细菌内毒素检查法

摘要： 目的对依托泊苷脂质微球注射液进行热原和细菌内毒素检查实验,制订其热原及细菌内毒素控制标准,保证产品质量及用药安全。方法按《中华人民共和国药典》2015年版四部“9301注射剂安全性检查法应用指导原则”“1142热原检查法”和“1143细菌内毒素检查法”进行实验,用家兔法对三批依托泊苷脂质微球注射液进行热原检查,使用湛江安度斯生物有限公司和福州新北生化工业有限公司两个不同厂家生产的鲎试剂对三批依托泊苷脂质微球注射液进行细菌内毒素干扰和检查实验。结果依托泊苷脂质微球注射液三批样品,每只家兔体温升高均低于0.6°C,3只家兔体温升高的总和均低于1.3°C,热原检查实验结果均符合规定。三批样品以60%乙醇溶解并稀释到0.03 mg/ml浓度,对细菌内毒素检查法无干扰作用。并进行细菌内毒素检查,结果符合规定。结论依托泊苷脂质微球注射液的热原及细菌内毒素检查方法可行,能控制产品质量,保证临床用药安全。

摘要： 报告基因法是目前发展的热原检测新方法,具有操作简单、快速,不使用动物、检测热原谱广,可对热原进行定量等优点,已越来越广泛地应用于生物制品热原检测。2021年10月《体外热原检查法(报告基因法)》在中国药典委网站公示,为更好地理解该公示稿内容,推动该方法的实施,本文以HL60-pNL3.2报告基因热原检查法为例,介绍该公示稿框架和内容,对报告基因法在生物制品中的应用进行了展望,以期为准确应用该方法控制相关产品的质量提供参考。

摘要： 目的评价微量动态显色法与动态显色法的等效性,为替代方法的使用提供数据支持。方法检测条件:采用微量动态显色法和动态显色法鲎试剂,每孔样品和鲎试剂加样量25μL(动态显色法100μL),检测波长405 nm,预设OD值0.03,使用半孔酶标板检测(动态显色法使用普通酶标板)。在国内的4个实验室协作研究,以等效性检验等多种统计方法,评价两种方法的等效性。结果单因素方差分析、配对t检验和等效性检验的结果较为一致,均显示出不同厂家的现有动态显色法之间存在一定差异,而每个厂家的试剂采用微量或常规的量之间并不存在显著性差异。结论微量动态显色法在准确度回收率方面是与现有试剂等效的。

摘要： 目的研究微量动态显色法用于重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)中细菌内毒素定量检测的可行性。方法使用微量动态显色法鲎试剂,建立细菌内毒素标准曲线,通过干扰预实验确定稀释倍数,测定供试品溶液中外加内毒素的回收率进行干扰试验,完成供试品中细菌内毒素含量的定量检测试验。并与凝胶法试验结果进行比较。结果标准曲线的线性范围为0.02~2.0EU·mL^(-1),回归方程为lgT=-0.3027 lgC+2.8587,r=0.9989,供试品在稀释40倍时均对反应无干扰作用,细菌内毒素回收率在50%~200%范围内,三批供试品的内毒素定量检测结果均符合规定。检测结果与凝胶法一致,符合标准规定。结论微量动态显色法可用于重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)细菌内毒素定量检测,结果准确,灵敏度高,过程可控。

摘要： 目的建立注射用比伐芦定的细菌内毒素检查法。方法依据《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法,采用凝胶法和光度法(动态显色法)进行试验。结果凝胶法在稀释至25倍时可排除抑制干扰。光度法在稀释至180倍时,回收率在104%~129%之间。3批样品的内毒素检查结果均符合规定。结论细菌内毒素检查法可用于注射用比伐芦定的质量控制。

摘要： 查阅重要文献发现,细菌内毒素起源、化学结构、生物活性及毒性反应均会影响药品检验效果,凝胶限量法、光度定量测定法均是常见的细菌内毒素检查方式,涉及制药工艺、检验药品及临床医学等应用范围,其中药品检验中应用最广泛,利于为患者用药安全提供保障.本文研究药品检验中应用细菌内毒素检验法的价值,以供参考.

