腐败梭菌

摘要： 羊快疫病是一种急性发作的传染病,往往发病急且病程较短。主要症状表现为真胃出血和坏死性炎症。病原为腐败梭菌,即厌氧性大肠埃希菌。此病主要经过消化道感染,特别是在冬末春初季节里,由于地边、山坡旁或河边地带,气温冰冷、潮湿,羊采食了冰冷草料时,腐败梭菌在绒山羊胃中迅速繁殖,其毒素使消化道黏膜发炎并坏死,而诱发羊快疫病。本病一般为散发性,但发生此病时,病死率较高。现将2020年3月末,在岫岩地区发生一起绒山羊快疫病的诊治过程报告如下。

摘要： 羊快疫是由腐败梭菌引起的一种致死性传染病,尤其在早春或秋冬季,羊群容易摄入冰冻饲料和冷水、或受冷发生感冒,再加上营养缺乏等因素,极易诱发羊群感染本病。羊群发病比较突然,并且病程短、死亡快,在实际生产中很难及时进行救治,就会发生较高的死亡率,给养羊场带来较大的损失,并且对整个养羊业产生严重危害。

摘要： 羊快疫(Braxy)是由腐败梭菌引起的急性、致死性传染病,迫切需要建立一种针对羊快疫等腐败梭菌病的快速诊断方法,进行有效检测和防治。因此,本研究创新性地发明了新型腐败梭菌培养方法,并以此为基础,建立了腐败梭菌胶体金检测方法和腐败梭菌类毒素疫苗。胶体金试纸条所制备抗体效价可达到1:1024000,纯化后的抗体最适标记量为10µg/ml,经测定最适标记pH为8.0,胶体金-抗体结合物原液的最佳工作浓度稀释比为1:4。本实验所制备类毒素疫苗免疫小鼠21 d后血清中腐败梭菌毒素抗体效价达到1:6400,接种3.5 ml腐败梭菌类毒素疫苗绵羊免疫21 d后,血清小鼠中和效价达到1:600。经检测,腐败梭菌胶体金检测方法具有较好的特异性和灵敏性,腐败梭菌类毒素疫苗有效抗原成分高,免疫效果理想,抗体效价较高且维持时间较长,为羊快疫的诊断和防控提供了理论依据。

摘要： 羊梭菌病是由梭状芽孢杆菌属的细菌引起的,可导致病羊出现羊快疫、羊肠毒血症、羊猝狙、羔羊痢疾等。1常见梭菌病1.1羊快疫导致羊快疫的病原为腐败梭菌,该病主要见于绵羊,患羊以真胃黏膜有坏死性炎症、快速死亡为特点。6~18月龄的羊易感染发病,羊在潮湿、低洼地或沼泽地放牧时极易感染腐败梭菌。羊快疫通常呈散发,发病率低,但病死率较高。

摘要： 将腐败梭菌参考株增殖、鉴定,使用饱和硫酸铵沉淀法粗提腐败梭菌天然α毒素,并通过SDS-PAGE方法对其进行检测。将扩增的α毒素目的片段和经酶切的p ET-21a(+)载体同源重组,将构建好的重组质粒转入到BL21(DE3)感受态细胞中,并筛选阳性克隆株。在优化的表达条件下,对α毒素重组蛋白进行了大规模的表达。免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA方法进行阳性杂交瘤细胞筛选。制备及纯化腹水,进行效价、浓度、纯度及特异性测定。结果表明,本研究成功表达了可溶性腐败梭菌α毒素蛋白,大小约为46 kDa,筛选出的单抗3 E8和单抗6B12对重组蛋白效价检测结果均为1:256 000,对天然α毒素的效价检测结果均为1:128 000;纯度均已达到85%以上;单克隆抗体的浓度分别为3E8:2.27 mg/ml,6B12:1.96 mg/ml;均能够与腐败梭菌重组α毒素、天然α毒素特异性结合,而与产气荚膜梭菌α毒素无交叉反应。结论:得到特异性强、稳定性高的单抗3E8和单抗6B12,有助于腐败梭菌病的早期诊断及研究。

摘要： 本文分析了羊因食用烂土豆而引发疾病的流行病学调查、主要症状和发病原因,并以解除毒素和腐败梭菌危害、促进神经功能恢复为原则对该病进行综合治疗,一般3～4d就可康复,配合补液和葡萄糖效果更佳,总体治愈率可达95％以上.

