结合疫苗

摘要： 2020年,对于黄镇和他的沃森生物技术有限公司来说,会是一个值得纪念的年份。随着13价肺炎结合疫苗上市,黄镇向着“让中国儿童用上西方发达国家同品质的国产疫苗”的誓言,又迈进了一步。疫苗的研发与生产,从来都彰显着一个国家生命安全的重量。作为一名生物科技工作者,黄镇在云南创建了全省第一个、也是至今唯一的细菌性结合疫苗创新技术平台。

摘要： 首款治疗脑瘤的溶瘤病毒疗法在日本获批。近期,美国食品药品监督管理局(FDA)通过加速批准途径批准了Aduhelm(aducanumab)用于治疗阿尔茨海默病(AD)患者。龙沙与Moderna宣布扩大合作,在荷兰生产Moderna新冠疫苗原液。辉瑞肺炎球菌20价结合疫苗获美国FDA批准。西门子助力实现过程工业的数字化转型。

摘要： 目的 研制新型非天然氨基酸标记的HiD-Hin47融合载体蛋白.方法 选择融合蛋白氨基酸序列中合适位置的20个氨基酸位点,利用非天然氨基酸标记技术将原有氨基酸位置插入一种含叠氮基的非天然氨基酸N6-(2-叠氮乙氧羰基)-L-赖氨酸(NAEK),对不同位点插入NAEK的融合蛋白进行表达和纯化,纯化后产物经SDS-PAGE分析,观察各位点融合蛋白产量,最终E677位点表达稳定性更高,均能达到野生型的70％,选择E677位点表达的融合蛋白与3型和6B型肺炎球菌多糖发生click反应完成偶联,所得结合物纯化后进行动物实验和免疫学检测,并与CRM197、破伤风类毒素(TT)、HiD以常规结合方式与3型和6B型肺炎球菌多糖结合产物进行对比.结果 以HiD-Hin47为载体蛋白的3型肺炎球菌多糖结合物的免疫原性稍优于与其余3组结合物,但差异无统计学意义;以HiD-Hin47为载体蛋白的6B型肺炎球菌多糖结合物的免疫原性显著优于以TT、HiD为载体的结合物,与以CRM197为载体结合物的免疫原性差异无统计学意义.结论 NAEK标记的HiD-Hin47具有作为肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗载体蛋白的潜力,值得进行进一步研究.

摘要： 目的:评价以白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白为载体的b型流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗原液及成品在不同储存条件下主要质量指标的变化,为该疫苗保存条件及有效期制定提供依据.方法:将b型流感嗜血杆菌结合物原液分别于2～8°C放置3,6,12个月,20～ 25°C放置4,8周,37°C放置2,4,6周后,进行多糖含量、游离多糖含量、蛋白含量、糖/蛋白比值、游离蛋白百分比、pH值、细菌内毒素检查、分子量等主要质量指标检测,结合疫苗成品分别于2～8°C放置6,12,18,24,30,36个月,20～ 25°C放置6,12个月,37°C放置1,3,6,9个月后,进行多糖含量、游离多糖含量、蛋白含量、糖/蛋白比值、游离蛋白百分比、pH值、细菌内毒素检查、分子量主要质量指标的检测.结果:b型流感嗜血杆菌结合物原液2～8°C放置12个月,20 ～ 25°C放置8周,37 °C放置6周后,各项质量指标均符合规定;疫苗成品2～8°C放置36个月,20 ～ 25°C放置12个月,37°C放置6个月后,各项质量指标均符合规定.结论:以白喉类毒素无毒突变体CRM197蛋白为载体的b型流感嗜血杆菌结合疫苗原液及成品具有良好的稳定性.

摘要： Objective:To establish a conjugated method for group W135 meningococcal polysaccharide conjugate with CRM197.Methods:Polysaccharides were oxidized by sodium periodate oxidation and subsequent analysized by ion chromatography(IC),to define oxidation degree by the measurement of aldehyde and polysaccharides.NIH mice were immunized with the conjugate vaccine carrying polysaccharides with different oxidation degree,and antibody titers against MW135 polysaccharide were analyzed with indirect ELISA.Results:Administration unoxidize sample did not induce any antibodies in mice.However,the MW135-CRM197 glyconjugate induced high titer antibodies in which the polysaccharide was oxidized by the best concentration of sodium periodate of 0.4 and 1 g·L-1.Conclusion:The results showed that conjugate vaccine prepared under the conditions retained intact antigenicity.It was applicable to prepare MW135 conjugate vaccine by the process conditions.%目的:建立一种W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(MW135)与CRM197蛋白结合的方法.方法:使用高碘酸钠对MW135进行氧化,离子色谱(IC)方法检测其氧化位点,通过对醛基和多糖含量的测定来计算其氧化度,将不同氧化度的多糖与CRM197进行结合,免疫NIH小鼠并用间接ELISA法测定小鼠血清中针对MW135多糖的抗体滴度.结果:MW135多糖无法在小鼠体内产生抗体,高碘酸钠(0.4和1g·L-1)氧化后的结合产物能诱导出高水平血清抗MW135抗体.结论:本实验条件下制备的结合疫苗保留了完整的抗原性,以该工艺制备MW135多糖蛋白结合疫苗是可行的.

