组织块法

摘要： 目的 比较组织块法与酶消化法对分离培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的影响.方法 选取5根足月妊娠自然分娩的健康婴儿的废弃脐带,采用组织块法和酶消化法进行原代分离培养,比较两种培养方法的细胞增殖情况,并测定其细胞表面免疫标志物.结果 hUC-MSCs的融合状况:组织块法培养的第5天,细胞从组织块内爬出,培养2周左右细胞融合率可达80％ 以上;酶消化法培养5 d后,可见少量形态不规则的细胞贴壁,培养2周后细胞融合可达40％ ～50％.hUC-MSCs的增殖情况:组织块法原代及传代后的hUC-MSCs的增殖速度远高于酶消化法,差异有统计学意义(P95％;酶消化法分离培养的P3细胞表面CD34、CD45、HLA-DR、CD105表达95％.结论 组织块法与酶消化法相比,能获得较纯的hUC-MSCs,且方法简单、成本低,是获得hUC-MSCs的理想方法.

摘要： 目的 建立一种简单高效的小鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法.方法 选取2～3周ICR小鼠,剪开胸腹腔,取距离肺边缘约1.5mm组织,剪碎成米粒状,置于含有培养液的离心管中,离心洗涤后种瓶进行原代培养.通过细胞形态学观察、细胞Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定所培养的细胞.结果 接种24h后,红细胞从贴壁的肺组织块边缘向四周游离;48h后,肺微血管内皮细胞爬出,单个细胞形态为多角形或短梭形,细胞间隙较大,胞核清晰,胞浆丰富;96h后细胞融合,呈典型的单层、铺路石样镶嵌式排列.细胞Ⅷ因子免疫细胞化学染色检测,胞质呈棕红色,表达为阳性,阳性细胞率达98％以上.结论 随机组织块法能够成功高效分离培养出原代小鼠肺微血管内皮细胞.

摘要： 鱼类细胞培养主要有组织块法和胰酶消化法,不同的鱼类细胞对培养基、pH以及温度等的要求不同.本文概述鱼类细胞的培养方法、条件以及应用研究进展,为鱼类细胞培养研究提供基本参考资料.

摘要： 背景:胎盘间充质干细胞能够为细胞治疗提供理想的种子细胞,但其培养未曾使用过胰酶冷消化法,故对此方法进行探索,并与组织块法进行比较,从中筛选出一种方便易行、培养成功率更高的方法.目的:观察胰酶冷消化法与组织块法分离培养的人胎盘间充质干细胞的生物学特性.方法:采用胰酶冷消化法和组织块法从人胎盘中分离、纯化和传代培养人胎盘间充质干细胞(n=6).记录胎盘间充质干细胞首次出现时间及原代培养周期,绘制第3代细胞生长曲线,流式细胞仪分析第3代细胞表面标志,检测其向成神经及成脂方向诱导分化能力.结果与结论:①使用上述2种培养方法均可获得胎盘间充质干细胞,胰酶冷消化法首次出现贴壁细胞时间早于组织块法(P ＜ 0.05),原代培养周期短于组织块法(P＜ 0.05);②生长曲线提示在进入平台期后的各个时间点胰酶冷消化法培养的细胞数量明显多于组织块法(P＜0.05);③2种细胞具有均一的细胞表型,均表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45;④2种方法培养的胎盘间充质干细胞经诱导后均具有成神经及成脂分化潜能;⑤上述结果表明,对于胎盘间充质干细胞的培养而言,胰酶冷消化法具有明显优势.

