肝脏细胞

摘要： 背景:人诱导多能干细胞是一种与胚胎干细胞特性高度类似的多能干细胞类型,具备三胚层分化潜能和持续自我更新能力。将人诱导多能干细胞定向分化成具备功能的肝脏细胞对临床肝脏替代治疗意义重大。目的:建立一种高效的基于人诱导多能干细胞的肝脏细胞定向分化实验方案。方法:利用明场显微镜、免疫荧光对人诱导多能干细胞特性进行鉴定。通过转录因子重组蛋白手段时序性调控不同信号通路,即在第0,5,10,15天顺序加入激活素A、成纤维细胞生长因子4/骨形态发生蛋白4、肝细胞生长因子、肿瘤抑制因子M,使多能干细胞经历终末内皮层、肝内胚层、肝母细胞(肝脏前体细胞)最终分化成为有功能的肝脏细胞。利用明场显微镜、实时定量PCR(qPCR)、ELISA动态观察不同阶段形态特征和分子标记物。结果与结论:①所使用的人诱导多能干细胞具备经典的诱导多能干细胞形态特征并且高表达诱导多能干细胞特异标记蛋白(SSEA4、SOX2、OCT4);②人诱导多能干细胞发生了终末内胚层、幼稚肝细胞、肝脏细胞不同阶段形态转变;③qPCR结果显示,随着肝细胞分化进展,诱导多能干细胞特异标记物(OCT4)显著下调,终末内胚层(GCS、CXCR4)和肝脏内胚层标记物(HNF4α、HNF1β)则呈现先升高再下调趋势,而肝脏细胞标记物(CYP34A、ALB)则呈现出逐渐递增趋势;④ELISA结果进一步显示,诱导15 d以后的肝脏细胞开始具备肝特异蛋白(白蛋白、尿素)分泌功能,并且随着时间延长其分泌功能进一步增加;⑤上述结果提示,成功建立人诱导多能干细胞向肝脏细胞定向分化的实验方案,为未来临床肝脏细胞替代治疗提供实验基础。

摘要： 为研究六氟双酚A(BPAF)对斑马鱼肝脏细胞的毒性机制。试验以斑马鱼肝脏细胞为研究模型,选择不同浓度的BPAF(0、10、20、30μmol/L)作用于斑马鱼肝脏细胞系ZFL细胞,检测BPAF对ZFL细胞的细胞毒性以及细胞的抗氧化酶活性。结果表明,10、20、30μmol/L BPAF均可极显著抑制ZFL细胞的细胞活性(P<0.01);与对照组相比,10μmol/L BPAF组细胞丙二醛(MDA)含量显著提高(P<0.05),20、30μmol/L BPAF组细胞MDA含量极显著提高(P<0.01);20、30μmol/L BPAF组细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著降低(P<0.01);10、20、30μmol/L BPAF组细胞过氧化氢酶(CAT)活性极显著降低(P<0.01);20、30μmol/L BPAF组ZFL细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性极显著降低(P<0.01)。研究表明,BPAF可通过干扰细胞的氧化应激,对ZFL细胞产生细胞毒性。

摘要： 肝脏具有强大的再生能力,肝切除术或肝移植术的成功,主要取决于术后肝脏能否恢复正常的生理功能和体积。研究表明,血小板在促进肝再生中发挥着重要作用。然而,其作用机制尚未完全明确。本文就血小板促进肝再生的作用机制及其研究进展作一综述,以期为肝切除或肝移植相关术后肝再生提供新的治疗策略。

摘要： 肝脏是人体最大的实质性器官,是不可或缺的“化工厂”。肝细胞的非正常死亡影响肝脏功能进而影响人体物质代谢,终末期肝病的高死亡率尚未得到有效解决。人类诱导多能干细胞提供了一种潜在的、取之不尽的自体干细胞来源,在不同生长因子和小分子物质诱导下逐步分化成包含肝细胞样细胞在内的多种组织细胞。近年来,通过模拟肝脏发育的三维环境,干细胞分化的肝细胞样细胞在表型和功能表达上更接近成人肝细胞,为肝脏疾病治疗研究和药物开发提供广阔的平台。本文将阐述人诱导多能干细胞向肝脏细胞分化的新技术及相关应用前景。