摘要： 目的 利用肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)为蛋白载体研制b型流感嗜血杆菌(Hib)多糖与蛋白的结合疫苗,并研究其在幼龄大鼠体内的免疫原性以及对肺炎球菌导致的急性中耳炎(AOM)的免疫保护作用.方法 运用酰胺缩合法将PsaA与Hib荚膜多糖偶联结合制备多糖蛋白结合疫苗.选取30只约3周龄无特定病原体(SPF)雌性SD大鼠,体重88 ～ 102 g,随机分成实验组和对照组,每组15只.对幼龄SD大鼠进行疫苗接种,实验组接种Hib-PsaA疫苗,对照组接种磷酸盐缓冲液(PBS).每2周接种1次,3次接种后检测动物血清相关抗体免疫球蛋白G(IgG)水平.然后对实验组及对照组大鼠分别以肺炎球菌经鼓膜穿刺注入中耳以诱发AOM,观察2组大鼠发生AOM的炎症反应情况.结果 运用酰胺缩合法将PsaA与Hib多糖偶联结合,结合物的洗脱峰明显前移,表明细菌多糖与载体蛋白结合成功.接种该结合疫苗的实验组幼龄大鼠产生的抗PsaA抗体IgG的几何平均滴度(GMT)为11 138,抗Hib抗体IgG的GMT为7 017,而对照组抗PsaA抗体IgG的GMT与抗Hib抗体IgG的GMT分别为729和348.实验组2种抗体IgG均明显高于对照组(P＜0.001).肺炎球菌攻击后组织病理学检查发现,实验组大鼠在细菌攻击后第3天和第7天中耳炎症反应明显轻于对照组,显示Hib-PsaA结合疫苗对肺炎球菌诱发的大鼠AOM有免疫保护作用.结论 运用酰胺缩合法可成功将PsaA蛋白与Hib多糖偶联结合,所制备的多糖蛋白结合疫苗在幼龄大鼠体内可诱导分别针对PsaA和Hib多糖的有效免疫应答反应,并且可有效预防肺炎球菌导致的大鼠AOM.

摘要： 目的:研制5型肺炎链球菌荚膜多糖(PN5PS)与白喉无毒突变体(CRM197)结合疫苗.方法:采用还原胺化法制备结合物,即以肺炎5型多糖的邻位羟基作为活化位点,用高碘酸钠进行氧化,形成的醛基与CRM197蛋白上的氨基生成席夫碱反应,在氰基硼氢化钠的作用下形成共价结合物,并将制备的结合物与两种不同铝佐剂吸附,用间接ELISA法检测大鼠血清中针对肺炎5型多糖的抗体效价,比较结合疫苗与不同佐剂吸附前后的免疫原性.结果:当多糖活化度为7.3时,总糖及蛋白的回收率较高,游离糖含量较低,糖蛋白结合比在1.2～2.7时结合疫苗具有较强的免疫原性,结合比为1.9时结合疫苗的免疫原性最强;结合物吸附磷酸铝佐剂后所产生的抗体水平略高于氢氧化铝.结论:通过还原胺化法制备的PN5PS-CRM197结合疫苗具有较好的免疫原性.

