细胞株

摘要： 【目的】通过建立过表达T7 RNA聚合酶(T7 RNA polymerase,T7 RNAP)的慢病毒系统,构建可稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞株。【方法】根据GenBank中公布的大肠杆菌BL21(DE3)基因组中T7 RNAP基因序列(登录号:NZ_CP081489.1)设计引物,并采用PCR扩增T7 RNAP基因片段,将其克隆至慢病毒载体中,构建pCDH-CMV-T7 RNAP重组质粒。筛选阳性克隆及测序鉴定后,利用脂质体将包含重组质粒pCDH-CMV-T7 RNAP的包装系统和辅助包装质粒共转染至HEK-293T细胞,进行慢病毒的包装及纯化,获得高病毒滴度的重组慢病毒。将收集的病毒液分别以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1、5、10和20感染BHK-21细胞,72 h后观察荧光情况,筛选最佳MOI。将重组慢病毒在最佳MOI条件下感染BHK-21细胞,通过绿色荧光蛋白copGFP的表达观察感染细胞的阳性率。使用4μg/mL嘌呤霉素作为抗性筛选物进行多轮筛选,最终筛选得到BHK-21-T7 RNAP细胞株。进一步对所筛选的细胞株设计3对检测引物进行RT-PCR检测,并通过检测试验组与空白对照组细胞中海肾荧光素酶(hRluc)报告基因的活性差异来反映T7 RNAP驱动T7启动子下游基因的能力。【结果】本研究成功扩增了大肠杆菌BL21(DE3)细胞基因组中T7 RNAP基因,成功构建重组慢病毒载体,并获得了滴度为1.0×10^(8)TU/mL的重组慢病毒。成功筛选到BHK-21-T7 RNAP细胞株,此重组细胞株经RT-PCR扩增能够检测到T7 RNAP的特异性DNA序列。将含有T7启动子驱动的hRluc的质粒(pT7-hRluc)转染此细胞株后发现,BHK-21-T7 RNAP细胞株中hRluc的活力与空白对照组BHK-21细胞相比极显著升高(P<0.01)。【结论】本研究获得了稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞株,且所筛选的BHK-21-T7 RNAP细胞株中的T7 RNAP能够驱动pT7启动子下游基因hRluc的转录,研究结果为RNA病毒的反向遗传学平台建立奠定了细胞基础。

摘要： 目的构建shRNA-不均一核糖核蛋白U(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein U,hnRNPU)慢病毒表达载体以及hnRNPU基因稳定敲减的小鼠preB A70细胞株。方法将靶向小鼠hnRNPU基因的shRNA干扰序列连接入pLKO.1-EBFP-PURO质粒中,测序检测。将构建成功的pLKO.1-hnRNPU shRNA-EBFP-PURO和慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清。将病毒上清感染A70细胞,利用倒置荧光显微镜观察病毒感染情况,利用Western blot检测hnRNPU蛋白的表达。通过有限稀释方法,构建单细胞克隆,并利用Western blot筛选hnRNPU基因稳定敲减的A70细胞株。结果成功构建了shRNA-hnRNPU慢病毒表达载体。表达shRNA-hnRNPU的慢病毒在HEK293T细胞中完成包装。包装好的病毒感染A70细胞72 h后,细胞内可以观察到蓝色荧光。感染后的细胞经过嘌呤霉素筛选后,细胞内的hnRNPU蛋白大约减少一半。通过有限稀释方法,构建了hnRNPU基因稳定敲减的细胞株。结论本研究成功构建了hnRNPU稳定敲减的A70细胞株,为后续研究hnRNPU在早期B细胞发育中的作用奠定了实验基础。