摘要： 背景:关于人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离培养方法的研究很多,但是如何简便、快捷获得大量原代培养间充质干细胞的问题尚未解决.目的:探讨优化人胎盘绒毛膜间充质干细胞体外分离培养组织块法的最佳方法.方法:无菌条件下,取正常足月剖宫产胎盘绒毛膜,用匀浆器处理组织块,采用组织块法贴壁分离培养人胎盘绒毛膜间充质干细胞,经初次培养的组织块进行再次接种培养.结果与结论:用电动匀浆器处理人胎盘绒毛膜省时省力,组织分散度和去除红细胞效果好.初次培养和再次培养获得细胞的平均时间分别为(17.73±1.14)d和(10.03±1.30)d.每个Φ100 mm培养皿获得的原代细胞分别为(6.97±0.98)×105个和(13.82±1.44)×105个.获得的贴壁细胞呈典型的成纤维细胞形态,呈平行或漩涡状生长,高表达CD90、CD73、CD105,而CD45、CD34、CD14、CD19、HLA-DR为阴性.细胞可向成骨、成脂方向诱导分化.结果表明优化的方法能够简便、快捷地处理人胎盘绒毛膜组织,获得大量的原代间充质干细胞.%BACKGROUND:There are a lot of studies on isolation and culture methods of human placental chorionic-derived mesenchymal stem cells (hpcMSCs), but how to simply and efficiently harvest a large amount of primary MSCs has not been resolved. OBJECTIVE:To optimize the tissue explants method of isolating and culturing hpcMSCsin vitro. METHODS:Human placental chorionic villi were collected from full-term deliveries under aseptic condition and isolated by electric homogenizer. hpcMSCs were prepared by tissue explants method. The fluid and tissue of the primary culture flask and douching normal saline of the initial culture were centrifuged and prepared for secondary culture. RESULTS AND CONCLUSION: It saved time and effort to treat human placental chorionic villi with electric homogenizer, with good effects on tissue dispersion and removal of red blood cells. The average time of cell acquisition in initial culture and secondary culture was (17.73±1.14) and (10.03±1.30) days, respectively. The yields of primary cultured cells in initial culture and secondary culture were (6.97±0.98)×105 and (13.82±1.44)×105per Φ100 mm culture dish, respectively. The adherent cells showed fibroblast-cell-like shape, which were in parallel or circinate arrangement. Highly expressed CD73, CD105 and CD90 could be detected in the third generation of hpcMSCs, but CD34, CD45, CD14, CD19 and HLA-DR were negative. Following induction, alizarin red staining and oil red O staining produced a strong reaction in cells. In a word, the optimized method is a simple and efficient method for obtaining a large amount of primary hpcMSCs.

摘要： 背景:获取高纯度、高活性的成骨细胞是进行骨代谢研究的基础.目的:探索一种简便、高效的原代成骨细胞培养方法.方法:将新生24 h内的SD大鼠,分离获取颅骨的顶骨和额骨,预先采取胰酶和胶原酶消化,再进行组织块培养的方法提取成骨细胞.通过倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态,细胞计数绘制细胞生长曲线,采用碱性磷酸酶BCIP/NBT染色和茜素红矿化结节染色进行成骨细胞鉴定.结果与结论:①细胞形态呈长梭形、三角形、不规则多边形,有两至三个细胞突起;②透射电镜下线粒体和内质网在成骨细胞中非常丰富,并且有较多细胞突起,呈现出典型成骨细胞特点;③细胞刚接种时生长缓慢,3 d后增殖加快,第7天达高峰;④碱性磷酸酶BCIP/NBT染色显著阳性,茜素红钙结节染色橘红色;⑤采用酶消化法联合组织块法提取的细胞具有典型的成骨细胞特征和功能,是一种理想的原代成骨细胞分离培养方法.%BACKGROUND:Osteoblasts with high purity and activity are essential for bone metabolism research. OBJECTIVE:To explore a simple and effective culturing method of primary osteoblasts. METHODS:Osteoblasts were isolated from the parietal and frontal bones of newborn Sprague-Dawley rats using trypsin and collagenase digestion and tissue explant method. The morphology of osteoblasts was observed by inverted phase contrast microscope and transmission electron microscope;the cells was counted to draw the growth curve;the osteoblasts were identified by alkaline phosphatase BCIP/NBT staining and alizarin red staining. RESULTS AND CONCLUSION:The cells showed spindle, triangle or polygon shapes, having two or three protrusions. There were abundant mitochondria and endoplasmic reticulum under electron microscope, which presented the typical characteristics of osteoblasts. The cell growth was slow intially, accelerating at the 3rd day, and peaking at the 7th day. The cells were highly positive for alkaline phosphatase staining and were stained orangered through the alizarin red staining. To conclude, the cells isolated using enzymatic digestion combined with tissue explant method exhibit the typical characteristics and functions of osteoblasts, and this method is an ideal way to culture primary osteoblasts.

