细胞毒性试验

摘要： 通过临床动物实验评价金属注射成型(MIM)制备的新型血管支架的可行性与安全性。采用粉末注射成型技术制备血管支架,大幅提高材料利用率;研究MIM过程中碳杂质含量变化对316L不锈钢力学性能与耐腐蚀性能的影响;同时开展MIM血管支架的体外毒性测试与动物实验以评价支架的安全性。结果表明,316L不锈钢的性能对碳含量变化极为敏感,在MIM制备过程中应该对碳含量波动实施精准控制。所有MIM血管支架都成功植入狗的主动脉血管,MIM 316L不锈钢支架未出现明显毒性,能够稳定维持支架形状及结构,快速实现内皮化过程,呈长期植入通畅性。采用MIM技术制备的新型血管支架具备合适的结构、物理以及化学稳定性和生物相容性,在临床实践中具有广阔应用前景。

摘要： GB/T 14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分:生物试验方法》是我国现行的医用输液、输血、注射器具的国家推荐标准,自颁布以来,对医用输液、输血、注射器具类别的医疗器械检验具有极其重要的指导意义.本文主要结合GB/T 16886《医疗器械生物学评价》和《中国药典》标准现状及具体试验方法,对GB/T 14233.2-2005提出改进建议.

摘要： 目的 探讨MTT法和琼脂扩散法在壳聚糖创伤敷料细胞毒性试验中的应用效果.方法 将样品按6 cm2/ml的比例制备浸提液,并进行倍比稀释,用MTT法进行评价,同时用琼脂扩散法对原液组和1/8组进行对比评价.结果 MTT法结果显示,样品原液组和1/2、1/4、1/8组的细胞存活率(RGR)分别为59％、71％、87％、90％;琼脂扩散法结果显示,样品原液组、1/8组的细胞毒性分别为3级、2级.结论 采用MTT法和琼脂扩散法进行壳聚糖创伤敷料的细胞毒性试验,样品原液组和1/8组的细胞毒性结果一致,两种方法联合应用可避免单一方法得出过高或过低的评价结果.

摘要： 介绍了GB 16886系列标准中固体样品和液体样品的制备方法,分析了GB/T 16886.5—2017《医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验》中浸提液试验、琼脂扩散试验、直接接触试验3种定性试验和MTT试验、中性红摄取(neutral red uptake,NRU)试验、集落形成(clone forming assay,CFA)试验3种定量试验的试验方法,比较了各试验方法的实验条件和判定标准.指出了选择合适的体外细胞毒性试验对正确评价样品潜在毒性的重要性.提出了应将体外细胞毒性试验结果与其他生物相容性试验结果结合,以获得对医疗器械更准确的生物风险评估.

摘要： 通过体外细胞毒性试验评价速即纱、英洁尔、泰可聆三种可吸收止血材料的细胞相容性,旨在为纤维素类可吸收止血材料的临床安全应用提供参考.采用四唑盐比色法(MTT比色法)、细胞形态分析、琼脂扩散法以及滤膜扩散法,评价三种材料对L929成纤维细胞增殖活性的影响及细胞毒性反应.各材料按50.00 mg/mL加入不完全细胞培养液浸提24 h后,离心得浸提液,此浓度设为100％,依次稀释得50.0％、25.0％、12.5％、6.25％、3.13％、1.56％、0.78％、0.39％材料浸提液.MTT比色法结合细胞形态分析显示:英洁尔材料各浸提液浓度无明显的细胞毒性,速即纱与泰可聆材料浸提液在浓度稀释至25.0％以下时,才不会出现明显的细胞毒性.对于三种材料本身,琼脂扩散法与滤膜扩散法均显示英洁尔材料无明显的细胞毒性,而速即纱与泰可聆材料有明显的细胞毒性.三种不同止血材料的细胞相容性不同,须选择适宜的评价方法.

