平台在20分钟内可完成血清样本的直接检测,可以既能检测登革热早期标记物NS1,又能检测IgG和IGM.对31份血清进行检测,该技术平台的阳性检出率达到29.0％(9/31),高于PCR9.6％(3/31)和ELISA22.6％(7/31),其中PCR阳性的3份血清样本均检测到NS1标记物,而7份ELISA阳性样本中,检测出其中6份,两者的检测符合率达到85.7％. 结论：初步构建一种登革热综合性蛋白质芯片,结合SPR技术可并行检测多个项目,可为口岸登革热的快速检测提供一个有力的技术平台.

摘要： 随着人类基因组计划(HGP)的完成和蛋白质组计划(HPP)的启动，人们获得了数量巨大的基因和蛋白质信息，为了对如此庞大的信息进行全面的处理和研究，生物芯片技术应运而生。本文对生物芯片，特别是蛋白质芯片技术的发展进行了简要总结，并着重介绍了基于微孔板的蛋白质芯片技术，该技术以其成本低廉、操作简便、通量高、并行化检测等特点，在临床检验中具有很好的推广价值。

摘要： 本文就生物芯片的概念、特点、类型和在医药领域中的应用作一简单介绍，着重介绍蛋白质芯片和组织芯片。蛋白质芯片可用于寻找疾病生物学标志物、研究蛋白质相互作用、寻找药物或毒物新靶点等；组织芯片可用于基因表达分析、寻找与临床治疗及预后有关的标志物、发现新的候选癌基因或抑癌基因等。

摘要： 综述了近年来国内外聚氨酯水凝胶的研究进展,介绍了在新型给药系统、敷料、蛋白质芯片、人造关节、载体眼镜以及空气清新剂等方面的最新应用进展,展望了聚氨酯水凝胶的发展趋势.

摘要： 本发明公开了基于微孔阵列芯片的微量样本代谢组、蛋白质组和磷酸化蛋白质组多组学分析方法。本发明包括如下步骤：(1)提供微孔阵列芯片，亲水修饰；(2)将待测细胞样本置于微孔中，加入有机溶剂萃取代谢物；分析萃取液，鉴定代谢物；(3)构建仅包含蛋白质组谱和同时包含蛋白质组和磷酸化蛋白质组谱的质谱谱图数据库；(4)在萃取代谢物后的微孔中加入蛋白酶，收集消化液；对消化液进行液相色谱‑质谱分析；搜索仅包含蛋白质组谱数据库，鉴定肽段及相应蛋白质；搜索同时包含蛋白质组和磷酸化蛋白质组谱数据库，鉴定磷酸肽及相应磷酸化蛋白质。本发明利用HILIC分离原理实现代谢物和蛋白质的串联提取，建立了无需富集的磷酸化蛋白质组分析方法。

摘要： 本发明属于临床诊断技术领域，公开了一种蛋白质质控芯片的稳定剂及制备蛋白质质控芯片的方法。本发明所述蛋白质质控芯片的稳定剂包含乙烯基甲醚与马来酸单酯的交替共聚物和有机溶剂。采用本发明所述稳定剂对蛋白质质控芯片进行稳定，解决了质控芯片拖尾的现象和质控芯片常温不稳定的问题，可制备出形貌规则、稳定性好的质控芯片，且质控芯片在37°C下可至少稳定1年，2～8°C可以稳定数年。制得的形貌规则、稳定性好的质控芯片可作为参照对试剂盒进行批间控制，亦可对仪器成像系统进行定期校准。

摘要： 由下述氟树脂形成了与蛋白质或包含蛋白质的组合物接触的表面的容器及用于制造蛋白质或包含蛋白质的组合物的器材具有显著的低蛋白质吸附性，其中，所述氟树脂为选自四氟乙烯‑六氟丙烯系共聚物及四氟乙烯‑全氟烷基乙烯基醚系共聚物中的至少1种氟树脂，并且，所述氟树脂的熔点为320°C以下，所述氟树脂中的相对于每1×10

