耐药质粒

摘要： 研究人员发现细菌交换DNA并产生耐药性的新细节。这些发现是理解细菌如何接合配对方面取得的关键进展,将使人们能够预测新出现的耐药质粒在高危细菌病原体中的传播。有害细菌对抗生素产生耐药性的主要途径之一,是从其他已经具有耐药性的细菌中获取DNA。这种DNA交换是通过一种称为“接合”的过程进行的,类似于细菌交配。在该过程中,两个细菌形成亲密的连接,其中一个将DNA包转移给另一个。

摘要： 目的通过全基因测序方法(NGS)分析印第安纳沙门氏菌耐药克隆的质粒结构特征并与肠杆菌科质粒BLAST分子溯源,通过质粒消除研究其耐药表型和基因型的变化,探索印第安纳沙门氏菌耐药克隆成因及起源。方法通过对2株(编号222、15)泛耐药印第安纳沙门菌全基因测序结果尤其是其质粒序列耐药I类整合子、耐药基因、移动元件的分析,并与NCBI中28株肠杆菌科菌的质粒BLAST比对溯源。对3株印第安纳沙门氏菌(编号15、38、222),1株肠炎沙门氏菌(编号17)、1株鼠伤寒沙门氏菌(编号32)、1株德尔卑沙门氏菌(编号163)进行高温-SDS质粒消除试验并比较质粒消除后菌株耐药表型及基因型的变化。结果全基因测序结果显示5株菌株拥有1个带有1个以上的耐药I类整合子及多个转座酶(Tns)和插入序列(ISs)等多种移动元件的结构相似、携带大量耐药基因且同源性大于99%的质粒(>210000 bp)。经质粒消除实验后菌株15、38对四环素、庆大霉素、环丙沙星、阿奇霉素、阿米卡星等抗生素恢复敏感,菌株222对头孢噻圬、庆大霉素、环丙沙星、萘啶酸、卡那霉素等抗生素恢复敏感。菌株15不再携带TEM-1、OXA-1、sul1、aacC4、dfrA17、floR、qnrB等7种耐药基因,菌株38不再携带TEM-1、OXA-1、CTX-M、sul1、aacC4、dfrA17、floR,菌株222不再携带TEM-1、OXA-1、sul1、aacC4、aac6-1b。BLAST溯源结果表明印第安纳携带的质粒与大肠杆菌质粒高度相似,同源性大于99%。结论印第安纳沙门氏菌拥有含耐药I类整合子、多种移动元件(Tns)、插入序列(ISs)及大量耐药基因的耐药质粒是印第安纳沙门氏菌泛耐药克隆形成的主要原因。该质粒可能是其进化过程中从大肠杆菌类菌中获得。

摘要： 2021年7月,上海交通大学医学院附属瑞金医院呼吸与危重症医学科瞿介明教授课题组在Genome Medicine发表题为“Mobilization of the nonconjugative virulence plasmid from hypervirulent Klebsiella pneumoniae”的研究成果,揭示了肺炎克雷伯菌非接合型毒力质粒转移的新机制,即接合型IncF质粒可以将非接合型毒力质粒从高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKP)诱导转移至ST11型碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)中。该研究表明:肺炎克雷伯菌的耐药质粒和毒力质粒之间存在转移互作;抗生素的不合理使用可能极大促进耐药与毒力这2种重要性状在病原细菌中的共同播散。

摘要： 随着抗菌药物在水产养殖中用量的增加及混合使用现象的出现,水产病原菌表现出更强的耐药性甚至是多重耐药性,大大增加了水产养殖中细菌性病害防治的难度.细菌耐药性最常见的传递方式是耐药质粒的转移.本研究通过对多个水产致病弧菌质粒上新霉素及卡那霉素的耐药基因aph(3′)-IIa进行检测分析,并利用电穿孔法将筛选得到的3个受试菌株上的质粒分别转入大肠杆菌中,结果从3个转化子中检测到目的基因.进一步的药敏测试结果显示,3个转化子的最小抑菌浓度(MIC值)以及最小杀菌浓度(MBC值)均明显上升.可见,在特定条件下,水生致病性弧菌对氨基糖苷类(新霉素和卡那霉素)的耐药质粒可转移至大肠杆菌并参与介导其耐药性,大大降低了受体菌对新霉素和卡那霉素的敏感性.本研究将为环境弧菌与临床细菌对氨基糖苷类药物的抗性传递研究提供数据基础和参考依据.

