乙脑病毒

摘要： 夏天来临,讨厌的蚊子也来了,冷不防叮你一口,让人无法安眠,也可能“中招”某些疾病,如疟疾、登革热和登革出血热、乙脑等。也有人担心蚊子会成为传播新冠病毒的新隐患。[真相]南方医科大学公共卫生学院副院长陈晓光认为,这种可能性微乎其微。陈晓光表示,病毒对宿主特异性的要求很高。目前,通过蚊媒传播的病毒包括乙脑病毒、登革病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒等,但没有证据表明,冠状病毒可以感染蚊子,并通过蚊子传播。即使可通过蚊子传播的病毒,也不是所有种类的蚊子都能传播,比如登革病毒主要通过伊蚊传播,而库蚊却不会传播登革热。

摘要： 目的建立乙脑病毒重组酶介导逆转录核酸扩增(RT-RAA)快速检测方法。方法根据乙脑病毒NS1基因片段设计引物和探针,通过优化筛选确定最佳引物组合,建立乙脑病毒RT-RAA检测方法,并对其检测灵敏度和特异性进行测试。结果建立的乙脑病毒RT-RAA检测方法灵敏度可达10拷贝,方法检测时间少于20 min,最快2-3 min即可观察到明确荧光扩增信号,与登革病毒、黄热病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒及正常血液样本无交叉反应。结论建立的乙脑病毒RT-RAA检测方法灵敏、快速、特异性好,适用于口岸现场乙脑病毒的快速检测。

摘要： 为模拟乙脑病毒在哺乳动物和蚊虫宿主体内交替传代的自然感染过程,以哺乳动物细胞与蚊虫细胞为培养载体,交替传代培养乙脑病毒SA14毒株,之后对传代培养获得的部分毒株进行序列测定、分析,藉此研究宿主选择压力下乙脑病毒基因变异规律。结果显示,乙脑病毒基因序列变异位点较多,但是突变类型均以单个碱基点突变的形式出现,未发生插入或缺失突变,提示自然传播条件下乙脑病毒进化比较保守。研究结果与既往有关乙脑病毒基因变异及生存适合度研究报道相近,表明此实验模型适应于乙脑病毒乃至其他虫媒病毒基因变异研究。

摘要： 目的:鉴定以乙脑病毒(JEV)疫苗株SA14-14-2为骨架的乙脑/寨卡(ZIKV)嵌合病毒,分析其作为疫苗候选株的可行性。方法:通过对嵌合病毒的噬斑形态鉴定和生长特性鉴定,初步判断嵌合病毒的毒力,并用嵌合病毒接种昆明鼠,检测其脑内、皮下及腹腔神经毒力,使用噬斑减少中和试验(PRNT)及免疫攻击试验分析嵌合病毒的免疫原性及免疫保护作用。结果:嵌合病毒比乙脑疫苗株SA14-14-2具有更小的噬斑;用不同的感染复数(0.1、0.01、0.001)感染BHK21细胞,可得到相似的生长曲线,复制速度较SA14-14-2慢,峰值出现较SA14-14-2晚;对昆明鼠有较强的神经毒力但无明显神经侵袭力;可诱导小鼠产生较高的中和抗体效价;能保护小鼠免受病毒自身脑内攻击并呈现典型的剂量效应;能与SA14-14-2产生一定程度的交叉反应。结论:嵌合病毒JE/ZIKA免疫原性良好,但对小鼠有较强的脑内神经毒力,嵌合病毒和乙脑疫苗株也有一定的交叉免疫。

摘要： 2022年10月初,山东莘县某小型养猪场繁殖母猪出现流产、死胎等临床症状,采取抗生素治疗和蓝耳病疫苗紧急免疫后效果不佳。为确诊病因,采集流产胎儿和脐带血等样品进行细菌分离;并以PCR/RT-PCR法分别检测病料样品中是否存在猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪乙脑病毒(JEV)核酸。结果在送检样品中未分离到细菌,均检测到JEV核酸,其它检测病原均为阴性。其后对1份JEV阳性样品E基因部分序列进行扩增、测序和分析,扩增片段大小约为1500 bp,与已知GI-b型JEV毒株核苷酸序列同源性最高。以上结果表明,该场母猪繁殖障碍是由JEV感染引起,且该毒株属于GI-b型。JEV的流行对猪群和工作人员健康造成巨大的威胁,因此急需采取相应的防控措施。

