肺癌干细胞

摘要： 背景:通过对小细胞肺癌体外分选鉴定,可以发现肿瘤干细胞的存在是促使肿瘤细胞恶性增殖的重要因素.肿瘤的发生与细胞内多种分子的异常表达以及靶向基因的调控障碍密切相关.前期研究发现,EVI1具备原癌基因特性,在肺癌中其表达上调.miR-206可靶向调控EVI1基因和蛋白的表达.目的:探讨miR-206靶向调控EVI1转录基因的表达对小细胞肺癌干细胞增殖和分裂周期的影响.方法:首先采用miR-206转染实验验证靶向调控EVI1基因,实验分3组:miR-206 mimics组、miR-206 inhibitor组和miR-NC组,分别转染小细胞肺癌干细胞,Western blot法检测细胞中EVI1蛋白的表达.然后采用慢病毒干扰法下调小细胞肺癌干细胞中miR-206表达验证细胞的信号转导通路和生物学行为,实验分3组:pLB-miR-206组、空载体组和对照组,RT-PCR法检测细胞中miR-206和EVI1 mRNA表达水平,Western blot法检测p-Akt和p-JNK蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期中分裂细胞和凋亡细胞的百分比.结果 与结论:①miR-206 mimics组Evi1蛋白水平显著高于miR-NC组(P<0.05),miR-206 inhibitor组Evi1蛋白水平显著低于miR-NC组(P<0.05),提示miR-206可能靶向调控小细胞肺癌干细胞EVI1基因的表达;②经miR-206慢病毒转染后,pLB-miR-206组miR-206和EVI1 mRNA表达水平明显低于空载体组和对照组,p-Akt和p-JNK蛋白表达水平下降,细胞增殖率减少,分裂细胞比例下降(P<0.05),提示miR-206可能通过靶向调控小细胞肺癌干细胞中EVI1基因的表达和Akt/JNK信号通路的激活,对细胞增殖和分裂周期产生影响.

摘要： 背景:通过对小细胞肺癌体外分选鉴定,可以发现肿瘤干细胞的存在是促使肿瘤细胞恶性增殖的重要因素。肿瘤的发生与细胞内多种分子的异常表达以及靶向基因的调控障碍密切相关。前期研究发现,EVI1具备原癌基因特性,在肺癌中其表达上调。miR-206可靶向调控EVI1基因和蛋白的表达。目的:探讨miR-206靶向调控EVI1转录基因的表达对小细胞肺癌干细胞增殖和分裂周期的影响。方法:首先采用miR-206转染实验验证靶向调控EVI1基因,实验分3组:miR-206 mimics组、miR-206 inhibitor组和miR-NC组,分别转染小细胞肺癌干细胞,Western blot法检测细胞中EVI1蛋白的表达。然后采用慢病毒干扰法下调小细胞肺癌干细胞中miR-206表达验证细胞的信号转导通路和生物学行为,实验分3组:pLB-miR-206组、空载体组和对照组,RT-PCR法检测细胞中miR-206和EVI1 mRNA表达水平,Western blot法检测p-Akt和p-JNK蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期中分裂细胞和凋亡细胞的百分比。结果与结论:(1)miR-206 mimics组Evi1蛋白水平显著高于miR-NC组(P<0.05),miR-206 inhibitor组Evi1蛋白水平显著低于miR-NC组(P<0.05),提示miR-206可能靶向调控小细胞肺癌干细胞EVI1基因的表达;(2)经miR-206慢病毒转染后,pLB-miR-206组miR-206和EVI1 mRNA表达水平明显低于空载体组和对照组,p-Akt和p-JNK蛋白表达水平下降,细胞增殖率减少,分裂细胞比例下降(P<0.05),提示miR-206可能通过靶向调控小细胞肺癌干细胞中EVI1基因的表达和Akt/JNK信号通路的激活,对细胞增殖和分裂周期产生影响。