摘要： 通过DNA shuffling技术选择8种AAV (AAV1～AAV4,AAV6～AAV9) cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库.将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列).通过转化实验获得随机感染质粒文库(pIRC).将所得质粒经过共转染HEK293细胞,72 h后收集纯化病毒,获得感染性AAV文库.利用野生型5型腺病毒(Wild Type Ad5,wt Ad5)辅助感染人肝癌Hep G2细胞,进行筛选后,最终在肝细胞中富集获得1种新型AAV血清载体AAVXL12.通过将携带GFP基因的不同AAV血清型载体感染Hep G2细胞,观察到不同程度的绿色荧光的表达,最终显示筛选到的AAV血清型载体AAVXL12介导的GFP基因表达效果最好,荧光强度最强.

摘要： 近日,南京医科大学基础医学院李仲教授课题组的一项研究发现,肝脏细胞中存在着一种承担脂肪分泌"加速器"功能的蛋白——PNPLA7,它可以促进肝脏极低密度脂蛋白的分泌,减少脂肪在肝脏的积累。研究中发现,PNPLA7蛋白的表达水平和血脂水平呈正相关关系。他们以肝脏细胞中缺失"加速器"蛋白的小鼠为研究对象,给它们喂高脂饲料,小鼠会出现严重的脂肪肝。

摘要： 重症肝炎的引发,主要体现在细菌感染以及药物中毒、酒精中毒、病毒感染等原因,属于人体内严重肝功能障碍疾病,并且在临床治疗中属于重大肝性疾病类型。重症的肝炎会使人体的肝脏器官发生病变而导致人体解毒功能下降,进而引发人体肝脏器官中淤积大量的毒素,影响人体的新陈代谢与各功能紊乱。除此之外还会导致患者的肝脏遭受损伤,抑制肝脏细胞的再生,产生恶性循环状况,最终的结果便是导致患者的身体出现功能障碍,极有可能威胁患者生命。

摘要： 肝炎是临床常见的疾病,根据现有临床资料表明,肝炎又是肝脏炎症系统的统称,一般情况下是由于多种因素如病毒、寄生虫、药物、自身免疫因素、细菌、化学毒物等因素导致患者的肝脏细胞出现明显的损伤,从而导致肝脏细胞、肝功能等出现损伤,继而引起患者的机体出现一系列不良症状。对于肝炎相信大家并不陌生,但是为了帮助大家更好的了解肝炎,并且在日常生活中做到有效的肝炎防护,本文就这些问题进行相应的讲述。

摘要： 为探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠肝脏细胞凋亡的作用及其机制与内质网应激蛋白PERK和GRP78表达的关系,采用注射小剂量链脲佐菌素联合喂养高脂饮食建立T2DM大鼠模型,成模后随机分为模型组(MOR组)、EGCG1低剂量组和EGCG2高剂量组,同时设置正常对照组(NOR组).EGCG1组与EGCG2组干预12周,检测各组大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素水平(fasting insulin,FINS)和计算胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI),观察EGCG对大鼠糖代谢的影响;HE染色和透射电镜分别观察肝细胞形态和超微结构变化,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)方法检测各组大鼠肝细胞凋亡改变,免疫组化和实时荧光定量PCR分别检测肝脏PERK和GRP78蛋白的表达和mRNA水平.结果显示,比较MOR组,EGCG1组大鼠FBG显著降低(P<0.01),EGCG2组大鼠FBG与FINS均显著降低(P<0.01),ISI在高浓度EGCG组明显降低(P<0.01).HE染色可见模型组肝脏结构存在明显病理损伤,EGCG1和EGCG2组均可观察到肝细胞结构的改善.透射电镜下模型组细胞核染色质聚集,呈现细胞凋亡的改变,不同浓度EGCG干预后肝细胞凋亡细胞减少.TUNEL法测定NOR组有较少细胞凋亡,MOR组AI明显高于NOR组(P<0.01),EGCG1、EGCG2组与MOR组比较AI降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).免疫组化显示MOR组PERK和GRP78蛋白表达显著高于NOR组(P<0.01),EGCG1与EGCG2组PERK和GRP78蛋白表达减少,低于模型组(P<0.05,P<0.01).RT-PCR结果显示,MOR组大鼠肝脏内质网应激蛋白PERK和GRP78的mRNA水平明显高于NOR组(P<0.01),与MOR组相比,不同浓度EGCG干预后肝脏细胞中PERK和GRP78的mRNA水平降低,EGCG1组P<0.05,EGCG2组P<0.01.表明EGCG可通过降低内质网应激蛋白PERK和GRP78的表达,抑制肝脏细胞内质网应激水平,从而减轻2型糖尿病大鼠肝细胞凋亡的发生.

