葡糖基转移酶

摘要： 为了解光照对三角梅(Bougainvillea glabra)葡糖基转移酶基因表达的影响,从其苞片中克隆了环多巴5-糖基转移酶基因(cDOPA 5GT)。结果表明,三角梅cDOPA 5GT基因的cDNA全长为1446 bp,编码482个氨基酸,生物信息学分析表明cDOPA 5GT蛋白的等电点(PI)为5.77,具有糖基转移酶的特征基序,为酸性亲水跨膜蛋白,不含信号肽,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,氨基酸序列保守性较差。qRT-PCR分析表明,遮光处理cDOPA 5GT基因表达量和植株的甜菜红素含量均显著下降。这表明三角梅的色素合成受糖基转移酶基因调控,并与光照呈正相关关系。

摘要： 目的:探讨vicK调控反义RNA ASvicR(Antisense vicR)及gtfB/C/D表达水平,影响变异链球菌胞外多糖代谢的机制.方法:同源重组法构建vicK缺失株及vicK补偿株,通过RT-qPCR检测与变异链球菌UA159标准株比较ASvicR及gtfB/C/D的表达水平差异.通过Western Blot来确定葡糖基转移酶GtfB/C/D的变化;激光共聚焦显微镜及扫描电镜下观测生物膜的结构和致密性.结果:相比UA159,当vicK基因缺失,变异链球菌的ASvicR表达升高,gtfB/C/D表达降低,GtfB/C/D水平降低,生物膜结构松散,致密性降低;而vicK补偿株对于GtfB/C/D亦有调控作用.结论:基因vicK调控GtfB/C/D蛋白表达,vicK缺失使ASvicR表达增高,胞外多糖合成减少,从而降低变异链球菌的致龋性.

摘要： 为了解光照对三角梅(Bougainvillea glabra)葡糖基转移酶基因表达的影响,从其苞片中克隆了环多巴5-糖基转移酶基因(cDOPA 5GT).结果表明,三角梅cDOPA 5GT基因的cDNA全长为1446 bp,编码482个氨基酸,生物信息学分析表明cDOPA 5GT蛋白的等电点(PI)为5.77,具有糖基转移酶的特征基序,为酸性亲水跨膜蛋白,不含信号肽,二级结构以 α-螺旋和无规则卷曲为主,氨基酸序列保守性较差.qRT-PCR分析表明,遮光处理cDOPA 5GT基因表达量和植株的甜菜红素含量均显著下降.这表明三角梅的色素合成受糖基转移酶基因调控,并与光照呈正相关关系.

摘要： 该研究以葡萄风信子(Muscari ameniacum)'亚美尼亚'为试材,克隆了花青素合成途径过程中的类黄酮糖基转移酶基因MaGT1(GenBank登录号MK652470).该基因开放阅读框全长1338 bp,编码445个氨基酸,预测蛋白分子量为49.301 kD,理论等电点为5.40.结构分析显示,MaGT1蛋白具有PSPG保守结构域、UDP-糖基转移酶家族结构域和UDP-葡萄糖醛酸基/葡萄糖基转移酶保守域(UDPGT).进化分析表明,MaGT1蛋白与油棕、海枣、葡萄亲缘关系相近,聚类于类黄酮糖苷糖基转移酶类分支,以UDP-葡萄糖/鼠李糖为主要糖供体.花青苷含量测定显示,花青苷仅在葡萄风信子着色的花中积累,在根、鳞茎和叶以及未着色的花蕾(S1)中几乎检测不到花青苷,且随着花的发育,花青苷含量不断增加,并在衰败期(S5)达到最高.荧光定量PCR分析表明,MaGT1基因的表达具有显著的时空特异性,并在花中优势表达,而在根、鳞茎和叶片中微量表达;在花发育不同阶段,MaGT1基因的表达量随着花发育不断增加,并在盛花期达到峰值.研究表明,MaGT1蛋白催化反应是花青素合成途径中的重要修饰步骤.该研究结果为进一步分析MaGT1基因在葡萄风信子花青素合成和调控中的功能提供了依据.

