线粒体DNA突变

摘要： 目的通过对213例耳聋患者和120例正常对照进行线粒体12S rRNA突变筛查后,发现2个携带线粒体A1555G突变的聋病家系,并对其进行临床和分子遗传学评估,探讨耳聋的分子机制。方法使用PCR对2个耳聋家系的母系成员进行线粒体基因组的扩增并进行Sanger测序,测序结果与线粒体标准序列比对,筛选突变位点。同时对突变进行保守性分析、tRNA二级结构分析,评估突变的致病性。结果2个耳聋家系有较高的外显率,分别为66.6%和62.5%,明显高于其他携带A1555G突变的耳聋家系。线粒体基因组测序分析后发现存在12S rRNA A1555G,tRNAThr A15924G和G15927A突变,分别属于东亚线粒体单体型B4cl和B5b。A15924G和G15927A突变位于tRNAThr反密码子环,在进化上高度保守,突变可能影响tRNAThr的二级结构和功能,从而导致线粒体功能缺陷。未发现其他有功能学意义的突变位点。结论线粒体tRNAThrA15924G和G15927A可能是耳聋有关的继发性突变位点,通过影响tRNAThr的代谢并加重A1555G突变引起的线粒体功能损伤,进而增加耳聋的外显率和表现度。

摘要： 肾小球滤过液重吸收过程能量消耗很高,因此肾脏细胞富含线粒体。线粒体和细胞核基因突变均可导致线粒体病。线粒体DNA突变相关线粒体功能障碍可导致多种病变,包括肾小管疾病(如Fanconi综合征及各种电解质紊乱)、慢性间质性肾炎和肾小球疾病(如局灶节段性肾小球硬化)等,部分患者可进展为终末期肾病。这些病变的根本机制仍未完全明确,更好地理解其分子机制对于提高疗效、改善预后至关重要。

摘要： 对41例女性乳腺癌患者带毛囊毛发线粒体DNA的编码区ATP基因(ATP6和ATP8)进行测序,对比45例正常人群线粒体DNA基因序列,采用统计学分析软件筛选具有统计学差异的突变位点,共检测到ATP基因突变位点25个,其中在ATP6亚基上共发现18个(72％)基因突变,其中8584G-A、8701A-G、8794C-T、8860A-G、8865G-A、8964C-T、9053G-A、9180A-G位点具有统计学差异(P<0.05);ATP8亚基上发现7个(28％)基因突变,其中8414C-T具有统计学差异(P<0.05).结果表明,ATP基因突变与乳腺癌具有显著相关性,ATP基因突变可作为一种潜在的特异性分子标记,对乳腺癌早期诊断具有重要意义.

摘要： 线粒体功能障碍会导致ATP的生成减少,活性氧的产生增加,被认为是血管内皮损伤的触发因素之一。许多因素与线粒体功能障碍有关,如线粒体DNA突变、线粒体融合与分裂失衡、线粒体自噬受损等。本文综述了线粒体的质量控制过程和线粒体功能障碍在血管内皮损伤中的作用机制,以期为动脉粥样硬化的有效防治提供新的思路。

摘要： 卵巢癌发病率呈逐年上升趋势,死亡率位于女性生殖道恶性肿瘤之首.早期诊断是改善预后,提高长期生存率和生活质量的重要途径.但是,目前用于卵巢癌早期诊断及治疗监测的方法仍不能获得满意的效果.线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)具有基因组小、突变率高、拷贝数高等特点,且与肿瘤的发生发展关系密切,故检测mtDNA变异有望在卵巢癌中发挥重要作用.本文综述了近年来卵巢癌中mtDNA变异检测的进展,以及mtDNA作为生物标志物在卵巢癌早期诊断、鉴别诊断、肿瘤进展监测以及化疗药物耐药性分析等方面的作用.

摘要： 目的:研究视网膜神经纤维层(RNFL)厚度变化与11778位点突变的Leber遗传性视神经病变(LHON)患者远期视功能的相关性,以及早期RNFL厚度对远期视功能的预测价值.方法:回顾性分析经mtDNA检查确诊为11778 G>A/ND4位点突变的LHON患者23例44眼,以病程30mo远视力0.5(LogMAR)为标准将患者分为两组,先得到两组患者各预定时间点(病程)的RNFL厚度均值并对比获得备选的RNFL预测界值,再以备选界值为标准,将不同RNFL厚度的患眼分为两组进行统计分析,判断该界值能否用于预测远期视力和视野,最终选定能同时评估远期视力和视野的最早界值为目标界值.结果:根据RNFL厚度均值的分布获得备选界值为:病程2mo 130μm,病程4mo 100μm,病程8mo 80μm,病程12mo 65μm,分析发现病程8mo时RNFL厚度是否超过80μm对远期视力的区分更佳,且对远期视野平均缺损(MD)及平均敏感度(MS)值均有很好的区分(P80μm的患眼中,31％患眼远期视力优于LogMAR 0.1(相当于小数视力0.8),仅34％患眼为远期低视力,且RNFL>80μm的患眼视力和视野均显著优于RNFL≤80μm.结论:病程8mo时RNFL厚度是否超过80μm可作为判断远期视力和视野的最佳预测界值,该界值对11778位点突变的LHON患者的远期视力、视野均有良好的预判性.

