蛇足石杉

摘要： 蛇足石杉是一种古老的蕨类植物,具有非常重要的药用价值,该试验以蛇足石杉的孢子为外植体进行离体繁殖以提高繁育速度,通过孢子不同接种方式及不同初代、增殖、生根培养基配方比较,最后得出,接种时最佳的接种方式是将1cm大小的孢子叶直接接到培养基上;初代诱导阶段选用MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L配方最好;增值阶段选用MS+KT 1.0mg/L+NAA 0.2 mg/L+GA31.0mg/L配方最好并能降低玻璃化;生根阶段选用1/2 MS+IBA 0.5 mg/L配方效果最好。希望该试验的结论能为整个蛇足石杉快繁提供依据,加速其工厂化育苗。

摘要： 蛇足石杉是国家二级重点保护野生植物,目前面临生物资源骤减的威胁。该研究基于蛇足石杉在中国的分布数据和气候数据构建组合模型,预测蛇足石杉当前和未来(2070)气候情景下在中国的适生区,通过ERDAS和ArcGIS计算适生区面积及质心变化,探究气候变化对蛇足石杉适生区的影响,为蛇足石杉的保护提供理论依据。结果显示:(1)组合模型AUC值大于0.9,预测结果极好。(2)影响蛇足石杉适生区的主要生物气候变量是最湿月降水量、温度季节性、最冷季均温和最暖月最高温。(3)蛇足石杉当前总适生面积226.99×10^(4) km^(2),中、高适生区面积154.51×10^(4) km^(2),质心均位于湖南省西部。(4)蛇足石杉未来总适生面积变化不大,中、高适生区面积剧烈收缩,在RCP2.6、RCP4.5、RCP6.0及RCP8.5情景下分别净收缩14.34%、23.31%、31.63%和47.08%,总适生区质心和中、高适生区质心均向西北方向转移。研究表明,蛇足石杉中、高适生区受气候变化影响很大,未来随着排放水平升高将逐渐转变为低适生区和非适生区。

摘要： 为研究蛇足石杉内生真菌极细枝孢菌(Cladosporium tenuissimum MT-35)的代谢产物,本实验采用硅胶柱色谱及半制备液相色谱等方法从蛇足石杉极细枝孢菌C.tenuissimum MT-35的糙米发酵物中分离出10个化合物,根据化合物的理化性质及MS、NMR数据分别鉴定为4-hydroxy-3-methoxy-2(1 H)-quinolinone(1)、acropyrone(2)、lumichrome(3)、(1 H-indol-3-yl)oxoacetamide(4)、1,6-dihydro-1-methyl-6-oxo-3-pyridinecarboxylic acid(5)、尿嘧啶(6)、过氧化麦角甾醇(7)、麦角固醇(8)、9(Z),12(Z)-十八碳二烯酰胺(9)、8-O-4-dehydrodiferulic acid(10)。除化合物7和8外,其他化合物均为首次从C.tenuissimum中分离得到。对分离鉴定的化合物进行体外抗炎和抗乙酰胆碱酯酶活性筛选,结果表明化合物3、7、8、9对脂多糖诱导的小鼠单核巨噬细胞释放一氧化氮具有抑制活性,IC_(50)值分别为36.8±1.0、13.9±0.2、36.6±0.0、53.2±1.4μmol/L,其余化合物在浓度为100μmol/L时,对RAW 264.7细胞NO释放无明显抑制活性;化合物3对乙酰胆碱酯酶具有一定的抑制活性,IC_(50)为77.9±11.1μmol/L,其余化合物在浓度为100μmol/L时,对乙酰胆碱酯酶无明显抑制活性.

摘要： 依据《中国药典》和《国家药品标准工作手册》(2015)中药质量标准研制的要求,对蛇足石杉药材的性状、鉴别方法、水分、总灰分、浸出物等进行研究。结果明确了蛇足石杉药材的性状和显微结构特征,建立了具有专属性的薄层鉴别方法;规定蛇足石杉药材水分不得超过12.0%、总灰分不得超过7.5%、醇溶性浸出物含量不得少于11.0%。本研究为制定蛇足石杉药材质量标准及其市场流通、临床应用和深度开发提供参考。

