肺泡上皮细胞

摘要： 目的探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠发病的影响及其相关机制。方法构建ALI模型小鼠,免疫印迹法检测肺组织中HSP70的表达情况,酶联免疫法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中HSP70的分泌情况。ALI小鼠经鼻滴HSP70抗体(anti-HSP70)后,抽取BALF,检测其中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和蛋白的含量,并计数中性粒细胞的数目;获取肺组织进行苏木精-伊红染色并计算肺湿/干重比。以LPS刺激小鼠肺泡上皮细胞株MLE-12细胞,酶联免疫法检测培养上清液中TNF-α和IL-1β的含量。不同浓度的HSP70(10~500 ng/mL)刺激小鼠肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells,AECs)后,流式细胞术检测AEC吞噬凋亡细胞的情况。结果与正常对照组小鼠相比,ALI小鼠肺组织中HSP70的表达及BALF中HSP70的分泌均增加(均P<0.05)。与ALI组小鼠相比,经anti-HSP70鼻滴治疗后的ALI小鼠,其BALF中TNF-α、IL-6、IL-1β和蛋白的含量均降低(均P<0.05),中性粒细胞数目减少(P<0.05);其肺组织中炎性细胞浸润减少,肺湿/干重比降低(P<0.05)。与LPS刺激组相比,anti-HSP70+LPS组MLE-12细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β含量均减少(均P<0.05)。与未刺激组相比,10~500 ng/mL HSP70刺激组MLE-12细胞吞噬凋亡细胞百分率明显降低,其中以200 ng/mL HSP70刺激组降低最为明显(P<0.01);与未刺激组相比,200 ng/mL HSP70刺激的小鼠原代肺泡上皮细胞吞噬率降低(P<0.01)。结论HSP70促进ALI小鼠肺部炎症反应,这一效应可能与HSP70降低肺泡上皮细胞吞噬凋亡细胞的功能相关。

摘要： 目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在肺泡上皮细胞衰老致肺纤维化中的作用。方法用博来霉素(BLM)构建小鼠肺纤维化模型,免疫组织化学观察IGF-1的表达变化。利用IGF-1刺激A549细胞株(72 h)建立细胞衰老模型,β-半乳糖苷酶染色观察衰老阳性细胞数量。免疫荧光观察IGF-1对A549细胞衰老关键蛋白P16、P21表达的影响。ELISA法观察IGF-1刺激A549细胞后转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化。免疫印迹检测IGF-1对A549细胞转分化的影响。RT-PCR检测IGF-1对下游信号通路中磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的影响。结果与正常小鼠肺脏相比,IGF-1在肺纤维化小鼠肺脏中广泛表达。与对照组相比,IGF-1刺激A549细胞72 h后的衰老阳性细胞数量明显增多(P<0.05),细胞衰老关键蛋白P16、P21表达也明显上调(P<0.05)。IGF-1刺激A549细胞72 h后,培养基中细胞衰老表型(SASP)主要成分TGF-β1、MMP-9的表达量要高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,IGF-1使A549细胞发生了转分化现象,α-SMA、CollagenⅠ的表达升高(P<0.05)。与对照组相比,IGF-1明显增加A549细胞中PI3K、AKT的表达(P<0.05)。结论IGF-1是促进肺泡上皮细胞衰老致肺纤维化进展的重要因素,并且与激活IGF-1/PI3K/AKT信号通路相关。