摘要： 目的:观察补阳还五汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肺动脉内皮细胞(HPAEC)Dll4/Notch4信号的调控作用.方法:以53.36?g/(kg·d)剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清.体外培养HPAEC细胞,TGF-β1诱导建立内皮间质转化(EndMT)模型,设立空白组(10％空白血清)、模型组(10％空白血清+TGF-β1)、DAPT组(10％空白血清+DAPT+TGF-β1)、10％含药血清组(10％含药血清+TGF-β1)、5％含药血清组(5％含药血清+5％空白血清+TGF-β1)和2.5％含药血清组(2.5％含药血清+7.5％空白血清+TGF-β1)6组.采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1?mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹(Western?blot)法检测各组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1蛋白的表达,采用免疫共沉淀(Co-IP)法检测各组HPAEC细胞NICD4与CBF1的相互作用.结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1?mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01),且NICD4与CBF1有结合作用;与模型组比较,DAPT组和补阳还五汤各剂量含药血清组HPAEC细胞Notch4、Dll4和CBF1?mRNA及蛋白表达均降低,NICD4与CBF1的结合被抑制,随着含药血清浓度的增加,作用越明显.结论:补阳还五汤含药血清可抑制TGF-β1诱导的HPAEC细胞的Dll4/Notch4信号,这可能是其干预内皮间质转化的机制之一.

摘要： 为研究水牛瘦素(Leptin)的功能,构建leptin基因真核表达载体EGFP-leptin,检测leptin在NIH/3T3细胞中的表达并分析其生物学特性.根据水牛leptin基因序列设计引物,并在上下游引物分别添加Hind Ⅲ和BamH Ⅰ酶切位点,以pMD18-T-leptin载体为模板,PCR扩增leptin基因,并亚克隆至载体pEGFP-Nl,以双酶切和DNA测序鉴定EGFP-leptin重组质粒;然后采用脂质体2000将重组质粒转染到NIH/3T3细胞,经G418筛选,获得稳定转染的细胞株,RT-PCR及Western blot检测EGFP-Leptin融合蛋白表达.动物试验分3组,处理组从小鼠尾静脉注入重组质粒1 μg/只,对照组和禁食组注射等体积生理盐水,3 d后称其体质量,采用ELISA法测定小鼠血清中Leptin水平.结果显示,成功构建真核表达载体EGFP-leptin,转染NIH/3T3细胞后出现绿色荧光;RT-PCR和Western blot进一步证实了 Leptin表达.动物试验显示,处理组和禁食组小鼠体质量下降速率高于对照组,差异显著(P＜0.05),处理组血清Leptin水平高于对照组,差异显著(P＜0.05).以上结果表明,EGFP-leptin能够在NIH/3T3细胞中稳定表达,产生的融合蛋白具有良好的生物学活性.

摘要： 目的 分析8种人胰腺癌细胞株中常见肿瘤相关基因突变,为胰腺癌基础研究中选择合适的细胞株提供依据.方法 体外培养8种人胰腺癌细胞株(AsPC-1、BxPC-3、Capan-1、Capan-2、MIA PaCa-2、PANC-1、Patu8988和T3M4,均购自美国模式培养物集存库),采用二代测序技术检测113个肿瘤相关基因突变情况,结合京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对突变基因进行功能分析.结果 二代测序结果显示,8种人胰腺癌细胞株中共确定36个基因、79个位点发生突变.鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、肿瘤蛋白P53(TP53)、细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A)和胰腺癌缺失基因(DPC4/SMAD4)在8种胰腺癌细胞株中的突变率分别为87.5％(7/8)、100.0％ (8/8)、50.0％(4/8)和37.5％(3/8).AsPC-1和Capan-1细胞中同时存在上述4个基因的突变,BxPC-3细胞株是KRAS野生型胰腺癌,CDKN2A基因在AsPC-1、Capan-1、Capan-2和Patu8988细胞中检测到突变,而DPC4/SMAD4在AsPC-1、Capan-1和T3M4细胞中发生突变.其他发生率较高的突变基因包括AT丰富结合域1A(ARID1A)基因(AsPC-1、Capan-1、Capan-2、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREBBP)基因(Capan-1、Capan-2、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)、NOTCH1(BxPC-3、Capan-2、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)、腺瘤性息肉病(APC)基因(AsPC-1、Capan-1和Patu8988发生突变)和E1A结合蛋白P300(EP300)基因(BxPC-3、MIA PaCa-2和T3M4发生突变).突变基因功能主要涉及Ras/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、细胞周期调控、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路、NOTCH信号通路、染色质重塑复合物家族、转化生长因子β(TGF-β)信号通路、DNA损伤修复、Hedgehog和磷脂酰肌醇3激酶丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3 K-Akt)信号通路等.结论 8种胰腺癌细胞株具备人胰腺癌组织的基因学特征,不同细胞株具有不同的基因突变特点,实验研究中应根据不同细胞的基因突变情况合理选择细胞株并分析研究结果.