摘要： 目的:研究琼脂扩散法细胞毒性试验中材料受试形式对材料细胞毒性测试结果的影响.方法:制备光固化复合树脂、氧化锌丁香油水门汀、磷酸锌水门汀、玻璃离子水门汀、聚羧酸锌水门汀的固体试样及浸提液,采用琼脂扩散法测定此5种材料凝固即刻和24 h的固体试样及其浸提液的细胞毒性.结果:细胞毒性由重到轻依次为:①以材料浸提液为试样时,氧化锌丁香油水门汀(重度) 磷酸锌水门汀=玻璃离子水门汀=聚羧酸锌水门汀(中度) 光固化复合树脂(轻度);②以凝固24 h为受试样品时,氧化锌丁香油水门汀(重度) 磷酸锌水门汀=聚羧酸锌水门汀=玻璃离子水门汀=光固化复合树脂(轻度);③以即刻凝固为受试样品时,氧化锌丁香油水门汀(重度) 磷酸锌水门汀(中度) 聚羧酸锌水门汀=玻璃离子水门汀=光固化复合树脂(轻度).结论:3种受试形式对轻、重度细胞毒性材料的测定结果无影响,而对中度细胞毒性材料的测定结果有影响,其中浸提液测出相对较高的细胞毒性,而试样凝固24 h的细胞毒性则小于即刻凝固.%AIM:To study the effects of sample form of dental materials on the cytotoxicity test results by agar diffusion method. METHODS:The extract and disc specimen of dental filling materials of light-curing compos-ite resin(LCR),zinc oxide eugenol cement(ZOEC),zinc phosphate cement(ZPC),glass ionomer cement(GIC) and zinc polycarboxylate cement(ZPOC)were respectively prepared,disc specimens hardened for 24 h. The cytotoxicity of the extracts,immediatly immediatly prepared discs and the discs hardened for 24 h was respectively tested using agar diffusion method. RESULTS:For the extracts, their cytotoxicity decreased in an order of ZOEC(severe) ZPC=GIC=ZPOC(moderate) LCR(mild). For disc specimens hairdened for 24 h,the cytotoxicity decreased in an order of ZOEC(severe) ZPC=ZPOC=GIC=LCR(mild). For immediately prepared discs, the cytotoxicity decreased in an order of ZOEC(severe) ZPC(moderate) ZPOC=GIC=LCR(mild). CONCLUSION:With agar diffusion method,the sample form of a tested materials with severe or mild cytotoxicity has no influence on the cytotoxic re-sponse. For the materials with moderate cytotoxicity,the sample form affects its cytotoxic response slightly.

摘要： 背景：相对于其他用于支架材料的高分子化合物,脱软骨细胞基质能够模拟出更接近原生理状态下的细胞外环境,由其制备的椎间盘支架弹性模量也更加接近软骨组织。目的：制备脱细胞软骨基质,并从细胞和活体两方面评价其生物相容性。方法：将猪软骨粉碎后,经胰酶、核酶及TritonX-100处理得到脱细胞软骨基质。（1）细胞毒性实验：将脱细胞基质溶于醋酸,制备成脱细胞基质膜。将SD大鼠腰椎终板软骨干细胞接种于脱细胞基质膜上,培养1-5 d,采用CCK-8检测软骨干细胞在基质膜上的增殖情况,评价细胞毒性分级;（2）动物体内毒性实验：将含有脱细胞基质的醋酸（实验组）与醋酸（对照组）分别注射至SD大鼠背部皮下,形成皮丘,注射后36 h内观察大鼠体温与皮丘直径变化。结果与结论：（1）细胞毒性实验：倒置显微镜下可见,腰椎终板软骨干细胞接种于脱细胞基质膜2 d即贴壁,呈梭形生长,接种5 d内的细胞相对增殖率均在80%以上,细胞毒性分级为0至1级;（2）动物体内毒性实验：注射后即刻,两组大鼠背部均可见皮丘形成,注射36 h内皮丘内溶液被完全吸收,并且对照组吸收速度快于实验组,两组皮丘边缘均无红肿现象;注射36 h内,实验组与对照组大鼠体温均未超过37.5°C;（3）结果表明：脱细胞软骨基质具有很好的生物相容性,符合生物支架选材标准。