摘要： 为探索包膜蛋白T120A突变对乙脑/寨卡嵌合病毒JEV/ZIKV小鼠脑内神经毒力的影响,应用重叠延伸PCR和分子克隆技术构建含T120A突变的乙脑/寨卡嵌合病毒全长cDNA质粒,经酶切、测序鉴定后,以其为模板体外转录制备RNA,电转染导入BHK21细胞,收获培养液上清获得突变病毒株JEV/ZIKV (T120A).分别用JEV/ZIKV和JEV/ZIKV (T120A)感染BHK21细胞,绘制病毒增殖曲线,比较蚀斑大小;脑内接种昆明鼠,比较病毒小鼠脑内神经毒力差异.突变病毒感染性克隆经酶切鉴定表明成功构建,增殖曲线发现:突变病毒高峰滴度为5.59 log10pfu/mL,低于JEV/ZIKV的峰值(6.8 log10pfu/mL),JEV/ZIKV (T120A)的小鼠脑内神经毒力LD50为1.38 PFU(0.03 mL),JEV/ZIKV病毒LD50为2.21 PFU(0.03 mL).研究表明寨卡病毒包膜蛋白T120A突变降低了乙脑/寨卡嵌合病毒的复制能力,但却轻微增强了病毒小鼠脑内神经毒力.

摘要： 为了实现一步快速检测乙脑病毒,试验采用逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术,利用具有高反转录酶活性的Bst 3.0 DNA聚合酶,根据乙脑病毒P3株NS1序列设计一组LAMP引物,以乙脑病毒NS1重组质粒为模板,针对影响LAMP反应结果的4个重要因素:反应温度、甜菜碱浓度、Mg2+浓度、酶浓度进行单因素试验并优化反应体系.结果 表明,当扩增温度为67°C,甜菜碱浓度为0.8mol· L-1,Mg2+浓度为4mmol·L-1,酶浓度为0.32U·μL-1时体系反应效率最佳.为进一步验证RT-LAMP检测方法,以乙脑病毒P3株为模板,进行扩增反应,结果显示成功.在结果判定方面,采用成本较低的钙黄绿素-MnCI2显色方法,并通过使用有色背景板,增强阳性与阴性结果间的差异,辅助判断.试验说明基于Bst 3.0 DNA聚合酶对乙脑病毒的一步检测是成功的,为研制一款灵敏度高、特异性强、检测成本低、可在猪场和基层实验室简单操作的JEV快速检测试剂盒做出探索,也为今后研发针对RNA病毒的高效检测方法提供参考.

摘要： 目的 利用THP-1细胞研究梯度稀释的乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)E蛋白抗体对Ⅱ型登革病毒(Dengue virus,DENV-Ⅱ)复制能力的影响.方法 采用不同稀释度的JEV-E抗体与分离自云南西双版纳重症患者血清中的DENV-Ⅱ复合感染人THP-1细胞,构建DENV-Ⅱ病毒荧光定量PCR检测标准曲线,利用实时荧光定量PCR检测不同稀释度的JEV-E抗体与DENV-Ⅱ以不同MOI(Multiplicity of infection)复合感染人THP-1细胞的病毒拷贝数.结果 实时荧光定量PCR检测发现1/4稀释度浓度的JEV-E抗体促进DENV-Ⅱ在人THP-1细胞内复制,而高浓度和低浓度JEV-E抗体对DENV-Ⅱ在人THP-1细胞内的复制无明显促进作用.结论 同为黄病毒属的JEV病毒E蛋白抗体能够诱发DENV-Ⅱ在人THP-1细胞产生抗体依赖增强感染现象,为后续研究黄病毒间的抗体依赖增强感染现象奠定了理论基础.

摘要： 流行性日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染人及多种哺乳动物,并引起严重的中枢神经系统损害的一种人畜共患病.本文对流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)猪源分离株CSEXZ-2D感染的BHK-21细胞培养物中乙脑病毒的浓缩及纯化方法进行了研究.对浓缩及纯化后的病毒TCID50效价分别进行测定的结果表明,经差速离心后病毒液在4°C条件下分别以30000rpm、40000rpm、50000rpm或60000rpm各超速离心3h,其中50000rpm超速离心可将绝大部分JEV病毒粒子充分沉淀至离心管底部,浓缩效果最佳;病毒沉淀用PBS重悬后进行不连续蔗糖密度梯度离心,病毒粒子主要集中在浓度为35％～50％的区带蔗糖层.本研究为利用差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化JEV细胞毒提供了有价值的参考依据.