摘要： 目的 构建表达磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)的稳定细胞株并对其在膜性肾病(membranous nephropathy,MN)诊断中的应用进行初步评价.方法 人工合成pIRES-PLA2R真核表达质粒并稳定转染CHO细胞,筛选后分别进行RT-PCR,Western免疫印迹和细胞免疫荧光方法(immunofluorescence assay,IFA法)鉴定.以构建的稳定细胞株建立PLA2R自身抗体IFA法并对2018～2019年收集的97例肾病患者血清样本进行初步检测.结果 成功构建表达PLA2R蛋白的稳定细胞株CHO-PLA2R并以该细胞株为基础建立PLA2R自身抗体IFA法.与ELISA试剂盒检测结果相比,阴性样本符合率为100％(55/55);阳性样本符合率为76.2％(32/42);总体符合率为89.7％(87/97).Kappa检验具有一定的一致性(P<0.05).结论 成功构建表达PLA2R蛋白的稳定细胞株,并应用该细胞株建立了检测PLA2R自身抗体的IFA检测方法.

摘要： 目的 :检测食管鳞癌组织和细胞中 miR-181a 的表达情况,研究其在食管鳞癌中的作用。方法 :采用实时定量反转录一聚 合酶链反应 (qRT-PCR) 方法检测 22 例食管鳞癌组织、正常食管组织、人食管癌细胞株 ECA109、TE-1 中及人食道上皮细胞株 Heep 中 miR-181a 的表达。结果 :miR-181a 在食管鳞癌组织中的表达高于癌旁正常组织,两者之间的差异有统计学意义(P ﹤ 0.001)。在 两种食管鳞癌细胞株内的表达明显高人食道上皮细胞株(p<0.001)。结论 :miR-181a 可能参与食管鳞癌的发生发展过程。

摘要： 新冠疫情的阴影笼罩全球,疫苗竞赛分秒必争。本书以生产人用疫苗所用细胞株WI-38的传奇历史为线索,讲述疫苗巨人海弗利克等科学家的研发故事。他们的发明与发现大大改变了疫苗科技,为保障亿万人的生命健康做出了贡献.

摘要： 本文探讨微小RNA-183(microRNA-183)靶向EGR1对人滑膜肉瘤细胞株SW982耐药、迁移、侵袭能力的影响.采用脂质体转染技术将microRNA-183 mimics/inhibitors/N.C转染技术上调/下调人滑膜肉瘤细胞株SW982细胞中microRNA-183的表达;采用噻唑蓝(MTT)法检测转染后24h-96hSW982细胞增值率;采用噻唑蓝(MTT)法测定转染24h、48h、72h后10μM多柔比星对SW982 滑膜肉瘤细胞抑制率.流式细胞术检测转染效率及转染前后细胞周期的改变、Annexin V-FITC/PI双染法检测转染前后细胞凋亡的影响，Transwell实验比较转染前后SW982细胞迁移、侵袭能力的变化。Western blot检测转染前后各组中EGR1含量的变化。结果表明，microRNA-183表达增加时，EGR1表达减低，SW982细胞耐药、侵袭及迁移能力均增强。因此microRNA-183可能作为致癌因素通过靶向EGR1参与调控SW982滑膜肉瘤的耐药、侵袭及迁移能力。

摘要： 目的:探索各类来源的细胞株对UVB紫外线的耐受性,为相关研究提供基础.方法:0、20、50、80和100mJ/cm2紫外线照射后,利用MTT、克隆形成率实验和荧火虫荧光底物酶检测实验,检测细胞的增殖情况和存活能力,确定各类细胞对UVB紫外线的耐受性.结果:人表皮细胞Hacat、人黑色素细胞A875、人肺腺癌细胞A549和H322、人肝癌细胞HepG2的增殖均受UVB紫外线的影响,克隆形成率和荧火虫荧光底物酶检测实验显示UVB紫外线损伤细胞的再生能力.结论:UVB紫外线对各类细胞的存活和增殖均产生影响,且和照射剂量存在关系.