摘要： 沙门氏菌是一种重要的食源性病原菌,其耐药性普遍,对食品安全和人类健康造成巨大威胁.采用Illumina Miseq×10平台对一株食源性沙门氏菌进行高通量测序,利用SOAP de-novo2组装测序原始序列得到了完整的基因组序列,通过与6大数据库比对(EggNOG、GO、KEGG、NR、Pfam、Swiss-Prot),将得到的基因进行功能注释.采用ResFinder3.2软件筛查耐药基因,使用PlasmidFinder软件筛查质粒并绘制质粒基因图谱和结构图谱.结果表明,此株沙门氏菌携带了包括六大类抗生素中共计13种与耐药相关的基因,其中合成类(喹诺酮类)耐药基因数量最多.并且筛查到的质粒并不含耐药基因,说明该沙门氏菌的耐药基因都在染色体上,而不在可移动遗传元件上,属于固有耐药.

摘要： 沙门氏菌是一种重要的食源性病原菌,其耐药性普遍,对食品安全和人类健康造成巨大威胁。采用Illumina Miseq×10平台对一株食源性沙门氏菌进行高通量测序,利用SOAP denovo2组装测序原始序列得到了完整的基因组序列,通过与6大数据库比对(EggNOG、GO、KEGG、NR、Pfam、Swiss-Prot),将得到的基因进行功能注释。采用ResFinder3.2软件筛查耐药基因,使用PlasmidFinder软件筛查质粒并绘制质粒基因图谱和结构图谱。结果表明,此株沙门氏菌携带了包括六大类抗生素中共计13种与耐药相关的基因,其中合成类(喹诺酮类)耐药基因数量最多。并且筛查到的质粒并不含耐药基因,说明该沙门氏菌的耐药基因都在染色体上,而不在可移动遗传元件上,属于固有耐药。

摘要： 研究大肠埃希菌耐药性和耐药基因和十二烷基硫酸钠(SDS)对大肠埃希菌耐药质粒消除作用.以大肠埃希菌临床分离株为试验菌株,采用K-B药敏纸片法对6种抗菌药物进行药物敏感性检测,并对大肠埃希菌耐药质粒TEM1型耐药基因进行PCR检测,采用SDS消除大肠埃希菌临床分离菌株的耐药质粒,采用琼脂糖凝胶电泳检测质粒条带,药敏试验检测大肠埃希菌耐药质粒消除前后的药物敏感性.结果表明,大肠埃希菌对庆大霉素敏感,对大观霉素中敏,对氨苄西林、阿莫西林、头孢拉定、环丙沙星耐药;大肠埃希菌耐药质粒检测出TEM1型耐药基因;试验菌株经7.5 g/L的SDS处理至第3代时,质粒条带有明显的减少,TEM1型耐药基因消失,并且恢复了对β内酰胺类抗生素的敏感性,说明耐药质粒已经成功消除.

摘要： 常见的病原微生物多重耐药性的增加以及多重耐药菌株的出现,给动物养殖业造成了巨大的经济损失.细菌的耐药性与其自身携带的耐药质粒关系密切.论文从细菌耐药现状,细菌的耐药性和耐药质粒的关系,耐药质粒的物理、化学、中草药消除方法这几个方面进行综述,旨在寻求一种安全有效的消除方法消除耐药质粒,为今后相关的研究提供参考.

摘要： 耐药基因通常位于可移动元件上，携带耐药决定子的质粒是传播耐药性的重要途径，全基因组测序分析在耐药基因型确定和预测耐药表型中可能成为一种简单、快速和高效的方法，并且有较高的灵敏度和特异度。通过分析50株鸡白痢沙门菌的全基因组序列，获得一个新的耐药质粒pSPUR，目前在鸡白痢沙门菌中未见报道。该质粒仅存在于对氨苄西林的MIC值>512μg/mL的菌株(s9303，s9804，s98109，s09c6，s09c12，s09c13，s09c15)中。将s9804中的耐药质粒序列补充完整，其大小为42，895bp，用CGⅥew Server绘制质粒环状图，并利用NCBI Conserved Domain Search寻找该质粒的开放阅读框，进行功能注释。其上的耐药基因为bla TEM-1，含有IS1转座酶、IS240转座酶、Tn3转座酶和InsA转座酶四种转座酶。该质粒可能来源于以下两类质粒的重组，一类为：肠炎沙门菌pSE12-52质粒(GenBank：KT317614)、都柏林沙门菌pOU1114质粒(GenBank：DQ115387)、大肠杆菌pOLA52质粒(GenBank：EU370913)和志贺杆菌pLN12633质粒(GenBank：HE578058)，另一类为：都柏林沙门菌pMAK2质粒(GenBank：AB366441)、肺炎克雷伯氏菌pKPX-2质粒(GenBank：AP012056)、肠炎沙门菌pFORCT质粒(GenBank：CP009767)和大肠杆菌pAPEC-078-ColV质粒(GenBank：CP010316)，仍有一小部分来源未知。将s9804质粒电转化到大肠杆菌受体菌J53AzR中，与之相比，转化子J53(pSPUR)对氨苄西林的MIC值升高了512倍，对阿莫西林／克拉维酸和头孢唑啉也升高了256倍，而对其它药物影响不大。该质粒可不同程度升高对B-内酰胺类药物的MIC值。但该转化子J53(pSPUR)对p-内酰胺类药物的MIC值比供体菌s9804高得多，机制不明，需要进一步的研究。