摘要： 目的 探讨阿米卡星对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞凋亡以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6表达的影响和分子机制。方法 该研究于2020年1—7月完成,采用LPS诱导肺泡上皮细胞,构建急性肺损伤细胞模型。将肺泡上皮细胞分为对照组、模型组(LPS处理24 h)、实验组(由LPS和不同剂量的阿米卡星处理24 h)、anti-miR-NC组(转染微小RNA阴性对照后进行LPS处理)、anti-miR-223组(转染微小RNA-223抑制剂后进行LPS处理)、实验3+miR-NC组(转染微小RNA阴性对照后进行LPS和15μg/L阿米卡星处理)、实验3+miR-223组(转染微小RNA-223激动剂后进行LPS和15μg/L阿米卡星处理)。流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blotting)检测兔源裂解的胱天蛋白酶3(cl-caspase3)表达。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中TNF-α和IL-6含量。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-223(微小RNA-223)表达。结果 与对照组比较,模型组肺泡上皮细胞凋亡率(25.81±1.82)%、cl-caspase3(0.81±0.06)和miR-223表达(0.17±0.02)、细胞上清液中TNF-α(793.92±34.49)ng/L和IL-6含量(412.04±23.94)ng/L升高(P <0.05)。与模型组比较,实验组肺泡上皮细胞凋亡率(22.07±1.69)%、cl-caspase3(0.68±0.05)和miR-223表达(0.28±0.03)、细胞上清液中TNF-α(478.38±25.85)ng/L和IL-6含量(202.95±15.55)ng/L降低(P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-223组肺泡上皮细胞凋亡率(10.12±1.13)%、cl-caspase3(0.27±0.03)和miR-223表达(1.69±0.08)、细胞上清液中TNF-α(403.48±29.94)ng/L和IL-6含量(166.35±15.61)ng/L降低(P<0.05)。与实验3+miR-NC组比较,实验3+miR-223组肺泡上皮细胞凋亡率(24.03±1.64)%、cl-caspase3(0.75±0.06)和miR-223表达(4.67±0.22)、细胞上清液中TNF-α(726.18±33.57)ng/L和IL-6含量(385.07±22.15)ng/L升高(P<0.05)。结论 阿米卡星对LPS诱导的肺泡上皮细胞具有明显的抗炎和抗凋亡作用,其机制可能与抑制miR-223表达有关。

摘要： 目的明确miR-98对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症因子分泌的影响和机制。方法肺泡上皮细胞A549分成Control、SP(肺炎链球菌刺激)、miR-NC+SP(转染mimics control,肺炎链球菌刺激)、miR-98+SP组(转染miR-98 mimics,肺炎链球菌刺激),qRT-PCR方法检测miR-98表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测C-Caspase-3、Bax蛋白表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平。利用targetscan分析miR-98可能的靶基因,以荧光素酶报告系统,鉴定二者的靶向关系。将pcDNA-PALM3和miR-98 mimics共转染到肺泡上皮细胞A549,肺炎链球菌刺激,同样测定细胞增殖、凋亡和C-Caspase-3、Bax蛋白表达,以及细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6水平。结果SP组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、Bax蛋白表达增多,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6水平增加,与Control组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-98+SP组细胞增殖能力升高,细胞凋亡率降低,细胞中C-Caspase-3、Bax蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,与miR-NC+SP组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-98靶向下调肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞中PALM3表达水平。pcDNA-PALM3对miR-98抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和C-Caspase-3、Bax蛋白表达,以及TNF-α、IL-1β、IL-6分泌有逆转作用。结论上调miR-98靶向抑制PALM3减少肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症因子分泌。

摘要： 目的探讨金丝桃苷对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)的影响及分子机制。方法将HPAEpiC分为对照组、模型组、金丝桃苷低、中、高剂量药物组、anti-miR-NC组、anti-miR-199a组、高剂量药物组+miR-NC组、高剂量药物组+miR-199a组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-199a表达水平;蛋白质印迹(Western blotting)法检测裂解的半胱天冬蛋白酶3(Cleaved-caspase3)、半胱天冬蛋白酶3前体(pro-caspase3)的蛋白表达。结果金丝桃苷处理后,LPS诱导的HPAEpiC中细胞OD值升高,金丝桃苷低、中、高剂量药物组OD值分别为(0.49±0.02)、(0.60±0.03)、(0.72±0.03),G0/G1期细胞所占比例降低,S期细胞所占比例升高,细胞凋亡率降低,TNF-α、IL-1β水平降低,miR-199a表达水平降低,Cleaved-caspase3表达水平降低,pro-caspase3表达水平升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);抑制miR-199a表达可抑制LPS诱导的HPAEpiC细胞凋亡和炎症因子的释放。且miR-199a过表达逆转了金丝桃苷提取物对LPS诱导的HPAEpiC细胞凋亡和炎症因子的作用。结论金丝桃苷可能通过下调miR-199a抑制LPS诱导的HPAEpiC细胞凋亡和炎症反应。