摘要： 目的：探讨儿童间充质干细胞培养上清的可溶性因子对白血病细胞株K562、Jurkat、K562/AO2在细胞毒性药物处理下的保护作用.方法：从儿童急性白血病患儿骨髓中分离单个核细胞,体外培养间充质干细胞,制备间充质干细胞条件培养基,作用于白血病细胞株K562、Jurkat、K562/AO2,流式细胞仪检测白血病细胞株在多柔比星诱导的凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;荧光定量PCR检测Bcl-2、Mcl-1、COX-2基因表达量的变化.结果：K562、Jurkat、K562/AO2细胞株的MSC条件培养基组加多柔比星诱导凋亡后,细胞存活率高于只加多柔比星的对照组(P＜0.05);加MSC条件培养基后,K562、Jurkat、K562/AO2细胞株的细胞周期出现阻滞,G0-G1期细胞比例增加(P＜0.05);MSC条件培养基上调Jurkat、K562及K562/AO2白血病细胞株Bcl-2基因的表达(P＜0.05),上调K562/AO2的COX-2基因表达(P＜0.05).结论：MSC分泌的可溶性因子抑制多柔比星诱导的细胞凋亡,使白血病细胞周期停滞在G0/G1期,上调白血病细胞株Bcl-2基因的表达,上调K562/AO2的COX-2基因表达.

摘要： 为研究microRNA(gga-miR-21)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究利用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共转染293FT细胞,制备含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21.用VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得了过表达gga-miR-21的细胞株DF-miR-21,用定量RT-PCR(qRT-PCR)检测表明,gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高60％。将IBDV接种于DF-miR-21细胞,在96 h后,其病毒滴度(104.75TCID50/0.1mL)显著低于正常DF-1细胞的病毒滴度(108.75TCID50/0.1mL).用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组VP1基因中存在gga-miR-21的结合靶点。将IBDV感染的DFmiR-21细胞,用western blot分析,VP1蛋白的表达量比正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异。本实验结果表明:细胞gga-miR-21可抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上实现的。

摘要： 卵巢癌病死率为妇科肿瘤之首,已成为严重威胁妇女生命和健康的主要肿瘤.中药莪术为姜科多年生草本植物蓬莪术、广西莪术或温郁金的根茎,具有破血行气、消积止痛的功效,主治血气心痛,饮食积滞,脘腹胀痛,血滞经闭,痛经,癥瘕瘤痞块,跌打损伤等疾病。通过试验方法分析莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路的影响。实验确定了莪术醇对卵巢癌的增殖抑制及JAK2/STAT3信号通路的作用，针对莪术醇作用于以STAT为分子靶点的肿瘤治疗也将逐渐成为研究热点。另外莪术醇抑制卵巢癌增殖是否还有其它信号途径的参与，以及这些信号通路与JAK2/STAT3信号通路的相关性尚不清楚，其是否通过多靶点抑制卵巢癌尚待进一步研究。