摘要： 为探索大蒜和芦荟对耐药质粒的消除作用,本试验针对临床分离的一株多重耐药性嗜水气单胞菌,分别采用大蒜、芦荟及两者等比混合物,对该茵进行质粒消除.结果表明,单一的大蒜和芦荟对耐药质粒没有消除作用,而两者的等比混合物成功的将耐药质粒消除,且消除率达到90％.其中质粒消除不完全的细菌恢复了对呋喃唑酮、链霉素、诺氟沙星、恩诺沙星和利福平的敏感性;质粒完全消除的细菌恢复了对庆大霉素、复方新诺明、呋喃唑酮、强力霉素、妥布霉素、氨苄西林、阿莫西林、链霉素、磺胺甲噁唑、诺氟沙星、恩诺沙星、氯霉素、四环素和利福平的敏感性.由此可见,大蒜芦荟汁可作为一种耐药质粒消除剂,有效的抑制耐药质粒的扩散.

摘要： 本文旨在了解耐药质粒消除对大肠杆菌耐药性及其它生理特性的影响。将前期试验分离出8株质粒携带aac(6’)-Ib耐药基因的大肠杆菌，药敏试验表明对8种氨基糖苷类和喹诺酮类具有广泛的耐药性。本试验选取1株耐药性最强菌株用高温及SDS进行耐药质粒消除，PCR检测aac(6’)-Ib基因，结果显示耐药质粒成功消除，耐药性消失。且细菌在不舍抗生素条件下培养，耐药性消除状态可稳定遗传;但在含卡那霉索条件下连续传代，其耐药性可迅速恢复，第4代即可产生耐药性。体外生长曲线显示，耐药质粒消除株生长较快，且较早进入对数期。以上数据表明大肠杆菌多重耐药性主要由质粒决定，研究开发新型耐药质粒消除剂对克服大肠杆菌耐药性具有重要意义。

摘要： 目的：对大肠杆菌中新出现的耐药机制进行研究，进一步了解耐药的分子机理。方法：采用微量肉汤稀释法进行庆大霉素和阿米卡星最低抑菌浓度(MIC)的测定，并用普通PCR法检测16S甲基化酶基因。结果：介导高水平耐药的16S甲基化酶基因RmtB的检出率为11.6%(26/224)，只有一株大肠杆菌检测到armA基因，没有检测到rmtA，且三种甲基化酶基因在低度耐药菌中检出率均为0。结论：质粒主要介导氨基糖昔类药物的高浓度耐药。

摘要： 细菌耐药性问题日益严重,已经成为全球问题的焦点,在这种情况下,人们将注意力转向天然药物,本文综述了近年来国内外天然植物药物(包含中草药)对细菌耐药性作用方面的最新研究进展,并对其未来的前景进行展望.指出应该开展中草药对细菌耐药性作用的深入研究,从分子水平深入探讨我国优秀中草药的作用机制,是解决医学和兽医临床上日趋严重的细菌耐药性问题的一个新思路和新方法.

摘要： 细菌耐药性问题日益严重,已经成为全球问题的焦点,在这种情况下,人们将注意力转向天然药物,本文综述了近年来国内外天然植物药物(包含中草药)对细菌耐药性作用方面的最新研究进展,并对其未来的前景进行展望.指出应该开展中草药对细菌耐药性作用的深入研究,从分子水平深入探讨我国优秀中草药的作用机制,是解决医学和兽医临床上日趋严重的细菌耐药性问题的一个新思路和新方法.