摘要： 背景：获取高纯度、高活性的成骨细胞是进行骨代谢研究的基础.目的：探索一种简便、高效的原代成骨细胞培养方法.方法：将新生24 h内的SD大鼠,分离获取颅骨的顶骨和额骨,预先采取胰酶和胶原酶消化,再进行组织块培养的方法提取成骨细胞.通过倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态,细胞计数绘制细胞生长曲线,采用碱性磷酸酶BCIP/NBT染色和茜素红矿化结节染色进行成骨细胞鉴定.结果与结论：①细胞形态呈长梭形、三角形、不规则多边形,有两至三个细胞突起;②透射电镜下线粒体和内质网在成骨细胞中非常丰富,并且有较多细胞突起,呈现出典型成骨细胞特点;③细胞刚接种时生长缓慢,3 d后增殖加快,第7天达高峰;④碱性磷酸酶BCIP/NBT染色显著阳性,茜素红钙结节染色橘红色;⑤采用酶消化法联合组织块法提取的细胞具有典型的成骨细胞特征和功能,是一种理想的原代成骨细胞分离培养方法.

摘要： 目的 比较无血清条件下不同组织块法培养人角膜上皮细胞的出膜时间及出膜率.方法 培养方式:A组:剥除角膜内皮及刮除角膜上皮后组织块角膜上皮面向上贴壁;B组:剥除角膜内皮及刮除角膜上皮后组织块角膜上皮面向下贴壁;C组:仅剥除角膜内皮后全层组织块角膜上皮面向上贴壁;D组:仅剥除角膜内皮后全层组织块角膜上皮面向下贴壁.相差显微镜观察细胞形态学变化,对比各组出膜时间及出膜率.结果 A组:细胞爬出时间(7.00±3.00)d,出膜率47.50％ (19/40);B组:细胞爬出时间(7.55±2.58)d,出膜率45.83％ (11/24);C组:细胞爬出时间(8.43±3.32)d,出膜率63.64％ (14/22);D组:细胞爬出时间(7.49±2.20)d,出膜率72.22％ (39/54).卡方检验结果示,A组与D组、B组与D组出膜率相比,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05),余组间两两比较差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 无血清条件下不同组织块培养方式细胞爬出时间大致相同,约一周.相比较而言,仅剥除角膜内皮后全层组织块角膜上皮面向下贴壁培养法出膜率明显较高,且培养的细胞更纯、更稳定.%Objective To compare and analyze the time of cell eruption formation and the rate of cell eruption of human corneal epithelial cells cultured by different explant culture methods under serum-free conditions.Methods Explant tissues were randomly divided into A,B,C and D groups.In A group,the cornea epithelial cells were put side up after stripping corneal endothelium and scraping the corneal epithelium;in B group,the corneal epithelium was put side down after stripping corneal endothelium and scraping the corneal epithelium;in C group,the corneal epithelium was put side up after only stripping corneal endothelium;and in D group,the corneal epithelium was put side down after only stripping corneal endothelium.The morphological changes of the cells in the 4 groups were observed by phase-contrast microscope,and both aforementioned variable were recorded.Results The average time of cell eruption formation and the rate of cell eruption in A,B,C and D group was (7.00 ± 3.00) d and 47.50％ (19/40),(7.55 ±2.58)d and 45.83％ (11/24),(8.43 ±3.32)d and 63.64％ (14/22),(7.49 ± 2.20) d and 72.22％ (39/54),respectively.The chi-square test showed that there was significant difference in the cell eruption rate between A and D group as well as B and D group (all P ＜ 0.05),but there was no significant difference between the other groups (all P ＞ O.05).Conclusion The time of cell eruption formation in the four different explant culture methods was about one week in free-serum conditions.And D group has higher cell eruption rate,and pure plus stable cultured cells when compared with the other three groups.