摘要： 清代《植物名实图考》中记载的传统草药千层塔,之前被考证为石松科(Lycopodiaceae)石杉属(Huperzia Bernh)植物蛇足石杉(Huperzia serrata).目前药学研究从中分离出的石杉碱甲,能够高效、高选择、可逆地抑制乙酰胆碱酯酶,减少乙酰胆碱分解,已广泛应用于改善记忆和治疗阿尔茨海默病,引起了世界的广泛关注.该文综述了国内外近40年来有关"蛇足石杉"在系统与分类学、遗传多样性、组学研究、内生真菌、化学成分、资源调查、栽培繁殖和资源保护等方面的研究进展,并从植物分类学研究角度出发,厘清原中国境内分布的蛇足石杉,实应为我国东北地区分布的Huperzia serrata和我国南方分布较广的H.javanica两个物种;该研究结果显示,《植物名实图考》千层塔的基原,应是我国南方广布的石杉属植物H.javanica.考虑到药用植物和药材名称的稳定,将H.javanica的中文名沿用《植物名实图考》中的"千层塔",H.serrata的中文名处理为"蛇足石杉".

摘要： 目的:建立测定蛇足石杉中有效成分-石杉碱甲含量的超高压液相色谱四级杆飞行时间串联质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)的检测方法.方法:采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD色谱柱(2.1×50 mm,1.8μm),流动相乙腈-(0.1％甲酸)水=5:95,流速0.4 mL.min-1,检测波长310nm,柱温35°C,进样量1μL.结果:石杉碱甲在88～8800ng·mL-1范围内均呈现良好线性,r=0.9995;精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率在98.92％～100.89％之间,RSD为2.07％(n=9).结论:所建立的方法简便、准确、快速、重复性好,可用于蛇足石杉中有效成分石杉碱甲的含量测定.

摘要： 蛇足石杉产石杉碱甲的相关研究进展进行了综述,并指出相关研究进展的重要性,为石杉碱甲药物生物合成提供了重要依据。

摘要： 为探究不同色光对蛇足石杉离体叶状体生长和石杉碱甲(HupA)累积的作用,设置了二极管白光(W)、二极管蓝光(B)、二极管红光(R)3种不同色光处理,以普通荧光灯(CK)为对照,研究不同色光下叶状体生长和HupA累积的差异及其与IAA、ZT、ABA、GA几种内源激素水平的关系.结果表明:红光处理对蛇足石杉离体叶状体生长繁殖有促进效果,但对HupA含量累积有极显著的抑制作用;蓝光相较CK提高了叶状体的生长量和HupA的含量,其叶状体HupA生产率最高达1811.728μg·L-1,较CK提高了49.67％;蓝光处理的叶状体IAA/ZT值、ABA含量、ABA/ZT值、ABA/IAA值在全生育期均高于CK.依据不同类型激素功能,该研究结果说明:蓝光培养的叶状体中存在高水平的生长型激素IAA/ZT,促进其生长,增加了生物量,且其体内成熟型激素ABA的高水平存在,促进了次级代谢产物HupA累积增加.

摘要： [目的]从蛇足石杉[Huperzia serrata(Thunb.) Trey.]植株中分离内生真菌以及筛选能产生物碱的菌株,并对产生物碱菌株进行鉴定.[方法]采用内生真菌常用的方法从蛇足石杉健康植株中分离获得内生真菌,采用生物碱沉淀法和薄层色谱法(TLC)对分离得到的内生真菌的代谢产物进行检测,分析是否产生物碱,并应用形态学、分子生物学和生物信息学等方法对其进行鉴定和系统发育分析.[结果]从蛇足石杉茎中分离的内生真菌,筛选出1株产生物碱菌株LYS081,初步鉴定为木霉属(Trichoderma)真菌.[结论]蛇足石杉内生真菌LYS081能产生生物碱,在天然产物活性研究和资源开发以及内生真菌的研究中具有重要的意义.