摘要： 本实验选用8头泌乳中期奶山羊进行综合调控试验,研究通过综合调控法对日粮添加缓冲剂是否能改善高精料对肝脏细胞凋亡的影响.试验分成两组:综合调控组(Comprehensive regulation,CC)和高精料组(High Concentrate,HC),在饲喂等重量高精料(精∶粗=6∶4)的条件下,综合调控组将饲料颗粒化,并加入缓冲剂碳酸氢钠、氧化镁、乙酸钠和丁酸钠,高精料组饲喂粉料.饲喂后通过瘤胃瘘管采集0-10h瘤胃液,并用pH计检测瘤胃pH值.采用生化分析方法检测外周血中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总蛋白、白蛋白含量以检测高精料饲喂条件下山羊肝脏的损伤程度.通过肝脏血管插管采集门静脉、肝静脉血液检测肝脏中LPS的含量.实时荧光定量PCR法检测肝脏中凋亡相关基因的表达,采用分光光度计法测定肝脏细胞中Caspase-3、Caspase-8酶的活性.试验结果显示,高精料综合调控能提高瘤胃pH,降低酸中毒程度,外周血酶含量测定中,HC组GOT、GPT、LDH、NAG、ALT含量显著高于CC组,而蛋白含量却显著降低(P＜0.05),门静脉血中LPS含量HC组显著高于CC组,但肝静脉血中LPS含量没有差异(P=0.064),凋亡相关基因mRNA相对表达量HC组与CC组相比,Caspase-3(P＜0.05),Caspase-8(P＜0.01),TNF-α都显著升高,而Caspase-9没有差异,Bcl-2家族中的促凋亡基因Bax、Bak的表达量都显著升高,抗凋亡基因Bcl-2表达量降低(P=0.08),酶的活性Caspase-3 (P=0.23)和Caspase-8 (P=0.054)HC组都有所提高.总之,高精料综合调控能减轻肝脏损伤,降低肝脏细胞的凋亡程度.

摘要： 目的：观察双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肝脏细胞凋亡的保护作用.rn 方法：通过链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)结合高糖高脂饮食诱导建立2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠模型,糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组(diabetes model control,DMC)、骆驼奶低剂量组(low camel milk,LCM)、骆驼奶高剂量组(high camel milk,HCM)和二甲双胍组(metformin hydrochloride,MHT),另设正常对照组(control group,C).处理4周后测量大鼠体重并采血,检测糖耐量和胰岛素(INS)的变化;采用苏木精-伊红(H&E)染色方法检测肝脏组织的病理变化;采用免疫组织化学染色和免疫印迹法检测肝脏组织BCL-2(B cell lymphoma/lewkmia-2)、BAX蛋白(Bcl2-associated X protein,BAX)的表达;采用荧光实时定量RT-PCR法检测BCL-2、BAX、Caspase3 (cysteinyl aspartate specific proteinase 3)和NF-κB (nuclear factor-kappa B,NF-κB) mRNA的表达.rn 结果：与对照组相比,MHT和HCM组大鼠血糖(Glu)明显下降;H&E染色显示DMC组肝细胞水肿,部分肝细胞核皱缩、碎裂、溶解,而驼奶治疗组和MHT组肝细胞形态正常,胞核结构清晰;与DMC组相比,HCM组和MHT组大鼠肝脏细胞BAX蛋白表达减弱,BCL-2蛋白表达增强,BAX/BCL-2降低(P＜0.01);BCL-2 mRNA在MHT组中表达最高,BAX mRNA在LCM组和MTH组中表达最高;DMC组、MHT组、LCM组和HCM组均可见BCL-2和BAX蛋白的表达.骆驼奶能抑制BAX蛋白的表达而促进BCL2蛋白表达,揭示骆驼奶能抑制细胞凋亡,促进细胞增殖.rn 结论：骆驼奶具有明显的降低2型糖尿病大鼠的血糖及肝脏细胞损伤的作用,对糖尿病治疗有积极作用,这为临床治疗糖尿病提供了新思路.