摘要： 孩子预防接种的疫苗可以溯源吗?家长通过什么途径可以获知相关信息?A目前,预防接种的疫苗可以通过查询疫苗的批号实现溯源。每种疫苗均有生产企业名称、生产日期、批号等信息,疫苗从生产企业直至配送到预防接种单位,各过程都会记录详细的相关信息,因此,根据疫苗种类、生产日期、批号,结合疫苗的采购与储运信息,可以追踪到疫苗的存放地点、是否已使用、库存数量等信息,家长可以通过预防接种证登记的疫苗批号,获知所接种的同一批号疫苗的相关信息。

摘要： 目的 评价伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液的稳定性,为该疫苗原液的制备、储存提供有力的数据支持.方法 选取3批伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液分别放置于(37±2)°C、(25±2)°C和2～8°C温度下,根据稳定性研究方案定期取样,对其主要评价指标(多糖含量、结合物含量、相对分子质量、鉴别试验)进行检测,评估疫苗原液的稳定性.结果 伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液于2～8°C放置22个月,(25±2)°C放置52 w,(37±2)°C放置24 w时,各项主要评价指标均符合其质量标准的要求.结论 伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液稳定性良好,在2～8°C可稳定存放22个月.

摘要： 目的 在b型流感嗜血杆菌结合疫苗生产过程中有效监控1-氰基-4-二甲基氨基-吡啶四氟化硼(CDAP)的残留量.方法 在已有针对流脑多糖衍生物的基于强阳离子交换层析检测法的基础上进行改进.结果 该法具有良好的专属性、准确度、精密度,最低检出限为6μg/L,且在20 ～ 100μg/L的范围内线性良好.结论 建立了一种针对b型流感嗜血杆菌多糖衍生物中CDAP的检测方法.

摘要： 病原菌的O多糖(OPS)、荚膜多糖(CPS)往往是其重要的保护性抗原,以细菌多糖为保护性抗原的疫苗一直是细菌疫苗研发的重点之一.目前,已有一批多糖疫苗上市多年,但多糖疫苗的免疫记忆性和免疫原性较弱,特别是在2岁以下儿童和老年人体内尤为突出.如今,这类疫苗的研发重点已转向多糖-蛋白结合疫苗,其中7价肺炎结合疫苗、4价脑膜炎结合疫苗、b型流感嗜血杆菌结合疫苗已经上市,且一批多糖-蛋白结合疫苗正处于不同的研发阶段.目前，G1ycoUaxyn AG公司开发出了基于空肠弯曲弧菌N一糖基化修饰系统的生物交联技术，制备了基于痢疾杆菌O多糖和金黄色葡萄球菌荚膜多糖的结合疫苗，并分别进入临床前研究和一期临床研究。

摘要： 目的：比较两种b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗的免疫原性。方法：本研究选取一批国产和一批进口Hib结合疫苗，按照开放、随机、双盲的原则。选择1970名2月龄～5岁的健康婴幼儿为观察对象，按年龄分层为2～5月龄750人，6～11月龄620人，1～5岁600人。两种疫苗按1：1比例进行随机分配，2～5月龄婴儿于0、1、2月，6～11月龄婴幼儿于0、1月，1～5岁幼儿于0月免疫程序分别接种1剂疫苗。各组于首剂免疫前和末次免疫后1个月采集静脉血，分离血清，采用ELISA法检测血清多聚核糖基核糖醇(PRP)抗体。结果：免疫国产Hib结合疫苗后各年龄段婴幼儿血清PRP抗体浓度均达到1.0μg／ml以上，保护率为100％;而免疫进口疫苗后，各年龄段均有血清PRP抗体浓度<0.15μg／ml的婴幼儿，总保护率为99.3％。但是，免疫后国产疫苗组血清PRP抗体几何平均浓度(GMC)普遍低于进口疫苗，小于6月龄组分别为14.136和18.135,6月龄至小于1岁组分别为21.457和25.728，1～5岁组分别为31.095和38.119。结论：不同Hib结合疫苗免疫后的血清抗体水平分布虽然相似，但抗体GMC存在一定差异，应关注其抗体亲和力，跟踪其免疫持久性。

摘要： 目的:研制b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗并考察其稳定性。rn 方法:用溴化氰活化提纯Hib荚膜多糖抗原，通过己二酰肼(ADH)与破伤风类毒素(TT)蛋白共价结合，制备b型流感嗜血杆菌结合物，并考察放置在2～8°C及室温9个月和37°C3个月后的稳定性。rn 结果:用本工艺提取的多糖，合成的多糖衍生物，多糖蛋白结合物的化学组成及结构特性均达到了国外同类产品的质控要求。结合物在2～8°C及室温放置9个月后基本无降解。rn 结论:为临床评价Hib结合疫苗的安全性和保护效果及确定效期提供了实验基础。

