蛋白印迹法

摘要： 目的:观察夹脊电针不同时间点干预对ALS-SOD1^(G93A)小鼠发病期、运动功能及TLR4/NF-κB信号通路相关因子TLR4、NF-κB和IL-1β的影响,探究夹脊电针治疗ALS的最佳干预时间及机制。方法:将36只ALS-SOD1^(G93A)小鼠随机分为模型组、60 d夹脊电针组和90 d夹脊电针组,12只/组;选取同窝经PCR鉴定的12只ALS-SOD1^(G93A)阴性鼠作为野生组。60 d夹脊电针组和90 d夹脊电针组分别在60日龄和90日龄时将小鼠固定在无菌操作台,针刺双侧L_(1~2)、L_(5~6)夹脊穴,针刺深度2~3 mm,连接电针2 Hz、1 mA,20 min/次,2次/周,共4周;模型组和野生组在小鼠60日龄时,将小鼠固定在无菌操作台,20 min/次,2次/周,共4周,不予治疗。采用悬尾实验判定小鼠发病日龄;转棒式疲劳仪评价小鼠肢体运动功能变化;各组小鼠均于120日龄取材,HE染色观察各组小鼠腰髓前角运动神经元形态;尼氏染色观察各组小鼠腰髓前角运动神经元数量;Western Blot法检测小鼠腰髓TLR4、NF-κB及IL-1β相对表达量。结果:经治疗后,模型组与90 d夹脊电针组发病时间比较,差异无统计学意义(P>0.05),60 d夹脊电针组发病时间明显推迟(P<0.01);与野生组比较,其他各组小鼠转棒时间均降低,差异具有统计学意义(P<0.05),其中60 d夹脊电针组较模型组、90 d夹脊电针组降低时间延后,差异具有统计学意义(P<0.05);与野生组比较,各组运动神经元数量均减少,差异具有统计学意义(P<0.05),其中60 d夹脊电针组运动神经元数量较模型组、90 d夹脊电针组保留较多,差异具有统计学意义(P<0.05);与野生组比较,各组TLR4、NF-κB及IL-1β表达均增加,差异具有统计学意义(P<0.05),其中60 d夹脊电针组较模型组、90 d夹脊电针组表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:夹脊电针可以延缓ALS-SOD1^(G93A)小鼠的发病时间,改善小鼠肢体活动功能,且60日龄时的早期干预疗效优于90日龄时干预,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB介导的神经炎症有关。

摘要： 为了给非洲猪瘟的临床诊断技术和实验室研究提供物质基础,本研究以我国首次分离的非洲猪瘟病毒(ASFV) Pig/HLJ/2018株基因组为模板,扩增pA104R基因,并将其克隆至pET-30a载体,构建重组原核表达质粒pET-30a-A104R,表达并纯化重组pA104R蛋白(rpA104R),以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(MAb),并采用ELISA、western blot、间接免疫荧光法(IFA)和免疫组化(IHC)对所获得的MAb进行鉴定.结果 显示,正确构建pET-30a-A104R重组质粒,并获得大小约为12 ku的可溶性蛋白.通过间接ELISA方法筛选到2株阳性杂交瘤细胞株为4G2和4E10,并且2株MAb的重链均为IgG1,轻链为Kappa链.Western blot和IFA结果显示,MAb 4G2株能够特异性地识别ASFV pA104R蛋白和病毒感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的pA104R蛋白.IHC结果表明,MAb 4G2可以与病毒感染的阳性猪组织发生特异性反应.本研究也为ASFV基因缺失疫苗的开发提供了技术储备.