摘要： 目的 研究建立单磷酰脂A佐剂的热原控制方法 .方法对2批不同来源的单磷酰脂A分别采用细菌内毒素检查法、TLR2高表达HEK细胞和TLR4高表达HEK细胞报告基因法进行了线性与范围、专属性、检测限、耐用度、回收率等方法学研究.结果 2批样品使用3种方法的线性与范围、检测限、耐用度、回收率等方法学研究结果均符合规定.专属性方面的研究显示,细菌内毒素检查法、TLR4高表达HEK细胞报告基因法不能区分细菌内毒素和单磷酰脂A.结论 细菌内毒素检查法、TLR4高表达HEK细胞报告基因法检测专属性均无法满足质量控制要求.TLR2高表达HEK细胞报告基因法可作为单磷酰脂A佐剂的热原控制方法.

摘要： 目的 分析国内外非肠道用制品及药品包装容器(材料)热原检测结果,并进行安全性评价.方法 对非肠道用制品及药品包装容器(材料)进行家兔热原检查法(Rabbit pyrogen test,RPT)或细菌内毒素检查法(Bacterial endotoxin test,BET),其检验和判定方法按照《中国药典》2015年版进行.结果 2016～2018年间共对223批非肠道用制品及药品包装容器(材料)进行热原检测,总合格率为98.2％,其中97批进行家兔热原检查法试验,其合格率为95.9％;126批进行细菌内毒素检查法试验,其合格率为100％;化学药、抗生素、中药、药包材检品合格率为100％,其他检品合格率为87.9％.结论 检测的非肠道用制品及药品包装容器(材料)部分具有潜在危害性,需加强监管.

摘要： 目的：建立注射用美洛西林钠舒巴坦钠的细菌内毒素检查方法.方法：按中国药典2010年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法进行试验和结果判断,对不同生产企业的供试品进行干扰试验和细菌内毒素检查.结果：根据临床实际应用情况,确定注射用美洛西林钠舒巴坦钠的内毒素限值为0.05EU·mg-1,其最大不干扰浓度为5mg·mL-1,可用灵敏度0.25EU·mL-1及以上的鲎试剂检测其中的细菌内毒素.按此标准检查,102批样品的细菌内毒素均符合规定.结论：本品种可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法,建议统一并提高其安全性检查标准.

摘要： 为探讨本品用细菌内毒素检查法控制热原的可能性,本文对其细菌内毒素检查方法进行了研究，注射剂是否适合用细菌内毒素检查法控制热原取决于其对细菌内毒素检查是否干扰及干扰能否被排除。试验结果表明，在2.5mg/ml浓度时可以排除SHI对细菌内毒素检查的抑制性干扰，因此，SHI可用细菌内毒素检查法控制热原。一般高浓度供试品对细菌内毒素检查不产生干扰，则低浓度的供试品也不产生干扰。SHI的最大无干扰浓度为2.5mg/ml，采用O.O5EU/mg为SHI的内毒素限值在进行细菌内毒素检查时可选TAL的灵敏度范围在(0.125~0.03)EU/ml。

摘要： 目的：通过研究《中国药典》2010版细菌内毒素检查法凝胶半定量试验判断模式的合理性,为其修订提供科学依据.rn 方法：通过统计分析407批凝胶半定量试验结果,评价《中国药典》凝胶半定量试验判断模式.rn 结果：407批试验结果中,共有2批次的试验结论出现"无法判断"情况,占0.49％.总结分析在现有《中国药典》中能够可产生"无法判断"情况的模式共有4种.rn 结论：建议将《中国药典》2015年版细菌内毒素检查法凝胶半定量试验判断模式修订为:"系列溶液A中每一系列平行管的终点稀释倍数乘以λ,为每个系列的反应终点浓度.""若每一系列内毒素浓度均小于规定的限值,判定供试品符合规定.否则判定供试品不符合规定.",修订后的判断模式不存在无法判断的情况,更为科学严谨.

摘要： 目的:建立左卡尼汀注射液细菌内毒素检查方法,替代家兔法检查热源,缩短检验周期,减少动物使用,满足3R原则.方法:根据左卡尼汀注射液临床应用剂量,参考USP标准,设定细菌内毒素限值L＜0.1EU/mg.随机抽取10批次供试品分别用家兔法和细菌内毒素法进行实验,然后将检验结果进行对比.结果:10个批次的供试品进行热源检查时,每试验组的3只家兔单只体温变化均低于0.6°C,三只家兔升温总和均低于1.3°C.相同批次供试品进行细菌内毒素检查时,每批次实验结果内毒素限值均小于0.1EU/mg.结论:左卡尼汀注射液应用细菌内毒素检查法替代家兔法检查热源具有可行性.