摘要： 背景：尽管壳聚糖是一种天然止血材料,但其对严重大出血创面的止血效果尚不明显,需要进一步的改性研究。且在壳聚糖中引入较短碳链的烷基（己烷）对凝血效果的影响也不明确。目的：合成N-己烷壳聚糖,研究其细胞毒性与凝血效果。方法：还原氨化法制备N-己烷壳聚糖,傅氏转换红外线光谱分析仪、元素分析法完成结构表征;MTT比色法和荧光标记法测试其细胞毒性;全血凝固时间、流变性能和血浆凝固实验评价其凝血性能。结果与结论：（1）傅氏转换红外线光谱分析仪、元素分析法均证实合成的产物是N-烷基化壳聚糖,取代度分别为8.67%,18.06%,32.88%;（2）MTT结果显示N-己烷壳聚糖的毒性分级是0级和1级。荧光染色表明与各组材料作用后,L929细胞生长旺盛,几乎无死细胞,提示明材料毒性作用小;（3）与壳聚糖相比,N-己烷壳聚糖具有明显促凝作用,且取代度越大其促凝作用越强。血浆凝固时间结果发现各组间活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间相比均无显著性差异（P〉0.05）,提示N-己烷壳聚糖不能促进凝血因子活化,其促凝机制有待于深入研究;（4）结果表明,通过还原胺化法合成了毒性较低、取代度介于8.67%-32.88%的N-己烷壳聚糖。与纯壳聚糖相比,N-己烷壳聚糖具有明显的促凝作用,且取代度越大,其促凝效果越好。

摘要： Objective To evaluate the viability of gasoline engine exhaust (GEE) with different particle sizes on human lung cell line BEAS-2B in vitro by air-liquid interface (ALI). Methods GEE were collected with a Tedlar bag and their particulate matter (PM) number, surface and mass concentration in three kind of GEE (filtered automobile exhaust, non-filtered automobile exhaust and motorcycle exhaust without three-way catalytic converter) were measured by two type of particle size spectrometer including TSI-3321 and SMPS-3938. Five groups were included, which divided into blank control group, clean air group, filtered automobile exhaust group, non-filtered automobile exhaust group and motorcycle exhaust without three-way catalytic converter group. Except the blank control group, BEAS-2B cells, cultured on the surface of Transwells, were treated with clean air or GEE by ALI method at a flow rate of 25 ml/min, 37°Cfor 60 min in vitro. CCK-8 cytotoxicity test kit was used to determine the cell relative viability of BEAS-2B cells. Results In the filtered automobile exhaust, non-filtered automobile exhaust and motorcycle exhaust without three-way catalytic converter , high concentrations of fine particles can be detected, but the coarse particles only accounted for a small proportion, and the sequence of PM concentration was motorcycle exhaust without three-way catalytic converter group> non-filtered automobile exhaust group>filtered automobile exhaust group (Pnon-filtered automobile exhaust group>motorcycle exhaust without three-way catalytic converter group (P汽车尾气组>过滤后的汽车尾气组的趋势(P汽车尾气组>摩托车尾气组的趋势(P<0.001);以洁净空气组为参考,过滤后的汽车尾气组、 汽车尾气组、 非三元催化配置的摩托车尾气组的细胞相对存活率均数依次降低了26.34%、36.00%和49.59%.结论 人肺BEAS-2B细胞ALI暴露于不同粒径谱的GEE可产生不同程度的毒性作用,降低GEE颗粒物浓度以及配置三元催化装置可明显改善肺细胞的存活率.

摘要： 目的：通过体外细胞毒性试验和在体排异反应试验,评价小型猪腹壁拉链装置(专利号：200920207646.1)的安全性。方法：通过CCK-8法细胞毒性试验,评价小型猪腹壁拉链装置材料的细胞毒性；通过分别测定空白对照组(C组)、外科手术组(S组)和小型猪腹壁拉链模型组(M组)外科手术前(Od)及术后1d、3 d、7 d、14 d和2l d血清IL-1、IL-6、IL-10和TNF-a等免疫细胞因子的浓度,观测动物是否有排异反应,评价该装置的生物安全性。结果：细胞毒性试验中,50%和100%浓度浸提液培养的L929细胞,在第2、4、7d细胞相对增殖率均为90%以上,表明细胞毒性为0～1级：排异反应试验中,术后1d和3d,M组和S组分别与C组相比较,IL-1、IL-6、IL-10和TNF-a均有极显著差异(P＜0.01),但M组和S组组间差异无统计学意义。结论：小型猪腹壁拉链装置体外细胞毒性合格,符合生物材料的国家标准；在体排异反应试验表明生物拉链本身没有引起严重的排异反应或炎症反应,安全性良好,为小型猪腹壁拉链动物模型的建立和推广应用提供了良好的实验依据。