摘要： 组蛋白去乙酰化酶(HDACs)异常活化和肿瘤发生、组织发育异常密切相关.已有选择性HDAC抑制剂(HDACi)应用于临床.本实验采用HDACi筛选试剂盒进行活性追踪,从健骨中药箭叶淫羊藿70％醇提取物中分离得到了11个化合物.经质谱和核磁共振波谱分析,化合物鉴定为槲皮素(1)、牡荆苷(2)、山奈酚-3-O-a-L-阿拉伯吡喃糖苷(3)、山奈酚-3-O-β-D-木吡喃糖苷(4)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(5)、山奈酚-3-O-(6''-O-乙酰)-β-D-葡萄吡喃糖苷(6)、山奈酚-3-O-(6''-O-(E)-对-香豆酰基)-β-D-葡萄毗喃糖苷(7)、山奈酚-3-O-(2",4"-双-O-(E)-对-香豆酰基)β-D-葡萄吡喃糖苷(8)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(9)、异鼠李素-3-O-β-D-木吡喃糖苷(10)和schizandri-side(11).化合物2～11系首次从该种植物中分得.化合物1～ 10都显示了强于淫羊藿苷的HDAC抑制活性;化合物3、4和5显示了强于山奈酚的HDAC抑制活性.采用蛋白印迹法进一步观察了非毒性浓度的3、4和5对宫颈癌HeLa细胞内HDAC1～11表达的影响.结果 发现:三个化合物都能明显抑制HDAC6(抑制成骨)的表达,4同时还明显下调HDAC4/7(抑制成骨)的表达.本实验首次从箭叶淫羊藿鉴定了具有HDAC抑制作用的活性成分:无异戊烯取代的黄酮苷,特别是山奈酚-3-O-单糖苷(3～5);化合物3～5对HDAC6或HDAC4/7蛋白表达的抑制作用,为将其识别为淫羊藿药材中潜在的具有山奈酚-3-O-单糖苷结构特征的抗骨质疏松症有效成分,提供了实验依据.

摘要： 目的:检测含 Pleckstrin 同源结构域的 S1(pleckstrin homology domain containing S1,PLEKHS1)蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达,分析PLEKHS1与临床病理特征的关系,探讨其在甲状腺乳头状癌发生、发展中的作用.方法:采用蛋白质印迹法、实时定量PCR技术以及免疫组织化学SP法检测80例甲状腺乳头状癌组织及相应癌旁经病理证实的正常组织中PLEKHS1的表达情况.结果:蛋白质印迹与实时定量PCR结果显示,与癌旁正常组织相比,甲状腺乳头状癌组织中的PLEKHS1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P均＜0.05);免疫组织化学染色结果显示,PLEKHS1在甲状腺乳头状癌组织中的阳性率为80.0％(64/80),明显高于癌旁正常组织的22.5％(18/80)(P＜0.01).PLEKHS1的阳性表达与甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移有关,而与性别、年龄、肿瘤大小、病灶数目、肿瘤位于单或双侧腺叶和腺外侵犯无关.结论:PLEKHS1可能参与甲状腺乳头状癌的发生、进展,有望在甲状腺乳头状癌的早期诊断方面发挥作用.