摘要： 目的:为日常检测中不可避免出现的内毒素检测结果超过质量标准(OOS)的情况建立一套科学的处理方法.方法:通过风险因素分析法,结合大量实际工作经验,对产生OOS的原因进行了逐项分析和研究,包括质量标准与计算、实验操作、材料与仪器等因素.并针对内毒素检查的特性,设计决策流程图确定验证OOS方案.结果:确定了所有类型的风险因素产生原因和解决方法,建立了用于回顾细菌内毒素OOS的风险因素鱼骨图和用于验证OOS结果的决策流程图.结论:按风险因素鱼骨图进行回顾分析并按决策流程图进行验证试验处理OOS,能够使内毒素检测结果更加科学严谨.

摘要： 目的：对10％脂肪乳(00)/5.5％氨基酸(15)/葡萄糖(20％)注射液进行凝胶法干扰试验,建立10％脂肪乳(00)/5.5％氨基酸(15)/葡萄糖(20％)注射液细菌内毒素的检查方法.rn 方法：采用《中国药典》2010年版二部附录收载的细菌内毒素检查法.rn 结果：10％脂肪乳(00)/5.5％氨基酸(15)/葡萄糖(20％)注射液加入终浓度为0.0001％的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液稀释24倍浓度或以下稀释浓度的溶液对细菌内毒素检查法无干扰作用.rn 结论：采用细菌内毒素检查法检查10％脂肪乳(00)/5.5％氨基酸(15)/葡萄糖(20％)注射液中的细菌内毒素是可行的,可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法.

摘要： 目的：建立米力农原料药的细菌内毒素检查方法.方法：以DMSO溶解米力农,再用细菌内毒素检查用水稀释后按中国药典2010年版二部附录细菌内毒素检查法,采用2个不同厂家的鲎试剂进行干扰试验研究.结果：根据临床实际应用情况,确定米力农的内毒素限值L=13 EU·mg-1;在本实验条件下,米力农的最大不干扰浓度为0.5mg·mL-1,可选择市售任意灵敏度的鲎试剂检测米力农中的细菌内毒素.结论：米力农原料药可采用细菌内毒素检查法控制其质量.

摘要： 目的:考察含有纳米银的敷料的细菌内毒素检查方法的可行性.方法:依据《中华人民共和国药典》2010年版附录XIE细菌内毒素检查法,确定纳米银敷料的有效的稀释浓度和细菌内毒素限值.结果:纳米银敷料的浸提液在稀释2倍后对细菌内毒素实验无干扰作用,其细菌内毒素限值符合规定.结论:该产品可以采用细菌内毒素检查法,与家兔热原检查法结果一致.

摘要： 目的:对难溶于水的原料药他克莫司建立细菌内毒素检查方法.方法:参照《中国药典》2010年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查方法要求进行试验.结果:采用无水乙醇作为稀释剂,他克莫司在1.0g·L-1及以下浓度时对湛江安度斯的鲎试剂均无干扰,在2.5g·L-1及以下浓度时对福州新北生化工业有限公司的鲎试剂均无干扰.无水乙醇在稀释20倍及以上稀释倍数时对2个厂家的鲎试剂均无干扰.结论:采用无水乙醇作为稀释溶剂,可建立他克莫司的细菌内毒素检查法,细菌内毒素限值为2.0EU/mg.