摘要： 目的：探讨成纤维细胞毒性试验(Fib-CVS)是否可作为家兔眼刺激试验(Draize test)的一种替代方法。rn 方法：用该方法对22种化妆品的眼刺激性进行检测,并与1999年卫生部颁布的《化妆品卫生规范》(以下简称体内法d>)和新颁布的《化妆品卫生规范》(2002版)(以下筒称体内法)测定的眼刺激试验最大平均值(MASold和MASnew)分别进行相关性比较。rn 结果：MASold与MASnew和Fib-CVS的相关系数分别为-0.802、-0.729。rn 结论：Fib-CVS可作为替代方法用于眼刺激性的评价,是比较有潜力的眼刺激替代试验方法。

摘要： 目的：生物医用材料及制品已被大量应用于临床各个学科,其安全性问题已越来越受到重视.在众多的生物相容性试验中,细胞毒性试验以其简便、快捷、灵敏性高、节省动物等优点被列为首选试验项目,作为评价材料毒性的重要指标.细胞毒性试验是一种在离体状态下模拟生物生长环境检测生物医用材料及制品或其浸提液对细胞溶解、死亡、抑制细胞生长和其他毒性的作用方法.在细胞毒性试验中人们通常会将细胞接种于96孔或24孔培养板中,进而通过材料的浸提液与培养的细胞广泛接触,分析材料中各组成成分及其浓度对细胞的毒性影响.本次试验对以上两种规格培养板对同种材料检测所得到的板间误差、板内误差结果进行分析,为医疗器械、生物材料进行体外细胞毒性检测选择合适规格的培养版、减少检测系统误差、保证检测结果可靠性提供一定的依据.rn 方法：选取小鼠成纤维细胞L-929，传代2-3次后将其配制成浓度为l×104个/ml和1×105个/ml的细胞悬液分别接种子96孔培养板和24孔培养板中，接种体积分别为100μ1和500μl。置37±2°C，5%C02培养箱中培养，24-48小时后细胞生长占孔面积约80%左右，置显徽镜下观察细胞形态，拍照，弃去原培养液。空白对照组（C组）加入新鲜细胞培养液；阴性对照组（CN组）加入市售一次性无菌注射器管壁部分浸提液；阳性对照组（CP组）加入体积分数为5%的DMSO新鲜细胞培养液，置C02培养箱继续培养，于更换培养液后的24、48和72h，置显徽镜下观察细胞形态，并拍照。rn 结果：96孔细胞培养板各板内所测得OD值的相对标准偏差分别为：C组9.35%和4.66%，CP组7.82%和4.81%，CN组7.01%和6.28%; 24孔细胞培养板各板内所测得OD值的相对标准偏差分别为。C组5.47%和9.62%; CP组6.29%和3.56%：CN组5.14%和3.6l%。rn 结论：24孔细胞培养板的板内重复性要优于96孔细胞培养板，其原因可能是由于其单个孔内的细胞基数以及添加的试剂体积多于96孔细胞培养板，因而由操作造成的相对误差因较96孔板小，因此当样品数量少较少时建议使用24孔培养板，其板内重复性和板间误差要稍优于96孔板。

摘要： 本文选用医用聚氯乙烯作为细胞毒性阳性对照材料的基质.为保证原材料的安全可靠,对原材料进行了鉴别和杂质检查.采用溶剂流延法来制备有机锡聚氯乙烯膜,并添加不同量的马来酸二丁基锡.均匀性结果表明有机锡在聚氯乙烯膜上分布均匀.加速老化试验结果表明,老化前后有机锡聚氯乙烯和超高分子量聚乙烯红外光谱图没有明显改变,特征基团的峰位置、峰型和峰强度几乎没有变化;老化前后聚氯乙烯膜中可浸提出的有机锡含量几乎没有变化.对该材料多次独立重复试验的结果表明,有机锡聚氯乙烯膜呈现稳定的细胞毒性反应,适宜作为细胞毒性阳性对照材料.

