腺病毒介导

摘要： 目的 探讨热休克培养对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptors,FGFRs)及Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白的影响.方法 4周龄雄性SD大鼠处死后获取BMSCs,24 h热休克培养,分别转染bFGF基因过表达腺病毒载体Ad-bFGF和空载体Ad-GFP,并设立阴性对照组,qRT-PCR和Western blot法分别鉴定3组细胞bFGF基因和蛋白的表达情况,Western blot法测定FGFRs、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况.结果 转染后48 h,RT-PCR和Western blot结果显示,转染Ad-bFGF组细胞有bFGF基因和蛋白表达,而阴性对照组和空载体Ad-GFP组未检测;Western blot结果表明,与阴性对照组和空载体Ad-GFP组相比,转染Ad-bFGF组FGFRs、Bcl-2表达增高,而Bax、Caspase-3表达下降,Bax/Bcl-2比值下降(P0.05).结论 腺病毒介导的基因转染技术能实现bFGF转染到BMSCs中,借助于热休克培养能提高FGFRs表达水平,并增强细胞抗凋亡能力,有望成为基因治疗的理想载体.

摘要： 【摘要】p53通过调节细胞周期和诱导细胞程序性死亡中起重要作用的药物反应。p53蛋白的C-末端具有负性调节作用；但是，它是否会影响肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性，目前尚不清楚。在这项研究中，

摘要： 项目名称:腺病毒介导的抗菌肽CAMA-syn靶向表达及其抑菌作用研究项目经费:25万项目主要内容:抗菌肽被誉为抗细菌感染的新希望,然而其存在的靶向性差、生产成本高、体内效率低等问题成为阻碍抗菌肽药物临床应用的瓶颈。通过腺

摘要： ^10F;华中科技大学学报：医学英德文版

摘要： 目的 构建针对单核细胞趋化蛋白1(monoeyte chemoattractant protein 1,MCP-1)基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒,探讨干扰MCP-1表达对人单核细胞白血病株THP-1迁移能力的影响.方法 设计并合成针对人MCP-1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与带有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183细菌中进行同源重组,获得重组腺病毒载体pAdeasy-si-MCP-1,转染人胚肾细胞株293细胞,包装并扩增病毒颗粒.体外感染能表达MCP-1的293细胞,RT-PCR检测siRNA对MCP-1转录水平影响.Millicell细胞迁移实验检测对人单核细胞白血病株THP-1体外迁移能力的影响.结果 高糖诱导下,人293细胞MCP-1的表达增强;而Ad-si-MCP-1感染后,能够显著抑制高糖刺激的MCP-1 mR-NA水平的升高;Ad-si-MCP-1感染293细胞后的培养上清对THP-1的趋化作用较高糖刺激组及其siRNA阴性对照组显著降低.结论 成功构建了抑制MCP-1表达的siRNA腺病毒载体,其抑制MCP-1表达可明显抑制高糖诱导的THP-1的趋化作用,提示MCP-1表达的干预可能为糖尿病肾病等MCP-1相关疾病提供新的预防和治疗手段.

摘要： COPD的发病机制尚未完全清楚。过去30余年，COPD被认为是由于吸烟、环境污染、细菌产物等引起肺部炎症反应，造成蛋白酶和抗蛋白酶系统失衡，最终导致肺泡破坏引起肺气肿。近年的研究结果表明，香烟介导的氧化应激与细胞内皮凋亡在肺气肿发病机制中具有重要作用心引。本研究以香烟烟雾提取物（cigarette smoking extract，CSE）作用于人脐静脉内皮细胞株ECV304，并通过腺病毒介导谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GPX）基因转染，观察GPX基因转染前后CSE刺激下ECV304细胞内活性氧与凋亡指数的变化，了解不同氧化和抗氧化状态对ECV304凋亡的影响，探讨与吸烟有关的氧化应激与内皮细胞凋亡在COPD发病机制中的作用。

