聚合酶链式反应(PCR)

摘要： 食品安全事关人们的生命健康,受到人们的广泛关注,食品检验是保证人们饮食安全的重要环节。近年来,现代分子生物学技术发展迅速,因其快速、灵敏、高效等特点,在食品检验方面的应用广泛。本文主要对分子生物学技术在食品检验领域中的应用进行探讨,以期为食品检验技术的发展提供依据。

摘要： Kod DNA聚合酶作为常见的高保真DNA聚合酶,具有较强的DNA延伸能力以及3'-5'外切核酸酶校正活性。本研究通过对重组Kod DNA聚合酶分离纯化条件的优化,以期提高其表达和纯化效率以及片段扩增能力。利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)对pET-30a-Kod进行诱导表达后,利用酶溶法和超声波破碎法对细胞破碎并提取粗酶液,然后利用Ni-NTA柱洗脱纯化获得较纯Kod DNA酶,再经透析得到高纯度Kod DNA酶,利用PCR反应和Sanger测序手段来检测自提纯化的Kod DNA聚合酶活性及保真性。同时,本研究对IPTG浓度和洗脱液中咪唑浓度等重要参数进行优化。结果表明,在28°C条件下0.1 mmol/L IPTG诱导16-18 h后,Kod DNA聚合酶高效表达;当咪唑浓度为200 mmol/L时蛋白洗脱效果最佳。PCR反应体系中Mg^(2+)浓度为1.5 mmol/L,Kod DNA聚合酶浓度为0.06125μg/μL时,Kod DNA聚合酶效率较高,能有效地扩增3194 bp的目的条带;通过序列比对,PCR产物序列中未引入任何突变。经优化制备后的Kod DNA聚合酶在酶活性和扩增保真性上均能达到商用高保真DNA聚合酶水平。本研究为节省实验室PCR成本,进一步开发和利用Kod DNA聚合酶奠定一定的基础。

摘要： 乳酸菌被视为一类重要的无芽孢革兰氏阳性菌,可以直接利用碳水化合物实现发酵产酸,在益生菌家族当中扮演着重要的角色,具备调节肠道菌群平衡状态、参与免疫应答以及抑制肠道病原菌生长繁殖等一系列的益生效果。从以往发酵食品当中分离出乳酸菌22株,主要涵盖植物乳杆菌7株、干酪乳杆菌3株、发酵乳杆菌3株、瑞士乳杆菌5株、鼠李糖乳杆菌2株以及保加利亚乳杆菌以及嗜热链球菌各1株等。从以上乳酸菌当中,筛选出6株不同类型的乳杆菌开展动物实验。借助于实时荧光定量PCR技术,探索不同阶段小鼠粪便当中各类乳杆菌的实际数量,分析其在小鼠肠道当中具有的定植能力。由此为工业应用菌株整体功能性的评价及筛选提供相应的参考借鉴依据。

摘要： 文章运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和侧向流试纸条(lateral flow strip,LFS)相结合方法,以豌豆特异性基因为参照对绿豆食品中掺入豌豆成分进行定性分析。实验对退火温度、修饰引物浓度和镁离子浓度进行优化,并在最优PCR条件下进行特异性和灵敏度检测。结果表明,在退火温度为59°C,修饰引物加入量为0.20μmol/L,镁离子加入量为1.75 mmol/L条件下,PCR扩增效果最好,掺假检测限为0.5%,最低可检测豌豆DNA量为0.12 ng。该方法特异性高、操作简单快速,依靠视觉观察就能得出定性结果。

摘要： 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种具有急性、烈性、高度接触性的传染病,致死率高达100％,传播范围十分广泛,由于目前尚无有效的疫苗对这种病毒进行免疫预防,必须进行检测、扑杀和隔离,才能阻断病毒的传播,因此亟需建立简便、快速、有效的核酸检测方法.通过介绍当前使用的非洲猪瘟病毒的检测方法,归纳出各种方法的优缺点,并对非洲猪瘟病毒检测技术的发展方向进行阐述.