摘要： 目的:建立乙脑病毒RT—PCR检测方法.rn 方法:参照已发表的乙脑病毒全基因组序列,针对其衣壳蛋白C基因设计1对引物,提取乙脑病毒的RNA,逆转录为cDNA,进行PCR扩增,对检测方法进行优化,验证该方法的特异性及敏感性,并对90份临床样本进行检测.rn 结果:所建立的乙脑病毒RT—PCR检测方法特异性和敏感性良好,以含乙脑病毒衣壳蛋白C基因的重组质粒DNA为模板,最低可检出10 pg DNA.90份样本经RT—PCR检测,有23份扩增出特异性的目的条带.从小型猪脑组织中能分离鉴定出乙脑病毒.rn 结论:已建立了乙脑病毒逆转录PCR检测方法,为乙脑病毒检测、流行病学调查奠定了基础.

摘要： 目的：以狂犬与乙脑病毒之间存在交叉抗原为假设，对狂犬免疫球蛋白存在高效价乙脑抗体现象的客观性与规律性进行验证，分析其科学价值。rn 方法：以普通血清、破伤风标准血清与其它免疫球蛋白制品为对照，采用狂犬与乙脑抗体定量检测试剂盒分别检测乙脑阳性血清、狂犬标准血清、狂犬免疫球蛋白的狂犬与乙脑抗体效价。rn 结论：推测狂犬与乙脑病毒之间存在单向、强交叉性抗原，该发现对狂犬与乙脑的防治具重要科学价值。

摘要： 流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病属于自然疫源性疾病,多种动物均可感染,其中猪群感染最为普遍,此病是导致种猪繁殖障碍的元凶之一,并且在我国猪场中广泛存在。

摘要： 流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病属于自然疫源性疾病,多种动物均可感染,其中猪群感染最为普遍,此病是导致种猪繁殖障碍的元凶之一,并且在我国猪场中广泛存在。

摘要： 流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病属于自然疫源性疾病,多种动物均可感染,其中猪群感染最为普遍,此病是导致种猪繁殖障碍的元凶之一,并且在我国猪场中广泛存在。

摘要： 流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病属于自然疫源性疾病,多种动物均可感染,其中猪群感染最为普遍,此病是导致种猪繁殖障碍的元凶之一,并且在我国猪场中广泛存在。

摘要： 本发明公开了以乙脑病毒减毒株为基因骨架的乙脑/登革嵌合病毒及其应用。本发明提供了一个DNA分子，是将乙脑病毒的基因组RNA对应的cDNA中的蛋白质A的编码基因替换为蛋白质B的编码基因得到的重组DNA；所述蛋白质A为由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述蛋白质B为由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明所提供的以乙脑病毒减毒株为基因骨架的乙脑/登革嵌合病毒为含有所述DNA分子的重组病毒。本发明所提供的乙脑/登革2型嵌合病毒作为登革疫苗用于预防登革病毒感染也具有良好的应用前景。

摘要： lncRNA NONSUST006715.1在抑制乙脑病毒增殖中的应用，属于生物技术领域。本申请公开了lncRNA NONSUST006715.1在抑制乙脑病毒增殖中的应用。本发明提出了一种具有抑制JEV增殖功能的宿主lncRNA，对于防治乙脑病具有重要意义。