摘要： 目的探讨白芍总苷及对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响分子机制。方法肺泡上皮细胞A549随机分为对照(Con)组、模型(Model)组(1×10^(8)CFU/mL的肺炎链球菌感染)、Model+白芍总苷低、中、高剂量组(17.5 mg/mL、35 mg/mL、70 mg/mL的白芍总苷+1×10^(8)CFU/mL的肺炎链球菌感染)、Model+白芍总苷+anti-miR-23b-3p组(转染miR-23b-3p抑制剂+70 mg/mL白芍总苷+1×10^(8)CFU/mL肺炎链球菌感染);细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6、IL-10水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-23b-3p表达水平;蛋白质印迹法检测FoxA1蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-23b-3p和FoxA1的靶向关系。结果低、中、高剂量白芍总苷处理后,肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞的活性升高,细胞凋亡率降低,IL-6含量降低,IL-10含量升高,miR-23b-3p表达水平升高,FoxA1蛋白表达水平降低,呈剂量依赖性(P<0.05)。过表达miR-23b-3p后,FoxA1蛋白表达水平降低,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,IL-6含量降低,IL-10含量升高(P<0.05)。抑制miR-23b-3p可逆转白芍总苷对肺炎链球菌诱导A549细胞凋亡、活性和IL-6和IL-10含量的影响。miR-23b-3p靶向调控FoxA1。结论白芍总苷通过调控miR-23b-3p/FoxA1轴抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症。

摘要： 目的:探究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制。方法:使用肺泡上皮BEAS-2B细胞进行实验,细胞经不同浓度(0、1%、3%、5%、7%和9%)的CSE处理24 h,通过Western blot法检测环加氧酶2(cyclooxygenase 2,COX2)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达量,CCK-8法检测细胞活力,以确定CSE的最适浓度。按照不同干预因素将细胞分为对照组、CSE组、CSE+NaHS(100μmol/L)组、CSE+NaHS(200μmol/L)组、CSE+NaHS(400μmol/L)组及单纯NaHS(400μmol/L)组进行后续实验。H2S供体NaHS预处理30 min后加入CSE,CCK-8法检测细胞活力的变化,铁离子检测试剂盒测定活性铁含量,共聚焦荧光显微镜采集脂质活性氧(lipid reactive oxygen species,Lip ROS)图片,流式细胞术测定细胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)及Lip ROS含量,谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒测定各自含量,Western blot检测核受体辅激活因子4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)、COX2和GPX4的表达情况。结果:Western blot检测结果显示,随着CSE浓度的增加,GPX4表达水平逐渐降低,COX2表达水平逐渐升高,细胞活力也逐渐降低但在CSE浓度为5%时显著降低(P<0.01),故选择5%浓度处理24 h作为后续CSE的刺激条件。与单纯CSE刺激组相比,NaHS(尤其是中、高浓度)预处理使细胞活力显著增加(P<0.05),抗氧化酶GSH-Px含量和GPX4表达水平显著增加(P<0.05),NCOA4、FTH1和COX2表达量及Fe2+含量显著降低(P<0.05),ROS和Lip ROS水平及MDA含量显著降低(P<0.05)。结论:H2S可通过抑制NCOA4介导的铁自噬-铁死亡减轻CSE诱导的肺泡上皮细胞损伤。

摘要： 急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是临床常见的危重症,目前对它的治疗仍局限于器官支持治疗,并无更理想的治疗方法。部分ARDS幸存者肺功能可恢复至接近正常水平,这表明人体拥有较强的肺再生系统。肺再生主要依赖于区域性分布的肺干细胞重新进入细胞周期、增殖并分化,因此内源性肺干细胞可用于肺损伤的治疗。研究发现,肺干细胞对肺泡上皮完整性的修复有助于恢复肺泡的正常功能,也可能从根本上延缓或逆转ARDS的病理进程。且有研究发现,远端气道干细胞(distal airway stem cells,DASCs)能够进行体外大规模扩增,并分化出修复受损肺泡功能的肺泡上皮细胞。近年来研究认为,肺干细胞表达肿瘤蛋白-63(p63)和角蛋白5(Krt5)的基因(p63^(+)/Krt5^(+))对于肺再生是必需的,p63^(+)/Krt5^(+)远端气道干细胞(p63^(+)/Krt5^(+)DASCs)能够迁移、增殖并分化为肺泡上皮1型(AT1)和2型(AT2)细胞来修复损伤的肺泡上皮细胞。本文阐述了近年来DASCs在治疗肺损伤中的作用,以期为ARDS的临床治疗提供有益的启示。