摘要： 目的:基于DNA条形码技术及高分辨率熔解曲线(HRM)方法鉴定肉苁蓉药材的基原.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对肉苁蓉样品的ITS2序列进行扩增;将待鉴定肉苁蓉样品的ITS2序列与Genbank数据库进行BLAST比对;利用MEGA 6.06软件通过建树法进行NJ树聚类分析;通过HRM方法快速鉴定肉苁蓉药材基原.结果:21份待鉴定肉苁蓉样品ITS2序列的BLAST比对结果中,11份样品与沙苁蓉高度一致,其余10份样品与《中华人民共和国药典》2015年版一部收载品种肉苁蓉(Cistanche deserticola)或管花肉苁蓉(C istanchetubulosa)高度一致;通过ITS2序列的NJ聚类分析,将21份待鉴定肉苁蓉样品分别聚类到沙苁蓉、管花肉苁蓉、盐生肉苁蓉、肉苁蓉4个种;通过HRM方法鉴定肉苁蓉药材样品,鉴定结果与NJ聚类分析结果一致.结论:通过DNA条形码和HRM技术均能有效鉴定不同种的肉苁蓉药材样品,且结果一致,起到互相验证的作用,为肉苁蓉及其他中药民族药品种的快速鉴定提供了参考依据.

摘要： 目的:基于DNA条形码技术鉴定重楼药材疑似伪品的基原.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对重楼的内部转录间隔区2(ITS2)序列进行扩增;通过与GenBank数据库进行Blast比对,以及利用建树法推断重楼药材疑似伪品的基原.结果:重楼药材疑似伪品经Blast比对,结果显示为狭叶重楼(变种)和黑籽重楼(原变种),一致率均达到99％;通过与前期研究的重楼ITS2序列进行NJ聚类分析,可以判定待鉴定样品的基原与西藏延龄草较为接近;通过将重楼药材疑似伪品与收集的吉林延龄草标本、西藏延龄草标本、宽瓣重楼标本、华重楼标本的ITS2序列进行NJ聚类分析,推断重楼药材疑似伪品的基原为吉林延龄草.结论:确定重楼药材疑似伪品为非2015年版《中华人民共和国药典》收载物种,并推断其基原为吉林延龄草,通过DNA条形码技术为鉴别药材正伪品开辟了一条新途径.

摘要： 目的：建立快速、灵敏、定量检测巨细胞病毒的方法,并形成检测试剂盒。方法 使用TaqMan探针技术,选择保守序列CMV-pp65设计引物,荧光定量病毒载量。对该检测系统进行灵敏度、重复性和特异性等测试,并检测31份临床阳性标本和106份正常献血者标本。结果 检测灵敏度为358copies/ml,CV﹪值在1﹪左右,特异性好,临床标本符合率为100﹪。结论 表明本检测系统特异性好,准确性高,适用于病毒检测,可与临床治疗相结合。

摘要： 目的：建立快速、灵敏、定量检测巨细胞病毒的方法,并形成检测试剂盒。方法 使用TaqMan探针技术,选择保守序列CMV-pp65设计引物,荧光定量病毒载量。对该检测系统进行灵敏度、重复性和特异性等测试,并检测31份临床阳性标本和106份正常献血者标本。结果 检测灵敏度为358copies/ml,CV﹪值在1﹪左右,特异性好,临床标本符合率为100﹪。结论 表明本检测系统特异性好,准确性高,适用于病毒检测,可与临床治疗相结合。

摘要： 目的：建立快速、灵敏、定量检测巨细胞病毒的方法,并形成检测试剂盒。方法 使用TaqMan探针技术,选择保守序列CMV-pp65设计引物,荧光定量病毒载量。对该检测系统进行灵敏度、重复性和特异性等测试,并检测31份临床阳性标本和106份正常献血者标本。结果 检测灵敏度为358copies/ml,CV﹪值在1﹪左右,特异性好,临床标本符合率为100﹪。结论 表明本检测系统特异性好,准确性高,适用于病毒检测,可与临床治疗相结合。

摘要： 目的：建立快速、灵敏、定量检测巨细胞病毒的方法,并形成检测试剂盒。方法 使用TaqMan探针技术,选择保守序列CMV-pp65设计引物,荧光定量病毒载量。对该检测系统进行灵敏度、重复性和特异性等测试,并检测31份临床阳性标本和106份正常献血者标本。结果 检测灵敏度为358copies/ml,CV﹪值在1﹪左右,特异性好,临床标本符合率为100﹪。结论 表明本检测系统特异性好,准确性高,适用于病毒检测,可与临床治疗相结合。