摘要： 喜树碱是从喜树(Camptotheca acuminata Decne.)里提取的一种抗癌药物.但由于喜树中喜树碱的含量十分低,喜树碱的获取十分困难.在这个研究中,我们采用了组织块法从喜树的果实、树皮、叶片中分离筛选能够生产喜树碱的内生真菌,一共从分离得到了15株菌株.经过摇瓶发酵培养后,用TLC法与HPLC法对其菌丝体提取物进行分析,发现有1株菌株能够产生喜树碱(Camptothecin,CPT),其喜树碱产量为227 μg/L.且该菌株在常规的PDA液体培养基中易于培养、生长迅速,表明该菌是一株优良的喜树碱产生菌.

摘要： 目的:采用组织块法体外培养成年兔肌腱细胞，观察其细胞形态、生长增殖情况以及Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白的表达。方法:无菌条件下取成年新西兰白兔双侧后肢趾屈肌腱，手术显微镜下剥离、去除肌腱外膜组织，剪成组织小块，0.25%胰蛋白酶和0.1%胶原酶I消化10-15min，离心去上清，将组织小块转移到培养瓶中，贴壁后加入1mL培养液，待细胞游出贴壁生长时，再加培养液继续培养，每3d换液1次，当细胞长到80%-90%融合时按1:3传代。结果与结论:一般lOd左右细胞会从组织块游出贴壁生长，此时细胞多呈星形或不规则形，随着时间延长细胞逐渐增多，呈梭形的成纤维细胞样。传代细胞刚接种时圆形，4-6h开始贴壁并伸展为梭形，排列逐渐规则成群。从传代细胞的生长曲线可看出，前4d细胞生长较慢，为潜伏期，第5天后进人快速增殖期，7d以后进入平台期。免疫荧光法证实Ⅰ型胶原染色阳性，而Ⅱ型胶原染色呈阴性。结果表明采用组织块法可在体外成功培养成年兔肌腱细胞。

摘要： 目的：采用组织块细胞培养法进行膝骨性关节炎患者退变软骨组织的细胞培养、传代及形态特征观察.方法：6例患者标本均来源于云南中医学院第一附属医院骨科确诊为膝骨性关节炎的住院患者,行人工膝关节置换手术切出的新鲜退变软骨组织,采用组织块培养法培养原代细胞,待原代细胞长满皿底,用2.5g/L的胰蛋白酶溶液进行消化,传代细胞爬片增殖1周,用4％的多聚甲醛固定15min,进行甲苯胺蓝、阿力新蓝染色及Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、X型胶原、BFGF、MMP13免疫荧光观察.结果：原代培养第7～9天可见少量细胞散在分布于组织块周围,3周出现细胞自融,4周基本长满皿底.细胞多呈梭形或多角形,细胞核偏于细胞的一侧而贴近细胞膜.Ⅱ型胶原和Ⅰ型胶原免疫荧光均有一定的表达,BFGF、MMP13、X型胶原免疫荧光表达均较高.结论：通过组织块细胞培养法能获得一定数量的退变软骨细胞,可成功地进行传代及形态特征观察;同时提示膝骨性关节炎患者退变软骨细胞主要为成纤维样软骨细胞和肥大软骨样细胞,并伴有大量降解酶的释放.