摘要： 目的 探讨内皮抑素对小鼠肺癌生长和转移的抑制作用及其对肿瘤内部新生血管的影响.方法 在C57BL/6小鼠背部皮下注射2×106 lewis肺癌(LLC)细胞,建立小鼠肺癌种植瘤模型,2周后,瘤内注射2×109 pfu内皮抑素腺病毒载体,观察内皮抑素对肿瘤生长、转移及生存率的影响,检测内皮抑素在肿瘤组织的原位表达和血液循环中的表达水平及持续时间.用免疫组化方法,检测肿瘤内部血管密度,观察治疗对肿瘤血管的影响.用透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡情况.结果 免疫组化检测结果显示,内皮抑素蛋白在内皮抑素组的肿瘤组织中呈强阳性表达,而在空载体对照组和阴性对照组中呈阴性表达或很少量表达.用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测内皮抑素组血清内皮抑素浓度,第2周可达1540±560 ng/ml;1个月后,血清内皮抑素浓度降至对照水平.内皮抑素组的肿瘤体积和生存率,与空载体对照和阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).抗CD31抗体标记的肿瘤内血管密度(MVD)在内皮抑素组、空载体对照组和阴性对照组中,分别为37.5±4.6、65.2±5.8和68.5±4.5个/200倍视野,抗CD105抗体标记的肿瘤内MVD分别为10.5±3.2、39.7±5.6和42.4±4.8个/200倍视野,内皮抑素组与空载体对照组和阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).内皮抑素组的组织在电镜下呈凋亡相的肿瘤细胞多见.结论 腺病毒介导的内皮抑素基因可在体内高效、较长时间表达内皮抑素蛋白,对小鼠皮下种植瘤有一定的治疗作用,其作用的靶点是抑制新生血管的生成.

摘要： 目的 探讨激肽释放酶(kallikrein)对脑梗死周边区域缺血神经细胞凋亡的作用.方法 建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,将造模成功的30只大鼠采用随机数字表法分为以下几组:A组,空白对照组;B组,注射生理盐水;C组,注射pAdCMV-人类组织激肽释放酶(HTK):每组10只.观察每组大鼠处理前后神经功能损害评分(NSS),用免疫组化技术检测外源性HTK的表达,并通过TUNEL染色、RT-PCR检测细胞凋亡及凋亡因子bcl-2、bax、caspase-3 mRNA水平.结果 治疗后24h在C组中可见HTK表达阳性细胞并逐渐增多,72h后达高峰.与B组以及A组相比差异有统计学意义(112±6.1、68±4.2、59±3.9,P0.05);治疗后72 h及7 d,bax与caspase.3 mRNA水平则明显降低(P0.05) while bax and caspase-3 mRNA levels decreased markedly(P<0.05) 72 h and 7 days after the treatment.Conclusion Kallikrein can inhibit neuronal apoptosis around the cerebral infarct and improve the neurological fimction of rats following cerebral infarction probably by reducing the expressions of such apoptotic factors as bax and caspase-3.

摘要： 目的 探讨Kallikrein基因对脑缺血再灌注后梗死灶周围血管增生与局部脑血流灌注恢复的作用.方法 建立大鼠脑缺血再灌注模型,术后将90只大鼠按照随机数字表法分为3组.每组30只,分别是空白对照组、注射生理盐水、注射pAdCMV-人组织激肽释放酶(HTK)组.各组大鼠又分为治疗后12 h、24 h及72 h组,每组各10只.治疗前后行大鼠神经功能缺损评分.TTC染色方法测定脑梗死面积的变化,用免疫组化检测外源性HTK的表达以及局部血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并通过14C-iodoantipyrine微示踪技术检测局部脑血流灌注(rCBF)情况.结果 与其他两组相比,pAdCMV-HTK组大鼠脑梗死面积在治疗后24h已有明显减小,72h后这种变化更明显,差异有统计学意义(P0.05),而在治疗24h、72 h后rCBF则明显增高,差异有统计学意义(P0.05),and significant increase in the rCBF occurred 24 h and 72 h after the injection (P<0.05). ConclusionKallikrein gene transfer following cerebral ischemia/reperfusion injury promotes vascular proliferationaround the infarct and increases the rCBF to reduce the infarct volume and attenuate neurological deficitsin rats.