摘要： 目的 探索槲皮素对A549肺癌干细胞活性及对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)和音猬因子(sonic hedgehog,SHH)信号通路的影响。方法 使用不同浓度槲皮素(0、5、10、25、50、100和200μmol/L)处理肺癌A549细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞存活率。采用无血清培养法分离富集肺癌干细胞,观察槲皮素对A549悬浮细胞球体积、数量以及肺癌干细胞分子标志物表达的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测增殖凋亡相关指标以及Wnt/β-catenin和SHH信号通路关键分子的表达变化。结果 槲皮素能够显著抑制A549细胞活力,且呈现时间和浓度依赖性;与空白对照组相比,槲皮素均显著抑制A549成球能力和肺癌干细胞分子标志物[CD133、CD44和醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)]表达;同时,肺癌干细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和B细胞白血病/淋巴瘤-2(Bcl2)水平显著下调,凋亡相关指标Bcl2相关蛋白X(Bax)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Cleaved Caspase 3)表达显著上调;槲皮素处理后,肺癌干细胞中Wnt/β-catenin和SHH信号通路关键分子磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)(Ser9)、β-catenin、原癌基因蛋白c-Myc、胶质瘤相关癌基因同源物1(GLi1)、GLi2和SHH的蛋白水平明显下降。结论 槲皮素显著抑制肺癌干细胞活性,其机制可能与调控Wnt/β-catenin和SHH通路有关。

摘要： 目的:探讨小分子化合物I T E对人小细胞肺癌H446干细胞增殖的作用及机制.方法:免疫荧光法检测人肺癌H446干细胞中Oct4蛋白的表达.MTT法测定ITE对肺癌H446干细胞增殖的影响.Western blot法检测ITE对Oct4和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:与H446亲本细胞相比,富集干细胞中Oct4的表达明显增加(P<0.05).与DMSO组相比,ITE呈浓度梯度依赖性地降低H446富集干细胞活力,20μM的ITE处理24 h可降低富集干细胞活力至0.46±0.03(P<0.05).与Control组相比,ITE显著下调富集干细胞中Oct4及Bcl-2蛋白表达(均P<0.05).结论:小分子化合物IT E可通过下调干细胞转录因子Oct4和凋亡抑制基因Bcl-2,抑制人H446干细胞的增殖.

摘要： 目的:探讨小分子化合物ITE对人小细胞肺癌H446干细胞增殖的作用及机制。方法:免疫荧光法检测人肺癌H446干细胞中Oct4蛋白的表达。MTT法测定ITE对肺癌H446干细胞增殖的影响。Western blot法检测ITE对Oct4和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:与H446亲本细胞相比,富集干细胞中Oct4的表达明显增加(P<0.05)。与DMSO组相比,ITE呈浓度梯度依赖性地降低H446富集干细胞活力,20μM的ITE处理24h可降低富集干细胞活力至0.46±0.03(P<0.05)。与Control组相比,ITE显著下调富集干细胞中Oct4及Bcl-2蛋白表达(均P<0.05)。结论:小分子化合物ITE可通过下调干细胞转录因子Oct4和凋亡抑制基因Bcl-2,抑制人H446干细胞的增殖。

摘要： 目的探讨莱菔硫烷(SFN)对肺癌干细胞增殖与自我更新的影响及其调控机制。方法MTT法检测SFN对肺腺癌细胞株H460和A549细胞增殖的影响;肿瘤球形成实验、蛋白印迹法等检测SFN处理前后肺腺癌细胞肿瘤球形成能力、干性相关基因(如β-catenin、Klf4、c-myc)表达水平等;NGS测序法分析SFN对肿瘤细胞miRNAs表达谱的影响;qRT-PCR验证SFN对重点miRNAs转录水平的改变;蛋白印迹法检测SFN对肿瘤细胞DNA甲基化转移酶(DNMTs)表达的影响;构建miR-200c启动子-GFP质粒,细胞免疫荧光、甲基化PCR法和DNA测序法检测SFN对肿瘤球和miRNA启动子甲基化水平的影响。结果SFN(5.0μmol/L)处理肺腺癌细胞肿瘤球后miRNAs表达谱发生显著变化,其中miRNA-200c增高最为明显。与对照组比较,SFN-S组H460和A549细胞β-catenin、Klf4、c-myc和Vimentin等蛋白表达下降,DNMT1和DNMT3a蛋白表达水平也明显降低。与对照组比较,SFN-S组稳定表达pEGFP-R200c质粒的H460和A549细胞肿瘤球直径显著减少,而肿瘤球荧光强度增加,GFP蛋白表达上调。上述表达pEGFPR200c质粒细胞株中miR-200c启动子区域存在9个CpG丰富区域位点,其甲基化水平在对照组、SFN-S组和5-Aza-dC组分别为88.9%、44.4%、38.8%。结论SFN可能经由表观遗传学水平下调miR-200c启动子甲基化水平,促进miR-200c的转录,从而调控肺癌干细胞的干性相关基因表达。