摘要： MicroRNAs(miRNAs)是真核生物中一类长度约20~24个核苷酸的功能性非编码单链小RNA,是由具有发夹结构的约70~90个碱基组成的pre-miRNA经过Dicer酶剪切产生,miRNAs与目标mRNA的3'非编码区(3'URT)相结合,抑制翻译过程或降解目标mRNA,从而抑制相关基因的表达,具有调节多细胞多种生物学功能的作用[1-3]。一个miRNA可以作用于多个靶点,多个miRNA也可以共同调控一个基因的表达[4]。

摘要： 目的探讨二甲双胍(Met)对妊娠糖尿病(GDM)大鼠子代胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法将SD孕鼠随机分为正常组(Normal组)和GDM组。GDM组孕鼠采用高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)建立GDM模型,测定空腹血糖水平(FBG)。无菌条件下取胎鼠肺组织,分离肺泡上皮细胞,不同浓度Met处理细胞48 h,MTT法检测细胞存活率。将肺泡上皮细胞随机分为对照组(Control组)、GDM组和Met组,Met组细胞用80μmol/L Met处理48 h,Control组和GDM组细胞不做处理。Transwell实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR检测细胞中上皮钙粘蛋白(E-cad)、神经钙粘蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vimentin)mRNA相对表达量,蛋白印迹法检测磷酸化核因子-κB(NF-κB)和Twist1蛋白相对表达量。结果GDM组孕鼠的FBG水平明显高于Normal组(P<0.05);细胞存活率随Met浓度的增加而降低,且具有剂量依赖性(P<0.05);与Control组比较,GDM组侵袭细胞数、N-cad、Vimentin mRNA相对表达量以及p-NF-κB p65和Twist1蛋白相对表达量升高,E-cad mRNA相对表达量降低(P<0.05);与GDM组比较,Met组侵袭细胞数、N-cad、Vimentin mRNA相对表达量及p-NF-κB p65和Twist1蛋白相对表达量降低,E-cad mRNA相对表达量升高(P<0.05)。结论Met可抑制GDM大鼠子代胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞EMT过程,其可能是通过抑制NF-κB/Twist1信号通路发挥作用。

摘要： 探讨PI3K/Akt信号通路在CO上调内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞线粒体融合蛋白表达中的作用.在37°C,5％CO2细胞培养孵箱内培养大鼠肺泡上皮细胞,按随机数字表法随机分10组：对照组(C组)、内毒素攻击模型(L组)、LPS+CORM-2(L+CO组)、LPS+LY294002(L+LY组)、LPS+CORM-2+LY294002(L+CO+LY组)、LPS+iCORM-2(L+iCO组)、LPS+DMSO(L+D组)、CORM-2(CO组)、LY294002(LY组)、CORM-2+LY294002(CO+LY组).

摘要： 急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及细毛细血管内皮细胞损伤,造成弥漫性肺间质及肺泡水肿,导致的急性低氧性呼吸功能不全.肺泡上皮是急性肺损伤发病机制和康复机制所涉及的一种重要结构,肺泡上皮细胞分为Ⅰ型肺泡上皮细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞.Ⅰ型肺泡上皮细胞覆盖了80％的肺泡表面积,用于气体交换.Ⅱ型肺泡上皮细胞覆盖了5％的肺泡表面积,主要功能是分泌肺泡表面活性物质和调节上皮液的平衡.肺泡上皮细胞在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)中对维护肺血屏障的完整性和受损屏障的修复有着关键的作用,有效的肺泡上皮修复对ARDS患者的恢复至关重要,未来的治疗策略可能是加速损伤肺上皮的修复过程.因此在这篇文章中将介绍更多的关于肺泡上皮细胞在ARDS的作用.ARDS的发病机制错综复杂，致病环节众多，目前没有特异的治疗方法，死亡率在30%-50%。临床迫切需要一个基于ARDS基础机制的靶向治疗。AEC的损伤程度对ARDS发生、发展及恢复有重要意义，也是评估临床预后的重要指标。目前对AEC损伤与修复以及凋亡如何直接和间接影响ARDS的确切机制和AEC免疫调控机制仍不是十分清楚，需要进一步深入进行体内外研究。