摘要： 羊快疫是由腐败梭菌感染而引发的一种消化道性细菌病,消化道是主要传播途径,应激对该病的发生有促进作用,病羊发病很急,表现突然死亡.该病由于发病急的特征导致治疗难度非常大,实际生产过程中要以预防为主,部分病程较长的羊可采用对症和对因同时用药的方案进行治疗.预防该病需科学对羊群进行放牧和饲喂,定期使用微生态制剂进行预防,加强羊场的管理.

摘要： 羊快疫主要是发生于绵羊的一种急性传染病,发病突然,病程极短,死亡率高,其特征为真胃呈出血性、炎性损害,一经发病会给羊场带来经济损失.养羊场户应该对该病加以重视,做好防控措施,所以笔者将羊快疫及其防控措施进行简单介绍.

摘要： 羊快疫是羊感染腐败梭菌所引起的一种急性传染病,该病对羊的健康生长影响巨大,常导致大量羊死亡,给养殖户造成严重的经济损失,严重阻碍羊养殖业的持续稳步发展.羊感染该病后临床症状不明显,体温也未见明显升高,并在几个小时内发生痉挛,迅速死亡.有的病程较长,出现排粪困难,腹部胀满.剖检可见胃黏膜有出血性、坏死性炎症.羊快疫具有明显的季节性,发病迅速,病死率较高,严重威胁羊群健康生长,更影响养殖户经济效益.因此为了有效防止羊快疫对羊养殖业造成不利影响.本主要对羊快疫的诊断与防治措施进行探讨,供参考.

摘要： 本文简述腐败梭菌病诊断及防治措施,根据国内报道腐败梭菌病的发病情况对其危害进行阐述,就腐败梭菌的生物学特性、致病性、临床症状、剖检症状、实验室诊断方法及防治等方面进行浅析,对腐败梭菌病有了一个较为系统的认识.腐败梭菌病的流行在国内尚未得到重视,类毒素疫苗技术尚未成熟.在腐败梭菌的研究方面,国内仅仅对腐败梭菌的PCR鉴定、培养、产毒、血清学分型、疫苗及α毒素分子克隆等进行较浅研究,针对腐败梭菌病检测的快速检测方法尚未开发,ELISA试剂盒及胶体金试剂条等快速检测诊断方法亟须建立.

摘要： 腐败梭菌是一种产芽孢的革兰氏阳性厌氧菌.本菌经创伤感染可致人的气性坏疽和马、牛、羊、猪等家畜的恶性水肿,消化道感染可引起羊快疫.该菌引起的疾病前期症状不明显,发病急,传染快,常常来不及治疗,因此具有很高的死亡率,对养殖业和人类健康构成很大威胁.本文就腐败梭菌的流行病学特点、主要毒素、检测和防治方法做了简要综述，以期为控制该病的传播与流行提供一定的参考资料。

摘要： 腐败梭菌是一种产芽孢的革兰氏阳性厌氧菌。本菌可感染软组织引起组织坏死和恶性水肿。该菌引起的疾病前期症状不明显，发病急，传染快，常常来不及治疗，因此具有很高的死亡率，对养殖业和人类健康构成很大威胁。本文就腐败梭菌的流行病学特点、主要毒素、检测和防治方法做了简要综述。

