苹果酸脱氢酶

摘要： 为了解大鳞鲃(Barbus capito)的形态特征和生化遗传特性,为其种质鉴定提供理论依据,本研究采用传统形态观察和测定可数可量性状的方法对30尾样品鱼进行形态特征分析,并通过聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳对大鳞鲃5种组织(心脏、眼睛晶状体、肝脏、肾脏和脾脏)的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和酯酶(EST)进行分析。结果表明:大鳞鲃的主要形态特征为体呈梭形,头部较小,体修长,口亚下位,具有吻须和颌须各一对。身体被覆发光的鳞片,鱼体背部呈银灰色,腹部银白色。鳍式为背鳍D.Ⅲ-7~8、胸鳍P.Ⅰ-16~18、腹鳍V.Ⅱ-8、臀鳍A.Ⅲ-5和尾鳍C.22-28;侧线鳞数64-74、侧线上鳞数12~14、侧线下鳞数10~11;下咽齿齿式为2·3·5/5·3·2;脊椎骨数为46~49。大鳞鲃的LDH、MDH和EST同工酶具有组织特异性,这种特异性与组织行使其生理功能有关,肝脏组织3种同工酶表达活性最强,肾脏组织3种同工酶的表达活性较强,可能与肾脏具有调节渗透压功能有关。

摘要： 为了了解巨须裂腹鱼的生化遗传特性,丰富巨须裂腹鱼种质资源研究的内容,通过聚丙烯胺凝胶垂直板电泳对巨须裂腹鱼5种组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏)中的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)进行了电泳分析。结果表明:所测样本鱼心脏LDH酶带数为6~7条、眼睛晶状体LDH酶带数为6~10条、肌肉LDH酶带数为5~7条、肝脏LDH酶带数为8~11条和肾脏中的LDH酶带数为8~10条;LDH-C基因只在肝脏中特异性表达。心脏MDH酶带数为4~8条、眼睛晶状体MDH酶带数为2~4条、肌肉MDH酶带数为3~4条、肝脏MDH酶带数为4~5条和肾脏MDH酶带数为4~7条。5种组织中LDH在肝脏中表达的酶带数最多,肝脏MDH酶带着色最深,表达活性程度最强。巨须裂腹鱼的LDH和MDH同工酶系统具有组织特异性和个体差异性。组织特异性主要体现在LDH和MDH酶带数目和表达活性程度不同两方面,与各组织执行特定生理功能密切相关。巨须裂腹鱼同工酶个体差异性可能是其漫长的进化过程中为了能适应特殊生境的需要。研究结果可从生化遗传角度为巨须裂腹鱼制定种质标准和资源保护利用提供一定理论依据。

摘要： 苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)是生物体内十分重要的一类酶,参与植物生长、花粉和果实发育等重要生物过程的调控.当前花生中苹果酸脱氢酶在种子后熟和萌发过程中的作用研究较少.本研究克隆了花生AhMMDH1基因,其ORF大小为1038bp,编码345个氨基酸,是定位于线粒体的疏水蛋白.三维结构分析发现,AhMMDH1以苹果酸脱氢酶(M链)和乙醛酸前体(G链)的异源二聚体形式存在,其M链在41-47位点出现NAD+结合位点.qRT-PCR分析发现,该基因在花中表达量较高,干种子次之,茎叶中表达痕量;不同发育时期10～70 d(新鲜收获种子)种子表达水平均明显低于干种子;种子吸水16h表达量明显升高,胚根突破种皮时(吸水36h)达到最高,随后表达量明显下降.推测该基因在种子后熟和萌发过程中起重要作用.本研究为进一步研究AhMMDH1的生物功能提供了参考.