摘要： 本发明公开了一种利用组织块贴壁法培养原代贴壁细胞的专用培养皿，包括培养皿、圆形筛和皿盖，所述圆形筛上均匀设置有筛孔，所述圆形筛的侧边设置有多个中心对称的搭杆，所述搭杆远离所述圆形筛的端部均设置有可夹在所述培养皿的侧边上的固定夹。本发明具有如下优点：可以保护组织活性，又能牢靠固定组织块，提高原代贴壁细胞活性，提高培养效率及节省时间，利于组织块固定，避免了目前方法实施过程中组织块容易脱水，固定不牢靠，爬出的原代贴壁细胞活性差，容易老化的弊端，采用搭设固定的方式通过固定夹将圆形筛固定在培养皿上，十分方便。

摘要： 本发明公开了一种利用组织块贴壁法培养原代贴壁细胞的新型培养皿，包括培养皿和圆筛，圆筛可升降设置在培养皿内，圆筛上均匀设置有多个筛孔，圆筛的中央设置有长方体的安装台，培养皿的中央固定设置有1.5mm高的限位柱，限位柱上方设置12mm的螺纹柱，限位柱的外径大于螺纹柱，安装台的顶部固定设置有5mm高的把手，安装台和把手的中央设置有与螺纹柱匹配的螺纹槽。本发明优点：可组织活性，又牢靠固定组织块，提高原代贴壁细胞活性，利于组织块固定，安装台的把手设计方便利用无菌器械对圆筛进行调整高度、拆卸和安装，设计合理，在本领域具备较好的推广前景。

摘要： 本实用新型涉及一种脐带组织块贴壁法培养固定组织块的培养瓶装置，设有培养瓶体所述培养瓶为一卧式的偏平状瓶体，所述偏平状瓶体在内部装水平设置有一孔板悬架，所述孔板悬架通过两侧边与培养瓶体的两瓶体连接成一体结构，所述孔板悬架上均匀设置有若干个圆形凹槽，所述圆形凹槽的直径为4mm，所述圆形凹槽的深度为4mm，孔板悬架在下底面与培养瓶底面高度为1mm，孔板悬架的上表面是平整的，所述培养瓶体在一侧设有瓶口，所述瓶口上设有瓶盖。

摘要： 本实用新型公开了一种组织块贴壁培养法用引流型原代培养皿，包括培养皿体、第一固定板和第二固定板，所述培养皿体的底部内壁中部固定连接有含蓄液池和引流槽的引流体，所述第一固定板的一侧开设有第一安装槽，所述第一安装槽的一侧内壁滑动连接有横板，本实用新型结构简单，通过转动手轮调节加液漏斗的高度，可以适配多种尺寸的培养皿体，适用范围广，防滑垫和支撑底座的设置保证了装置不会轻易移动，利用加液漏斗加液至培养皿的引流体后，顺引流槽流下，实现添加培养液的操作，避免了人工手抖将培养液直接滴在培养皿体的内部，对贴壁不稳的组织造成冲击，减轻了工人的工作量，增加了原代细胞的爬出率，使用方便。

摘要： 本实用新型公开了一种利用组织块贴壁法培养原代贴壁细胞的新型培养皿，包括培养皿和圆筛，圆筛可升降设置在培养皿内，圆筛上均匀设置有多个筛孔，圆筛的中央设置有长方体的安装台，培养皿的中央固定设置有1.5mm高的限位柱，限位柱上方设置12mm的螺纹柱，限位柱的外径大于螺纹柱，安装台的顶部固定设置有5mm高的把手，安装台和把手的中央设置有与螺纹柱匹配的螺纹槽。本实用新型优点：可组织活性，又牢靠固定组织块，提高原代贴壁细胞活性，利于组织块固定，安装台的把手设计方便利用无菌器械对圆筛进行调整高度、拆卸和安装，设计合理，在本领域具备较好的推广前景。