摘要： 采用鸭胚成纤维细胞培养从山东和北京两地暴发的鸭瘟临床病例中分离到两株鸭肠炎病毒(DEV),分别命名为SD和BJ.利用细胞滴片技术,以制备的单抗2G为基础,建立单抗介导的间接免疫荧光(IFA)检测方法,对SD株感染细胞进行间接IFA检测,可见明显的蓝绿色荧光.试验感染7日龄雏鸭可引起鸭肠炎的典型临床症状,死亡率为100﹪(3/3),取试验感染死亡鸭肝脏、胰脏、法氏囊和脑组织等制备石蜡包埋切片,利用单抗进行免疫组化检测,除脑组织外均得到阳性结果.根据在GenBank上已发表的DEV两段序列设计两对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)对野毒SD株和BJ株肝脏病料核酸提取物进行扩增,均得到预期大小为765bp和1954bp的目的片段片段,长片段进行测序,与发表序列进行比较,不同毒株间的碱基序列同源性达到99.73﹪.

摘要： 采用鸭胚成纤维细胞培养从山东和北京两地暴发的鸭瘟临床病例中分离到两株鸭肠炎病毒(DEV),分别命名为SD和BJ.利用细胞滴片技术,以制备的单抗2G为基础,建立单抗介导的间接免疫荧光(IFA)检测方法,对SD株感染细胞进行间接IFA检测,可见明显的蓝绿色荧光.试验感染7日龄雏鸭可引起鸭肠炎的典型临床症状,死亡率为100﹪(3/3),取试验感染死亡鸭肝脏、胰脏、法氏囊和脑组织等制备石蜡包埋切片,利用单抗进行免疫组化检测,除脑组织外均得到阳性结果.根据在GenBank上已发表的DEV两段序列设计两对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)对野毒SD株和BJ株肝脏病料核酸提取物进行扩增,均得到预期大小为765bp和1954bp的目的片段片段,长片段进行测序,与发表序列进行比较,不同毒株间的碱基序列同源性达到99.73﹪.

摘要： 采用鸭胚成纤维细胞培养从山东和北京两地暴发的鸭瘟临床病例中分离到两株鸭肠炎病毒(DEV),分别命名为SD和BJ.利用细胞滴片技术,以制备的单抗2G为基础,建立单抗介导的间接免疫荧光(IFA)检测方法,对SD株感染细胞进行间接IFA检测,可见明显的蓝绿色荧光.试验感染7日龄雏鸭可引起鸭肠炎的典型临床症状,死亡率为100﹪(3/3),取试验感染死亡鸭肝脏、胰脏、法氏囊和脑组织等制备石蜡包埋切片,利用单抗进行免疫组化检测,除脑组织外均得到阳性结果.根据在GenBank上已发表的DEV两段序列设计两对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)对野毒SD株和BJ株肝脏病料核酸提取物进行扩增,均得到预期大小为765bp和1954bp的目的片段片段,长片段进行测序,与发表序列进行比较,不同毒株间的碱基序列同源性达到99.73﹪.

摘要： 采用鸭胚成纤维细胞培养从山东和北京两地暴发的鸭瘟临床病例中分离到两株鸭肠炎病毒(DEV),分别命名为SD和BJ.利用细胞滴片技术,以制备的单抗2G为基础,建立单抗介导的间接免疫荧光(IFA)检测方法,对SD株感染细胞进行间接IFA检测,可见明显的蓝绿色荧光.试验感染7日龄雏鸭可引起鸭肠炎的典型临床症状,死亡率为100﹪(3/3),取试验感染死亡鸭肝脏、胰脏、法氏囊和脑组织等制备石蜡包埋切片,利用单抗进行免疫组化检测,除脑组织外均得到阳性结果.根据在GenBank上已发表的DEV两段序列设计两对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)对野毒SD株和BJ株肝脏病料核酸提取物进行扩增,均得到预期大小为765bp和1954bp的目的片段片段,长片段进行测序,与发表序列进行比较,不同毒株间的碱基序列同源性达到99.73﹪.