摘要： 本实验研究石竹烯对热杀索丝菌的抑菌效果及其作用机理.通过石竹烯对热杀索丝菌的最小抑菌浓度(minimum inhibition concentration,MIC)和生长曲线的测定考察其抑制活性;通过观察扫描电子显微镜和碱性磷酸酶的泄漏判定石竹烯对细胞形态和细胞壁结构的破坏程度;通过钾离子、二乙酸荧光素分子和蛋白质的泄漏考察其对细胞膜的影响;通过苹果酸脱氢酶以及丙酮酸激酶活力的测定探究其对细胞代谢的影响;通过荧光光谱扫描法研究石竹烯与细菌DNA的结合能力.结果表明,石竹烯对热杀索丝菌的MIC值为4.51 mg/mL,1×MIC和2×MIC石竹烯能够破坏细胞的形态、结构以及细胞膜的通透性,影响细胞代谢,导致苹果酸脱氢酶、丙酮酸激酶活力显著降低(P<0.05),同时对基因组DNA构象和结构造成破坏.

摘要： 质外体汁液(apoplastic washing fluid, AWF)在植物生长发育和抵抗生物及非生物逆境方面发挥着重要作用。目前普遍采用真空渗透离心法提取质外体汁液,但具体提取流程和条件却因植物培养条件、种类和器官等不同而不同。本试验以营养液培养的棉花幼苗为材料,改进了棉花根系和叶片AWF分离的取样方法、渗透条件和离心参数等。结果表明,相对于通常的非整体取样,改良后整体取样简单易操作且显著降低了质外体与共质体的苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase, MDH)活性比值,更适宜开展质外体汁液组分研究。根据真空渗透鲜重增加和AWF稀释因子,进一步证明根系不用真空渗透;而叶片需真空渗透,适宜真空强度/时间为-60 kPa/1min,真空后恢复到正常压强约110s。证明叶片颜色变深面积可作为判定真空渗透强度或时间是否适宜的一种简易可行方法。最后,AWF体积、质外体与共质体的可溶性蛋白含量比值和MDH活性比值综合分析表明,棉花根系适宜离心力大小/时间长度为800×g/10~20 min,叶片为400×g/5 min。本改进方法为棉花AWF组分,如蛋白质组学和代谢组学等研究结果的准确性和可靠性奠定了基础,为其他作物AWF分离方法的优化提供了参考。

摘要： 为了解拉萨裸裂尻鱼的生化遗传特性,采用聚丙烯胺凝胶垂直板电泳分析了拉萨裸裂尻鱼5种组织(心脏、眼睛、肌肉、肝脏和肾脏)的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH),并比较了拉萨裸裂尻鱼和黄河裸裂尻鱼乳酸脱氢酶的差异.结果 表明:拉萨裸裂尻鱼的LDH同工酶和MDH同工酶具有组织特异性和个体差异性,所测样本鱼心脏、眼睛、肌肉、肝脏和肾脏中的LDH酶带数分别为12条、12-13条、14-15条、11-13条和10条;MDH酶带数分别为1条、1-3条、1条、1-3条和5条,拉萨裸裂尻鱼的MDH分为上清液型(s-MDH)和线粒体型(m-MDH).

摘要： 苹果酸脱氢酶(MDH)是参与生物三羧酸循环(TCA)的关键酶,广泛用于临床肝脏相关疾病的诊断,并在生物制药、化工检测等领域具有极大的市场需求.该研究以墓画大洋芽孢杆菌(Oceanobacillus picturae) XJH-11为苹果酸脱氢酶(MDH)产生菌,基于单因素试验,通过Plackett-Burman响应面试验并结合Box-Behnken试验设计对发酵条件进行响应面优化.结果 表明,菌株XJH-11产MDH的发酵培养基为葡萄糖10g/L、酵母膏20 g/L、硫酸镁0.1 g/L、初始pH值8.0,最佳发酵条件为发酵温度27°C、摇床转速150 r/min、接种量5％、装液量125 mL/500 mL.在此优化条件下,MDH酶活为43.67 U/mL,比优化前提高了197.87％.