摘要： 从20世纪70年代开始,欧洲经济共同体、澳大利亚、巴西、中国、日本、韩国等国家陆续批准将喹乙醇作为一种临床药物或饲料添加剂使用。近年来,随着动物饲喂过程中中毒事件的增多,国内外对该药提出了极为严格的限制使用要求,需要对喹乙醇的毒性及残留重新作出系列研究与评价,细胞毒性试验是一种在离体状态下,模拟生物体生长环境来检测生物材料或生物制品、化学物质及其他受试物对细胞产生的溶解(细胞死亡),抑制其生长或其他毒性作用的一系列方法。细胞毒性的评价方法有许多,可以依据细胞的形态、生长情况来评价,也可以依据其生化改变来评价.根据各个试验的可靠性、可重复性、灵敏度、方便性及费用大小等原则,本试验研究选择了其中的形态学指标、中性红试验、MTT试验对喹乙醇的细胞毒性进行联合检测,力求获得综合、准确的评价依据。

摘要： 本文对电缆材料绿色化的两大指标──毒性和有害元素含量进行了检测,得出了采用细胞毒性试验和电感耦合等离子体发射光谱仪法具有简便、精确、快速、省钱等优点。

摘要： 提供一种用于筛选测试化合物的肾近曲小管细胞毒性的体外试验。该方法包括，使测试化合物和肾近曲小管细胞的测试群接触；和，检测一项或多项细胞形貌特征，检测一项或多项细胞骨架特征，和/或测定测试群中的肾近曲小管细胞的细胞数量，并且将所述细胞形貌、细胞骨架成分排列和/或细胞计数与对照群的相应特征做比较。相对于对照群而言，测试群的一项或多项细胞形貌特征的变化、一项或多项细胞骨架排列特征的变化，或细胞数量的下降指示该测试化合物对肾近曲小管细胞具有毒性。

摘要： 提供一种用于筛选测试化合物的肾近曲小管细胞毒性的体外试验。所述方法包括，使测试化合物与肾近曲小管细胞的测试群接触；和，测定所述测试群中白介素的表达水平，所述白介素是白介素‑6(IL‑6)或白介素‑8(IL‑8)或上述两者。若所述测试群中白介素的表达水平大于未与测试化合物接触的肾近曲小管细胞的对照群中的表达水平，则指示所述测试化合物对肾近曲小管细胞具有毒性。

摘要： 提供一种用于筛选测试化合物的肾近曲小管细胞毒性的体外试验。该方法包括，使测试化合物和肾近曲小管细胞的测试群接触；和，检测一项或多项细胞形貌特征，检测一项或多项细胞骨架特征，和/或测定测试群中的肾近曲小管细胞的细胞数量，并且将所述细胞形貌、细胞骨架成分排列和/或细胞计数与对照群的相应特征做比较。相对于对照群而言，测试群的一项或多项细胞形貌特征的变化、一项或多项细胞骨架排列特征的变化，或细胞数量的下降指示该测试化合物对肾近曲小管细胞具有毒性。

摘要： 本发明提供一种检测口含烟制品细胞毒性的试验方法，经过样品前处理、单细胞悬液的制备、细胞浓度计算、细胞接种、加入受试物、孵育受试物、染料孵育、测定吸光值、计算细胞抑制率、计算半数细胞致死剂量等步骤。本发明综合考察口含烟制品的暴露途径、作用方式，建立了口含烟制品样品前处理方法，根据口含烟制品作用靶细胞选取了人口腔粘膜成纤维细胞hOMF作为口含烟制品细胞毒性试验检测用细胞，并确定了样品检测剂量，形成了适合口含烟制品的细胞毒性试验检测方法。

摘要： 本发明是一种卷烟滤嘴水浸提液细胞毒性试验阳性对照设置方法，该方法为：（1）选取相同数量的待测样品组卷烟滤嘴和用于制备阳性对照组的卷烟滤嘴；（2）配制浓度为10-20？mg/mL的十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液；（3）在用于制备阳性对照组的卷烟滤嘴上均匀喷洒SDS水溶液，待其自然干燥后备用；（4）用相同的方法对相同数量的阳性对照组和待测样品组卷烟滤嘴进行浸提；（5）用浸提液作为溶剂，用粉末细胞培养基按照培养基说明的方法进行配制，然后将配制后的溶液过滤除菌后用于细胞毒性试验；（6）对处理过的提取液进行细胞毒性试验。通过该方法设置的阳性对照，可以验证卷烟滤嘴的提取过程和后续对卷烟滤嘴水浸提液进行的细胞毒性试验是否可靠。