摘要： 目的:制备并纯化抗变异链球菌卵黄抗体(抗S.mutans-IgY),观察其对变异链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)胞外多糖、葡糖基转移酶活性、生物膜形成及活性的影响。方法:将甲醛灭活的S.mutans免疫150日龄白航蛋鸡4次,每次间隔10 d,取鸡蛋用两步硫酸铵沉淀法提取IgY,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫后效价变化。蒽酮法测定水不溶性及水溶性胞外多糖;Neson-Somogyi法测定葡萄糖基转移酶活性;二甲氧唑黄[2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrzo lium hydroxide,XTT]还原比色法研究IgY对生物膜总量的影响;采用激光共聚焦显微镜观察牙菌斑生物膜中死菌和活菌的构成。结果:经4次免疫后抗体最高效价为1∶256000,维持40 d;IgY对S.mutans合成水不溶性胞外多糖的能力较对照组有明显抑制(P<0.01);药物作用后S.mutans还原糖、酶活力均降低(P<0.01);XTT法结果显示IgY对S.mutans生物膜抑制率为17.02%～74.13%;激光共聚焦显微镜观察到随着药液浓度增加,绿色的活菌、团块结构减少,生物膜厚度明显减小。结论:一定浓度IgY能够抑制S.mutans的增殖,具有抗龋作用。

摘要： 目的：观察变异链球菌在模拟微重力环境下形态学的变化，及对其葡糖基转移酶基因(gtfs)mRNA表达的影响。方法：采用旋转培养系统(rotary cell culture system，RCCS)建立模拟微重力细菌培养模型，将变异链球菌分为模拟微重力组和对照组。在37°C厌氧环境(80％N2，20％CO2)下培养24h，收集模拟微重力组及对照组菌体，通过扫描电镜、透射电镜观察细菌的形态学变化；并通过Q-PCR方法检测模拟微重力对变异链球菌gtfB，gtfC，gtfD mRNA表达的影响。结果：扫描电镜图片显示，模拟微重力组细菌之间的不定形胶冻样物质明显少于对照组；透射电镜观察显示模拟微重力组细菌的荚膜部分减少，分裂状态下的细菌两极不对称。模拟微重力条件下变异链球菌gtfB、gtfC、gtfD mRNA表达水平呈下降趋势，与对照组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论：模拟微重力环境下变异链球菌的超微结构有显著改变，对其gtfB、gtfC、gtfD mRNA表达有明显的抑制作用。%Objective:To investigate the effect of simulated microgravity on the morphologic changes of Streptococcus mutans (S. mutans), and to detect mRNA expression level of gtfs.Methods:A model of simulated microgravity on bacterial culture was obtained with a Rotary cell culture system (RCCS). Samples of S. mutans were allotted into simulated micro-gravity group (SMG) and control group (normal gravity group, NG). S. mutans was cultured at 37°Cin anaerobic environ-ment (80%N2, 20%CO2) for 24 hours. The effect of simulated microgravity on morphologic change of S. mutans was evalu-ated by using scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM), and mRNA expression level of gtfB, gtf, gtfD measured by using Real-time fluorescence quantitative PCR.Results:SEM observations showed the SMG group had obvious morphological changes compared with those of the NG group, and cells of the SMG group were covered by less quantities of gelatinous material than the NG group. TEM observations of the SMG group showed capsular reduction and bacterium divides state poles asymmetrical. The mRNA expression level of gtfB, gtfC, gtfD of the SMG group decreased. Compared with the NG group, the differences were statistically significant (P<0.01).Conclusion:The study suggests that simulated microgravity changes the morphology of S. mutans, and inhibits gtfB, gtfC, gtfD mRNA expression of S. mutans.

摘要： 目的：探讨没食子鞣质及其有效提取物对口腔细菌生物膜中葡萄糖转移酶（GTF）活性的影响及其防龋的作用。方法采用硫酸铵沉淀法提取粗酶，Neson-Somogyi 法测定还原糖，G250微量蛋白定量 GTF 还原糖计算 GTF 活性单位，实验分为阴性对照组（空白组），阳性对照组（为没有干预处理形成的细菌生物膜），没食子鞣质组和有效提取物（没食子酸＋没食子酸甲酯）组。评价实验药物没食子鞣质和有效提取物对口腔细菌生物膜中GTF 活性的影响。结果经没食子鞣质及其有效提取物作用后，没食子鞣质组24 h 的口腔细菌生物膜中 GTF 活性为（0．0186±0．077），有效提取物组 GTF 活性为（0．0527±0．035），GTF 的活性受到明显抑制，与对照组 GTF 活性（0．6601±0．204）相比差异均有统计学意义（P ＜0．05）。结论实验药物没食子鞣质及其有效提取物可能通过抑制细菌生物膜中 GTF 活性而发挥防龋作用。%Objective The aim of this study is to investigate the effect of Aleppo gall and its active compo-nent on the action of GTF in oral bacteria biofilm and its preventive mechanism.Methods The visible light semiquantitative method has been used to measure biomass GTF (OD620)values so that the effect of Aleppo gall and active component on GTF of oral bacteria biofilm has been discovered.The experiment samples were divided into 3 groups:control group,Aleppo gall group and active component group.Result It was discovered that Aleppo gall and active component were able to inhibit GTF activity of 24 h bacte-rial biofilm (GTF activity of Aleppo gall group is 0.018 6±0.077,GTF activity of active component group is 0.052 7±0.035),compared with control group (GTF activity of control group is 0.6601±0.204),it had statistical significance (P <0.05).Conclusion The effect of Aleppo gall on oral bacterial biofilm not only inhibits bacteria biofilm growth,but also adjusts GTF activity of 24h bacterial biofilm so that it has a very obvious anti-caries effect.