摘要： 目的:系统性探讨微囊藻毒素-LR (Microcystin-LR,MC-LR)对原代培养的大鼠肝脏细胞的毒作用特征.rn 方法:采用胶原酶灌注法建立原代培养的大鼠肝脏细胞模型,并通过抗大鼠细胞角蛋白(CK18)的特异性抗体来进行免疫荧光染色鉴定细胞纯度.对分离培养得到的原代肝细胞分别给予不同浓度(10-12-10-5mol/L)的MC-LR,在给药后的不同时点采用MTT法观察细胞存活率的情况,流式细胞术分析细胞凋亡发生率、细胞周期、DNA合成速率以及细胞内ROS含量。rn 结果:分离培养所得细胞均为肝实质细胞，细胞纯度为100%。高剂量的MC-LR能引起细胞死亡或凋亡的发生，细胞内ROS水平显著增高;而低剂量的MC-LR则具有促进细胞增殖的效应，DNA合成速率以及S期细胞比例明显增加，细胞内ROS水平在染毒后出现增加趋势，但与对照组相比差异不具有统计学意义。双向毒性效应的分界浓度为10-7-10-8mol/L左右。rn 结论:MC-LR对的原代培养肝脏细胞的毒性效应表现为剂量上的双向性，即高剂量的MC-LR可能通过诱导细胞内ROS升高从而导致细胞凋亡的发生，而低剂量的MC-LR毒性作用则表现为促细胞增殖效应。

摘要： 为了研究气态甲醛对小鼠肝脏细胞遗传物质的毒性,选用SPF级昆明种纯系雄性小鼠作为研究对象,用浓度为0.5mg/m3、1.0mg/m3和3.0mg/m3的气态甲醛对小鼠进行连续动态染毒72小时,染毒结束后观察肝细胞的RAPD图谱和微核形成率。结果表明：气态甲醛能诱导肝细胞微核率增加,染毒组与对照组RAPD图谱之间存在明显差异。以上结果提示：甲醛对小鼠肝脏细胞的染色体有明显的损伤作用,同时验证利用RAPD技术获得的DNA多态性变化可用作检测甲醛遗传毒性效应的生物标志物。

摘要： 在能源紧缺的大环境下,核能作为可持续发展的清洁能源备受瞩目.世界上大多数核电站位于沿海区域,除了利用海水进行循环冷却之外,海洋对于放射性核废水的稀释作用也是重要因素之一,由此也导致了核电站周边水体、沉积物、土壤、生物体等多介质中仍能检测到一定量的放射性核素残留.