摘要： 目的:克隆人端粒酶催化亚单位启动子(hTERTp)及癌胚抗原启动子(CEAp)的序列片段,并比较hTERT、CEA及CMV启动子在人结肠癌细胞株lovo、SW480中的启动效率。rn 方法:设计引物应用PCR法从人结肠癌基因组中克隆人端粒酶催化亚单位启动子(hTERTp)及癌胚抗原启动子(CEAp),经测序无误后,选择pLVX-EGFP-3FLAG为原始表达载体,选取酶切位点MluⅠ和XhoⅠ,联合双酶切和PCR方法切除原始载体中巨细胞病毒启动子(CMV),将上述启动子片段与pLVX-EGFP-3FLAG载体重组,构建出携带人端粒酶催化亚单位启动子(hTERTp)和癌胚抗原启动子(CEAp)的重组质粒pLVX-CEAp-EGFP-3FLAG和pLVX-hTERTp-EGFP-3 FLAG,将上述两种质粒连同原始表达载体pLVX-EGFP-3FLAG(含CMV启动子)分别瞬时转染人结肠癌细胞株lovo、SW480,检测两种细胞株的荧光表达强度。rn 结果:琼脂糖凝胶电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长度为327bp, DNA测序结果与GenBank(AN 097365)中hTERT启动子DNA序列完全一致;同样方法克隆的CEA启动子片段长度为369bp,DNA测序结果与GenBank (NT O11109)中CEA启动子DNA序列完全一致。将上述克隆片段连接到不含CMV启动子的表达载体pLVX-EGFP-3FLAG上，双酶切、PCR鉴定及DNA序列分析无误。将 pLUX-CEAp-EGFP-3FLAG , pLVX-hTERTp-EGFP-3FLAG及pLVX-EGFP-3FLAG分别瞬时转染人结肠癌细胞lovo, SW480，示:在lovo细胞中:CMV启动子的启动效率约为54.7%, HTERT启动子的启动效率约为33.0%, CEA启动子的启动效率约为9.5%;在SW480中:CMV启动子的启动效率约为16.5%, HTERT启动子的启动效率约为10.1%, CEA启动子的启动效率约为8.5%，在上述两种细胞中，三种启动子的启动效率差异有统计学意义(P<0.05)。rn 结论:在人结肠癌细胞株lovo, SW480中，CMV启动子的启动效率最高，HTER7，启动子启动效率次之，CEA启动子启动效率最低。

摘要： 本研究构建了一种高灵敏的细胞株DR-EcoScreening，运用此细胞株测定了不同废气样品，并将分析结果与HRGC/HRMS分析结果进行了对比。结果显示，DR-EcoScreening测定值与HRGC-HRMS结果具有较好的相关性，可通过换算系数进行修正，即DR-EcoScreening的测定值乘上换算系数做为样品中二噁英类毒性当量浓度的预测值，DR-EcoScreening细胞可用于对废气样品的筛查。

摘要： 目的：探讨鼻咽癌细胞化疗药物耐药基因的表达.方法：用CCK-8法分别检测HNE1/DDP(耐顺铂鼻咽癌细胞)和HNE1(鼻咽癌细胞)对顺铂的毒性试验.然后应用实时荧光定量PCR检测和比较HNE1/DDP、HNE1和NP69-SV40T三株细胞系中与化疗药物耐药相关的基因mRNA的表达情况.采用β-actin作为内参基因,耐药相关的基因检测包括二氢嘧啶脱氢酶、胸苷磷酸化酶、胸苷酸合成酶、乳清酸转磷酸核糖基转移酶、叶酸还原酶、亚甲基四氢叶酸还原酶、切除修复互补交叉基因1、表皮生长因子受体、血管内皮生长因子-A、耐药相关蛋白、肺耐药蛋白1、腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2和拓扑异构酶Ⅱα基因.应用SPSS15.0统计软件进行统计学处理,多组均数比较采用单因素ANVOA分析,P<0.05为差异有统计学意义.结论：HNE1/DDP,HNE1和NP69-SV40T都存在多种耐药基因表达，并且大多数耐药基因mRNA的表达存在明显差异。研究耐药细胞和亲本细胞以及正常细胞各种耐药基因表达之间的关系，有助于进一步研究鼻咽癌化疗耐药的机制并提高临床疗效。

摘要： 目的:探讨复方川芎嗪(Complex tetramethylpyrazine,CTMP)在肝癌多药耐药中的应用.rn 方法:采用MTT检测CTMP联合阿霉素(ADM)对肝癌多药耐药细胞(HepG2/ADM)生长增殖的影响;应用荧光显微镜分析经CTMP逆转多药耐药后细胞内ADM浓度,比较逆转后HepG2/ADM细胞细胞形态及caspase-3的激活.rn 结果:当非细胞毒性剂量的CTMP(2～16 μg/ml)作用于耐药细胞后呈显著逆转作用,逆转倍数为0.84～2.85倍;低毒剂量的CTMP作用后,逆转效果更佳,逆转倍数为3.88倍;化疗药物ADM蓄积试验中,CTMP作用后HepG2/ADM细胞内的的浓度提高1.5～2.5倍且ADM致HepG2/ADM细胞凋亡作用显著性增加,对caspase-3的激活作用提高1.51倍.rn 结论:CTMP能够增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转HepG2/ADM细胞多药耐药性.