摘要： 研究表明腺病毒感染的宿主范围广，是稳定介导的重要工具。我们利用绿色荧光蛋白（green fluorescence protein，GFP）为报告基因，观察GFP腺病毒对体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞的感染能力，为采用腺病毒介导的目的基因转染治疗眼底病变奠定基础。

摘要： 目的：检测C-fos基因启动子在胶质瘤细胞株中的转录活性;构建c-fos启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)自杀基因重组腺病毒载体,观察腺病毒介导的HSV-tk/GCV系统在cfos启动子调控下对胶质瘤细胞的杀伤作用.rn 方法：PCR法克隆人C-fos,TERT,Survivin,E2F1,Cox2基因启动子片段,将上述5种启动子以及CMV启动子序列分别插入到pGL4-Basic报告载体中.将构建的pGL4-Cfos,pGL4-TERT,pGL4-Survivin,pGL4-E2F1,pGL4-Cox2,pGL4-CMV重组质粒和内参质粒pRL-TK瞬时共转染胶质瘤细胞系U87,U373,U251，检测双荧光素酶的活性。rn 结果：经酶切鉴定和测序验证，克隆及载体构建完全正确。将腺病毒Ad-CMV-TK一IRES-hrGFP和Ad-CFOS-TK-IRES-hrGFP分别感染U251细胞，随GCV质量浓度的增加，U251细胞的抑制率升高，在MOI=100, GCV质量浓度分别为1,10,100,1000μmol/1条件下，细胞抑制率分别为(24.18±6.0l)%, （30.39±9.67)%,（57.07±9.29)%, (94.50±3.48)。将腺病毒Ad-CMV-TK-IRES-hrGFP和Ad-CFOS-TK-IRES-hrGFP分别感染U87细胞，随GCV质量浓度的增加，U87细胞的抑制率升高，在MOI=100, GCV质量浓度分别为1,10,100,1000μmol/1条件下，细胞抑制率分别为(36.03±2.27)%,(96.62±1.86)%,(98.09±1.49 %, (98.84±0.60)。rn 结论:在人胶质瘤细胞株中C-fos启动了的转录活性高。腺病毒介导的HSV-tk/GCV系统在c-fos启动了调控下在体外可以有效杀伤胶质瘤细胞。该结果可为胶质瘤的靶向性基因治疗研究提供参考。

摘要： 目的：观察腺病毒介导的心肌营养素-1 (Adv-EG FP-CT-1)对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)神经分化中细胞存活的影响.方法：全骨髓贴壁筛选法分离培养rBMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面标记性蛋白.将细胞分为以下4组:对照组、Adv-EGFP(重组腺病毒增强型绿色荧光蛋白)转染组、Adv-EGFP-CT-1转染组及诱导剂组,各转染组分别向培养液中加入对应的腺病毒液,转染复数MOI=200.转然后48h,除对照组外,其他各组均予神经分化诱导,于诱导后5h、24h、48h DAPI染色法观察凋亡细胞核形态;流式细胞术检测细胞的早期凋亡率.于诱导后5h、3d、7d相差显微镜下观察细胞存活情况;台盼蓝染色法检测细胞存活率.结果:诱导处理后，CT-1组及对照组，细胞核大部分为淡蓝色圆形或椭圆形，而空病毒组及诱导剂组细胞核出现染色质聚集、固缩，见较多凋亡细胞核;诱导后各时间点，CT-1组及对照组早期凋亡率较空病毒组及诱导剂组明显减少，差异有统计学意义(P0.05);空病毒组及诱导剂组差异无统计学意义(P>0.05);同时，各组细胞随时间的延长均有凋亡，且差异有统计学意义(P<0.05)。诱导后不同时间点，CT-1组及对照组存活率均高于空病毒组及诱导剂组，差异有统计学意义(P<0.05);不同时间点各组与对照组比较，存活率均低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05);各时间点空病毒组及诱导剂组差异无统计学意义(P<0.05);同时，各组细胞随时间的延长均出现死亡，差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CT-1可以维持旧MSCs神经分化过程中细胞的存活。

摘要： 目的：观察腺病毒介导的心肌营养素-1(Adv-EGFP-CT-1)对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)向神经方向分化的作用.方法：全骨髓贴壁筛选法分离培养rBMSCs,纯化至第三代(P3),流式细胞术鉴定细胞表面标记性蛋白.将细胞分为以下4组:对照组、Adv-EGFP(重组腺病毒增强型绿色荧光蛋白)转染组、Adv-EGFP-CT-1转染组及诱导剂组,各转染组分别向培养液中加入对应的腺病毒液,转染复数MOI=200.转然后48h,除对照组外,其他各组均予神经分化诱导,于诱导后5h、3d、7d观察各组细胞形态学变化、细胞免疫荧光检测各组Nestin、NeuN、GFAP的表达.结果：诱导处理后,除对照组外,其他各组均显示类神经细胞样形态改变,其中CT-1组此变化最明显.诱导后5h Nestin的阳性率最高,其中CT-1组的阳性率均高于其他各组(86.31％±4.27％),差异有统计学意义(P＜0.05),随后其阳性率逐渐下降,CT1组较其他各组变化明显,差异有统计学意义(P＜0.05);诱导后5h CT-1组NeuN、GFAP即有少量表达,随后NeuN、GFAP阳性率逐渐升高,至第7d时阳性率最高,其中,CT-1组各时间点NeuN、GFAP阳性率均高于其他各组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论：CT-1可以促进rBMSCs向神经方向分化.