摘要： 腐败梭菌是一种严格厌氧性致病菌,广泛存在于环境中,易通过饲料、饮水和伤口感染动物,羊感染后会引发传染性疾病—羊快疫,该病是羊的一种最重要的传染性疫病之一,发病突然,病程极短,传染很快.本研究通过对河南省某发生羊快疫的羊场的病羊进行病原的分离鉴定,为羊场更好地防控该病提供理论基础.腐败梭菌是引起羊快疫病的病原，本病原来源于河南省某规模化羊场，通过流行病学调查发现该场在从外地引进羔羊进行育肥不到半月即发生疫情，且疫情发展很快，半个月内育肥羊死亡率超过60％，且临床症状极为典型，突然发病，腹部鼓涨，口吐白沫，瞳孔放大，食欲废绝，死亡羊头胫后仰，解剖见肺部出血、肿胀；肾脏出血、黄染、肿胀；肝脏出血、肿胀，边缘梗死；皱胃粘膜出血；小肠充气，有的有出血。根据症状基本可判定羊快疫。从本试验分离鉴定的结果也证明了临床诊断结果。为进一步研究该菌株的毒力因子和致病性，以及该病的防控奠定了基础。

摘要： 恶性水肿病是一种急性、创伤性传染病，它的特征是局部的炎性水肿和全身毒血症。病原为腐败梭菌。羊经口感染腐败梭菌时称快疫，是较普遍存在的疾病；创伤感染腐败梭菌时叫恶性水肿，较少见。本文将北京市某区(县)一起绵羊恶性水肿病的诊疗过程和体会进行了介绍，以供同行和养羊饲养者参考。

摘要： 本发明涉及一种能同时检测产气荚膜梭菌、溶血梭菌和B型诺维氏梭菌的多重PCR检测试剂盒及其应用，属于PCR检测试剂盒技术领域。该试剂盒包括以产气荚膜梭菌的α毒素基因为模板设计的引物PrimerF1和PrimerR1，以溶血梭菌鞭毛蛋白基因FliA(C)、FliA(H)和B型诺维梭菌鞭毛蛋白基因FliA为模板设计的引物PrimerF2、PrimerR2和PrimerR3。该试剂盒操作方便、省时省力、成本低、特异性高。

摘要： 本发明涉及一种能同时检测产气荚膜梭菌、溶血梭菌和B型诺维氏梭菌的多重PCR检测试剂盒及其应用，属于PCR检测试剂盒技术领域。该试剂盒包括以产气荚膜梭菌的α毒素基因为模板设计的引物PrimerF1和PrimerR1，以溶血梭菌鞭毛蛋白基因FliA(C)、FliA(H)和B型诺维梭菌鞭毛蛋白基因FliA为模板设计的引物PrimerF2、PrimerR2和PrimerR3。该试剂盒操作方便、省时省力、成本低、特异性高。

摘要： 本发明提供了一种革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用、腐败梭菌α毒素的制备方法和疫苗，涉及生物技术领域。采用革兰氏阳性菌表达系统表达腐败梭菌毒素实现了腐败梭菌毒素的胞外分泌表达，离心收集上清，就可以获得表达量高且纯度较好的目的蛋白，降低目的蛋白纯化和内毒素去除工艺生产成本。

摘要： 本发明提供了一种腐败梭菌α毒素突变体、表达其的基因、制备方法和腐败梭菌疫苗，涉及生物技术领域。该腐败梭菌α毒素突变体包括(a1)‑(a3)中的任意一种。其中，(a1)为将具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的腐败梭菌α毒素第86位氨基酸残基由半胱氨酸突变为亮氨酸，和第189位氨基酸残基由丝氨酸突变为半胱氨酸得到的蛋白质；(a2)为切除(a1)的信号肽得到的蛋白质；(a3)为在(a1)或(a2)所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白中的任意一种，具有毒副作用低，免疫原性好的优点。该腐败梭菌疫苗包含腐败梭菌α毒素突变体或编码其的基因，具有良好的安全性和良好的免疫原性。

摘要： 本发明公开了一种检测腐败梭菌的胶体金试纸条及其制备方法和应用，所述胶体金试纸条包括PVC底板，依次搭接固定于PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫是结合有胶体金颗粒标记抗腐败梭菌抗原的多克隆抗体的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向依次设有检测线和质控线，所述检测线包被腐败梭菌抗体，所述质控线包被羊抗兔IgG抗体。采用该胶体金试纸条能够实现腐败梭菌的即时检测，检测时间缩短至5‑10分钟，且不需要大型仪器设备以及复杂的实验步骤。可通过对比反应前后体系的胶体金试纸条的颜色变化对腐败梭菌进行定性识别，结果易判断，适用性强，非常适合于基层养殖场中羊快疫等腐败梭菌引起的相关疾病的检测。