摘要： 观察信号转导和转录活化因子(STAT3)乙酰化修饰对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠肺泡上皮细胞促纤维化反应的影响.将体外培养小鼠肺泡上皮细胞株(MLE-12)分为正常对照组、DMSO对照组、AngⅡ组、AngⅡ+SAHA组,分别给予AngⅡ、DMSO和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA干预,采用免疫印迹法(Western blot)检测信号通路蛋白STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、乙酰化STAT3(acetyl-STAT3)的表达水平;检测纤维化相关蛋白：平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)及促纤维化细胞因子TGF-β的表达.STAT3乙酰化修饰可以抑制AngⅡ诱导的小鼠肺泡上皮细胞促纤维化反应。

摘要： 观察蛋白酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子(JAK2/STAT3)信号通路的激活对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠肺泡上皮细胞促纤维化反应的影响.将体外培养小鼠肺泡上皮细胞株(MLE-12)分为正常对照组、DMSO对照组、AngⅡ组、AngII+AG490组,分别给予AngⅡ、DMSO和JAK2拮抗剂AG490干预,采用Western印迹检测信号通路蛋白JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达水平;Western印迹检测纤维化相关蛋白：平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)的表达及最重要的促纤维化细胞因子转化生长因子(TGF-β)的表达.

摘要： 目的：评价远程缺血预处理(RIPC)对大鼠体外循环(CPB)后肺泡上皮细胞凋亡与相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响. 方法：成年雄性SD大鼠60只,随机分为3组(n=20)：假手术组(S组)、CPB组和RIPC+CPB组.S组行麻醉和穿刺但不行CPB;CPB组采用尾动脉插管灌注,右颈静脉插管引流建立CPB模型;RIPC+CPB组实施CPB前对后肢进行RIPC(通过驱血带阻断后肢血流10min,复灌10min,两侧后肢交替进行,每侧进行3次).麻醉复苏后2h处死大鼠并取肺组织，光镜下苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织的病理学改变，TUNEL法检测肺泡上皮细胞凋亡情况，Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平。 结果：与S组比较，CPB组和RIPC+CPB组肺泡上皮细胞凋亡指数升高，Bax和Bcl-2蛋白表达上调，Bax/Bcl-2比值上升（P＜0.05）；与CPB组比较，RIPC+CPB组肺泡上皮细胞凋亡指数下降，Bax蛋白表达下调，Bcl-2蛋白表达上调，Bax/Bcl-2比值下降（P＜O.05）。HE染色显示RIPC+CPB组肺组织细胞的形态学损伤轻于CPB组。 结论：RIPC对大鼠CPB后的肺泡上皮细胞有明显的保护作用，其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达从而抑制细胞凋亡有关。

摘要： 目的：探讨薏苡仁油对人肺泡上皮细胞间质转化的影响,评估薏苡仁在肺纤维化治疗方面的应用.rn 方法：以A549肺泡上皮细胞为研究对象,用TGF-β1诱导肺泡上皮细胞的间质转化,同时,加入不同浓度的组合物进行干预.TGF-β1刺激48h后,应用圆形度定量分析细胞形态的变化;应用免疫组织化学的方法分析细胞表面上皮特征性蛋白E-cad和间质特征性蛋白α-SMA、FN和Collagen-I的表达;应用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测细胞分泌MMP-9和TIMP-1水平.rn 结果：与正常组比较,TGF-β1组圆形度显著降低(P＜0.01);E-cad表达显著降低(P＜0.05);FN表达显著升高(P＜0.01);α-SMA和Collagen-I表达升高,MMP-9和TIMP-1的分泌量增加,但均无显著性(P＞0.05).与TGF-β1组比较,高剂量组E-cad表达显著增加(P＜0.05);小剂量组Collagen-I的表达显著降低(P＜0.05);小剂量组TIMP-1分泌量显著增加(P＜0.05),其它未显示出显著性的影响(P＞0.05).rn 结论：薏苡仁油能有效抑制体外培养的人肺泡上皮细胞A549的上皮间质转化,抑制MMPs对细胞外基质的破坏.