摘要： 目的 研究姜黄素对高浓度氧(高氧)诱导的新生小鼠视网膜病变(OIR)的治疗效果及对notch通路的影响.方法 建立高浓度氧诱导的C57BL/6J新生小鼠OIR模型,姜黄素组分为高剂量(HCG)、中剂量(MCG)及低剂量(LCG)三个剂量组.按照实验分组处理各组幼鼠,视网膜组织HE染色、内皮细胞核计数、视网膜铺片评价处理后幼鼠OIR缓解情况,蛋白印迹法(WB)测定幼鼠视网膜组织中notch、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平.结果 (1)组织病理学:与对照组(CG)相比,高氧模型组(HOG)视网膜内界膜结构不完整,有大量血管内皮细胞突破内界膜,血管内皮细胞数显著增加(q=81.42,P=0.000),大血管明显变细,分支减少,行走紊乱,视网膜周边及中央可见无灌注区,周边血管密度增加,可见大量渗漏点,血管丧失放射状结构;HCG组OIR症状明显得到改善,缓解程度与阿帕替尼组(APG)组相当;(2)视网膜内皮细胞核计数:与CG组相比,HOG组突破视网膜内界膜血管内皮细胞数显著增加(q=81.42,P=0.000).与HOG组相比,低剂量组(LCG)、中剂量组(MCG)、高剂量组(HCG)个数依次减少(qLCG=27.21,qMCG=44.95,qHCG=55.93,均P=0.000),APG组与HOG组相比显著减少(q=57.39,P=0.000),差异均有统计学意义;(3)notch蛋白表达:与CG组相比,HOG组表达水平显著升高(q=28.01,P=0.000);与HOG组相比,LCG组、MCG组、HCG组notch蛋白表达水平依次下降(qLCG=10.57,qMCG=17.69,qHCG=22.36,均P=0.000),APG组表达水平与HOG组相比下降(q=22.61,P=0.000),差异均有统计学意义;(4)VEGF蛋白表达:与CG组相比,HOG组表达水平显著升高(q=25.68,P=0.000);与HOG组相比,LCG组、MCG组、HCG组表达水平依次下降(qLCG=5.49,P=0.005;qMCG=14.27,P=0.000;qHCG=18.88,P=0.000).APG组表达水平与HOG组相比显著下降(q=19.10,P=0.000),均有统计学意义.结论 姜黄素可能通过抑制notch 通路活化,降低VEGF 表达,减少血管异常增生,缓解高氧诱导的新生小鼠OIR 症状.

摘要： [目的]明确疆夜蛾Peridroma saucia Plus-C气味结合蛋白PsauOBP7在不同化学感受器官中的表达谱,解析PsauOBP7重组蛋白的气味结合特异性.[方法]通过qRT-PCR检测PsauOBP7在疆夜蛾雌蛾和雄蛾的触角、口器、足和翅中的表达谱.原核表达并纯化PsauOBP7重组蛋白,利用Western blot检测PsauOBP7在疆夜蛾不同龄期幼虫头部及成虫不同组织中的表达情况;通过荧光竞争结合实验检测PsauOBP7重组蛋白对39种气味化合物的结合能力.[结果]成功表达并纯化PsauOBP7重组蛋白.qRT-PCR及Western blot检测显示PsauOBP7表达于4-6龄幼虫头部及雌雄成虫的触角、口器、足和翅中.荧光竞争结合实验显示PsauOBP7与反-2-己烯醛的结合能力最强,Ki=1.4 μmol/L.此外,PsauOBP7与5种酯类化合物乙酸月桂酯、顺-3-己烯乙酸酯、乙酸苯乙酯、苯甲酸己酯和肉桂酸甲酯有一定的结合能力,Ki值分别为5.7,6.5,8.9,9.5和10.2 μmol/L.PsauOBP7与两种醇类化合物顺-3-己烯-1-醇和法尼醇也有较强的结合能力,Ki值分别为5.8和5.9 μmol/L.[结论]疆夜蛾Plus-C气味结合蛋白PsauOBP7表达于其幼虫和成虫的多种化学感受器官中,且能结合多种植物气味化合物,说明其在疆夜蛾寻找寄主植物过程中发挥重要作用.