摘要： 目的：选用三种含不同类别热原的非肠道用制品对家兔热原检查法(RPT)、细菌内毒素检查法(BET)和新的体外热原检查法(IPT)三种不同原理的热原检测方法进行比较研究，以期评价它们在制品检测中的准确性、可靠性和适用范围，为今后制品选择适宜的检查方法提供科学的依据，确保制品临床使用的安全性。rn 方法：用三种热原检测方法分别对b 型流感嗜血杆菌结合疫苗（Hib）、卡介菌多糖核酸注射液（BCG-PNA 注射液）和红花注射液三种制品进行检测，以药典规定的人用热原限量标准为判断依据，比较三种方法所测制品中致热物质含量（相当于内毒素标准单位）之间的差异。rn 结果：根据药典规定的临床人用热原限量标准， Hib 应不高于50EU/ml，BCG-PNA 注射液应不高于50EU/ml，红花注射液应不高于2.5EU/ml。检测结果显示，三种检查法检测Hib 的结果均一致（为合格）[RPT 法（＜50EU/ml）、BET 法（4.63EU/ml）和IPT 法（＜1EU/ml）]，但检测BCG-PNA 注射液[在RPT 法（＜50EU/ml）和IPT 法（46.50EU/ml）的结果均为合格，但BET 法（4455.5EU/ml）的结果为不合格]和红花注射液[RPT 法（＞2.5EU/ml）的检测结果为不合格，而BET 法（＜0.3EU/ml）和IPT 法（＜ 0.9EU/ml）的结果均为合格]的结果却有所不同。rn 结论：Hib 适用于三种检测方法，可考虑选用IPT 法或BET 法替代RPT 法；BCG-PNA 注射液适用于RPT 法与IPT 法，而BET 法的检测结果与RPT 法和IPT 法的不一致，可能是因该制品含有与内毒素结构类似的多糖结构，故其不适用于BET 法，所以今后可能只有考虑选用IPT 法替代RPT 法；红花注射液因BET 法和IPT 法的检测结果与RPT 法（至今认为RPT 法为金标准）不一致，又因其成分复杂、活性作用广泛，故目前最好还是使用RPT 法对其进行热原检测。本研究也证明，对于BET 法和IPT 法的广泛应用还需要更多的研究与评价。

摘要： 本发明涉及细菌内毒素定量检测方法。本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的缺点，提供一种细菌内毒素定量检查的式作标准内毒素套盒的制备方法及使用方法。该方法是为了快速、准确的建立细菌内毒素定量检查法中的标准曲线，把建立细菌内毒素定量检查的标准曲线所需浓度的标准内毒素系列制备成冻干品，用国家标准内毒素(NSE)对其作效价标定后，组合成工作标准内毒素套盒。在作细菌内毒素定量检测时，用水复溶工作标准内毒素套盒后就可得到制备标准曲线所需要的标准内毒素浓度系列。本发明工作标准内毒素套盒消除了人为稀释标准内毒素时的误差，把所需要的标准内毒素浓度制备成冻干品，复溶后直接使用，大大提高了标准曲线的准确性，使标准曲线的重要参数即相关系数绝对值一般都可达到0.999以上。

摘要： 本文报道了一种测定抗体(使用细菌细胞产生的抗体)样品中低浓度的细菌内毒素的方法，其按照以下顺序包括以下步骤：i)向样品中加入镁离子，ii)稀释样品，iii)相对于无内毒素的水溶液透析具有pH值5.7‑8.0的样品，和iv)使用细菌内毒素测试，特别是鲎变形细胞溶解物测定法，测定样品中的细菌内毒素。

摘要： 本发明涉及细菌内毒素定量检测方法。本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的缺点，提供一种细菌内毒素定量检查的式作标准内毒素套盒的制备方法及使用方法。该方法是为了快速、准确的建立细菌内毒素定量检查法中的标准曲线，把建立细菌内毒素定量检查的标准曲线所需浓度的标准内毒素系列制备成冻干品，用国家标准内毒素(NSE)对其作效价标定后，组合成工作标准内毒素套盒。在作细菌内毒素定量检测时，用水复溶工作标准内毒素套盒后就可得到制备标准曲线所需要的标准内毒素浓度系列。本发明工作标准内毒素套盒消除了人为稀释标准内毒素时的误差，把所需要的标准内毒素浓度制备成冻干品，复溶后直接使用，大大提高了标准曲线的准确性，使标准曲线的重要参数即相关系数绝对值一般都可达到0.999以上。

摘要： 本文报道了一种测定抗体(使用细菌细胞产生的抗体)样品中低浓度的细菌内毒素的方法，其按照以下顺序包括以下步骤：i)向样品中加入镁离子，ii)稀释样品，iii)相对于无内毒素的水溶液透析具有pH值5.7‑8.0的样品，和iv)使用细菌内毒素测试，特别是鲎变形细胞溶解物测定法，测定样品中的细菌内毒素。