摘要： 采用鸭胚成纤维细胞培养从山东和北京两地暴发的鸭瘟临床病例中分离到两株鸭肠炎病毒(DEV),分别命名为SD和BJ.利用细胞滴片技术,以制备的单抗2G为基础,建立单抗介导的间接免疫荧光(IFA)检测方法,对SD株感染细胞进行间接IFA检测,可见明显的蓝绿色荧光.试验感染7日龄雏鸭可引起鸭肠炎的典型临床症状,死亡率为100﹪(3/3),取试验感染死亡鸭肝脏、胰脏、法氏囊和脑组织等制备石蜡包埋切片,利用单抗进行免疫组化检测,除脑组织外均得到阳性结果.根据在GenBank上已发表的DEV两段序列设计两对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)对野毒SD株和BJ株肝脏病料核酸提取物进行扩增,均得到预期大小为765bp和1954bp的目的片段片段,长片段进行测序,与发表序列进行比较,不同毒株间的碱基序列同源性达到99.73﹪.

摘要： 为研究细胞色素P450 2C19在中国土族人群中的基因型,采用聚合酶链式反应与限制性内切核酸酶片段长度多态性技术分析了100例无血缘关系土族人群的基因型.结果显示46人为CYP2C19野生型纯合子(wt/wt);45人为CYP2C19ml杂合子(wt/ml);9人为CYP2C19ml突变型纯合子(ml/ml).与国内外相关报道比较,本实验得出的CYP2C19ml突变频率与文献报道相符.

摘要： 本发明的一实施例涉及一种反复配置有图案加热器的聚合酶链式反应热块及包括其的聚合酶链式反应装置，由此，在反复配置有加热器的热块中，可防止从个别加热器中发生的放射形热分布及由此引起的相邻加热器之间不均匀的热重叠，来相当地改善聚合酶链式反应收率，且由于不需要额外的温度调节单元，因而可相当地贡献于装置的小型化及集成化，进而，可利用反复配置有加热单元的热块及板形状的聚合酶链式反应部，来同时且迅速扩增多个核酸样品，并测定连续的光学信号或电化学信号，来实时确认核酸扩增过程。

摘要： 本发明涉及一种便携式实时PCR装置及利用便携式实时PCR装置的PCR测量方法，根据本发明的实施例的便携式实时PCR装置包括：底座部，形成有设置空间；多个下部加热部，设置于所述底座部的所述设置空间中；下部光学测量部，设置于所述底座部，并布置在与所述下部加热部不同的位置，提供测量光或接收所述测量光；腔室组件，包括分别安置于所述下部加热部及所述下部光学测量部的多个腔室部，所述腔室部配备为能够从任意一个所述下部加热部移动到另一个所述下部加热部或所述下部光学测量部，其中，所述腔室部包括：腔室部主体，用于收容腔室单元，在所述腔室单元形成有在内部收容检体单元的检体单元收容空间，其中，所述腔室单元包括：腔室单元主体，形成有所述检体单元收容空间；及盖单元，从上方遮挡所述腔室单元主体的所述收容空间，其中，所述检体单元的作为宽度对比高度的比例的纵横比形成为大于0且小于1。

摘要： 本发明提供一种能够高效地进行聚合酶链式反应(PCR)的PCR装置以及PCR方法。上述PCR装置是如下的装置：向容器(30)填充比重比反应液(60)小且不与反应液(60)混和的液体(50)，控制部以容器(30)的上方部分的液体(50)成为第一温度，下方部分的液体(50)成为比第一温度低的第二温度的方式驱动控制第一加热部(151)和第二加热部(152)，以在液体(50)中成为球状的反应液(60)通过基于电场的库伦力在液体(50)的上方部分与下方部分之间反复进行上下移动的方式驱动控制电场产生部，在下侧电极(10)与上侧电极(20)之间产生电场。

摘要： 本发明涉及一种用于聚合酶链式反应的检测机构及聚合酶链式反应装置，其中检测机构包括至少一个激发模块组，每个激发模块组包括两个激发模块，激发模块组能够提供两种波长的激发光；激发光纤，与激发模块组连接，激发光纤能够将激发光传输到至少一个反应试管，每个反应试管均接收两种波长的激发光；接收光纤，能够收集并传输反应试管的荧光信号；至少一个接收模块组，与接收光纤连接，每个接收模块组包括两个接收模块，以分别接收来自同一个反应试管的两种波长的荧光信号，并将荧光信号转换为电信号输出；检测机构分时地对所述反应试管进行检测，并复用所述接收模块组获得输出结果。