摘要： 目的:探讨tRNALeu(CUN)12308A>G突变是否影响Leber遗传性视神经病变(LHON)的表型表达.方法:对295例无血缘关系的汉族LHON患者和316例正常对照者进行线粒体突变基因筛查,并对筛出的3个携带m.12308A>G突变并具有典型LHON临床表现的家系进行线粒体全序分析、单体型分析以及拷贝数的测定.结果:3个家系均不携带主要原发突变位点,但在tRNALeu(CUN)上高度保守的44位发生了m.12308A>G同质性突变,且3个先证者的单倍体型均属于东亚单倍体型H2,但发病年龄和视力损伤程度有所不同,并在正常对照者中未检出m.12308A>G突变.在拷贝数测定中发现突变细胞的线粒体拷贝数明显减少.结论:m.12308A>G突变可能是与LHON相关的突变位点,但突变本身并不足以造成LHON的表型表现,其他修饰因子(核基因修饰、线粒体单体型及环境因素)在LHON的发病进程中发挥了一定的作用.

摘要： 目的:探讨tRNA^Leu(CUN)12308A>G突变是否影响Leber遗传性视神经病变(LHON)的表型表达。方法:对295例无血缘关系的汉族LHON患者和316例正常对照者进行线粒体突变基因筛查,并对筛出的3个携带m.12308A>G突变并具有典型LHON临床表现的家系进行线粒体全序分析、单体型分析以及拷贝数的测定。结果:3个家系均不携带主要原发突变位点,但在tRNA^Leu(CUN)上高度保守的44位发生了m.12308A>G同质性突变,且3个先证者的单倍体型均属于东亚单倍体型H2,但发病年龄和视力损伤程度有所不同,并在正常对照者中未检出m.12308A>G突变。在拷贝数测定中发现突变细胞的线粒体拷贝数明显减少。结论:m.12308A>G突变可能是与LHON相关的突变位点,但突变本身并不足以造成LHON的表型表现,其他修饰因子(核基因修饰、线粒体单体型及环境因素)在LHON的发病进程中发挥了一定的作用。

摘要： 地中海贫血是一种常染色体隐形遗传病,线粒体DNA突变可能参与其中.多数临床研究显示地中海贫血可出现贫血,甚至死亡,严重程度与基因的缺失水平有关.积极进行输血及药物治疗是目前治疗地中海贫血的策略.本文就近年来线粒体DNA突变参与地中海贫血的发病机制进行综述,期望可为以后的地中海贫血研究提供新思路.

摘要： 本发明公开预测线粒体DNA突变阈值、生育风险和取卵数的方法，包括以下步骤：先建立线粒体突变发病概率预测模型并估算突变阈值s，再建立生育风险预测模型并预测突变携带者的生育风险p，然后利用二项分布建立卵母细胞提取预测模型并计算突变携带者的PGT取卵数；本发明使用发病概率预测模型估算常见mtDNA突变的阈值，并预测母亲的生育风险和PGT取卵数，在建立的生育风险预测模型和取卵预测模型的基础上，只需要知道突变携带者的线粒体DNA突变比例就可以计算其生育风险与生育一个健康子代所需的最小PGT取卵数，有助于临床医生对携带mtDNA异质突变的家庭进行遗传管理并提供遗传咨询，并提供PGT的标准指南。

摘要： 本发明涉及一种Leber遗传性视神经病变线粒体DNA基因突变的检测引物、试剂盒和检测方法。本发明基于Sanger测序的原理，具有高度的敏感性、稳定性和准确性的特点，可以同时检测LHON mtDNA最常见的四个致病突变，解决了现有检测LHON线粒体DNA突变方法的灵敏度低和特异性不够强、容易污染和费用昂贵等问题，为LHON提供了一种精准的基因诊断方法，对该病的遗传咨询和基因治疗有重要意义。

摘要： 本发明属于基因组学技术领域，具体为一种利用高通量测序精确测定线粒体DNA高频和低频突变的方法。本发明通过设计一组线粒体DNA特异的引物，采用滚环复制从总DNA中富集线粒体DNA，并通过特定的限制性内切酶进一步富集线粒体DNA，然后构建测序文库并进行高通量测序，并开发特定的数据分析流程，从而达到测定线粒体基因组中高频率及低频率变异的目的。其最低可检测频率低至0.3%的突变位点。