摘要： 目的 根据聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)沉淀原理,结合超高速离心改进一种简便、快速的细胞外泌体分离方法.方法 采用超高速离心法、PEG6000沉淀结合超高速离心和EXO Quick试剂盒,分别提取巨噬细胞外泌体.通过透射电镜、NanoSight ZS及Nanoparticle tracker(NTA)分析外泌体的形态和粒径;蛋白印迹法鉴定细胞外泌体标志物Alix、TSG101的表达情况.结果 PEG6000沉淀结合超高速离心法获得的外泌体,其粒径分布和差速离心法相当,小于商品化的 EXO Quick 试剂盒.而外泌体表面蛋白 Alix、TSG101在3种方法提取的沉淀物中都有表达.透射电镜结果显示,3种方法均获得典型的盘状囊泡.结论 实验改进的细胞外泌体提取方法操作简洁、效率高,并且成本较低.%Aim To establish the methods for exosomes isolation from the cell culture medium based on the principle of polyethy-lene glycol (PEG) precipitation combined with ultra-high speed centrifugation. Methods Exosomes were extracted by different centrifugation, PEG6000 precipitation combined with ultra-high speed centrifugation and EXO Quick kit,respectively. The mor-phology and particle size of exosomes were analyzed by transmis-sion electron microscopy,NanoSight ZS and Nano-particle track-er(NTA). Western blot assay was used to identify if the extrac-tion were exosomes. Results According to PEG6000 precipita-tion combined with ultra-high speed centrifugation method, the exosomes were successfully isolated from the culture medium. The morphology and particle size of exosomes,the exosomes iso-lated from PEG6000 precipitation combined with ultra-high speed centrifugation were equal to those of the ultra-high speed centrifugation but smaller to EXO Quick kit. What's more, the results of transmission electron microscopy showed that the three methods had typical discoid vesicles. Conclusion The im-provement of the exosome isolation from cell culture medium is convenient,easy and cheap.

摘要： 目的 研究SCIN在上皮性卵巢癌中的表达情况,并分析其表达与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化及western blot比较SCIN在上皮性卵巢癌组织、正常卵巢组织中的表达情况.结果 SCIN在上皮性卵巢癌组织中的表达明显高于在正常卵巢组织中的表达,差异有统计学意义.SCIN的表达与患者的临床分期、分化级别、淋巴结转移、腹膜种植有关,而与年龄无关.SCIN在上皮性卵巢癌细胞中的表达灰度值显著高于在正常卵巢细胞中的表达灰度值,差异有统计学意义.结论 SCIN在卵巢癌中高表达,提示其可能参与了肿瘤的发生、发展,并有望成为卵巢癌早期诊断的标志物和治疗的靶基因.

摘要： 目的 探讨产妇子宫平滑肌组织小窝蛋白表达情况与宫缩乏力性产后出血发病的关系.方法 将剖宫产产妇分为研究组(宫缩乏力性产后出血组,n=30)和对照组(宫缩正常无产后出血组,n=30).采用免疫荧光法观察产妇子宫平滑肌细胞小窝蛋白的定位情况;采用蛋白印迹法测定产妇子宫平滑肌小窝蛋白表达水平.结果(1)两组子宫平滑肌细胞均有小窝蛋白-1、小窝蛋白-2表达.(2)研究组子宫平滑肌小窝蛋白-1、小窝蛋白-2表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 宫缩乏力性产后出血产妇子宫平滑肌小窝蛋白 -1、小窝蛋白 -2 表达水平升高,提示其可能是发病的重要因素之一.

摘要： 目的：通过观察清肝活血方及其拆方对酒精性纤维化大鼠基质金属蛋白酶和其抑制物的调控作用，探讨清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝纤维化的作用机制。rn 方法：雄性SD大鼠随机分为空白组、四氯化碳(carbontetrachloride，CCl4)组和造模组。造模组采用56度白酒、玉米油、吡唑混合物灌胃联合腹腔注射CCl4橄榄油溶液(CCl4∶橄榄油=1∶3)的方法造模型。8周后造模组随机分为模型组、清肝活血方组、清肝方组及活血方组。各治疗组分别加用相应药物(4.75、1.5、3.25g/kg)灌胃，其他各组加用等体积生理盐水。12周末处死大鼠，观察大鼠肝功能变化，肝组织病理学改变；采用蛋白印迹法、荧光定量PCR、免疫荧光法检测MMP2、MMP9和TIMP-1蛋白和mRNA表达。rn 结果：与空白组比较，CCl4组肝纤维化程度无显著性差异，模型组肝纤维化程度明显加重(P＜0.01)，血清ALT、AST活性明显升高，MMP2、MMP9、TIMP-1表达明显升高，并且TIMP-1升高幅度高于MMP2、MMP9。与模型组比较，清肝活血方及其拆方均能不同程度地减轻酒精性肝纤维化大鼠肝纤维化程度(P＜0.01)，降低血清ALT、AST活性，显著降低TIMP-1表达，提高MMP2、MMP9表达，全方对上述环节的调控优于拆方。rn 结论：清肝活血方及其拆方均能改善酒精性肝纤维化大鼠肝功能，减轻纤维化程度，全方作用优于拆方，其机制可能与通过调控基质金属蛋白酶有关。

