摘要:
目的研究缺血性中风瘀毒互结模型(简称“IS-YD”)大鼠在不同缺血时相、不同脑区凝血酶(Thrombin)与微管相关蛋白1轻链3(light chain 3,LC3)的动态性变化及二者的相关性。方法将128只SD雄性大鼠随机分为假手术组、IS-YD(2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h)组,每组16只。分别于术后2、4、8、12、24、48、72 h取材前进行神经功能缺损评分,随即处死大鼠取出脑组织并分出大脑皮质与海马,2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色观察并计算每组大鼠的脑梗死体积,Western blot法检测大脑皮质与海马的Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ比值的表达。结果与假手术组相比,IS-YD 12 h、24 h、48 h组神经功能缺损评分升高(P<0.05)。与假手术组及IS-YD 2 h、4 h组相比,IS-YD 8 h、12 h、24 h、48 h、72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01);与IS-YD 8 h组相比,IS-YD 12 h、24 h、48 h、72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01);与IS-YD 12 h组相比,IS-YD 48 h、72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01);与IS-YD24 h组相比,IS-YD 48 h、72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01);与IS-YD 48 h组相比,IS-YD 72 h组脑梗死体积显著增大(P<0.01)。与假手术组相比,IS-YD 12 h、24 h组皮质和海马Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增强(P<0.05);与IS-YD 2 h、4 h组相比,ISYD 12 h、24 h组皮质和海马Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增强(P<0.05);与IS-YD 8 h组相比,IS-YD 12 h、24 h组皮质LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增强(P<0.01);与IS-YD 12 h组相比,IS-YD 48 h、72 h组皮质Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低(P<0.05),海马LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低(P<0.05);与IS-YD 24 h组相比,IS-YD 48 h、72 h组皮质和海马Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低(P<0.05)。两种蛋白呈现直线相关性,且皮质Thrombin与LC3Ⅱ/Ⅰ的密切程度为56.7%,海马Thrombin、LC3Ⅱ/Ⅰ的密切程度为53.3%。结论脑损伤后Thrombin与自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ在7个不同缺血时间点动态表达规律相似,并且具有高度相关性,同时明确了自噬变化最明显的两个时间点,也为进一步研究治疗脑梗死筛选了最佳药物反应时间点。