摘要： 目的:研究重组腺病毒介导的PTEN基因(第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因)表达对肺癌的抑癌和化疗增敏效应及分子机制。方法:采用重组腺病毒载体PTEN(简称Ad—PTEN)感染QBI-293A细胞，并用该细胞进行病毒扩增和效价测定。体外将Ad—PTEN感染NCI—H446小细胞肺癌细胞。分为5组：细胞对照PBS组(PBS组)、空载体腺病毒组(Ad组)、Ad—PTEN基因治疗组(简称Ad—PTEN组)、顺铂对照组(DDP组)和Ad—PTEN+DDP组，Western blotting鉴定PTEN基因表达，MTT法和流式细胞仪(FCM)检测Ad—PTEN对NCI—H446小细胞肺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用，用RT—PCR检测细胞凋亡相关基因P53、人细胞凋亡相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤／白血病-2(Bcl-2)、和生存素(Survivin)的转录。结果:Ad-PTEN可在QBI-293A细胞中增殖，病毒效价检测为108 pfu/ml。 Ad-PTEN感染NCI-H446细胞后，Western-blotting检测到了PTEN基因的表达，Ad-PTEN体外能明显抑制人NCI-H446小细胞肺癌细胞的生长和诱导凋亡，体内同样能明显抑制肺癌裸鼠移植瘤的生长，均优于PBS组和Ad组，具有抑瘤作用;而且Ad-PTEN能提高DDP化疗药物体内外抑制NCI-H446小细胞肺癌细胞及裸鼠移植瘤的生长和诱导凋亡的作用，具有化疗增敏效应。结论:1, Ad-PTEN体内外可抑制NCI-H446小细胞肺癌细胞和肺癌裸鼠移植瘤生长和诱导凋亡，呈现明显抑癌作用。2, Ad-PTEN联合细胞毒药物DDP体内外抑制NCI-H446小细胞肺癌细胞和肺癌裸鼠移植瘤生长和诱导凋亡的作用均较Ad-PTEN组和DDP组明显，具有一定化疗增敏效应。3,Ad-PTEN+DDP较Ad-PTEN, DDP更具显著上调P53, Caspase3, Bax和下调Bcl-2, Survivin等细胞凋亡相关基因表达的效应，这可能是Ad-PTEN具有抑癌和化疗增敏效应的重要机制之一。4, Ad-PTEN,DDP和Ad-PTEN+DDP具有下调肿瘤血管形成相关因子VEGF表达的效应，Ad-PTEN+DDP对VEGF表达趋势的影响较Ad-PTEN, DDP更显著，这可能是Ad-PTEN对肺癌裸鼠移植瘤体内生长具有抑瘤和化疗增敏效应的另一机制。

摘要： 目的：探讨小窝蛋白-1(caveolin-1)在大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜形成中的作用和相关机制.方法：将3月龄健康雄性SD大鼠分为4组:正常对照组,颈动脉球囊损伤+生理盐水组,颈动脉球囊损伤+过表达腺病毒转染组,颈动脉球囊损伤+空病毒转染组.进行临床研究。结果:大鼠颈动脉球囊损伤后7a和14a，生理盐水组与空病毒转染组血管组织caveolin-1蛋白表达与正常对照组相比显著降低(P均<0.01)，而过表达病毒转染组caveolin-1蛋白表达基本恢复到正常对照组水平。过表达病毒转染组明显抑制球囊损伤后血管新生内膜增生，与生理盐水组和空病毒转染组相比，术后7d和14d内膜与中膜的厚度比及面积比均显著减少(P<0.01)。免疫组织化学检查显示，过表达病毒转染组PCNA和a-actin的阳性细胞率均显著低于生理盐水组和空病毒转染组(P<0.01)。与生理盐水组和空病毒转染组组比较，过表达病毒转染组显著抑制球囊损伤后各时间点血管中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的mRNA和蛋白的表达(P<0.01)，而对TIMP-2的mRNA和蛋白表达无影响。结论：基因转染过表达caveolin-1能抑制颈动脉球囊损伤后局部新生内膜形成，其机制可能与抑制血管平滑肌细胞增殖、下调MMP-2的表达有关。