摘要： 确保血液质量和输血安全，是血站的质量宗旨和目标。我国采供血机构，均按照《全国艾滋病检测技术规范》的要求，对无偿献血者的血液筛查均采用酶联免疫吸附实验(ELISA)，并以蛋白印迹法(WesternBlot)加以确认。本文对确认的84例抗-HIV阳性结果进行分析。

摘要： HLA-G基因属于MHC非经典Ⅰ类基因,它拥有15个等位基因,能够编码7种不同的蛋白,即HLA-G1～G7,HLA-G1～G4为膜型,HLA-G5～G7为可溶性分子.HLA-G分子通过抑制介导移植物排斥反应的主要效应细胞的功能而发挥作用,如与NK细胞的杀伤抑制性受体(KIR,killedinhibitoryreceptor)结合从而抑制其杀伤活性、与CD4细胞表面的KIR结合抑制其增殖,HLA-G还以其特有的α3区与CD8细胞结合而诱导其凋亡.因此HLA-G可视为一种免疫耐受诱导分子,在临床上具有潜在的应用前景,对防治和监测器官移植排斥反应具有重要意义.本课题从检测移植受者的外周血HLA-G5的表达状况人手,采用酶联免疫吸附法、蛋白印迹法对1例心脏移植受者HLA-G5的表达进行动态观察。

摘要： 本文采用间接免疫荧光(IIF)法、蛋白印迹法和间接ELISA法对肝癌、肺癌、胃癌、结直肠癌、慢性肝炎、自身免疫病和健康人群血清中自身抗体进行了检测分析,并探讨了自身抗体在恶性肿瘤中的临床意义.

摘要： 取高、低体温大鼠下丘脑组织,应用蛋白印迹法测定热休克蛋白(HSP)含量.桂枝汤有效部位A(Er.A)在双向调节体温的同时,可明显拮抗安痛定性低体温大鼠下丘脑HSP70含量降低,对酵母性高体温大鼠下丘脑HSP70含量具有一定的降低作用,表明Er.A对高、低体温大鼠下丘脑HSP70含量的调节作用是其双向调节体温的机理之一.

摘要： 本研究用荧光检测和western-blot和细胞免疫荧光的方法研究MG-132预处理对ARPE-19氧化应激过程中细胞内氧化蛋白表达的影响。

摘要： 本研究用荧光检测和western-blot和细胞免疫荧光的方法研究MG-132预处理对ARPE-19氧化应激过程中细胞内氧化蛋白表达的影响。

摘要： 本研究用荧光检测和western-blot和细胞免疫荧光的方法研究MG-132预处理对ARPE-19氧化应激过程中细胞内氧化蛋白表达的影响。

摘要： 本研究用荧光检测和western-blot和细胞免疫荧光的方法研究MG-132预处理对ARPE-19氧化应激过程中细胞内氧化蛋白表达的影响。

摘要： 本研究用荧光检测和western-blot和细胞免疫荧光的方法研究MG-132预处理对ARPE-19氧化应激过程中细胞内氧化蛋白表达的影响。

摘要： 本发明公开一种快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其包括以下步骤：(1)使用凝胶将从样品中提取的总蛋白质进行梯度分离；(2)将已梯度分离的总蛋白质从凝胶印迹到PVDF膜；(3)将印迹有所述总蛋白质的PVDF膜浸泡在100％甲醇中；(4)干燥经100％甲醇处理的所述PVDF膜；(5)对干燥的PVDF膜中的目标蛋白质进行显色检测。本发明快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法提高低丰度蛋白质的检测效率，提供了更实用、更灵敏、更快速的检测手段。