摘要： 通过动物实验对刚地弓形虫苹果酸脱氢酶(TgMDH)基因进行生物信息学分析,并对该基因进行克隆和表达,纯化表达产物,分析其免疫原性；观察重组弓形虫苹果酸脱氢酶蛋白(rTgMDH)免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答及其抗弓形虫感染作用,探讨rTgMDH作为弓形虫疫苗候选抗原的可能性。实验表明：(1)生物信息学分析发现刚地弓形虫MDH有14个潜在的抗原表位，可能具有免疫原性。(2)成功构建重组质粒pET30a(+)/TgMDH并在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白。原核系统表达的rTgMDH具有免疫抗原性。(3)作为弓形虫疫苗的候选抗原，30μg组rTgMDH滴鼻免疫更有效诱导了黏膜和系统免疫应答。

摘要： 以来自云南的紫花苜蓿野生种德钦苜蓿为亲本之一，与5个国外弓}进紫花苜蓿栽培种以及1个云南紫花苜蓿逸散种AC-3进行了正、反交。采用PCR-RFLP技术，对亲本及杂交种增强结瘤的苹果酸脱氢酶基因(neMDH)CDS序列单核苷酸变异位点进行了研究。结果表明，在所研究的368bp的序列长度范围内，共有4个点突变发生，140bp处的点突变与决定各杂交组合耐酸性表现的产量、生长势、生理等性状之间没有极显著的相关关系。

摘要： 苹果酸脱氢酶1和2(MDH1和MDH2)以及苹果酸酶1(ME1)在能量代谢的三羧酸循环中具有重要作用。本实验采用实时荧光定量PCR技术(q-PCR)检测了瘦肉型长白猪和脂肪型荣昌猪六个不同部位脂肪组织中MDH1、MDH2和ME1基因mRNA的表达量。结果表明，脂肪型的荣昌猪中三个基因的mRNA表达量均高于瘦肉型的长白猪。同一品种内，母猪的脂肪细胞体积及三个基因的表达量均高于公猪。三个基因在皮下脂肪中的表达量高于内脏脂肪中的表达量。并且，MDH1、MDH2和ME1基因的mRNA的表达量与六个不同部位脂肪细胞的体积成正相关。本实验研究了MDH1、MDH2和ME1基因在品种间、性别间及组织间的表达模式，提示三个基因可作为研究猪脂肪沉积特性的候选基因。

摘要： 近年来,病毒性肝炎尤其是乙肝发病率很高,如不早期发现延误治疗易转为慢性导致肝硬化.目前肝功能检查常规测定GPT等,能发现急性肝细胞损害,但几周后多半正常,这对检查晚期病人或治疗尚未痊愈的患者会延误病情.为此提出两种新的酶做为检测指标.同时可弥补漏诊和肝功能常规组项的缺陷.ASAL、MDH检测到目前为止国内外均无试剂盒提供.我们从1996年起对ASAL、MDH两种检测试剂盒进行了研制,建立了检测方法(动力学法),制备成了试剂盒.并对260例健康人和270例肝炎病人同时进行了ASAL、MDH检测,并对其临床价值进行了研究.旨在于提高肝炎的早期诊断率,弥补漏诊和肝功能常规组项的缺隐.

摘要： 根据鸡MD基因序列设计引物,在235bp处发现一个SNP位点,此位点是一个限制性内切酶(SphI酶)发生变化的位点.以东北农业大学高低脂系的第八世代肉鸡和东农F2资源群体为材料.用PCR-RFLP的方法进行基因型分析,结果表明:在高低脂系第八世代肉鸡中BB基因型个体的腹脂重和腹脂率显著高于AA基因型个体(p＜0.05);BB基因型个体的大胸肌重和大胸肌率显著高于AA基因型个体(p＜0.05).在东农F2资源家系中BB基因型个体的大胸肌重和大胸肌率显著高于AA和AB基因型个体(p＜0.05);BB基因型个体的肝脏重和肝脏率显著高于AA和AB基因型个体(p＜0.05).