摘要： 细菌耐药性问题日益严重,已经成为全球问题的焦点,在这种情况下,人们将注意力转向天然药物,本文综述了近年来国内外天然植物药物(包含中草药)对细菌耐药性作用方面的最新研究进展,并对其未来的前景进行展望.指出应该开展中草药对细菌耐药性作用的深入研究,从分子水平深入探讨我国优秀中草药的作用机制,是解决医学和兽医临床上日趋严重的细菌耐药性问题的一个新思路和新方法.

摘要： 细菌耐药性问题日益严重,已经成为全球问题的焦点,在这种情况下,人们将注意力转向天然药物,本文综述了近年来国内外天然植物药物(包含中草药)对细菌耐药性作用方面的最新研究进展,并对其未来的前景进行展望.指出应该开展中草药对细菌耐药性作用的深入研究,从分子水平深入探讨我国优秀中草药的作用机制,是解决医学和兽医临床上日趋严重的细菌耐药性问题的一个新思路和新方法.

摘要： 细菌耐药性问题日益严重,已经成为全球问题的焦点,在这种情况下,人们将注意力转向天然药物,本文综述了近年来国内外天然植物药物(包含中草药)对细菌耐药性作用方面的最新研究进展,并对其未来的前景进行展望.指出应该开展中草药对细菌耐药性作用的深入研究,从分子水平深入探讨我国优秀中草药的作用机制,是解决医学和兽医临床上日趋严重的细菌耐药性问题的一个新思路和新方法.

摘要： 细菌耐药性问题日益严重,已经成为全球问题的焦点,在这种情况下,人们将注意力转向天然药物,本文综述了近年来国内外天然植物药物(包含中草药)对细菌耐药性作用方面的最新研究进展,并对其未来的前景进行展望.指出应该开展中草药对细菌耐药性作用的深入研究,从分子水平深入探讨我国优秀中草药的作用机制,是解决医学和兽医临床上日趋严重的细菌耐药性问题的一个新思路和新方法.

摘要： 本发明属于微生物耐药性研究技术领域，具体提供一种抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶(DNAzyme)，所述脱氧核酶为DNA片段Dz136或Dz341，Dz136的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，Dz341的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还进一步提供了所述脱氧核酶在抑制细菌耐药性以及制备抑制qnrD基因阳性细菌耐药性的试剂中的应用。本发明开创性的利用DNAzyme抑制质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的表达，通过新设计的脱氧核酶Dz136或Dz341，在喹诺酮类抗生素条件下，能够显著抑制细菌菌株的生长速度，Dz341导入后菌株生长速度变缓慢，进入对数生长期的时间延长了4.5小时。

摘要： 本发明共公开了一种基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法。该自杀型质粒的构建包括如下步骤：以pCat‑marinerr质粒为模板进行PCR扩增，将获得的扩增产物作为质粒骨架；然后以pUC57‑tpm质粒为模板扩增tpm抗性基因，再将质粒骨架和tpm抗性基因进行同源重组，得到所述自杀型质粒。本发明中的耐药突变菌株是将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，然后将获得菌株和目标菌株混合培养，再用含有亚碲酸盐的单药板、以及含有亚碲酸盐和原抗性筛选标记药物的双药板进行筛选，得到耐药突变菌株。本发明方法操作简单，可高通量的获得转座突变株，适用于构建耐药菌株或筛选药物。

摘要： 本发明公开了一种gRNA序列，所述序列在CRISPR‑Cas9系统中能够以细菌中的耐药性质粒特定位点为靶序列进行DNA序列的编辑，所述gRNA序列如SEQ ID NO:1和/或2所示。本发明还公开了所述gRNA序列的CRISPR‑Cas9系统，以及所述CRISPR‑Cas9系统在制备治疗耐药性细菌感染药物中的应用。本发明提供的CRISPR‑Cas9系统能够靶向NDM‑1和MCR‑1两种超级耐药基因，使所述两种耐药基因能够同时被消除，保证了碳青酶烯类和粘菌素类抗生素的使用效果。

摘要： 本发明共公开了一种基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法。该自杀型质粒的构建包括如下步骤：以pCat‑marinerr质粒为模板进行PCR扩增，将获得的扩增产物作为质粒骨架；然后以pUC57‑tpm质粒为模板扩增tpm抗性基因，再将质粒骨架和tpm抗性基因进行同源重组，得到所述自杀型质粒。本发明中的耐药突变菌株是将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，然后将获得菌株和目标菌株混合培养，再用含有亚碲酸盐的单药板、以及含有亚碲酸盐和原抗性筛选标记药物的双药板进行筛选，得到耐药突变菌株。本发明方法操作简单，可高通量的获得转座突变株，适用于构建耐药菌株或筛选药物。