摘要： 目的:探讨复方川芎嗪(Complex tetramethylpyrazine,CTMP)在肝癌多药耐药中的应用.rn 方法:采用MTT检测CTMP联合阿霉素(ADM)对肝癌多药耐药细胞(HepG2/ADM)生长增殖的影响;应用荧光显微镜分析经CTMP逆转多药耐药后细胞内ADM浓度,比较逆转后HepG2/ADM细胞细胞形态及caspase-3的激活.rn 结果:当非细胞毒性剂量的CTMP(2～16 μg/ml)作用于耐药细胞后呈显著逆转作用,逆转倍数为0.84～2.85倍;低毒剂量的CTMP作用后,逆转效果更佳,逆转倍数为3.88倍;化疗药物ADM蓄积试验中,CTMP作用后HepG2/ADM细胞内的的浓度提高1.5～2.5倍且ADM致HepG2/ADM细胞凋亡作用显著性增加,对caspase-3的激活作用提高1.51倍.rn 结论:CTMP能够增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转HepG2/ADM细胞多药耐药性.

摘要： 本发明提供了一种高效表达外源蛋白的CHO细胞构建方法，其中，该方法包括：克隆、重组一系列外源蛋白基因的表达质粒，该表达质粒分别逐一包含前置的13种信号肽及该外源蛋白基因；转染CHO细胞，根据表达量筛选出该外源蛋白表达量最高的前置信号肽序列，构建该信号肽序列和外源蛋白基因的表达质粒，然后转染CHO细胞，逐步筛选稳定表达外源蛋白的单克隆细胞。本发明还涉及该方法构建的高效表达外源蛋白的CHO细胞和使用该细胞表达外源蛋白的方法。本发明的方法能较常规表达显著提高蛋白表达含量，且可应用于多种外源蛋白的表达，无需对外源蛋白的基因进行优化，具有广泛的适用范围。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了杂交瘤细胞株及基于杂交瘤细胞株的抗Nodal抗体和检测肿瘤细胞方面的应用。所述杂交瘤细胞株AH12，于2014年4月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为杂交瘤细胞，保藏编号为CGMCC NO.9105。基于所述杂交瘤细胞株产生的抗Nodal的单克隆抗体，所述抗Nodal的单克隆抗体与抗Nodal的多克隆抗体组成一种新的可应用于检测肿瘤细胞的试剂盒。本发明提供单克隆抗体的类型为IgG，具有良好的特异性与较高的效价。经检测，其效价可达1:1024000，在western bolt检测中，本发明提供的抗体仅在目标位置检测到特异性条带，且在稀释2000倍后仍显示良好的特异性。所述试剂盒可以较好地用于血清中Nodal蛋白的含量检测，且具有较高的灵敏性和特异性。

摘要： 本发明公开了一种CHO细胞株及其制备方法和使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白及其应用，所述制备CHO细胞株方法包括：1)将密码子优化后的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株。所述使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法为发酵培养所述的细胞株，纯化后得到重组猪圆环病毒2型Cap蛋白。使用该CHO细胞株制备猪圆环病毒2型Cap蛋白具有可工业化生产、成本低、质控容易，且制备的蛋白具有免疫效果好的优点。

摘要： 本发明公开了一种新城疫病毒/全悬浮CHOK1细胞株及其制法和采用该细胞株制备的抗原及疫苗，所述细胞株为CHOK1‑DC005细胞株，保藏号为CGMCC No.16211。本发明使得新城疫疫苗实现了由鸡胚向哺乳动物细胞大规模培养生产的转变，这不仅简化了新城疫疫苗的生产工艺，降低生产成本，还大大提高疫苗的产量和质量。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了杂交瘤细胞株及基于杂交瘤细胞株的抗Nodal抗体和检测肿瘤细胞方面的应用。所述杂交瘤细胞株AH12，于2014年4月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为杂交瘤细胞，保藏编号为CGMCC No.9105。基于所述杂交瘤细胞株产生的抗Nodal的单克隆抗体，所述抗Nodal的单克隆抗体与抗Nodal的多克隆抗体组成一种新的可应用于检测肿瘤细胞的试剂盒。本发明提供单克隆抗体的类型为IgG，具有良好的特异性与较高的效价。经检测，其效价可达1∶1024000，在westernbolt检测中，本发明提供的抗体仅在目标位置检测到特异性条带，且在稀释2000倍后仍显示良好的特异性。所述试剂盒可以较好地用于血清中Nodal蛋白的含量检测，且具有较高的灵敏性和特异性。