摘要： 目的 研究甜茶护齿含片对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖合成的影响.方法 将甜茶护齿含片磨成粉末,并采用二倍稀释法,用含1%蔗糖的胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物(TTY)液体培养基,配制成5个浓度的实验组;并以含1%蔗糖的TTY液体培养基作为阴性对照组.加入变形链球菌菌液,厌氧培养48 h后离心,一份透析提取葡糖基转移酶,采用Somogyi法和考马斯亮蓝法分别测定还原糖和总蛋白含量,计算酶活性和比活力大小;另一份弃上清液留沉淀,采用蒽酮法测定水不溶性多糖的含量.结果 随着甜茶护齿含片混悬液浓度的升高,葡糖基转移酶活性和水不溶性多糖含量逐渐降低(P＜0.05),除0.313 g/50 ml浓度组外,葡糖基转移酶各实验组与对照组酶活性及比活力之间差异有统计学意义(P＜0.05),各实验组与对照组水不溶性多糖含量差异有统计学意义(P＜0.05).结论 甜茶护齿含片对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖的合成具有显著抑制作用.%Objective To study the influence of Rubrus Suarissimus S. Lee dental care buccal tablets on glucosyltransferase( GTF ) and extra-cellular synthesis of water-insoluble glucan( WIG ) of Streptococcus mutans( S. Mutans ). Methods Rubrus Suarissimus S. Lee dental care buccal tablets were lapped into powder and used in the experimental group with 5 concentrations prepared with TTY which contained with 1% glucose,while TTY culture with 1% glucose as the negative control. S. Mutans was added into each group,and then centrifugation was performed after 48 hours' anaerobical culturing. One batch was that the supernatants were collected to extract GTF,which was used to measure the content of reducing sugar and total protein by Smoyi method and Bradford method,then figured out enzyme activity and the specific activity. The other batch was that the supernatants were abandoned and the sedimentations were reserved, which was used to measure the content of WIG by the Anthrone method. Results The GTF and WIG of S. Mutans reduced gradually with the increase of the concentration of Rubrus Suarissimus S. Lee dental care buccal tablets( P <0.05 ). Except the group of 0.313 g/50 ml,there were significant differences between each experimental group and control group in glucosyltransferase activity, specific activity and WIG( all P <0.05 ). Conclusion Suarissimus S. Lee dental care buccal tablets could restrain the GIF and extra-cellular synthesis of WIG of S. Mutans.

摘要： 目的:观察甜茶护齿含片对几种常见口腔常居细菌和白色酵母菌生长的影响.方法:将磨成粉末的甜茶护齿含片,采用二倍稀释法,用TSA培养基,配制成从5.000g/50ml到0.313g/50ml的5个浓度的实验组的含药平板,用加样枪多点加入培养鉴定后配制浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液(约1-2μl)接种于琼脂平板表面,每点菌数约为104CFU,形成直径为5～8mm的菌斑.接种好后置37°C孵育16-24h,孵育后观察细菌生长情况,以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC.设立不含甜茶甙的平板做阴性对照.结果:甜茶护齿含片对4种微生物的生长均有一定的抑制作用,不同微生物之间抑制效果不同.随着甜茶护齿含片纸片浓度的逐渐下降,4种不同微生物在各浓度组间的差异均有统计学意义(P ＜0.05),4种微生物组中,金黄色葡萄球菌对甜茶护齿含片比较敏感,其它3组微生物对甜茶护齿含片均不甚敏感.结论:甜茶护齿含片能不同程度的抑制口腔常居微生物的生长.