摘要： 本发明公开了分泌中和腐败梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株及应用。属于生物技术领域。本发明筛选到一株分泌中和腐败梭菌α毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏编号为CGMCCNo.19400，并利用该杂交瘤细胞株制备单克隆抗体3D8，建立了腐败梭菌α毒素抗体的阻断ELISA检测方法。与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：单克隆抗体3D8在小鼠体外能够中和腐败梭菌天然毒素，其中和效价可到达2个小鼠MLD/0.1mL；利用单克隆抗体3D8建立了一种腐败梭菌α毒素抗体的阻断ELISA检测方法，该方法对腐败梭菌α毒素抗体的最低检测中和效价可达到0.625个小鼠MLD/0.1mL。

摘要： 本发明公开了一种兽用腐败梭菌毒素及其制备方法与专用培养基。每100ml培养基由下述物质组成：示蛋白胨(proteose peptone)1.5‑2.0g，酪蛋白胨1.5‑2.0g，酵母浸粉0.5‑0.75g，ZnSO4·7H2O 0.14‑0.28mg，Na2HPO4·12H2O 0.5‑0.75g，KH2PO40.03‑0.045g，葡萄糖1‑1.5g，余量为水；所述培养基的pH值为7.5‑8.0。所述腐败梭菌毒素是将腐败梭菌生产菌株接种于培养基中，收集培养物并离心，将上清液过滤即得。按本发明方法毒力最高可提至《中国兽用生物制品规程》制苗标准的10倍，产出投入比可提高至原传统工艺的20倍。并且，用其制备的类毒素疫苗在家兔和绵羊上的相应血清中和效价也分别提高至规程标准的8和8倍。

摘要： 本发明提供了一种革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用、腐败梭菌α毒素的制备方法和疫苗，涉及生物技术领域。采用革兰氏阳性菌表达系统表达腐败梭菌毒素实现了腐败梭菌毒素的胞外分泌表达，离心收集上清，就可以获得表达量高且纯度较好的目的蛋白，降低目的蛋白纯化和内毒素去除工艺生产成本。

摘要： 本发明提供了一种腐败梭菌α毒素突变体、表达其的基因、制备方法和腐败梭菌疫苗，涉及生物技术领域。该腐败梭菌α毒素突变体包括(a1)‑(a3)中的任意一种。其中，(a1)为将具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的腐败梭菌α毒素第86位氨基酸残基由半胱氨酸突变为亮氨酸，和第189位氨基酸残基由丝氨酸突变为半胱氨酸得到的蛋白质；(a2)为切除(a1)的信号肽得到的蛋白质；(a3)为在(a1)或(a2)所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白中的任意一种，具有毒副作用低，免疫原性好的优点。该腐败梭菌疫苗包含腐败梭菌α毒素突变体或编码其的基因，具有良好的安全性和良好的免疫原性。

摘要： 本发明涉及一种无毒产气荚膜梭菌和腐败梭菌融合蛋白疫苗及其生产方法。本发明制备的融合蛋白疫苗，系采用经过密码子优化、含有3个氨基酸突变的产气荚膜梭菌ε毒素以及含有4个氨基酸突变和11个氨基酸缺失的腐败梭菌α毒素的融合蛋白生产，即最大限度地保留天然毒素的完整性和空间构象，从而保持其免疫原性，又避免了单个氨基酸突变带来的生物安全隐患。该疫苗还具有制备工艺简单，疫苗效力优良等优点，较我国目前商品化的羊快疫和羊肠毒血症灭活疫苗大大降低了疫苗生产过程中的生物安全风险，是我国现行产气荚膜梭菌和腐败梭菌病疫苗升级换代的理想候选疫苗；而且在与其它抗原共同制备联苗时，无需增大联苗的使用剂量，即可制备联苗。