摘要： 肺癌对铂类的耐药分为原发性耐药和继发性耐药,目前临床上比较常见的对铂类药物的耐药多属获得性耐药.铂类药物获得性耐药的机制研究很多,越来越多的研究表明,LCSCs(Lung cancer stem cells,LCSCs)的存在与获得性顺铂耐药的发生密切相关,成为中西医研究肺癌耐药的热点之一.肺癌患者顺铂化疗产生继发性耐药，其机制尚未完全清楚，但肺癌干细胞领域相关的研究为缓解耐药带来一定希望。中医药在缓解肺癌耐药反应方面有独到优势，其发生作用的机制可能与肺癌干细胞及其微环境密切相关，但研究尚属起步阶段，需进一步深入挖掘其作用机制。

摘要： 本发明提供了一种制备干细胞样肺癌细胞的方法，其中，所述方法包括鉴定待测肺癌细胞标本中是否存在干细胞样肺癌细胞的步骤：所述步骤包括检测所述待测肺癌细胞标本中是否特异表达以下差异蛋白的至少两种：蛋白激酶Ciota、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1、乙醛脱氢酶1或乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2。本发明还提供了制备所述干细胞样肺癌细胞抗原负载该抗原树突状细胞的方法以及通过所述方法获得的树突细胞疫苗。通过本发明的方法，仅仅通过检测以上所述蛋白的至少两种，就能够高效准确地得到干细胞样肺癌细胞，基于所述方法所得干细胞样肺癌细胞纯度高且容易富集。

摘要： 本发明涉及利用植物干细胞和植物去分化干细胞(愈伤组织)的提取物通过重新编程分化的成人细胞来诱导定制亚全能干细胞的方法；利用该方法制得的亚全能干细胞以及包含所述亚全能干细胞的细胞治疗剂。根据本发明，可克服伦理问题，因为没有使用卵来制备具有与胚胎干细胞类似功能的亚全能干细胞，并且可制备确保安全性的亚全能干细胞，因为利用尤其已经证实对身体无害的植物干细胞提取物，并且还可利用本发明来开发适合不同个体的免疫相兼容的细胞治疗剂。此外，预计本发明可在阐明病因以及研究通过诱导亚全能干细胞治疗疾病个体的医学病症的方法时具有很大优势。

摘要： 本发明提供了一种制备干细胞样肺癌细胞的方法，其中，所述方法包括鉴定待测肺癌细胞标本中是否存在干细胞样肺癌细胞的步骤：所述步骤包括检测所述待测肺癌细胞标本中是否特异表达以下差异蛋白的至少两种：蛋白激酶Ciota、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1、乙醛脱氢酶1或乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2。本发明还提供了制备所述干细胞样肺癌细胞抗原负载该抗原树突状细胞的方法以及通过所述方法获得的树突细胞疫苗。通过本发明的方法，仅仅通过检测以上所述蛋白的至少两种，就能够高效准确地得到干细胞样肺癌细胞，基于所述方法所得干细胞样肺癌细胞纯度高且容易富集。

摘要： 本发明涉及一种用于直接分化胚胎干细胞来源间充质干细胞的培养基、用其制备间充质干细胞的方法、由此制备的间充质干细胞以及包括其的细胞治疗剂，根据一方面的培养基组合物和方法，不仅可以在短时间内以高产率制备间充质干细胞，而且由于没有胚状体形状的步骤，因此制备工艺简单，并且可以获得具有均质性的细胞，从而具有可以在比现有方法更短的时间内提供细胞治疗剂的效果。