摘要： 根据鸡MD基因序列设计引物,在235bp处发现一个SNP位点,此位点是一个限制性内切酶(SphI酶)发生变化的位点.以东北农业大学高低脂系的第八世代肉鸡和东农F2资源群体为材料.用PCR-RFLP的方法进行基因型分析,结果表明:在高低脂系第八世代肉鸡中BB基因型个体的腹脂重和腹脂率显著高于AA基因型个体(p＜0.05);BB基因型个体的大胸肌重和大胸肌率显著高于AA基因型个体(p＜0.05).在东农F2资源家系中BB基因型个体的大胸肌重和大胸肌率显著高于AA和AB基因型个体(p＜0.05);BB基因型个体的肝脏重和肝脏率显著高于AA和AB基因型个体(p＜0.05).

摘要： 根据鸡MD基因序列设计引物,在235bp处发现一个SNP位点,此位点是一个限制性内切酶(SphI酶)发生变化的位点.以东北农业大学高低脂系的第八世代肉鸡和东农F2资源群体为材料.用PCR-RFLP的方法进行基因型分析,结果表明:在高低脂系第八世代肉鸡中BB基因型个体的腹脂重和腹脂率显著高于AA基因型个体(p＜0.05);BB基因型个体的大胸肌重和大胸肌率显著高于AA基因型个体(p＜0.05).在东农F2资源家系中BB基因型个体的大胸肌重和大胸肌率显著高于AA和AB基因型个体(p＜0.05);BB基因型个体的肝脏重和肝脏率显著高于AA和AB基因型个体(p＜0.05).

摘要： 根据鸡MD基因序列设计引物,在235bp处发现一个SNP位点,此位点是一个限制性内切酶(SphI酶)发生变化的位点.以东北农业大学高低脂系的第八世代肉鸡和东农F2资源群体为材料.用PCR-RFLP的方法进行基因型分析,结果表明:在高低脂系第八世代肉鸡中BB基因型个体的腹脂重和腹脂率显著高于AA基因型个体(p＜0.05);BB基因型个体的大胸肌重和大胸肌率显著高于AA基因型个体(p＜0.05).在东农F2资源家系中BB基因型个体的大胸肌重和大胸肌率显著高于AA和AB基因型个体(p＜0.05);BB基因型个体的肝脏重和肝脏率显著高于AA和AB基因型个体(p＜0.05).

摘要： 本发明涉及一株在高山被孢霉中协同表达6‑磷酸葡萄糖脱氢酶G6PD2和苹果酸酶ME2的重组菌，还涉及所述菌株的构建方法及应用。本发明采用高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型为材料，构建了一株高产花生四烯酸的高山被孢霉基因重组菌株。本发明验证了G6PD2和ME2在脂肪酸合成与脱饱和过程中发挥的重要作用，通过协同过量表达这两个基因，本发明有效实现同时达到提高脂肪酸产量与脱饱和度的效果，显著提高了ARA在总脂肪酸中的比例，并有效缩短发酵时间，对产油真菌高山被孢霉ATCC 32222的脂质合成基础理论研究及产品开发具有重要的意义。

摘要： 本发明涉及一株在高山被孢霉中协同表达6-磷酸葡萄糖脱氢酶G6PD2和苹果酸酶ME2的重组菌，还涉及所述菌株的构建方法及应用。本发明采用高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型为材料，构建了一株高产花生四烯酸的高山被孢霉基因重组菌株。本发明验证了G6PD2和ME2在脂肪酸合成与脱饱和过程中发挥的重要作用，通过协同过量表达这两个基因，本发明有效实现同时达到提高脂肪酸产量与脱饱和度的效果，显著提高了ARA在总脂肪酸中的比例，并有效缩短发酵时间，对产油真菌高山被孢霉ATCC？32222的脂质合成基础理论研究及产品开发具有重要的意义。