摘要： 本发明提供产生具有增加的三叶苷含量或增加的4’‑O‑糖基转移酶活性的宿主细胞、植物细胞或植物的方法，所述方法包括用编码具有4’‑O‑糖基转移酶活性的多肽的多核苷酸转化所述宿主细胞或植物细胞。本发明还提供经遗传修饰以包含和/或表达所述多核苷酸的宿主细胞、植物细胞和植物。

摘要： 本发明的目的是提供包含除了糖核苷酸以外的糖供体化合物的糖供体试剂和能够使用除了糖核苷酸以外的糖供体化合物催化糖基转移反应的酶。本发明提供了以下：包含式(a)化合物的糖供体试剂：

摘要： 本发明提供了工程化糖基转移酶(GT)、具有GT活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸，以及包含这些多核苷酸和多肽的载体和宿主细胞。本发明提供了工程化蔗糖合酶(SuS)、具有SuS活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸，以及包含这些多核苷酸和多肽的载体和宿主细胞。本发明还提供了包含GT酶的组合物和使用工程化GT酶来制备具有β‑葡萄糖连接的产物的方法。本发明还提供了用于产生莱鲍迪苷(rebaudiosides)(例如莱鲍迪苷M、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷I和莱鲍迪苷D)的组合物和方法。本发明还提供了包含SuS酶的组合物及使用它们的方法。还提供了用于产生GT酶和SuS酶的方法。

摘要： 本发明提供了工程化糖基转移酶(GT)酶、具有GT活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸、以及包含这些多核苷酸和多肽的载体和宿主细胞。本发明提供了工程化蔗糖合酶(SuS)酶、具有SuS活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸、以及包含这些多核苷酸和多肽的载体和宿主细胞。本发明还提供了包含GT酶的组合物和使用工程化GT酶来制备具有β‑葡萄糖键的产物的方法。本发明还提供了用于产生莱鲍迪苷(例如莱鲍迪苷M、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷I和莱鲍迪苷D)的组合物和方法。本发明还提供了包含SuS酶的组合物及使用其的方法。还提供了用于产生GT和SuS酶的方法。

摘要： 本发明公开了一种天麻葡糖基转移酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；本发明根据天麻转录组提供的CDS序列筛选出葡糖基转移酶基因序列，并设计巢式PCR的引物通过扩增拼接得到葡糖基转移酶基因全长序列；构建原核表达载体pGEX4T‑UGT，表达纯化获得蛋白，构建真核表达载体对UGT基因的表达进行亚细胞定位，将构建的真核表达载体pH2GW7.0‑35S‑UGT通过农杆菌侵染法将葡糖基转移酶转入单核蜜环菌菌丝中获得转基因蜜环菌，使用其生物合成天麻素，以期用转基因蜜环菌人工栽培天麻，增加天麻中天麻素含量，同时也可以通过培养基因工程蜜环菌生产天麻素。

摘要： 本文公开了组合物，其包含具有至少1000的重均聚合度(DPw)的聚α‑1，3‑1，6‑葡聚糖。该葡聚糖聚合物包含至少30％α‑1，3键和至少30％α‑1，6键。也公开了合成聚α‑1，3‑1，6‑葡聚糖的葡糖基转移酶。还公开了聚α‑1，3‑1，6‑葡聚糖的醚衍生物以及使用此类衍生物作为粘度调节剂的方法。

摘要： 本发明公开一种葡糖基转移酶突变体及其应用，属于蛋白质工程技术领域。本发明使用生物信息学手段，通过蛋白建模、结构分析等方法确定若干个位于非保守区域的蛋白表面氨基酸，并进行单个或组合突变，得到的突变体在SEQID NO.1所示氨基酸序列的野生型UDP‑葡糖基转移酶中突变A11L、F39Y、S58G、S55P、N109K、A250E、I279L、V304L和T329I中的至少一个位点。得到的突变体较野生型UDP‑葡糖基转移酶热稳定性和酶活均显著提高，在甜味剂甜菊糖苷(莱鲍迪苷D和/或莱鲍迪苷E)的工业化生产中应用，可提高生产效率，降低生产成本，市场前景广阔。

摘要： 本发明教导提供了一种制备具有增加的厚度的酸奶产品的方法，所述方法具有以下步骤：提供奶；向所述奶中添加蔗糖以形成增甜奶；使所述增甜奶与葡糖基转移酶接触以形成不溶性葡萄糖聚合物；接种起子培养物；以及发酵以提供具有增加的厚度的酸奶产品。本文提供了额外的方法。

摘要： 本发明教导提供了一种制备具有增加的厚度的酸奶产品的方法，所述方法具有以下步骤：提供奶；向所述奶中添加蔗糖以形成增甜奶；使所述增甜奶与葡糖基转移酶接触以形成不溶性葡萄糖聚合物；接种起子培养物；以及发酵以提供具有增加的厚度的酸奶产品。本文提供了额外的方法。

摘要： 本文公开了具有经修饰的氨基酸序列的葡糖基转移酶。此类工程化的酶合成具有降低的分子量的不溶性α‑葡聚糖产物。进一步公开了使用工程化的葡糖基转移酶产生不溶性α‑葡聚糖的反应和方法。