摘要： 植物聚酮合酶是植物中广泛存在的一大类能够催化合成植物多酚类成分的酶的总称,催化起始底物(酰基辅酶A）与丙二酰辅酶A反复地缩合形成链状聚酮中间体,再经过Claisen、Aldol等环化方式生成查耳酮、二苯乙烯、间苯三酚等结构多样的天然产物和非天然小分子.而起始底物、缩合丙二酰辅酶A分子数以及环化机制的不同,使其可以生成结构多样的"非天然的天然产物".因此筛选新颖的植物聚酮合酶并且发掘其生物学功能,对于组合合成或仿生合成结构新颖多样的复杂非天然的天然产物库具有重要意义.石杉碱甲是一种石松属类生物碱，最早从蛇足石杉Huperzia serrata中分离得到，后因发现其是一种高效、可逆、高选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂而备受关注。目前石杉碱甲主要来自于野生资源，但因植物体内含量低、植株生长缓慢而难以满足需求；有机全合成步骤多、产量低。近来同位素研究推测石榴碱是石杉碱甲生物合成途径中的一个重要中间体，在一种酶的催化作用下可以和4PAACoA缩合生成石松属生物碱的重要前体phlegmarine（Fig.1a）。根据植物聚酮合酶催化机制，其有可能参与了该步偶合反应生成重要前体的步骤（Fig.1b）。因此，从蛇足石杉中筛选新颖植物聚酮合酶挖掘其催化机制，不仅有利于阐明石杉碱甲生物合成机制，也可以以此为工具酶开展组合合成，构建结构新颖多样的非天然小分子库进行活性先导化合物的筛选，为活性小分子的发现提供新的思路。目前，从蛇足石杉中成功获得三个基因。其中HsPKS3兼具多种功能，可催化合成简单喹诺酮生物碱、苄基丙酮、姜黄素类等成分。更为特别的是，HsPKS3能接受两个完全不同的底物并催化其发生“头碰头”缩合，生成C-2位取代喹诺酮生物碱和1,3-二酮类分子。目前，具备如此多样催化功能的PKS尚属首次发现。以HsPKS3作为工具酶，含有芳香环、杂环、饱和脂肪链等结构多样的辅酶A硫酯为起始底物，丙二酰辅酶A、非天然的延长单位如β-酮酸和β-酮酸的NAC硫酯等为链延长单位，开展了初步的组合合成研究，得到了系列喹诺酮及1,3-二酮类成分，并发现部分分子具有显著的抗炎活性。研究成果为酶催化构建非天然小分子化合物库并用于先导化合物的发现提供了参考。

摘要： 蛇足石杉作为我国沿用了上千年的中草药,其有效成分"石杉碱甲"具有增强记忆,抗老年性痴呆的作用,为了更好地开发和利用这些珍贵的蛇足石杉种质资源,笔者从种质资源调查、繁殖技术、引种驯化等方面对蛇足石杉的研究进展进行了综述.在此基础上,提出今后需重视蛇足石杉资源的收集与保护,加强引种驯化及开展综合利用研究,旨在进一步推动蛇足石杉种质资源的深入研究与合理开发利用.

摘要： 蛇足石杉系石杉科石杉属多年生草本植物,内含石杉碱甲,为乙酰胆碱脂酶的有效抑制剂,是治疗阿尔茨海默病症的特效药.随着世界人口老龄化的加速,蛇足石杉的需求量不断增加,然而蛇足石杉是古老的蕨类植物,其野生资源极其匮乏,而其繁殖却极其困难,为给蛇足石杉快速繁殖体系的研究与建立提供参考依据,文中综述了有关蛇足石杉的组织培养、孢子诱导、扦插繁殖、芽胞繁殖等方面的研究进展,并对其人工快速繁殖研究的新方向进行了展望.

摘要： 目的：制备石杉碱甲单克隆抗体,分析其免疫学特性,建立蛇足石杉中石杉碱甲ELISA检测方法.方法：用石杉碱甲人工抗原免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术筛选获取单克隆抗体,并对其纯度、亚型、灵敏度、特异性等进行鉴定,建立ELISA检测方法.结果：ELISA检测方法的标准曲线方程为Y=0.3736X-0.236,r=0.9965,线性检测范围5-1000ng/mL,检测限7.361ng/mL.石杉碱甲的回收率在96.6-103.8％之间,RDS 0.68％(n=6).结论：ELISA方法快速灵敏,可用于蛇足石杉中石杉碱甲的含量分析测定.

摘要： 目的：以庐山野生蛇足石杉成年株新生枝茎为材料,建立组织培养无性繁殖系及其能累积有效成分石杉碱甲的培养物.方法：以植物离体培养诱导叶状体器官发生与增殖,TLC法检测叶状体提取物中的石杉碱甲.结果：筛选到叶状体诱导培养基6,7-V+IAA0.5mg·L-1,诱导率50％;叶状体继代培养基为:不加激素的MS基本培养基,但蔗糖用量20g/L,55d收获叶状体生物量的相对增殖率达1362.6％(即收获量是接种量的14.6倍),薄层层析检测表明本研究建立的叶状体具有产生与原植物相同的有效成分石杉碱甲的能力.结论：本研究为天然石杉碱甲资源开发奠定了技术平台.