摘要： 人胚肺成纤维细胞二倍体细胞株LBHEL(KCTC0127BP)对水痘带状疱疹病毒(VZV)高度易感。无细胞水痘带状疱疹病毒(VZV)是由下列步骤产生的:(a)在培养容器中培养权利要求1的人胚肺成纤维细胞二倍体细胞株LBHEL(KCTC0127BP);(b)用VZV感染培养的LBHEL细胞得到VZV感染的细胞;(c)培养和收获VZV感染的细胞;(d)破碎收获的细胞以获得细胞匀浆;和(e)离心细胞匀浆以获得含有无细胞VZV的上清液。

摘要： 本发明公开了一种细胞株相似性评价方法及相似细胞株培养基配方推荐方法。将细胞株培养、代谢等数据，采用AI技术从细胞平行实验数据中学习细胞株特征，从而量化评价细胞株的相似性，具有良好的准确性和泛化能力。利用量化的细胞株相似性，可以为相同、相似的细胞实验提供相关的历史数据参考，甚至是直接提供相关的实验指导，从而减小实验摸索范围，缩短实验时间，提高实验效率。利用细胞株相似度分析技术，进行细胞培养基配方推荐，能够直接利用历史培养基配方数据，无需格外新增培养基配方数据，效率进一步得到提升。

摘要： 本发明公开了一种永生化饲养层细胞株的构建方法、永生化饲养层细胞株及应用，本发明选择将至少两种永生化基因感染进饲养层细胞中，两种永生化基因通过不同的促进细胞永生化的途径对饲养层细胞永生化实现协同促进作用，并得到永生化饲养层细胞株，弥补了饲养层细胞永生化方法的空白，为评价药物治疗肿瘤或控制肿瘤细胞增殖效果以及确定细胞增殖或衰老机理提供了广泛的细胞资源。

摘要： 本发明公开了一种快速建立基因编辑肝癌细胞株的方法。本发明将CRISPR/Cas 9技术进行改良，通过构建表达效率更佳的重组质粒，结合快速单克隆培养，构建稳定敲除基因的肝癌细胞株。所需sgRNA通过引物合成精准获得，通过两步PCR合成插入片段装入载体，构建成用于敲除的重组质粒；经包装慢病毒后与肝癌细胞共孵育，通过慢病毒介导将sgRNA与Cas9蛋白同时等量导入肝癌细胞；对基因编辑后的肝癌细胞进行嘌呤霉素(Puromycin)抗性筛选同时进行单克隆化培养，最终快速获得基因敲除阳性的稳定肝癌细胞株。本方法为研究基因在肿瘤发生发展中的分子机理提供了重要的实验材料，对肝癌疾病的体外细胞建模提供参考。

摘要： 本发明公开了一种肺癌细胞株的基因编辑方法。本发明基于CRISPR/Cas 9技术进行改良，通过构建表达效率更佳的重组质粒，建立一种稳定敲减肺癌基因细胞株的方法。所需shRNA通过引物合成的方式可以保证精准获得，退火后作为插入片段装入改造过的CRISPR载体中，构建成用于敲减的shRNA重组质粒。经包装慢病毒后与肺癌细胞共孵育，通过慢病毒介导将shRNA导入肺癌细胞中，对基因编辑后的肺癌细胞进行嘌呤霉素(Puromycin)抗性筛选同时进行单克隆化培养，最终获得基因敲减阳性的稳定肺癌细胞株。本方法为研究基因在肺癌发生发展中的分子机理提供了新的实验材料，对肺癌的相关建模提供参考。