摘要： 本发明公开一种快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法，其包括以下步骤：(1)使用凝胶将从样品中提取的总蛋白质进行梯度分离；(2)将已梯度分离的总蛋白质从凝胶印迹到PVDF膜；(3)将印迹有所述总蛋白质的PVDF膜浸泡在100％甲醇中；(4)干燥经100％甲醇处理的所述PVDF膜；(5)对干燥的PVDF膜中的目标蛋白质进行显色检测。本发明快速检测低丰度蛋白质的无封闭的蛋白质印迹法提高低丰度蛋白质的检测效率，提供了更实用、更灵敏、更快速的检测手段。

摘要： 一种蛋白质印迹法和免疫荧光法同盘检测装置，本发明涉及医疗机械领域，本发明提供的技术方案如下：一种蛋白质印迹法和免疫荧光法同盘检测装置，所述的同盘检测装置包括有底座、第一检测装置、第二检测装置、自动进样装置、加样处理装置以及试剂瓶区；所述的第一检测装置包括有第一孵育盘以及设于第一孵育盘侧边的第一排废装置、第一注液装置、第一烘干装置和第一扫描装置；所述的第二检测装置包括有第二孵育盘以及设于第二孵育盘侧边的第二排废装置、第二注液装置、第二封片装置和第二扫描装置。本发明的有益效果在于，实现了同时进行蛋白印迹检测和荧光检测，自动生成对比数据，大大提高工作效率，节省了人力物力和财力。

摘要： 本发明公开了一种用于蛋白质印迹法的半干转膜装置，电泳槽，所述电泳槽内底部设有缓冲液储存区，所述电泳槽内安装有正极板和负极板，所述正极板位于负极板上方，所述缓冲液储存区内的缓冲液液面高度不低于负极板的底面高度；吸液机构，所述吸液机构与电泳槽连接，所述吸液机构用于吸出正极板上方的废液；废液收集瓶，所述废液收集瓶与吸液机构连接，所述废液收集瓶用于收容吸液机构吸出的废液；缓冲液补充瓶，所述缓冲液补充瓶与电泳槽连接，所述缓冲液补充瓶用于向电泳槽内补充缓冲液。该用于蛋白质印迹法的半干转膜装置可以及时吸除电泳槽中的废液，在吸除废液的过程中带走热量，其次可对电泳槽进行补液。

摘要： 一种蛋白质印迹法和免疫荧光法同盘检测装置，本实用新型涉及医疗机械领域，本实用新型提供的技术方案如下：一种蛋白质印迹法和免疫荧光法同盘检测装置，所述的同盘检测装置包括有底座、第一检测装置、第二检测装置、自动进样装置、加样处理装置以及试剂瓶区；所述的第一检测装置包括有第一孵育盘以及设于第一孵育盘侧边的第一排废装置、第一注液装置、第一烘干装置和第一扫描装置；所述的第二检测装置包括有第二孵育盘以及设于第二孵育盘侧边的第二排废装置、第二注液装置、第二封片装置和第二扫描装置。本实用新型的有益效果在于，实现了同时进行蛋白印迹检测和荧光检测，自动生成对比数据，大大提高工作效率，节省了人力物力和财力。