摘要： 本发明的一实施例涉及一种反复配置有图案加热器的聚合酶链式反应热块及包括其的聚合酶链式反应装置，由此，在反复配置有加热器的热块中，可防止从个别加热器中发生的放射形热分布及由此引起的相邻加热器之间不均匀的热重叠，来相当地改善聚合酶链式反应收率，且由于不需要额外的温度调节单元，因而可相当地贡献于装置的小型化及集成化，进而，可利用反复配置有加热单元的热块及板形状的聚合酶链式反应部，来同时且迅速扩增多个核酸样品，并测定连续的光学信号或电化学信号，来实时确认核酸扩增过程。

摘要： 本发明涉及一种PCR聚合酶链式反应多孔板封膜设备，包括：底板、第一驱动单元、滑动底座、模具、安装座、第二驱动单元、摆动体、滚筒及控制器。第一驱动单元安装在底板上，第一驱动单元与滑动底座连接；模具固定在滑动底座上。安装座固定在底板上；第二驱动单元可转动地安装在安装座上；摆动体设置在第二驱动单元的前端，摆动体可转动地安装在安装座上，第二驱动单元与摆动体连接。滑动底座的运动轨迹位于摆动体的下方；滚筒可转动地安装在滑动底座上；第一驱动单元及第二驱动单元分别与控制器电性连接。本发明实施例提供的PCR聚合酶链式反应多孔板封膜设备，可对PCR聚合酶链式反应多孔板的可靠封膜，并且自动化程度高，能够大幅提高医疗检测效率。

摘要： 本申请实施例提供了一种数字聚合酶链式反应芯片聚合酶链式反应芯片及其制备方法和数字聚合酶链式反应装置，以解决现有聚合酶链式反应芯片加工工艺复杂、操作复杂、容易产生气泡、以及使用起来工艺成本高的技术问题。该数字聚合酶链式反应芯片包括：第一功能层，所述第一功能层的表面构造为对聚合酶链式反应溶液具有排斥性；以及多个第二功能区域，分别设置在所述第一功能层的表面，构造为对所述聚合酶链式反应溶液具有亲和性。

摘要： 本实用新型公开了一种PCR聚合酶链式反应定量分析仪，包括分析机，所述分析机顶部开设有加热池，所述加热池顶部卡接设置有加热载板，所述加热载板底部固定连接有加热套管，所述加热池内壁开设有第一流道和第二流道，所述分析机背面固定连接有第一管接口和第二管接口，所述第一流道一端与第一管接口相连通，所述第二流道与第二管接口相连通。本实用新型通过在加热池一侧开设第一流道和第二流道，并结合第一管接口和第二管接口可将加热池与外接蒸汽发生器相连接，通过蒸汽发生器向加热池内注入蒸汽或冷却水，实现快速升温或降温，有利于提高仪器的检测分析效率，反应全程通过温度传感器对温度进行监测，方便对反应温度进行控制。

摘要： 本实用新型涉及生物医疗技术领域，具体公开了PCR聚合酶链式反应多孔板封膜装置，包括用于多孔板封膜的模板、安装在模板顶部的滚筒、连接在滚筒上的翻转体以及驱动翻转体的一号驱动部件；所述翻转体的块体处开设有凹槽，且安装有一个铰支螺母，所述铰支螺母的外侧活动连接有一号执行部件，所述一号执行部件的另一端与一号驱动部件的输出轴相连接；本实用新型通过设置的滚筒配合设置的翻转体，可以在组合使用的时候，能够在一号驱动部件的组合下，带动滚筒进行转动，从而满足使用上的需要，且在滚筒的转动下，能够以稳定的覆盖压力配合模板让封板膜可以更好的覆盖在上面。

摘要： 本实用新型公开了一种PCR聚合酶链式反应检测仪，包括检测仪主体，所述检测仪主体正面和背面均设有提拎机构，所述提拎机构包括转动轴，所述转动轴数量设为两个，两个所述转动轴分别设置于检测仪主体两侧，两个所述转动轴分别与检测仪主体两侧转动连接，两个所述转动轴一端均固定连接有伸缩杆，两个所述伸缩杆之间固定连接有提杆，所述检测仪主体正面和背面均开设有卡槽。本实用新型通过设置两个提拎机构能够保证仪器在提拎时保持稳定，避免仪器发生摇晃，有利于提高仪器的便携性，检测仪主体正面和背面均开设有卡槽，伸缩杆收缩后可将提杆收纳于卡槽内，一方面可减少对空间的占用，另一方面便于仪器的正常使用。