摘要： 目的：利用基因工程技术在大肠杆菌中对CRM197进行克隆表达，探索是否可以得到能够产生重组CRM197的大肠杆菌重组菌株，对重组蛋白进行纯化，并考察重组CRM197作为蛋白载体是否具有可行性，增加我国结合疫苗的载体类型。rn 方法: 提取白喉棒状杆菌C7/β197株基因组DNA为模板，运用PCR技术扩增crml97基因。构建PCR 2.1-TOPO/crm197重组克隆质粒，双酶切鉴定后，筛选阳性克隆进行基因测序分析，然后将序列正确的crm197基因克隆人表达载体pET28a中，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，用IPTC诱导表达，采用金属镍离子亲和层析纯化重组目的蛋白，免疫印迹法对重组CRM197进行鉴定。重组CRM197的初步应用：用溴化氰活化A群脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)，以ADH作为连接剂，以重组CRM197为蛋白载体，在EDAC的作用下制备GAMP-rCRM197结合物；结合物经凝胶过滤层析纯化，产物进行理化性质检测。然后将 GAMP、GAMP+rCRM197混合物和GAMP-rCRM197结合物分别经皮下免疫接种Balb/c小鼠(18～20g)，免疫剂量为2.5μg多糖/只。间接ELISA法测定血清中A群脑膜炎球菌多糖特异的IgG抗体，对结合物的免疫原性进行初步分析。rn 结果: 重组CRM197在大肠杆菌BL21(DE3)中主要以包涵体形式表达，表达量占全菌体蛋白的25％左右，经纯化后重组CRM197纯度达到95％以上，免疫印迹法证明重组CRM197具有良好的抗原性；将重组CRM197与A群脑膜炎球菌多糖偶联制备了GAMP-rCRM197结合物，对结合物的免疫原性进行了初步分析，结果证明结合物中的多糖具有良好的免疫原性，重复接种产生了免疫增强效应，初步说明重组CRM197起到了载体蛋白的作用。rn 结论: 本课题初步达到了研究目的，说明以重组CRM197作为蛋白载体具有可行性，为以重组CRM197为蛋白载体制备其他结合疫苗，奠定了实验基础。

摘要： 疫苗是预防和控制脑膜炎球菌感染的有效途径,本文对A群脑膜炎球菌结合疫苗的临床安全性和免疫原性研究进行回顾综述。

摘要： 目的:通过三种不同载体(TT、DT、rEPA)与C群脑膜炎球菌荚膜多糖(GCMP)结合,经免疫小鼠后比较三种结合疫苗的免疫原性. 方法:将C群脑膜炎球菌荚膜多糖以ADH作为间隔剂分别与TT、DT和rEPA等3种蛋白质载体结合形成GCMP-蛋白质结合疫苗,以C群脑膜炎球菌荚膜多糖和3种结合疫苗免疫NIH小鼠以研究在其体内的免疫原性. 结果:C群脑膜炎球菌荚膜多糖和结合疫苗免疫NIH小鼠后,其血清ELISA结果显示多糖疫苗和结合疫苗均可诱生免疫应答,但使用GCMP免疫小鼠后仅能产生较低水平抗GCMP的IgG抗体,而用3种GCMP-蛋白质结合疫苗免疫后小鼠血清中产生了较GCMP免疫显著增高的抗GCMP的IgG抗体,并且3种GCMP-蛋白质结合疫苗组第二次和第三次免疫后与初次免疫相比,IgG抗体水平均有显著升高(P＜0.001),表明GCMP-蛋白质结合疫苗具有免疫记忆和再次免疫加强应答效应,且三种GCMP-蛋白质结合疫苗在小鼠体内产生的抗GCMP水平有显著性差异(P＜0.01).补体介导的血清抗体体外杀菌试验结果证明,3种GCMP-蛋白质结合疫苗组免疫小鼠诱导的IgG抗体均比GCMP组具有增强的体外杀菌活性. 结论:经三种不同载体与C群脑膜炎球菌荚膜多糖结合后免疫小鼠均产生了比GCMP显著增高的免疫应答.比较研究表明,rEPA是实验中GCMP-蛋白质结合疫苗较好的选用载体.