摘要： 本实用新型公开了一种利用组织块贴壁法培养原代贴壁细胞的专用培养皿，包括培养皿、圆形筛和皿盖，所述圆形筛上均匀设置有筛孔，所述圆形筛的侧边设置有多个中心对称的搭杆，所述搭杆远离所述圆形筛的端部均设置有可夹在所述培养皿的侧边上的固定夹。本实用新型具有如下优点：可以保护组织活性，又能牢靠固定组织块，提高原代贴壁细胞活性，提高培养效率及节省时间，利于组织块固定，避免了目前方法实施过程中组织块容易脱水，固定不牢靠，爬出的原代贴壁细胞活性差，容易老化的弊端，采用搭设固定的方式通过固定夹将圆形筛固定在培养皿上，十分方便。

摘要： 本发明涉及一种食管胃结合部平滑肌细胞的组织块法原代培养及鉴定方法，包括以下步骤：获取食管胃结合部的平滑肌组织肌条；将所述平滑肌组织肌条用消化液消化，得到消化后的平滑肌组织块；将所述消化后的平滑肌组织块转移至培养容器中使所述消化后的平滑肌组织块固定于培养容器底部，且相邻的所述消化后的平滑肌组织块之间的间距为0.5～1cm，培养至贴壁细胞占培养容器底部90％以上或相邻的所述消化后的平滑肌组织块之间通过新生细胞接触。本发明还提供了该平滑肌细胞的鉴定方法。本发明对食管胃结合部平滑肌细胞的组织块法原代培养方法简单、完善而有效，鉴定方法可以鉴定出平滑肌细胞特有的表型。

摘要： 本发明提供了组织块法培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞的方法，采用该方法分离细胞系生长分裂状态良好，呈现典型的铺路石状，原代细胞爬出组织块的速度较快，第三天就可以观察到有细胞爬出组织块生长，第四天就可以在显微镜视野中观察到每块组织块周围都有较多的细胞爬出组织块，第五天就可以在显微镜视野下观察到大片的的细胞团围绕在组织块周围，此时进行第一次传代培养。所构建的长江三角洲白山羊毛囊干细胞系活力旺盛、毛囊干细胞标记物阳性率高，可为研究皮肤细胞基因表达与通路调控，皮肤附属结构的生长与分化机制，尤其是皮肤主要细胞间的相互作用机制研究提供良好的实用模型。

摘要： 本发明涉及一种食管胃结合部平滑肌细胞的组织块法原代培养及鉴定方法，包括以下步骤：获取食管胃结合部的平滑肌组织肌条；将所述平滑肌组织肌条用消化液消化，得到消化后的平滑肌组织块；将所述消化后的平滑肌组织块转移至培养容器中使所述消化后的平滑肌组织块固定于培养容器底部，且相邻的所述消化后的平滑肌组织块之间的间距为0.5～1cm，培养至贴壁细胞占培养容器底部90％以上或相邻的所述消化后的平滑肌组织块之间通过新生细胞接触。本发明还提供了该平滑肌细胞的鉴定方法。本发明对食管胃结合部平滑肌细胞的组织块法原代培养方法简单、完善而有效，鉴定方法可以鉴定出平滑肌细胞特有的表型。

摘要： 本实用新型属于细胞培养领域，具体公开了一种组织块法培养原代干细胞的装置，包括培养筒和堆叠放置在培养筒内的培养皿，培养筒内设置支撑板，支撑板两端安装拉杆，培养筒上端套设密封盖，密封盖中部透气口内覆盖第一透气膜；培养皿侧面开设有条形透气槽，条形透气槽外部覆盖第二透气膜；皿盖顶面设置定位环，培养皿底面设置定位套环。本实用新型便于进行多组干细胞培养，利用培养皿底面的定位套环套接在皿盖上的定位环上，保证堆叠的稳定性；支撑板用于将堆叠后的培养皿整体送入培养筒或从培养筒内整体取出，操作方便；第一透气膜和第二透气膜均为PTFE组培膜，在保证空气交换的条件下，可以避免细菌以及病毒进入培养装置内，防止污染。