摘要： 微核(Micronucleus,MN)是真核类生物细胞中的一种异常结构,往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的.传统的微核试验(MNT)主要基于细胞分化迅速、组织分布良好的骨髓或外周血中未成熟红细胞,但是由于代谢能力、靶器官毒性或靶组织肿瘤诱导原因,单纯骨髓或外周血微核试验漏选了许多潜在的断裂剂或非整倍体诱导剂.肝脏是药物代谢的靶组织,也是许多化合物的毒性靶器官,故肝脏微核试验(LMNT)对于骨髓和外周血微核试验(BM/PBMNT)是一个重要的互补.肝微核试验最早由Tates等1980年创建了部分肝切除法（PH法），刺激肝脏细胞增殖，并得到成功的应用；后来有研究者采用促细胞分裂剂（4-AAF或四氯化碳）诱导肝细胞的增殖，但是因促细胞分裂剂本身的毒性，并可能与药物相互作用已不再应用。另未成年大鼠法（JR法）和成年大鼠的重复给药法（RD法）也是IWGT推荐的方法。

摘要： 病毒识别细胞表面的受体是病毒感染的第一步,为了筛选兔出血症病毒(RHDV)的肝脏细胞表面受体,成年兔肝脏组织经胰酶消化及300目铜网过滤,得到完整的兔肝脏细胞,用生物素对细胞表面蛋白进行标记和分离;采用病毒铺覆蛋白技术(Virus overlay protein blot assay,VOPBA)分析兔肝脏细胞表面蛋白,结果表明在130 ku-170 ku的位置上存在与RHDV相互作用的特异性蛋白条带,利用液相色谱联合质谱技术(LC MS/MS)对特异蛋白条带进行shotgun分析,鉴定得到39个候选蛋白,其中3种蛋白在病毒感染过程中具有重要作用.本研究将为RHDV受体的进一步探索奠定基础.

摘要： 研究黄曲霉毒素B1(AFB1)不同水平(3μg，30μg，300μg AFB1/kgBW)染毒后，在不同时间点导致雏鸭肝细胞DNA损伤情况；探明AFB1染毒剂量及染毒时间与雏鸭肝细胞DNA损伤之间的关系，为AFB1遗传毒性提供研究模型。将96只雄性北京鸭雏鸭，随机分为16组。雏鸭AFB1灌胃染毒后，分别于1h，2 h，8h，24 h和48 h用彗星试验检测肝细胞DNA损伤。试验表明，雏鸭对于AFB1导致的肝细胞DNA损伤非常敏感，低剂量(1/100 LD50)AFB1暴露就能够引起雏鸭肝细胞DNA发生显著损伤；肝细胞DNA损伤程度与AFB1摄入量以及摄入时间有关。一次经口染毒AFB1 2 h后雏鸭肝细胞DNA损伤达到高峰，此时DNA损伤程度与AFB1暴露之间的量效关系最为明显。所有染毒组在尾长、尾部DNA百分含量、尾矩、Olive尾矩等指标上均显著高于对照组；随着AFB1染毒剂量增加，DNA损伤程度加深、持续时间延长。试验还提示，雏鸭是研究AFB1遗传毒性的一个良好动物模型，彗星试验能够反映AFB1致雏鸭肝细胞DNA损伤的量效关系。

摘要： 本文分析了Resistin及其结合多肽对大鼠肝细胞糖原合成的影响。脂肪组织除作为一个储能组织外,还是一个重要的内分泌器官,可分泌多种脂源性细胞因子参与机体的各项生理活动。Resistin是近年发现的、主要由脂肪细胞分泌的、富含半胱氨酸的细胞因子,它的发现为探讨脂源性细胞因子与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病之间的关系开拓了一个新的研究领域。先前研究中,本研究小组通过噬菌体表面展示技术,筛选获得了一条Resistin结合多肽(RBP),并应用双荧光定位和亲和层析等技术验证了RBP与Resistin的特异性结合。研究显示,RBP能显著拮抗Resistin对脂肪细胞脂质代谢和内分泌功能的影响,RBP能显著改善由Resistin诱导的骨骼肌胰岛素抵抗.但RBP与肝细胞糖原合成的关系目前未见报道,本研究观察了Resistin、RBP对肝细胞糖原合成的影响,并初步探讨了Resistin、RBP对肝细胞GLUT2、IRS2、SOCS3等基因mRNA表达的影响。