摘要： 目的：探讨地黄对人肺泡上皮细胞间质转化的影响和机制.rn 方法：TGF-β1诱导A549肺泡上皮细胞的间质转化并进行地黄低剂量、中剂量、高剂量(分别简称低、中、高组)干预.MTT法分析地黄对细胞增殖的影响;圆形度定量法和免疫细胞化学法分析细胞形态和细胞E-cad、α-SMA、FN和Collagen-I蛋白的表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测细胞分泌MMP-9和TIMP-1水平.rn 结果：地黄对A549细胞增殖的抑制作用随着剂量的增加而增强,200μg/mL剂量显著抑制细胞增殖(P＜0.01).与正常组比较,TGF-β1组圆形度和E-cad表达显著降低(P＜0.001),α-SMA、FN和Collagen-I表达显著升高(P＜0.001),MMP-9和TIMP-1分泌量显著增加(P＜0.01,P＜0.05).与TGF-β1组比较,中、高组的圆形度和E-cad表达显著升高(P＜0.01,P＜0.001),α-SMA表达显著降低(P＜0.01,P＜0.001);地黄对FN和Collagen-I的表达和MMP-9分泌量没有显著的影响(P＞0.05);低、中、高剂量组TIMP-1分泌量显著增加(P＜0.001).rn 结论：地黄能有效抑制体外培养的人肺泡上皮细胞A549的上皮间质转化,作用机制可能与TGF-β1信号转导通路有关,尚可能有抑制MMPs降解细胞外基质的作用.

摘要： 目的：rn 观察骨髓间充质干细胞(BMSC)与染矽尘大鼠肺泡上皮细胞(AEC)体外共培养后能否分化为AEC,并对激光共聚焦显微镜(LSCM)和倒置荧光显微镜两种观察方法进行比较.rn 方法：rn 分别采用全骨髓贴壁法、免疫粘附纯化法培养BMSC和AEC,再将BMSC和染矽尘大鼠AEC共培养作为实验组,同时设对照A组:BMSC和正常大鼠AEC共培养,对照B组:BMSC单独培养.显微镜下动态观察BMSC的形态变化,并分别于共培养的第4、第8天对BMSC进行水通道蛋白5(AQP5)和表面活性蛋白C(SP-C)的免疫荧光双重染色,用LSCM和倒置荧光显微镜观察不同组的BMSC两种荧光的表达情况,采用图文分析软件对两种荧光进行积分光密度(IOD)分析.rn 结果：rn 共培养后实验组和对照A组的BMSC逐渐从长梭形向立方形、多边形转化,第8天时变化较第4天更明显,但对照A组BMSC形态变化无实验组明显,而对照B组BMSC的形态一直无明显变化.LSCM和倒置荧光显微镜下可观察到:实验组和时照A组的BMSC在共培养第4和第8天均可见呈绿色荧光的AQP5和红色荧光的SP-C表达,且两种荧光第8天均较第4天强,但同一时间点的两种荧光强度对照A组均较实验组弱;对照B组的BMSC在各时间点均可见少量绿色荧光表达,无红色荧光表达.LSCM可以在更高倍镜下清晰地观察不同蛋白的表达及其在细胞内的分布情况.对各组荧光进行IOD分析:实验组和对照A组BMSC在共培养第8天时的两种荧光IOD值均较第4天高(P＜0.05);同一时间点实验组两种荧光的IOD均高于对照A组和对照B组(P＜0.05),而对照A组两种荧光的IOD又均高于对照B组(P＜0.05);倒置荧光显微镜的荧光IOD较LSCM的荧光IOD值高(P＜0.05),但两者的实验比较分析结果一致.rn 结论：rn 染矽尘大鼠AEC能有效诱导BMSC分化成AEC;用LSCM可更清晰地观察细胞不同蛋白表达情况,但其荧光IOD分析的结果与倒置荧光显微镜无差别.

摘要： 本文结合动物实验，探讨了百草枯导致肺泡上皮细胞凋亡的作用机制，结果表明，PQ通过死亡受体途径、线粒体途径和内质网应激途径诱导ATⅡ凋亡，主动启动因素可能为活性氧。但活性氧如何启动三条凋亡途径，三条凋亡途径间的相互作用以及涉及到的具体信号通路，仍需进一步深入研究。