摘要： 基于本实验室已获得的蛇足石杉转录组数据,获得一个编码1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase,DXR)的转录本,分析其开放阅读框序列,发现该转录本编码全长为1,440bp的HsDXR1基因,含有479个氨基酸残基.采用RT-PCR方法获得了HsDXR1全长,并对HsDXR1编码蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析,发现HsDXR1蛋白的预测分子量51.4961kDa,等电点为6.44;不含信号肽和跨膜区;亚细胞定位预测显示该蛋白最可能定位于叶绿体.与拟南芥和水稻的DXR蛋白相比,具有DXR蛋白典型的结构域.实时荧光定量PCR方法检测HsDXR基因在蛇足石杉的茎中表达量最高,其次为根,在叶中表达量最低.本研究在国内外首次获得蛇足石杉HsDXR1基因的编码区序列,为进一步研究HsDXR1在蛇足石杉萜类化合物生物合成途径中的功能奠定基础.

摘要： 蛇足石杉含有用于治疗老年痴呆的石杉碱甲,受到越来越多的关注,但由于其野生资源遭遇大量采挖,人工培植技术尚未成功,资源短缺已成为限制该类药物生产的主要瓶颈。为更好地开展对蛇足石杉的引种栽培及人工培植研究,作者对海南霸王岭自然保护区的蛇足石杉天然居群结构、生态因子等进行了调查和研究。结果表明该居群以幼苗和幼株为主要构成,属于年轻居群,但幼苗和幼株死亡率较高。就该居群生态环境而言,酸性土壤,丰富的有机质及20°C的气温和90%以上高湿度的环境条件有利于蛇足石杉的生长。这为今后在蛇足石杉规模化生产进程中选择合适的基质,控制合理的温湿度等提供了依据。

摘要： 目前蛇足石杉的繁殖方式除孢子繁殖外,芽孢亦是重要的繁殖材料,芽孢繁殖在居群更新中起重要作用.本文通过介绍芽孢结构及萌发过程,指出芽孢是一种极易萌发成新植株的营养繁殖体.同时介绍了芽孢的规范化繁育体系.这对今后开展以芽孢为繁殖材料进行规模化生产有重要意义.

摘要： 从湘西古丈县采集蛇足石杉，选取无病虫、无伤口的新鲜植株作为材料。植株先经表面消毒，表面消毒方法为材料经流水冲洗1h后，超声洗涤20min；洗净的材料先置于75%乙醇中浸泡40s，用无菌水冲洗3-4次；接着用0.1%升汞浸泡8min，然后用无菌水冲洗3-4次；最后用0.3%双氧水浸泡10min.无菌水冲洗3-4次。植株表面消毒后，无菌操作将蛇足石杉植株用灭菌刀片切成0.5cmX0.5cm大小的组织块，接种于装有PDA与查氏培养基培养皿内，切口与培养基接触，同时将最后一次清洗植株的无菌水涂布于相应培养基上作对照，将培养皿置于28°C培养箱培养5-7d。

摘要： 蛇足石杉中的生物碱——石杉碱甲(Hup-A)是一种强效、可逆和高选择性第二代乙酰胆碱酯酶抑制剂，是目前国内最为成功的治疗阿尔茨海默病的药物。由于人工合成的Hup-A及其类似物离商品化生产还有较长距离，加速了蛇足石杉资源的消耗。本实验基于以上现状，通过两年多探索蛇足石杉离体培养的技术，成功获得了分化的叶状体组织块及蛇足石杉植株，构建了离体无性增殖系，可望建立一条规模化培养原植物器官或细胞实现生物技术合成石杉碱的新途径。

摘要： 本发明公开了一种改良MS液体培养基及蛇足石杉无菌茎尖培养方法，所述的改良MS液体培养基为在原有的MS液体培养基中加入条件培养液，所述的条件培养液为蛇足石杉茎段培养液；将蛇足石杉茎尖培养在改良MS液体培养基中，并于红光下培养。该操作方法简单易行，为蛇足石杉茎尖无菌体系的建立提供新途径。