摘要： 本文概述了细菌多糖及其免疫学的基本特性、细菌性结合疫苗的类型；介绍了国外结合疫苗研究现状与兰州所结合疫苗研究进展。

摘要： 分别提取金葡菌的荚膜多糖和链球菌的G蛋白，通过碳二亚胺将二者偶合制成一种偶联苗，希望获得一种对金葡菌和链球菌皆有预防效果的疫苗。用此偶合苗免疫小鼠，采血分离血清，通过ELISA检测小鼠血清中抗荚膜多糖抗体水平及抗链球菌G蛋白抗体水平，并用豚鼠血清补体介导进行体外杀菌实验，结果显示该偶合疫苗免疫小鼠后小鼠血清中能同时检测到抗金葡菌荚膜多糖和链球菌G蛋白抗体，比单独用多糖和蛋白免疫小鼠产生了较强的抗体效价水平，而且产生的抗体有较强的体外杀菌活性。

摘要： 目的：肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)表面蛋白C3-BP免疫学效果初步研究。rn 方法：通过离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等方法从9V型肺炎链球菌培养液上清中提取C3-BP，用SDS-PAGE检测其纯度，用Western blotting检测其补体C3结合活性，用ELISA法测定小鼠血清IgG抗体，用MTT法测定小鼠脾淋巴细胞增值情况，活菌攻击检测其交叉保护效果。rn 结果: 获得了较纯的表面蛋白C3-BP，其分子量约为90kD，单链蛋白；免疫小鼠后，抗体滴度显著升高；小鼠细胞免疫实验表明有较好的细胞免疫活性。rn 结论: 摸索出了一种提取肺炎链球菌表面蛋白C3-BP的方法；C3-BP具有不依赖血清型的交叉保护作用。

摘要： 目的：肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)表面蛋白C3-BP免疫学效果初步研究。rn 方法：通过离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等方法从9V型肺炎链球菌培养液上清中提取C3-BP，用SDS-PAGE检测其纯度，用Western blotting检测其补体C3结合活性，用ELISA法测定小鼠血清IgG抗体，用MTT法测定小鼠脾淋巴细胞增值情况，活菌攻击检测其交叉保护效果。rn 结果: 获得了较纯的表面蛋白C3-BP，其分子量约为90kD，单链蛋白；免疫小鼠后，抗体滴度显著升高；小鼠细胞免疫实验表明有较好的细胞免疫活性。rn 结论: 摸索出了一种提取肺炎链球菌表面蛋白C3-BP的方法；C3-BP具有不依赖血清型的交叉保护作用。

摘要： 本发明涉及生物医药技术与疫苗技术领域，尤其涉及一种表面覆盖Fc亲和蛋白的铝纳米晶递送系统及自组装颗粒佐剂疫苗的制备方法。其中铝纳米晶作为载体，在铝纳米晶表面覆盖有Fc亲和蛋白分子层与抗原分子，由重组Fc Tag的抗原通过与Fc亲和蛋白特异性结合，实现抗原自组装，形成类病毒颗粒疫苗，提升抗原密度。该疫苗对接种部位刺激小，安全性高，能够通过诱导体液及细胞免疫，产生高滴度的特异性抗体，是一种高效、便捷的自组装颗粒疫苗制备方法。

摘要： 本发明提供了例如用于疟疾疫苗的根据SEQ ID NO:1的疟原虫环子孢子蛋白的片段。本发明还提供了编码根据SEQ ID NO:1的疟原虫环子孢子蛋白的片段的核酸、包含根据SEQ ID NO:1的疟原虫环子孢子蛋白的片段的组合物和结合根据SEQ ID NO:1的疟原虫环子孢子蛋白的片段的抗体。根据本发明的抗体特异性结合恶性疟原虫子孢子并且可用于治疗和/或预防疟疾。

摘要： 本公开内容涉及用于在对象中诱导免疫应答的方法和组合物，其包括向所述对象提供肽或蛋白质疫苗以及与PD‑L1和CD137(例如人PD‑L1和人CD137)结合的结合剂(例如双特异性抗体)，其例如通过以下手段来进行：向所述对象共同施用用于疫苗接种的肽或蛋白质或者编码用于疫苗接种的肽或蛋白质的多核苷酸特别是RNA，以及与PD‑L1和CD137结合的结合剂或者编码与PD‑L1和CD137结合的结合剂的多核苷酸(特别是RNA)。本公开内容还涉及可用于本文中公开的方法中的药物制剂。

摘要： 本发明涉及一种由乙型脑炎病毒疫苗和脑膜炎球菌结合疫苗制备的联合疫苗及其制备方法。将乙型脑炎病毒经过细胞培养、收获、灭活、超滤浓缩、纯化获得的乙型脑炎病毒原液，再与纯化的A群脑膜炎球菌多糖和C群脑膜炎球菌多糖分别与B群脑膜炎球菌外膜蛋白进行化学偶联而形成的结合物原液，配制成一种乙型脑炎和脑膜炎联合疫苗。这种联合疫苗可以分别预防婴幼儿、儿童、青少年及成人因乙型脑炎病毒和A、B、C群脑膜炎球菌感染引起的脑炎和脑膜炎及败血症疾病。