摘要： 本发明公开了以乙脑病毒减毒株为基因骨架的乙脑/登革嵌合病毒及其应用。本发明提供了一个DNA分子，是将乙脑病毒的基因组RNA对应的cDNA中的蛋白质A的编码基因替换为蛋白质B的编码基因得到的重组DNA；所述蛋白质A为由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述蛋白质B为由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明所提供的以乙脑病毒减毒株为基因骨架的乙脑/登革嵌合病毒为含有所述DNA分子的重组病毒。本发明所提供的乙脑/登革2型嵌合病毒作为登革疫苗用于预防登革病毒感染也具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种鉴别基因Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅴ型乙脑病毒和盖他病毒的方法及其试剂盒，属于病毒分子检测领域。为克服临床上缺少对基因Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅴ型乙脑病毒和盖他病毒鉴别的方法，本发明提供一种基因Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅴ型乙脑病毒和盖他病毒的鉴别方法以及引物和探针，所涉及引物和TaqMan探针是依据乙脑病毒的prM/M基因保守区和盖他病毒的E2基因保守区进行设计，其可以有效鉴别乙脑病毒和盖他病毒，具有较高特异性和灵敏度的优点，可以为乙脑病毒和盖他病毒基因型的快速检测、临床诊断以及流行病学调查提供更好的方法支持。

摘要： 本发明公开了一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组及检测方法，核酸组包括用于检测乙脑病毒基因的第一引物对以及用于检测盖塔病毒的第二引物对；第一引物对包括：SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；第二引物对包括：SEQ ID NO.4所示的上游引物和SEQ ID NO.5所示的下游引物。该核酸组可以用于检测样品中的乙脑病毒和盖塔病毒，具有较高的特异性和灵敏度。

摘要： 本发明提供了一种寨卡病毒与乙脑病毒联合疫苗，属于生物制品制备技术领域。本发明的联合疫苗中含有0.5‑10ug/ml乙脑病毒和0.5‑10ug/ml寨卡病毒。本发明还提供了寨卡病毒与乙脑病毒联合疫苗的制备方法，包括乙脑病毒和寨卡病毒的接种、纯化和灭活步骤，其中乙脑病毒接种MOI为0.001‑0.1CCID50/ml，寨卡病毒接种MOI为0.001‑0.1CCID50/ml。本发明的疫苗能够同时免疫寨卡病毒和乙脑病毒，减少免疫次数，避免了减毒疫苗导致的感染和过敏反应，具有良好的防控寨卡病毒和乙脑病毒引起疾病的能力。

摘要： 本发明涉及一种乙脑病病毒颗粒及其制备方法，属于生物技术领域。其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。利用昆虫表达系统，获得稳定表达蛋白的杆状病毒，扩大培养表达蛋白浓缩后得到一种乙脑病毒颗粒。

摘要： 本发明公开了一种复制缺陷型乙脑病毒的制备方法和相关应用，制备该复制缺陷型病毒的方法包括以下步骤：a）构建稳定表达日本脑炎病毒（JEV，Japanese encephalitis virus）C蛋白的细胞系；b）构建C蛋白编码基因缺失的JEV病毒复制子DNA载体；c）C蛋白基因缺失的JEV病毒复制子DNA载体，转入稳定表达C蛋白的细胞系中,缺失C蛋白基因的JEV复制子和细胞中的C蛋白形成互补，组成外形完整的病毒颗粒，并把RNA包装进入病毒颗粒；d）培养细胞，收集细胞培养上清中的复制缺陷病毒，作为诊断试剂或者疫苗。上述制备方法简单有效，适合大规模生产，制备的复制缺陷病毒有多种应用，包括：a）作为病毒抗体诊断的抗原；b）单独或者加入佐剂，作为疫苗使用。

摘要： 本发明提供了一种乙脑病毒SA14‑14‑2的克隆方法：根据NCBI公布的D90195.1基因序列为参照分别合成6段基因序列，利用同源重组技术通过相应酶切位点将合成序列依次克隆至线性化载体中，获得乙脑病毒SA14‑14‑2的全长克隆。本发明采用同源重组技术，可简单、快速并且高效的将插入片段定向克隆至载体任意位点。仅需将插入片段正/反向引物5’端引入线性化载体的末端序列，使之包含载体的同源臂，后按一定比例混合，在重组酶催化下，37°C反应30min即可完成，极大的节约了连接时间。同时由于独特的非连接酶依赖体系，极大降低了载体自连背景，同时对杂质的耐受度增加，提高了其阳性率并简化了实验步骤。

摘要： lncRNA NONSUST006715.1在抑制乙脑病毒增殖中的应用，属于生物技术领域。本申请公开了lncRNA NONSUST006715.1在抑制乙脑病毒增殖中的应用。本发明提出了一种具有抑制JEV增殖功能的宿主lncRNA，对于防治乙脑病具有重要意义。