摘要： 本发明涉及新型蛇足石杉来源的赖氨酸脱羧酶及其编码基因和应用。具体而言，本发明提供一种多肽，选自：(1)SEQ ID NO:4、6、8、10、12和14所示的多肽序列；和(2)在(1)所述的多肽序列中经过插入、缺失或突变一个或几个氨基酸且具有赖氨酸脱羧酶活性的由(1)衍生的多肽；和(3)由SEQ ID NO:4、6、8、10、12或14所示多肽序列与促进SEQ ID NO:4、6、8、10、12或14所示多肽序列表达、分泌到胞外或纯化的多肽序列组成的多肽。本发明首次从蛇足石杉中鉴定到赖氨酸脱羧酶，并验证体外和体内活性。利用该赖氨酸脱羧酶应可提高石松类生物碱尤其石杉碱甲的产量，因此具有较好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一株抗灰霉菌的蛇足石杉内生真菌，分类命名为链格孢菌(Alternaria alternate)HR38‑7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2019388。该菌株是首次从蛇足石杉内生真菌中筛选得到，可用于农作物灰霉病的防治，以及作为活性成分用于制备防治农作物灰霉病的生防制剂。

摘要： 本发明公开了一种建立农杆菌介导蛇足石杉叶状体遗传转化体系的方法，蛇足石杉叶状体遗传转化体系包括预培养、浸染、共培养、推迟筛选、筛选、叶状体增殖和阳性植株的鉴定步骤，通过农杆菌介导向蛇足石杉叶状体中转入pBI121表达载体，pBI121连接了GUS基因和抗潮霉素基因。本发明方法不仅包括得到转基因植株的步骤，还包括对转基因植株的验证，形成了完整的转基因体系，为蛇足石杉基因功能组学的研究和育种奠定基础，同时也对后续的基因工程研究奠定了重要基础，从而培育出高产石杉碱甲的蛇足石杉新资源。

摘要： 本发明公开了一种蛇足石杉内生绿藻及其应用，该绿藻的分类命名为胶球藻(Coccomyxa sp.)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2019年4月26日，保藏编号：CGMCC17587，将该胶球藻辅助于蛇足石杉无菌材料的建立和野生植株的移栽，可显著提高蛇足石杉无菌材料和野生植株的移栽成活率。本专利为蛇足石杉无菌材料的建立和野生植株的移栽提供重要的方法。

摘要： 本发明公开了一株抗核盘菌的蛇足石杉内生真菌，分类命名为宁博炭疽菌(Colletotrichum boninense)HL33‑6‑1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019387。该菌株是首次从蛇足石杉内生真菌中筛选得到，可用于农作物菌核病的防治，以及作为活性成分用于制备防治农作物菌核病的生防制剂。

摘要： 本发明公开了一株宁博炭疽菌(Colletotrichum boninense)HS7‑1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019386。该菌株来源于蛇足石杉内生真菌，它具有产石杉碱甲的能力，本发明为石杉碱甲工业化发酵生产提供了另一种微生物资源，对满足石杉碱甲的原料药供应具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种自然条件蛇足石杉高效扦插繁殖方法，包括以下步骤：（1）基质配制；（2）生根激素配制；（3）插穗选择；（4）插穗处理；（5）扦插；（6）扦插后管理。该方法在自然条件下，通过对扦插基质成分、pH值进行严格处理，对生根激素的组成和配比进行优化筛选，对插穗的状况进行优化选择和分段处理，缩短扦插苗生根及新叶萌发的时间、提高扦插苗成活率和繁殖系数，从而达到提高蛇足石杉扦插繁殖效率的目的，插穗成活率和生根率分别达到96.1%和95.5%，繁殖系数达8.6。有效地解决了蛇足石杉扦插繁殖率低、扦插不易生根、成苗率低和扦插生长缓慢等问题，有利于野生种群恢复和大面积产业化应用。

摘要： 本发明一种蛇足石杉离体组织培养保存方法，包括以下步骤：步骤一：选用不同月份采集的新鲜药用植物蛇足石杉材料，用甜菜碱型表面活性剂浸泡20min将其洗净后，流水冲洗6h；然后灭菌，用无菌水冲洗6遍，并将经消毒处理后外植体上的茎尖接种于不同培养基中。本发明在丛生苗生根研究中发现基本M2培养基相对于B5培养基更适宜生根，且激素IBA对根的生长有显著性的影响，较高或较低浓度的IBA均不利于丛生苗生根，在添加10μmol/L IBA的MS培养基中丛生苗生根状态最佳。

摘要： 本发明公开了一种蛇足石杉中有效成分的制备方法，步骤如下：将蛇足石杉药材粉碎，置于纸筒，用乙醇浸泡23‑25h，回流提取至Dragendorffor's反应呈阴性，于55‑65°C真空浓缩，再用浓度为0.5mol/LHCl溶解，过滤，氯仿萃取，取酸水层调pH为9.4‑9.6，氯仿萃取4‑6次，无水Na