摘要： 目的：再狭窄和动脉粥样硬化以血管平滑肌细胞(VSMC)的过度增殖和迁移为特征。此前的研究证实,CREG基因可保护再狭窄的发生,但是CREG对动脉粥样硬化的影响尚不清楚。因此,本研究的目的是明确CREG对动脉粥样硬化有无保护作用。rn 方法：采用免疫染色和Western blotting检测人和小鼠血管中CREG的表达。通过静脉输注途径实施的、腺病毒介导的CREG过表达(以腺病毒介导的GFP过表达为对照)。采用短发卡RNA介导CREG低表达观察CREG对体外VSMC细胞增殖和炎症反应的影响。肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-1β的表达采用ELISA检测。采用Western blotting检测NF-κB和ERKI/2的表达。rn 结论：CREG可保护动脉粥样硬化，该作用与其抑制VSMC增殖和炎症反应有关。

摘要： 目的：研究腺病毒介导的ING4基因(Ad—ING4)对肺癌体内外的抑制作用及其潜在的分子机制。方法：体外采用不同MOI的Ad—ING4感染人A549肺癌细胞,并用MTT法检测Ad—ING4对A549肺癌细胞的抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞的凋亡率,采用A549细胞株建立人肺癌裸鼠模型,瘤体局部注射干预用药,每隔5d测量一次肿瘤体积,治疗结束后1wk,将裸鼠处死,摘除瘤体称重,计算抑瘤率;瘤块HE染色,免疫组化检测ING4、P53、Caspase3、Survivin、CD34、HIF—1等基因的表达。结果：Ad—ING4感染A549细胞抑制率可达47.62％左右：72 h凋亡率为18.5％;荷瘤裸鼠经治疗后,Ad—ING4组和DDP组的肿瘤体积、瘤重均明显缩小,其抑瘤率分别达到42.43％和46.47％,DDP组出现不良反应;免疫组化检测Ad—ING4组和DDP组与对照组比较,P53、Caspase3的表达上调(P

摘要： 目的：研究Ad-Tcf-fadd抑制人结直肠癌SW480细胞体内外生长的作用，为肿瘤后期的基因治疗提供一定的理论依据和方法。rn 方法：用MTT法检测Ad-Tcf-fadd对SW480细胞体外增殖活性影响、用移植瘤模型评价Ad-Tcf-fadd对人结直肠癌SW480体内生长的影响。rn 结果：滴度为1011PFU／ml、1010PFU／ml和109PFU／ml的Ad-Tcf-fadd对SW480细胞的增殖抑制率分别为69.9％、55.8％和33.3％;1011PFU／ml和1010PFU／ml滴度对体内移植瘤生长的抑制率分别为44.6％和33.2％。rn 结论：Ad-Tcf-fadd对人结直肠癌SW480细胞的体内外生长具有抑制作用。

摘要： 目的：研究Ad-GFP-nm23-H1抑制人高转移结直肠癌Lovo细胞生长和转移的作用，为肿瘤后期的基因治疗提供一定的理论依据和方法。rn 方法：用MTT法及Transwell分别检测Ad-GFP-nm23-H1对Lovo细胞体外增殖活性、黏附能力以及侵袭力的影响。rn 结果：滴度为1010PFU／ml、109PFU／ml和108PFU／ml的Ad-GFP-nm23-H对Lovo细胞的增殖抑制率分别为84.9％、48.5％和22.5％，黏附抑制率分别为70.3％、60.1％和18.5％，侵袭力抑制率分别为83.2％、52.2％和28.1％。rn 结论：Ad-GFP-nm23-H1对人高转移结直肠癌Lovo细胞的生长和转移具有抑制作用。

摘要： 本研究的目的在于构建带有双基因(抗VEGF一发夹状核酶+白细胞介素一24)的复制缺陷型腺病毒载体，细胞水平及移植瘤水平观察带有抗VEGF一发夹状核酶和白细胞介素一24的腺病毒对结肠癌VEGF表达的抑制作用以及对结肠癌生长的抑制作用。