摘要： 本发明涉及一种热裂解产物捕集物细胞毒性试验阳性物筛选方法。根据参与燃烧的物质的燃烧状态确定其热裂解温度；挑选几种细胞毒性试验常用阳性物作为热裂解捕集物细胞毒性试验用阳性物的备选物，根据备选物质的沸点、熔点、热稳定性等理化性质决定是否进入后续筛选步骤：未能查询到相关理化性质的物质或沸点低于燃烧温度且在燃烧未分解或少量分解的物质进行热裂解试验，裂解产物富集后至气相色谱-质谱联用仪分离分析，在燃烧温度条件下未分解或小部分分解的物质进行热裂解试验，并将捕集的热裂解产物进行MTT细胞毒性试验，将得到的细胞抑制率≥80%的物质作为热裂解产物捕集物细胞毒性试验的阳性物。本发明能有效筛选出热裂解产物捕集物细胞毒性试验的阳性物。

摘要： 本发明是一种卷烟滤嘴水浸提液细胞毒性试验阳性对照设置方法，该方法为：（1）选取相同数量的待测样品组卷烟滤嘴和用于制备阳性对照组的卷烟滤嘴；（2）配制浓度为10-20mg/mL的十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液；（3）在用于制备阳性对照组的卷烟滤嘴上均匀喷洒SDS水溶液，待其自然干燥后备用；（4）用相同的方法对相同数量的阳性对照组和待测样品组卷烟滤嘴进行浸提；（5）用浸提液作为溶剂，用粉末细胞培养基按照培养基说明的方法进行配制，然后将配制后的溶液过滤除菌后用于细胞毒性试验；（6）对处理过的提取液进行细胞毒性试验。通过该方法设置的阳性对照，可以验证卷烟滤嘴的提取过程和后续对卷烟滤嘴水浸提液进行的细胞毒性试验是否可靠。

摘要： 本实用新型公开了一种体外细胞毒性试验琼脂扩散法加样模具装置，包括呈整体呈盒体结构设计的且上端敞口的培养皿，在所述培养皿内部底面水平设有一层琼脂层；其特征在于，在培养皿内部的所述琼脂层上表面竖向向上放置有样品放置筒，且使得所述样品放置筒下端面与培养皿内的琼脂层上表面相贴；所述样品放置筒为多个且在水平方向上呈多边形分布，并且沿多边形轮廓方向相邻的两个样品放置筒之间各自通过水平的连接管相连以使得连接管和样品放置筒共同围成封闭的多边形；并且在连接管上沿其长度方向设置有长度刻度。本实用新型具有方便使用，能够对样品形状进行约束，能够更加方便对样品毒性进行量化以方便对样品毒性进行对比的优点。

摘要： 本实用新型提供了一种细胞毒性试验样品快速取样器。本实用新型的细胞毒性试验样品快速取样器包括载物台、销筒、弹簧和推进部，销筒的头端具有切割口，载物台相对设置在销筒切割口的外侧，在销筒的头部开设有取样窗，推进部包括长度大于销筒长度的推杆和设置在推杆尾端且直径大于销筒直径的推杆圆盘，推杆滑设在销筒中，弹簧套设在推杆的外部，弹簧的两端分别固定在销筒尾端和推杆圆盘上。本实用新型的细胞毒性试验样品快速取样器结构简单、操作简便、取样快速，从而极大地提高了工作效率。此外，利用该细胞毒性试验样品快速取样器制备的样品形状规则、边缘光滑、样品质量高，进而保证了细胞毒性试验结果的准确性。

摘要： 本实用新型公开了一种用于医疗器械产品细胞毒性试验直接接触法的装置，包括细胞培养板（1），细胞培养板（1）包括多个单元孔（6），所述单元孔（6）内设有放置试样的载体，在所述细胞培养板（1）的每个单元孔中间设有一个固定桩（3），所述固定桩（3）穿过所述载体。采用本方案能够避免在实验操作中试样移动从而导致实验不准确，具有提高实验的准确性和更方便实验操作的优点。