摘要： 本实用新型提供一种蛋白免疫印迹孵育盒及蛋白免疫印迹孵育装置，属于实验器材技术领域，包括盒体，所述盒体具有容纳空间，所述容纳空间被挡板分隔为多个小格；与所述盒体配合的盒盖；以及，至少一块隔板，每块所述隔板沿大致平行于所述盒体底壁的方向可拆卸安装于一个所述小格内，并将所述小格分隔为靠近所述盒体底壁的第一容纳空间以及远离所述盒体底壁的第二容纳空间；所述隔板上设置有连通所述第一容纳空间与第二容纳空间的孔。本实用新型通过在盒体小格内设置隔板，将两张膜隔开，避免了振摇时膜的重叠。成功的用一个格子的液体封闭两张膜，从而大大节省了抗体的使用量且对实验结果没有影响。

摘要： 本实用新型公开了一种新型蛋白质印迹法转膜降温装置，包括底板，所述底板顶部从左到右依次固定安装有T型支撑板、降温箱和防护箱，所述T型支撑板顶部固定安装有冷却箱，所述冷却箱侧壁和下壁内开设有互相连通的空心腔室，所述冷却箱内侧固定安装有放置箱，所述放置箱顶部铰接有端盖，所述冷却箱底部右侧固定连接有第一L型管道，所述第一L型管道与空心腔室相连通，所述第一L型管道另一端贯穿降温箱左壁，所述防护箱内侧底端固定安装有电机，所述防护箱顶部固定安装有驱动箱，所述电机输出轴贯穿驱动箱下壁且固定连接有螺纹丝杆。本实用新型避免了与冰的直接接触，取出转膜装置时无需清理，省时省力。

摘要： 本发明涉及蛋白印迹法检测毛囊干细胞VEGF165蛋白表达的方法，该方法包括以下的步骤：1）毛囊干细胞裂解备用；2）聚丙烯酰胺凝胶电泳包括a）制备8%分离胶；b）制备5%积层胶；c）30%聚丙烯酰胺0.33ml，10%SDS20μl，10%过硫酸胺20μl，TEMED2μl，加入后混匀，快速制胶；1.4ml上述混合液快速注入两层玻璃板间隙，迅速插入梳子，聚合完全后小心取出梳子；d）电泳；e）电转移；f）检测硝酸纤维上的蛋白质；g）免疫学检测。本发明由于采用了上述的技术方案，实现了转染后毛囊干细胞VEGF165蛋白表达的检测。

摘要： 本发明涉及蛋白印迹法检测毛囊干细胞VEGF165蛋白表达的方法，该方法包括以下的步骤：1）毛囊干细胞裂解备用；2）聚丙烯酰胺凝胶电泳包括a）制备8%分离胶；b）制备5%积层胶；c）30%聚丙烯酰胺0.33ml，10%SDS20μl，10%过硫酸胺20μl，TEMED2μl，加入后混匀，快速制胶；1.4ml上述混合液快速注入两层玻璃板间隙，迅速插入梳子，聚合完全后小心取出梳子；d）电泳；e）电转移；f）检测硝酸纤维上的蛋白质；g）免疫学检测。本发明由于采用了上述的技术方案，实现了转染后毛囊干细胞VEGF165蛋白表达的检测。

摘要： 本发明提供一种蛋白印迹法检测试剂盒的制备方法和应用，该试剂盒至少包括：包埋重组抗原的硝酸纤维素膜和碱性磷酸酶标记的鼠抗猪IgG。试剂盒制备方法包括：将重组抗原于电压100V、电流1～2A的条件下在聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，通电时间为45min；将步骤1获得的产物采用转膜液进行转膜处理；将转膜处理后的膜浸泡在封闭液内进行封闭处理；之后将膜风干得到包埋重组抗原的硝酸纤维素膜；采用过碘酸钠法将活化的碱性磷酸酶对鼠抗猪IgG进行标记，之后透析去除未结合的碱性磷酸酶，得到碱性磷酸酶标记的鼠抗猪IgG，再将碱性磷酸酶标记的鼠抗猪IgG用含0.12‰绿色素的酶标稀释液稀释，并与包埋重组抗原的硝酸纤维素膜一起于2～8°C避光封闭保存。