摘要： 本发明公开了一种鉴别鸭腺病毒1型、鸭腺病毒2型和鸭腺病毒3型的PCR‑HRM引物和方法。本发明首次建立了一种可快速区分鸭腺病毒1型、鸭腺病毒2型和鸭腺病毒3型的PCR‑HRM检测方法，操作简单，高通量，显著缩短了鸭腺病毒1型、鸭腺病毒2型和鸭腺病毒3型鉴别与检测所需时间；同时本发明的检测方法准确度高、特异性好、灵敏度高，有利于在临床实践中推广应用。

摘要： 本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。

摘要： 本发明涉及重组病毒基因工程技术领域，具体涉及一种同时预防人3型腺病毒‑人55型腺病毒‑人7型腺病毒的多表位疫苗候选株，在人3型腺病毒六邻体的HVR2区、HVR5区分别插入人55型腺病毒中和抗原表位55R2、人7型腺病毒中和抗原表位7R5，该疫苗候选株可以诱导同时抗人3型、7型、55型腺病毒的免疫反应，利用该疫苗候选株可以制备预防人3型、7型、55型腺病毒的三价疫苗。

摘要： 本发明提供了含有编码狂犬病病毒抗原的插入DNA顺序的重组腺病毒DNA顺序和结合该DNA顺序的重组体腺病毒。;本发明还提供了含有有效量的重组体腺病毒和药物上可接受的赋形剂的疫苗和使哺乳动物对由狂犬病病毒诱发的疾病产生免疫能力的方法，包括将病毒或疫苗施用于哺乳动物。

摘要： 本发明公开了一种鉴别鸭腺病毒1型、鸭腺病毒2型和鸭腺病毒3型的PCR‑HRM引物和方法。本发明首次建立了一种可快速区分鸭腺病毒1型、鸭腺病毒2型和鸭腺病毒3型的PCR‑HRM检测方法，操作简单，高通量，显著缩短了鸭腺病毒1型、鸭腺病毒2型和鸭腺病毒3型鉴别与检测所需时间；同时本发明的检测方法准确度高、特异性好、灵敏度高，有利于在临床实践中推广应用。

摘要： 本发明公开了一种犬腺病毒、I型和II型犬腺病毒的实时荧光定量PCR检测及鉴别引物和探针，并基于该引物和探针提供用于同时鉴别检测犬腺病毒、I型和II型犬腺病毒的试剂盒，属于生物检测技术领域。利用该试剂盒的检测操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好，不仅可用于犬腺病毒的检测，还可实现I型和II型犬腺病毒的鉴别，更可以实现I型和II型犬腺病毒的准确定量，将在犬腺病毒、I型和II型犬腺病毒的检测及疫苗生产过程中的质量监控和合理化配苗中发挥重要作用。

摘要： 本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。

摘要： 本发明涉及重组病毒基因工程技术领域，具体涉及一种同时预防人3型腺病毒‑人55型腺病毒‑人7型腺病毒的多表位疫苗候选株，在人3型腺病毒六邻体的HVR2区、HVR5区分别插入人55型腺病毒中和抗原表位55R2、人7型腺病毒中和抗原表位7R5，该疫苗候选株可以诱导同时抗人3型、7型、55型腺病毒的免疫反应，利用该疫苗候选株可以制备预防人3型、7型、55型腺病毒的三价疫苗。

摘要： 本发明涉及一种鸭3型腺病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。本发明根据鸭3型腺病毒基因组保守序列设计引物组：外引物(YX3‑F3和YX3‑B3)、内引物(YX3‑FIP和YX3‑BIP)和环引物(YX3‑LF和YX3‑LB)，具体序列分别见SEQ ID NO.1‑6。根据所设计的引物组建立一种鸭3型腺病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该试剂盒检测方法与鸭常见传染病病原不发生交叉反应。本发明的检测方法特异性强、准确性好、灵敏度高，无需昂贵仪器设备，便于基层临床现场使用，方便快速。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种腺病毒介导的高效生产水牛转基因胚胎的方法，其特征在于：具体步骤包括水牛卵母细胞体外培养；体外受精；单层共培养系统的制备；胚胎体外培养；腺病毒载体的包装及腺病毒扩增；腺病毒滴度稀释；腺病毒感染水牛颗粒细胞；腺病毒感染水牛胚胎，获得腺病毒介导的水牛转基因胚胎。本发明具有的优点是：采用本发明的技术方案将腺病毒介导感染水牛转基因胚胎，水牛胚胎卵裂率、桑囊率、转染囊胚率均有明显的提高，能够大大的提高转染的效率。