摘要： 目的：对内源性硫化氢对油酸诱导的急性肺损伤大鼠肺泡上皮细胞内质网应激的调节作用进行探讨.方法：雄性Sprague Dawley大鼠72只,随机分入正常对照组,油酸组,油酸+硫氢化钠组及硫氢化钠对照组.每个组进一步分为2、4和6小时3个时间点.对肺组织进行肺组织损伤半定量评分,检测肺组织湿干重比和匀浆硫化氢含量.通过蛋白印迹法检测内质网应激的标志蛋白(GR78表达和elF2α的磷酸化水平)的变化情况.结果：肺损伤大鼠肺组织损伤半定量评分及湿干重比明显升高,而肺组织硫化氢含量,肺泡上皮细胞GRP78表达和eIF2 α磷酸化水平明显降低.在硫氢化钠预处理的大鼠中,肺损伤半定量评分及肺组织湿干重比明显降低,而肺组织硫化氢含量,肺泡上皮细胞GRP78表达和eIF2 α磷酸化水平明显升高.结论：内源性硫化氢可能通过促进肺泡上皮细胞内质网应激反应进而在肺损伤过程中起到保护作用.

摘要： 本公开提供了促进多能干细胞分化成胸腺上皮细胞或胸腺上皮细胞祖细胞的方法，以及从所述方法获得的细胞，以及包含此类细胞的溶液、组合物和药物组合物。本公开还提供了将胸腺上皮细胞或胸腺上皮细胞祖细胞用于治疗和预防疾病、产生器官以及用于其他用途的方法，以及试剂盒。

摘要： 本发明的问题在于提供一种针对干眼症等与复层扁平上皮细胞相关的疾病有效的新的治疗剂。本发明是一种包含间充质干细胞的分泌物的复层扁平上皮细胞的正常分化‑成熟促进剂。优选地，上述分泌物不含动物血清，上述间充质干细胞为来源于脂肪的间充质干细胞、来源于脐带的间充质干细胞或来源于骨髓的间充质干细胞，上述复层扁平上皮细胞为选自由角膜上皮细胞、结膜上皮细胞、表皮角化细胞、口腔上皮细胞、会厌上皮细胞、食道上皮细胞、阴道上皮细胞、声带皱襞上皮细胞、鼻腔上皮细胞以及鼻前庭上皮细胞组成的群组中的至少一种。

摘要： 本发明公开了一种肺泡I型上皮细胞的选择性培养基及其分离纯化方法，涉及细胞提取技术领域，本发明提供的选择性培养基，以119ml培养基计算，所述选择性培养基包括如下组分：RPMI 1640培养基90mL、胎牛血清10mL、双抗1mL、促上皮生长因子1mL、谷氨酸溶液17mL，培养基pH值为6.5。利用该选择性培养基的分离纯化方法包括两个步骤，其一是常规培养，其二是选择性培养基中进行培养。本发明通过改良选择性培养基以及培养分离方式，解决了肺泡I型上皮细胞的分离纯化中肺成纤维细胞带来的技术难题。

摘要： 本发明属于细胞工程技术领域，具体公开了一种可逆性永生化Ⅱ型肺泡上皮细胞及其构建与应用。本发明通过SSR#41永生化工具质粒和逆转录病毒系统构建了可逆性永生化肺泡细胞株imPACs，并进一步分选出了可逆性永生化小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞，为了解Ⅱ型肺泡细胞的功能和作用机制，以及肺相关疾病诊断及治疗的研究提供了更好的细胞模型。进一步地，本发明通过体内外腺病毒Ad‑TGF‑β1干预imPAC2细胞株，以及构建稳定低表达β‑Catenin的imPAC2细胞系(imPAC2‑Si‑β‑Catenin)，还构建了pSEBI‑Kras和pSEBI‑p53R273H稳定过表达Kras及R273H位点突变p53的imPAC2细胞系(imPAC2‑KrasmP53)，为肺纤维化、肿瘤等相关研究提供了良好的细胞工具。

摘要： 本发明公开了一种玫瑰花提取物在制备防治肺泡上皮细胞过早衰老引起的疾病的药物中的应用，所述玫瑰花提取物为玫瑰花总提取物、玫瑰花提取物的水层或玫瑰花提取物的乙酸乙酯层，其中采用醇类溶剂浸泡玫瑰花，将得到的提取液浓缩得到玫瑰花总提取物，将玫瑰花总提取物加水稀释后，采用乙酸乙酯萃取，将分离的水层和乙酸乙酯层分别浓缩得到玫瑰花提取物的水层及乙酸乙酯层。本发明通过体外细胞实验，发现上述玫瑰花提取物均具有抗肺泡上皮细胞衰老活性，尤其玫瑰花提取物的乙酸乙酯层能显著下调p21蛋白水平并降低β‑半乳糖苷酶活性，在开发用于防治肺泡上皮细胞过早衰老引起的疾病的药物提供了新的理论和技术支撑。