摘要： 本发明公开了一种多糖蛋白结合疫苗中多糖蛋白结合位点结合率的测定方法：(1)标准品的酶解；(2)固相萃取富集目标肽段；(3)高效液相色谱串联质谱分析；(4)绘制标准曲线，得标准工作曲线方程；(5)样品检测，计算得到样品中各特征肽段的浓度；(6)计算各特征肽段的多糖结合率、各位点蛋白残留率。本发明实现了多糖蛋白结合疫苗多糖蛋白结合率的多位点定量监测，其中破伤风蛋白涉及20个监测位点，CRM197涉及16个监测位点。本发明不仅可以检测残留蛋白含量，还可以评价多糖蛋白结合疫苗多糖蛋白结合位点的结合率，也可用于多糖或蛋白残余率相同但活性和毒性不同的多糖蛋白结合疫苗的研究，可为改进多糖蛋白结合工艺提供直接的监测方法。

摘要： 本发明公开了一种测定Hib结合疫苗中高分子结合物含量的方法，它通过脱氧胆酸钠在酸性条件下形成胶团并吸附沉淀蛋白质的特性，使结合态多糖与游离态多糖分离，再通过50%乙醇水溶液溶解出低分子结合物，以实现对高分子结合物的分离测定。

摘要： 本发明涉及一种由乙型脑炎病毒疫苗和脑膜炎球菌结合疫苗制备的联合疫苗及其制备方法。将乙型脑炎病毒经过细胞培养、收获、灭活、超滤浓缩、纯化获得的乙型脑炎病毒原液，再与纯化的A群脑膜炎球菌多糖和C群脑膜炎球菌多糖分别与B群脑膜炎球菌外膜蛋白进行化学偶联而形成的结合物原液，配制成一种乙型脑炎和脑膜炎联合疫苗。这种联合疫苗可以分别预防婴幼儿、儿童、青少年及成人因乙型脑炎病毒和A、B、C群脑膜炎球菌感染引起的脑炎和脑膜炎及败血症疾病。

摘要： 本发明公开了一种多糖蛋白结合疫苗中多糖蛋白结合位点结合率的测定方法：(1)标准品的酶解；(2)固相萃取富集目标肽段；(3)高效液相色谱串联质谱分析；(4)绘制标准曲线，得标准工作曲线方程；(5)样品检测，计算得到样品中各特征肽段的浓度；(6)计算各特征肽段的多糖结合率、各位点蛋白残留率。本发明实现了多糖蛋白结合疫苗多糖蛋白结合率的多位点定量监测，其中破伤风蛋白涉及20个监测位点，CRM197涉及16个监测位点。本发明不仅可以检测残留蛋白含量，还可以评价多糖蛋白结合疫苗多糖蛋白结合位点的结合率，也可用于多糖或蛋白残余率相同但活性和毒性不同的多糖蛋白结合疫苗的研究，可为改进多糖蛋白结合工艺提供直接的监测方法。

摘要： 本文提供了工程改造的无催化性无毒性破伤风毒素变体，以低剂量使用所述破伤风毒素变体的方法，和保护性疫苗，其无毒性且比其对应的化学灭活的类毒素而言效力更高。另外，本文提供了结合疫苗运载体，其包含工程改造的破伤风毒素变体，以及用这些结合疫苗引发T细胞依赖性免疫记忆应答的方法，其能作为单一疫苗靶向广谱的微生物病原体。

摘要： 本发明公开了一种肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，包括以下步骤：对供试品进行处理，得到目标样A；对酶标板进行包被以及封闭处理；将稀释后的供试品以及目标样A分别加入到被包被以及封闭处理的酶标板中，得到供试品测试样和目标样A测试样；供试品测试样和目标样A测试样中均加入特异性抗血清，得到供试品反应样和目标样A反应样；向供试品反应样和目标样A反应样中分别加入酶标抗体，然后加入底物液进行显色反应，并测出OD值；以及根据供试品反应样和目标样A反应样中得到的OD值计算出对应的多糖含量，从而计算出吸附率，本发明具有计算出疫苗中各个血清型的结合原液的吸附率，并通过吸附率得出各型结合原液免疫原性的优点。