摘要： 本发明公开预测线粒体DNA突变阈值、生育风险和取卵数的方法，包括以下步骤：先建立线粒体突变发病概率预测模型并估算突变阈值s，再建立生育风险预测模型并预测突变携带者的生育风险p，然后利用二项分布建立卵母细胞提取预测模型并计算突变携带者的PGT取卵数；本发明使用发病概率预测模型估算常见mtDNA突变的阈值，并预测母亲的生育风险和PGT取卵数，在建立的生育风险预测模型和取卵预测模型的基础上，只需要知道突变携带者的线粒体DNA突变比例就可以计算其生育风险与生育一个健康子代所需的最小PGT取卵数，有助于临床医生对携带mtDNA异质突变的家庭进行遗传管理并提供遗传咨询，并提供PGT的标准指南。

摘要： 本发明公开了一种线粒体DNA A1555G和C1494T突变的荧光PCR检测试剂盒及检测方法，包括有PCR反应液、酶系、阴性对照和阳性对照，所述CR反应液规格为6孔每条，每孔21uL，6(A、B、C、D、E、F)孔中分别含A1555G‑AA型引物探针、A1555G‑GG型引物探针、C1494T‑CC型引物探针、C1494T‑TT型引物探针及dN(U)TPs、Buffer、Mg2+、dNTP和ddH2O，本发明涉及生物技术领域。本发明，以人线粒体12S rRNA基因A1555G、C1494T位点为检测对象，通过特异引物的优化组合以及荧光探针，通过荧光定量PCR反应，使试剂盒可以快速、简单同时分析人线粒体12S rRNA基因A1555G、C1494T位点的基因型。

摘要： 本发明涉及线粒体DNA分子检测领域，特别涉及用于检测人类线粒体DNA删除突变及耗竭的引物对、试剂盒及其方法。用于检测人类线粒体DNA删除突变及耗竭的引物对，引物对的正向引物位于线粒体重链复制原点的正负300bp范围内，反向引物位于线粒体重链复制原点区段内。本发明巧妙地将长程PCR的两条引物均设计在人类线粒体DNA的重链复制原点邻近区域，避免了因为引物落入删除区域而导致漏检的问题；本发明的扩增区域长达16397bp，几乎扩增整个环形线粒体DNA，可覆盖环形线粒体DNA上几乎所有可能的删除类型，形成了一种检测范围广、灵敏度高、操作快速简单、成本低廉的人类线粒体DNA删除突变及耗竭的检测方法。

摘要： 本发明公开了基于mitoTALENs的iPSCs线粒体DNA突变位点的修复方法，本发明的方法选择性强，修复效率高，脱靶率低，可以成功利用到MELAS患者特异来源的诱导多能干细胞MiPSCs。

摘要： 本发明公开了一种基于二代测序技术的游离线粒体DNA突变检测技术，主要包括以下步骤：1)制备cfDNA单链测序文库，2)mtDNA捕获，3)数据分析。本发明与现有技术相比的优点在于：针对游离mtDNA片段化程度高，突变频率低的特征，在NGS中富集游离mtDNA序列信息，解决其低频突变检测假阳性问题，克服NUMT对于突变检测的干扰，实现游离线粒体DNA突变的精准检测。

摘要： 本发明公开了一种用于检测线粒体DNA的D‑环区94G>A突变的核酸组合及其应用和试剂盒，本发明涉及DNA检测技术领域。本发明提供的用于检测线粒体DNA的D‑环区94G>A突变的核酸组合，其包括用于在ddPCR反应体系中扩增目标片段的SEQ ID NO:1‑2所示的引物对、3’端均标记有MGB基团的SEQ ID NO:3所示的野生型检测探针和SEQ ID NO:4所示的突变型检测探针，该核酸组合针对线粒体DNA的D‑环区94G>A突变位点设计，并结合ddPCR技术和MGB基团，可对线粒体DNA的D‑环区94G>A突变进行检测，具有灵敏度高、特异性好的特点。

摘要： 本发明涉及一种Leber遗传性视神经病变线粒体DNA基因突变的检测引物、试剂盒和检测方法。本发明基于Sanger测序的原理，具有高度的敏感性、稳定性和准确性的特点，可以同时检测LHON mtDNA最常见的四个致病突变，解决了现有检测LHON线粒体DNA突变方法的灵敏度低和特异性不够强、容易污染和费用昂贵等问题，为LHON提供了一种精准的基因诊断方法，对该病的遗传咨询和基因治疗有重要意义。