摘要： 本发明属于微生物耐药性研究技术领域，具体提供一种具有抑制细菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的脱氧核酶(DNAzyme)，所述脱氧核酶包含DNA片段Dz136和/或Dz341，Dz136的DNA序列如SEQ ID NO:1所示，Dz341的DNA序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还进一步提供了所述脱氧核酶在抑制细菌耐药性以及制备抑制细菌耐药性的产品中的应用。本发明开创性的利用DNAzyme抑制质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrD的表达，通过新设计的脱氧核酶Dz136和Dz341，在抗生素条件下，能够显著抑制细菌菌株的生长速度，Dz341导入后菌株生长速度变缓慢，进入对数生长期的时间延长了4.5小时。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种靶向削减替加环素耐药基因tetX及其耐药质粒的gRNA、可转移型敲除载体及其应用。本发明提供靶向敲除替加环素耐药基因tetX及携带tetX多重耐药质粒的gRNA序列，该序列如下所示：gRNAtetX‑1：5’‑CCTACACAAAGGTTCAGGTC‑3’gRNAtetX‑2：5’‑CGGCTAATGGCTGCTCATCA‑3’本发明通过序列分析及实验验证，提供了靶向耐药基因tetX及携带tetX多重耐药质粒的gRNA，该gRNA能引导Cas9蛋白靶向敲除tetX基因的相应位点。

摘要： 一种靶向削减耐药基因blaTEM及其耐药质粒的gRNA、可转移型敲除载体及其应用，本发明涉及生物技术领域，具体涉及靶向blaTEM耐药基因及其耐药质粒的gRNA、一种可水平转移的基因敲除载体及其在blaTEM耐药质粒削减方面的应用。本发明提供的gRNATEM‑1、gRNATEM‑2及其敲除载体pCas9‑Mob‑gRNATEM‑1和pCas9‑Mob‑gRNATEM‑2可以有效削减耐药基因blaTEM及携带blaTEM的多重耐药质粒。同时，利用本发明提供的敲除载体pCas9‑Mob‑gRNATEM‑1和pCas9‑Mob‑gRNATEM‑2制备方法较易得到靶向抗生素耐药基因blaTEM的敲除载体，也为其他耐药基因的敲除及削减研究提供了有效方法和基础。

摘要： 本发明属于生物材料技术领域，具体公开了一种抑制耐药质粒水平转移的复合材料及其制备方法和应用。本发明提供了一种抑制耐药质粒水平转移的复合材料，其可以作为耐药质粒接合抑制剂，所述复合材料制备步骤如下：S1.将蓖麻油和异佛尔酮二异氰酸酯搅拌混合，依次加入哌嗪、催化剂搅拌反应，再添加N‑甲基二乙醇胺，反应至溶液难以流动时添加丁酮，反应后冷却，中和；S2.向步骤S1所得反应体系中加入亚油酸，加水乳化，搅拌后提纯得到所述复合材料。所述复合材料具有pH响应特性，能够靶向动物结肠、盲肠给药，可显著抑制耐药质粒在肠道内细菌之间发生接合转移；可作为新型有效质粒抑制剂，为质粒介导的耐药基因水平传播防控提供了新方法。

摘要： 本发明公开了一种利用携带luxCDABE基因簇的受体菌检测多重耐药质粒水平转移能力的方法，包括融合载体构建、整合载体构建、荧光受体菌构建、供体菌和受体菌的接合、接合子的筛选、耐药性和发光性的检测及验证等步骤。本发明结合受体菌的荧光性和多重耐药质粒的耐药性，可以区分供体菌、受体菌和接合子，从而检测多重耐药质粒水平转移的能力。

摘要： 本发明公开了一种清除肠杆菌科细菌中耐药质粒的方法，包括以下步骤：耐药基因信息挖掘：通过NCBI检索并下载genbank中的所有blaKPC和blaNDM基因序列，利用blast对各基因序列分别进行比对，以紧临PAM基序的20个碱基的共有序列作为耐药基因清除的靶点。本发明所述的一种清除肠杆菌科细菌中耐药质粒的方法，公开了耐药质粒的靶向序列，该序列能够引导Cas9酶切蛋白，对含有互补序列的耐药基因进行酶切，其次能够定向且高效的清除对碳青酶烯类抗生素耐药的肠杆菌细菌(CRE)所携带的kpC基因、NDM基因和携带质粒，为耐药质粒功能研究提供模式菌株，并为CRE的防治提供新的思路，带来更好的使用前景。