摘要： 本发明涉及利用植物干细胞和植物去分化干细胞(愈伤组织)的提取物通过重新编程分化的成人细胞来诱导定制亚全能干细胞的方法；利用该方法制得的亚全能干细胞以及包含所述亚全能干细胞的细胞治疗剂。根据本发明，可克服伦理问题，因为没有使用卵来制备具有与胚胎干细胞类似功能的亚全能干细胞，并且可制备确保安全性的亚全能干细胞，因为利用尤其已经证实对身体无害的植物干细胞提取物，并且还可利用本发明来开发适合不同个体的免疫相兼容的细胞治疗剂。此外，预计本发明可在阐明病因以及研究通过诱导亚全能干细胞治疗疾病个体的医学病症的方法时具有很大优势。

摘要： 本发明公开了一种酶解多肽及用于抑制小细胞肺癌干细胞侵袭和转移的用途，以知了猴为原料，由如下方法制备：将知了猴洗净后绞成肉糜，置于超纯水中，加入碱性蛋白酶酶解，酶解条件为：pH值，8.3‑8.7；酶解温度，53‑57°C；酶解时间，9‑11小时；酶解结束后，加热使碱性蛋白酶灭活，冷却至常温；冷却后，8000‑10000rpm离心20‑30分钟，取上清，冷冻干燥得冻干粉；将冻干粉用超纯水溶解，用不同截留分子量的超滤膜对所得到的酶解多肽进行分离，将超滤所得组分冻干即得不同分子量大小的酶解多肽。本发明提供的酶解多肽有望开发成预防小细胞肺癌患者化疗后出现肿瘤转移的药物。

摘要： 本发明公开了一种酶解多肽及用于抑制小细胞肺癌干细胞侵袭和转移的用途，以知了猴为原料，由如下方法制备：将知了猴洗净后绞成肉糜，置于超纯水中，加入碱性蛋白酶酶解，酶解条件为：pH值，8.3‑8.7；酶解温度，53‑57°C；酶解时间，9‑11小时；酶解结束后，加热使碱性蛋白酶灭活，冷却至常温；冷却后，8000‑10000rpm离心20‑30分钟，取上清，冷冻干燥得冻干粉；将冻干粉用超纯水溶解，用不同截留分子量的超滤膜对所得到的酶解多肽进行分离，将超滤所得组分冻干即得不同分子量大小的酶解多肽。本发明提供的酶解多肽有望开发成预防小细胞肺癌患者化疗后出现肿瘤转移的药物。

摘要： 本发明公开了一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器，包括培养容器主体，所述培养容器主体内壁设有包被层，包被层为γ聚谷氨酸材质。本发明提供的含有γ聚谷氨酸包被层的培养容器可以显著提高悬浮生长细胞球体的形成效率，24小时内即可形成理想的悬浮生长细胞球体，且肺癌干细胞在该悬浮生长细胞球体中高度富集，比现有的无血清培养基加细胞生长因子法效率更高，更便捷。

摘要： 一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器，包括培养皿、培养皿盖和注射器；所述的培养皿为无上底的空心圆柱形，培养皿的上底面设置有培养皿盖，培养皿盖的圆周上设置有圆环，圆环的内径与培养皿的外径相等，培养皿盖与培养皿配合；所述的培养皿盖的圆心位置下侧设置有喷头，上侧设置有注射器底座，注射器底座上设置有注射器，所述的注射器有两个；所述的注射器底座为两个粘接在一起的圆柱，圆柱里设置有管道，管道联通喷头。该装置能形成从圆心向圆周培养液浓度逐渐降低的培养皿，而细胞具有向肥性，中心能量多，细胞向中心移动，形成从圆心向圆周细胞数量逐渐降低的细胞群体；该培养容器将肺癌干细胞集中在培养皿中心，有利于收集细胞。

摘要： 本实用新型公开了一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器，包括培养容器主体，所述培养容器主体内壁设有包被层，包被层为γ聚谷氨酸材质。本实用新型提供的含有γ聚谷氨酸包被层的培养容器可以显著提高悬浮生长细胞球体的形成效率，24小时内即可形成理想的悬浮生长细胞球体，且肺癌干细胞在该悬浮生长细胞球体中高度富集，比现有的无血清培养基加细胞生长因子法效率更高，更便捷。