摘要： 本文分析了Resistin及其结合多肽对大鼠肝细胞糖原合成的影响。脂肪组织除作为一个储能组织外,还是一个重要的内分泌器官,可分泌多种脂源性细胞因子参与机体的各项生理活动。Resistin是近年发现的、主要由脂肪细胞分泌的、富含半胱氨酸的细胞因子,它的发现为探讨脂源性细胞因子与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病之间的关系开拓了一个新的研究领域。先前研究中,本研究小组通过噬菌体表面展示技术,筛选获得了一条Resistin结合多肽(RBP),并应用双荧光定位和亲和层析等技术验证了RBP与Resistin的特异性结合。研究显示,RBP能显著拮抗Resistin对脂肪细胞脂质代谢和内分泌功能的影响,RBP能显著改善由Resistin诱导的骨骼肌胰岛素抵抗.但RBP与肝细胞糖原合成的关系目前未见报道,本研究观察了Resistin、RBP对肝细胞糖原合成的影响,并初步探讨了Resistin、RBP对肝细胞GLUT2、IRS2、SOCS3等基因mRNA表达的影响。

摘要： 本发明涉及医学领域，公开了一种用于小型动物肝脏淋巴细胞分离的肝脏灌注方法，将动物处死后，经后腔静脉进行灌注；本发明方法操作简便、快速，循环血液排除充分，且不需要特殊设备，实验成本低，能够达到理想的肝灌注效果，适合于大多数实验室在进行小鼠等小型动物的肝脏淋巴细胞分离时采用，具有良好的推广应用价值。

摘要： 本发明公开了一种用于小型动物肝脏淋巴细胞分离的肝脏灌注方法，将动物处死后，经后腔静脉进行灌注；本发明方法操作简便、快速，循环血液排除充分，且不需要特殊设备，实验成本低，能够达到理想的肝灌注效果，适合于大多数实验室在进行小鼠等小型动物的肝脏淋巴细胞分离时采用，具有良好的推广应用价值。

摘要： 本发明提供一种SD大鼠肝脏库普弗细胞和肝星状细胞原代分离、培养方法，包括步骤：(1)麻醉和抗凝；(2)插管；(3)原位灌注；(4)体外消化并获取总细胞悬液；(5)KC和HSC的纯化、分离；(6)细胞培养及形态观察；(7)存活率检测；(8)细胞鉴定。本发明使用健康成年SD雄鼠，200～350g，通过原位灌注、消化和体外消化、梯度离心和差速贴壁分离法，达到了存活率可达到95％以上、纯度可达到90％以上等效果。

摘要： 本申请公开一种脐带间充质干细胞重编程为肝脏细胞的方法：获取脐带间充质干细胞；对所述脐带间充质干细胞进行预处理2d；利用成肝诱导组合物对经过预处理的脐带间充质干细胞进行成肝诱导7d；利用第一成熟诱导组合物对经过成肝诱导处理的脐带间充质干细胞进行第一次成熟诱导7d，获得肝脏细胞；利用第二成熟诱导组合物对所述肝脏细胞进行第二次成熟诱导12～20d，获得功能性肝脏细胞。一种肝脏类器官：脱细胞基质水凝胶、干细胞和肝脏细胞，所述干细胞和肝脏细胞在脱细胞基质水凝胶中分布。本申请的重编程方法，增加了第二次成熟诱导的步骤，延长了培养时间，显著提高了诱导效率。本申请的肝脏类器官，其具有超低免疫源性，有跨物种移植的可能性。

摘要： 本发明涉及一种调节肝脏细胞的miR‑183调节物在制备治疗调节肝脏细胞药物中的应用，调节物包括抑制Tnfrsf1α表达和/或促进肝细胞增殖相关蛋白表达的调节物；调节肝脏细胞药物为含有所述调节物的药物以使所述调节物能够发挥作用。调节物包括能够促进肝脏细胞增殖的miR‑183模拟物。调节物还包括能够促进肝脏细胞凋亡的抑制物。本发明提供了一种能够调节肝脏细胞的调节物及其在制备治疗调节肝脏细胞增殖药物中的应用，本申请人通过研究发现了能够调节肝脏细胞增殖或凋亡的调节物，即miR‑183模拟物和抑制物，二者分别具有显著的促进肝细胞增殖和抑制肝细胞增殖的作用，故可制成相应的药物，来实现对肝细胞的调节。