摘要： 本发明提供能减小使用了特异性地结合的物质的测定中的由肝型脂肪酸结合蛋白质引起的测定值的变动幅度的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、评价该制剂的方法、制作肝型脂肪酸结合蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。一种用使用了用10mM的氧化剂在25°C下进行1小时的氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值与使用了未进行上述氧化处理的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂的测定值的比表示的氧化变动系数设定为1.4以下的肝型脂肪酸结合蛋白质制剂、用于该制剂的肝型脂肪酸结合蛋白质、编码该蛋白质的DNA、由该DNA转化得到的细胞、该蛋白质的制造方法、评价该制剂的方法、抑制使用该制剂的测定中的测定值的变动幅度的方法、制作该蛋白质的校准曲线的方法、以及定量该蛋白质的方法。

摘要： 本发明提供一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4‑氨基安替比林、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，至少Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，至少4‑氨基安替比林包含在含有4‑氨基安替比林的部分组合物中，蛋白酶的稳定剂是使亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，氧化还原电位是包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。

摘要： 本发明提供能够以优异的安全性将蛋白质导入到细胞中的蛋白质导入方法。通过使目标蛋白质承载在由粘土矿物构成的蛋白质导入用载体上并将其添加到细胞中，可以将所述目标蛋白质导入到所述细胞内中。所述粘土矿物优选为层状粘土矿物，可以使用蒙脱石、蛭石、伊利石等。

摘要： 本发明涉及与粉碎或切断洋葱等植物时发生催泪成分的生成有关的表现出将1－丙烯次磺酸转变为催泪成分的作用的蛋白质或多肽、编码该蛋白质或多肽的DNA(催泪成分合成酶基因)、使用用于属于葱属植物的催泪成分合成酶基因分离的引物以及使用该引物分离该基因的方法、含有上述DNA的重组载体、包含含有上述DNA的重组载体的转化体、对用含有上述DNA的重组载体转化的宿主细胞进行培养制造具有催泪成分合成酶活性的蛋白质或多肽的方法、具有催泪成分合成酶活性的蛋白质或多肽、以及具有抑制具有催泪成分合成酶活性的蛋白质或多肽的mRNA翻译的功能的核酸分子。

摘要： 本发明公开了基于微孔阵列芯片的微量样本代谢组、蛋白质组和磷酸化蛋白质组多组学分析方法。本发明包括如下步骤：(1)提供微孔阵列芯片，亲水修饰；(2)将待测细胞样本置于微孔中，加入有机溶剂萃取代谢物；分析萃取液，鉴定代谢物；(3)构建仅包含蛋白质组谱和同时包含蛋白质组和磷酸化蛋白质组谱的质谱谱图数据库；(4)在萃取代谢物后的微孔中加入蛋白酶，收集消化液；对消化液进行液相色谱‑质谱分析；搜索仅包含蛋白质组谱数据库，鉴定肽段及相应蛋白质；搜索同时包含蛋白质组和磷酸化蛋白质组谱数据库，鉴定磷酸肽及相应磷酸化蛋白质。本发明利用HILIC分离原理实现代谢物和蛋白质的串联提取，建立了无需富集的磷酸化蛋白质组分析方法。

摘要： 本发明公开了一种用于检测液相蛋白质交互作用的蛋白质芯片及其制备方法和应用，其中所述蛋白质芯片是在固相载体的表面点阵固定有探针；所述固相载体为氨基十六烷硫醇和活化槐糖脂化学修饰的金箔芯片；所述探针包括受体sCD25蛋白、配体IL‑2蛋白、sCD25抗体或IL‑2抗体。本发明蛋白质芯片具有高特异性和敏感性，其可视检测限与ELISA法测得抗原的最低检测限近乎相同，且其可以实现高通量联合检测，本发明旨在研发一种新方法用于液相中两种蛋白质交互作用的检测。

摘要： 本实用新型公开了一种横向免疫印迹蛋白质芯片以及设有该蛋白质芯片的反应装置，横向免疫印迹蛋白质芯片包括固相支持物，在固相支持物的上表面按顺序依次连接设有样品垫、标记物膜、蛋白质芯片和吸水材料；反应装置包括盒体和上盖，上盖设于盒体上部，所述盒体底部设有横向槽，所述横向槽内设有横向免疫印迹蛋白质芯片。本实用新型的横向免疫印迹蛋白质芯片在使用时直接将样品加至样品垫处，样品逐渐扩散至标记物膜溶解，样品与标记物充分反应后，继续扩散至蛋白质芯片，在蛋白质芯片上与包被物反应并显示结果，该免疫印迹蛋白质芯片只需一次加样，不需要多次加样、多次洗涤等多步反应步骤，反应时间短，在5-20分钟内即可得出实验结果。