摘要： 本发明提供了一种人肺泡上皮细胞分离与培养方法，采集的组织在活化基底的包围下可以有效地进行贴壁生长，血清成分可抑制肺泡上皮细胞的分裂和分化，从而大大提高了细胞活力；组织碎片在特定的气体环境下震荡培养，可以有效避免采集的组织样本由于缺血而引起损伤，以利于后续的培养操作；传代培养基中添加的尿囊素、肌酸和积雪草苷可以有效提高细胞活力和分裂能力，从而促进细胞生长和增殖；将3T3细胞作为滋养层，可以为原代肺泡上皮细胞提供良好的生长基底，有效促进肺泡上皮细胞的生长分裂，从而大大提高培养效果。通过上述方法，可以显著提高肺泡上皮细胞的活性和增值速率，从而为相关研究项目提供优质的实验材料。

摘要： 本发明涉及生物细胞培养技术领域，具体涉及一种大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法，包含以下步骤：①绑定静脉输液针与气管、②快速注入消化液、③肺入离心管、④吸取消化液、⑤缓慢注入消化液、⑥消化液再利用、⑦循环操作。本发明循环利用初始添加的消化液，反复吸取并注入肺中进行消化，使注入肺中的消化液量基本等于渗出肺的消化液量，保证消化液始终充满肺泡，从而使得消化持续稳定且快速，使消化更充分，消化总时间大大缩短，有效的增加了消化液消化效率和利用率，避免了消化液的浪费，增加了Ⅱ型肺泡上皮细胞原代产量。

摘要： 本发明公开了一种饰纹姬蛙肺泡上皮细胞的原代培养方法。它的步骤如下：取成体饰纹姬蛙进行表面消毒；解剖取出肺脏用HBSS平衡盐溶液清洗；加入胶原酶Ⅰ溶液消化；消化液冷冻离心后加入细胞完全培养基；吹打肺组织碎片，并经100μm孔径细胞过滤网过滤制得细胞悬液；27°C恒温培养，每隔3‑4天换新的细胞完全培养基。本发明能快速、可重复地建立饰纹姬蛙肺泡上皮细胞的原代培养，所需要的细胞培养设备简单，可操作性强，获得的细胞生长速度明显快于哺乳动物的肺泡上皮细胞。本发明是对已有的哺乳动物肺泡上皮细胞的重要补充，为陆生适应性、肺发育、肺纤维化、肺结核等重大生物学及医学问题的研究提供了新的细胞材料。

摘要： 本实用新型属于细胞相互作用研究技术领域，公开了一种充质干细胞对脂多糖诱导人肺泡上皮细胞凋亡测试装置，设置有密码输入器，连接有细胞培养基；细胞培养基中间销接有隔板；细胞培养基连接有离心机；离心机上方旋转安装有离心盘；离心机连接有水浴箱；水浴箱上方卡接有水浴盘；水浴箱连接有细胞分析仪和模拟实验学习机；细胞分析仪下方开槽有细胞检测凹槽；细胞分析仪连接有数据储存器；数据储存器连接有打印机。本实用新型对肺部损伤的病人具有很大的研究意义；同时具有测试与学习相结合的功能，在不影响测试结果的前提下，增加了医护人员的学习机会；且设有密码密码输入器，提高了装置的安全性。

摘要： 本实用新型公开了一种发烟罐烟雾提取物致大鼠肺泡上皮细胞损伤模型的培养架，其包括筒体；带有透孔的隔板将筒体的内部分为第一腔室和第二腔室；基座固定在第一腔室的内壁面上，该基座上设置有用于放置发烟罐的凹槽；微孔滤膜以垂直于筒体中心线的方式覆盖在第一腔室内，该微孔滤膜位于所述基座和隔板之间。本实用新型设计新颖、结构合理、便于操作。大鼠可被养殖在第二腔室中，在第一腔室内放入发烟罐，发烟罐产生的烟雾经微孔滤膜除去细菌和大颗粒物后从隔板上的透孔进入到第二腔室，大鼠生长一段时间后便可得到肺泡上皮细胞损伤模型。