摘要： 本文报道了一种测定抗体(使用细菌细胞产生的抗体)样品中低浓度的细菌内毒素的方法，其按照以下顺序包括以下步骤：i)向样品中加入镁离子，ii)稀释样品，iii)相对于无内毒素的水溶液透析具有pH值5.7‑8.0的样品，和iv)使用细菌内毒素测试，特别是鲎变形细胞溶解物测定法，测定样品中的细菌内毒素。

摘要： 本发明公开了一种乳剂样品中细菌内毒素的检查方法，包括以下步骤：S1、确定待检测乳剂样品的细菌内毒素限值L，确定鲎试剂的灵敏度；S2、根据细菌内毒素限值L、鲎试剂的灵敏度、供试品溶液的浓度C计算乳剂样品的最大有效稀释倍数；S3、将非离子型表面活性剂溶解于细菌内毒素检查用水中制备成稀释液；S4、将待检测的乳剂样品采用步骤S3制备的稀释液，并根据步骤S2计算的最大有效稀释倍数进行稀释处理，获得供试品溶液；S5、将步骤S4获得的供试品溶液采用鲎试剂进行检测。本发明用含0.05‑4％非离子型表面活性剂的细菌内毒素检查用水进行稀释处理，使用灵敏度为0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查，能够降低干扰，提高乳剂样品中细菌内毒素检查的准确率。

摘要： 本发明公开了一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法，包括以下步骤：将焦磷酸柠檬酸铁原料用细菌内毒素检查用水配制成浓度为0.6g/10ml的样品溶液S，再用细菌内毒检查用水将样品溶液S稀释40倍，即溶液A(S

摘要： 本实用新型公开了一种使用方便的用于细菌内毒素检查的反应装置，包括主体框架，所述主体框架的内部开设有多个贯穿上下表面的放置槽，多个所述放置槽的内部均设置有反应瓶，所述主体框架的下端设置有底座，所述底座的侧面固定连接有多个卡扣，所述主体框架的侧面固定连接有多个卡块。本实用新型中，本装置通过使用医用塑料材质的反应瓶代替玻璃材质的安瓿瓶，反应瓶上端使用与瓶身上的柔性连接板固定的端盖进行密封，端盖上固定的掀板便于将端盖打开，设置的刻度板便于观察其内部的溶液容量，支撑框架底端设置的底座与其通过卡扣和卡块进行固定，便于将底座拆卸，从而方便对主体框架内的放置槽和底座进行清洗。

摘要： 本实用新型公开了一种细菌内毒素检查设备，包括机体、立柱、横杆、放置板、试管孔、插入孔、旋钮，所述机体的底部四角设有螺纹连接的旋钮，机体的后方开设有凹槽，凹槽内放有水，凹槽上设有螺钉安装的盖板，盖板上开设有多个插入孔，所述凹槽的两侧设有螺钉安装的立柱，立柱的顶部焊接有横杆，放置板通过支架与立柱连接，且支架能沿立柱的高度方向进行上、下移动，放置板上开设有多个试管孔，试管孔与插入孔一一对应设置，机体内设有加热棒，且加热棒位于凹槽内，通过加热棒对凹槽内的水进行加热。本实用新型设计合理；利用放置板在立柱上进行上、下移动从而适应不同长度的试管。

摘要： 本实用新型公开了一种应用于细菌内毒素检查试验的干式恒温装置，包括机壳和底座，所述机壳内部通过螺栓固体有安装箱，且单片机设置在安装箱内部的PCB板上，同时单片机与蓄电池电性连接，框架焊接在机壳的内部，且框架内部形成干燥腔，同时温度传感器通过螺栓固定在框架的左侧壁上，上干燥箱的上端通过螺栓安装有轴杆，且轴杆的上端通过固定轴承与框架相固定，置物架安装在上干燥箱的内部，且置物架的两端与滑块一体成型。该应用于细菌内毒素检查试验的干式恒温装置，具有提高干燥装置的均匀受热能力，避免出现局部过热而出现发焦的情况，进而提高产品的质量和合格率，结构简单，方便实用的特点。