摘要： 本申请公开了用于靶向修饰一种或多种内源性植物苹果酸脱氢酶基因的方法和组合物。

摘要： 本发明提供一种苹果酸脱氢酶电极及其制备方法和应用。通过化学手段将辅酶因子小分子NAD+非活性部位进行化学修饰，将化学修饰后的NAD+与壳聚糖载体共价连接得到NAD+‑壳聚糖复合物，再在基底电极表面修饰碳纳米管，利用碳纳米管作为基底材料，用于NADH的检测；在电极上电沉积ABTS，使用ABTS作为电子媒介体实现NAD+原位再生；滴加NAD+‑壳聚糖复合物，实现NAD+在电极表面的固定；通过戊二醛交联作用将脱氢酶酶连接到壳聚糖载体上，得到脱氢酶电极；该NAD+的固定化与再生方法可与不同种类脱氢酶结合，制备多种脱氢酶电极/生物传感器。本发明在生物传感器制备领域具有广泛的实际应用价值。

摘要： 本发明提供一个来自于蒌叶假单胞菌Pseudomonas beteli的苹果酸脱氢酶PbMDH，该苹果酸脱氢酶的编码基因及其应用。本发明提供的带有苹果酸脱氢酶PbMDH核苷酸序列的克隆质粒可以通过转导、转化、结合转移的方法转入工程菌中，通过调节所述编码基因的表达，能够高效表达苹果酸脱氢酶PbMDH，为苹果酸脱氢酶的生产提供有效途径。本发明提供的海洋来源的苹果酸脱氢酶具有耐盐耐高温的性能，具有重要的工业化应用前景。

摘要： 本发明是一种低温苹果酸脱氢酶醋酸浓度检测试剂盒及其检测方法。所述试剂盒由乙酰辅酶A合成酶5～50U/L、腺嘌呤核苷三磷酸二钠盐0.5～2.5g/L和辅酶A 5～50U/L，L‑苹果酸0.5～2.5g/L，NADH 7.5mmol/L，低温苹果酸脱氢酶5～500U/L，柠檬酸合酶5～500U/L组成；检测方法为：将醋酸样品加入乙酰辅酶A合成酶、ATP和辅酶A反应，将NAD+、L‑苹果酸与低温苹果酸脱氢酶依次加入上述反应液中，混匀之后立刻加入柠檬酸合酶，全程在340nm下测量NADH的吸光度值，依据公式得到醋酸浓度。本发明试剂盒在4°C、20°C、37°C环境中及高盐环境下即可使用，操作简单，检测醋酸浓度准确性高，稳定性好。

摘要： 本发明公开了一种苹果酸脱氢酶基因CIMDH1，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，通过构建重组载体并在大肠杆菌中表达，表达产物具有苹果酸脱氢酶功能，能催化苹果酸转化成草酰乙酸。

摘要： 以大肠杆菌基因组DNA为模板，扩增得到编码苹果酸脱氢酶(MDH)的基因，将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a上，在E.coliBL21(DE3)中用IPTG诱导表达，利用表达载体pET-28a上的6·His-Tag标记选用Ni柱亲和层析法纯化表达具有活性的苹果酸脱氢酶(MDH)。粗酶的比酶活为43U/mg，纯化后比酶活达到112.5U/mg，纯化倍数达2.62倍，回收率为59％。并对该酶的酶学性质进行了初步研究，其中反应最适pH值为6.0，在pH值2.0-6.0的酸性范围内稳定，反应最适温度为37°C，在42°C以下酶的稳定性较好。k+对酶有明显的激活作用，Ni

摘要： 本发明公开了苹果酸脱氢酶MDH及其编码基因与应用。本发明公开的苹果酸脱氢酶MDH为如下A1)、A2)或A3)：A1)氨基酸序列是SEQ ID No.3的蛋白质；A2)将序列表中SEQ ID No.3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。本发明的苹果酸脱氢酶编码基因过表达后，干旱处理条件下转基因植株生长明显好于野生型，且存活率高于未转基因的对照植株，说明其能够显著提高植物抗旱性。

摘要： 本公开涉及一种新苹果酸脱氢酶变体、包含所述变体的谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)菌株以及使用所述菌株生产L‑赖氨酸的方法。