摘要： 本申请公开一种脐带间充质干细胞重编程为肝脏细胞的方法：获取脐带间充质干细胞；对所述脐带间充质干细胞进行预处理2d；利用成肝诱导组合物对经过预处理的脐带间充质干细胞进行成肝诱导7d；利用第一成熟诱导组合物对经过成肝诱导处理的脐带间充质干细胞进行第一次成熟诱导7d，获得肝脏细胞；利用第二成熟诱导组合物对所述肝脏细胞进行第二次成熟诱导12～20d，获得功能性肝脏细胞。一种肝脏类器官：脱细胞基质水凝胶、干细胞和肝脏细胞，所述干细胞和肝脏细胞在脱细胞基质水凝胶中分布。本申请的重编程方法，增加了第二次成熟诱导的步骤，延长了培养时间，显著提高了诱导效率。本申请的肝脏类器官，其具有超低免疫源性，有跨物种移植的可能性。

摘要： 本发明涉及一种调节肝脏细胞的miR‑183调节物在制备治疗调节肝脏细胞药物中的应用，调节物包括抑制Tnfrsf1α表达和/或促进肝细胞增殖相关蛋白表达的调节物；调节肝脏细胞药物为含有所述调节物的药物以使所述调节物能够发挥作用。调节物包括能够促进肝脏细胞增殖的miR‑183模拟物。调节物还包括能够促进肝脏细胞凋亡的抑制物。本发明提供了一种能够调节肝脏细胞的调节物及其在制备治疗调节肝脏细胞增殖药物中的应用，本申请人通过研究发现了能够调节肝脏细胞增殖或凋亡的调节物，即miR‑183模拟物和抑制物，二者分别具有显著的促进肝细胞增殖和抑制肝细胞增殖的作用，故可制成相应的药物，来实现对肝细胞的调节。

摘要： 本发明公开了一种敲除载体，包括CRISPR/Cas9载体骨架和连接到CRISPR/Cas9载体骨架上的一段互补DNA序列；CRISPR/Cas9载体骨架能够表达Cas9核酸酶；互补DNA序列能够被对应地转录为特异性识别PPARG基因中的特定序列的sgRNA，sgRNA能够与PPARG基因中对应的特定序列的互补链互补配对，使Cas9酶特异地切割特定序列，特定序列包括如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5及SEQ ID NO.6中的一种或多种。本发明还公开了一种打靶载体，包括依次连接的5’同源基因、标记基因及3’同源基因，5’同源基因和3’同源基因分别与肝脏细胞中含有PPARG基因的染色体上的PPARG基因的切割位点的上游端相邻基因和下游端相邻基因的序列同源。本发明还公开一种肝脏细胞中的PPARG基因的体外敲除方法和一种PPARG基因敲除肝脏细胞。

摘要： 本发明涉及一种肝脏细胞的miR‑429调节物及其在制备治疗调节肝脏细胞药物中的应用，调节物包括促进肝细胞增殖的调节物和/或抑制肝细胞增殖的调节物；促进肝细胞增殖的调节物包括促进原癌基因Jun表达和/或促进肝细胞增殖相关蛋白表达的调节物；抑制肝细胞增殖的调节物包括抑制原癌基因Jun表达和/或抑制肝细胞增殖相关蛋白表达的调节物；调节肝脏细胞药物包括含有促进肝细胞增殖的调节物的药物和/或含有抑制肝细胞增殖的调节物的药物以调节肝细胞的增殖或凋亡。本申请人研究出了miR‑429模拟物和miR‑429抑制物，二者分别具有显著的抑制肝细胞增殖和促进肝细胞增殖的作用，故可制成相应的药物，来实现对肝细胞的调节。

摘要： 本发明提供制备基于灌注的包含胰岛细胞的肝脏细胞外基质(胰岛细胞再细胞化的细胞外基质)的方法，以及使用所述再细胞化的基质的方法。