糖肽

摘要： 糖基化是生物体中最普遍的蛋白质翻译后修饰之一,与许多重大疾病的发生和发展密切相关。糖肽是聚糖与多肽结合形成的缀合物,其生物学功能是由聚糖结构和多肽序列的协同作用来实现的。由于糖肽的复杂性和难以获得性,目前对于糖肽相关的药物研究甚少。虽然聚糖合成与多肽合成均已取得了重要进展,但是复杂糖肽的高效合成技术仍严重缺乏,限制了糖肽的生物学功能研究及相关药物的开发。

摘要： 随着食品领域的研究越来越深入,对具有生物活性、功能性成分的糖蛋白(肽)的分析及构效研究成为深化加工技术、提高产品附加值、保证食品安全的一个重要切入点。糖肽在许多生理过程中起着重要的作用,然而,由于糖肽结构的复杂性,其结构的表征仍然是一个需要研究的领域。串联质谱法为糖肽上的多肽和寡糖组成的鉴定提供了高灵敏度的结构信息。寡糖的结构不同于多肽,存在大量的糖苷键和分支,这种复杂性使寡糖的分析不同于肽的分析。总结了常用的串联质谱用于糖肽结构鉴定的碎片化方法原理以及在糖肽的谱图解析方法,并介绍了质谱分析数据软件以及糖肽结构数据库。期望借鉴生物、化学等学科的先进分析技术为食品原料重要成分的鉴定、构效关系研究拓展思路、提供方法。

摘要： 本文采用水提醇沉法提取美洲大蠊糖肽粗品(Periplaneta Americana glycopeptide,PAG),通过HP-20大孔树脂脱色处理PAG得脱色美洲大蠊糖肽(PAGW),DEAE-琼脂糖凝胶FF分离纯化PAGW继续得到六个组分。采用MTT法测定各个组分对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响;苯酚-硫酸法及福林酚法测定PAGW中多糖和多肽的含量;PMP及OPA柱前衍生化法测定PAGW单糖和氨基酸的组成。结果显示:给药浓度范围内,PAG及PAGW随着浓度增加,均可显著升高RAW264.7的增殖活力,PAGW对其增殖率影响较好,经DEAE-琼脂糖凝胶FF洗脱的6个组分整体增殖率低。PAGW的多糖含量为21.24%,蛋白含量为76.35%,多糖由甘露糖、盐酸氨基葡萄糖等8种组成,其多肽由天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、等10种氨基酸组成。结果可为美洲大蠊糖肽免疫调节活性的深入研究提供参考。

摘要： 为了拓展蛋白质的应用范围,常对蛋白质进行改性,其中转谷氨酰胺酶(TGase)催化的酶法糖基化反应已应用于多种蛋白质/多肽的改性中。为了对蛋白质/多肽的酶法糖基化技术的广泛应用提供参考,简述了TGase的来源、催化的反应类型和底物类型,重点阐述了糖基化蛋白/多肽糖基化程度的评价方法以及修饰产物功能性质的变化。目前,TGase主要来源于微生物,其可催化底物的交联、酰基转移(酶法糖基化)和脱酰基3种类型的反应。在TGase催化的酶法糖基化反应中,常用RP-HPLC、邻苯二甲醛(OPA)法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法评价糖基化程度。通过酶法糖基化反应,可以不同程度地改善底物的溶解性、乳化性、热稳定性等功能性质。TGase催化的酶法糖基化反应还存在反应体系复杂、糖基化效率低等问题,需要进一步研究解决。

摘要： 翻译后修饰是蛋白质组学研究的前沿和重点,它不仅调节着蛋白质的折叠、状态、活性、定位以及蛋白质间的相互作用,也能帮助科学家更全面地了解生物体的生命过程,为疾病的预测、诊断和治疗提供更加强大的支撑和依据.翻译后修饰产物(例如磷酸化肽和糖肽)丰度很低,且存在着强烈的背景干扰,很难直接用质谱进行分析,因此迫切需要开发高效的富集材料和技术来选择性富集翻译后修饰产物.近年来,智能聚合物基材料通过外部物理、化学或生物刺激可逆地改变其结构和功能,实现对磷酸化肽和糖肽高度可控的吸附和脱附,进而衍生开发出一系列新颖的富集方法,极大地吸引研究者们的兴趣.一方面,智能聚合物基材料的响应变化包括材料疏水性的增加或减少、形状和形貌的改变、表面电荷的重新分布以及亲和配体的暴露或隐藏等特性.这些特性使得目标物和智能聚合物基材料之间的亲和力可以通过简单改变外部条件(如温度、pH值、溶剂极性和生物分子等)实现更可控和更智能的精细调节.另一方面,智能聚合物基材料为集成功能模块提供了便捷的可扩展平台,例如特定的识别组件,显著提高了目标物质的分离选择性.智能聚合物基材料在分离方面展现出巨大的潜力,这为蛋白质翻译后修饰产物的分析和研究带来了希望.围绕上述主题,该文依据Web of Science近20年来近50篇代表性文献,概述了智能聚合物基材料在磷酸化肽和糖肽分离及富集中的发展方向.

摘要： 蛋白糖基化是生物体中普遍发生且重要的生物学过程,其参与多种分子生物学的功能和途径,是临床诊断重要的生物标志物.但是,糖肽因其丰度低、离子化效率低、糖链异质性等难点,使糖蛋白分析一直面临巨大的挑战.因此,研究合成了一种新型的两性离子双功能化纳米金(AuGC)修饰的超亲水性沸石咪唑骨架(ZIF-8)纳米复合材料(AuGC/ZIF-8),并建立了亲水相互作用色谱(HILIC)和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)联用选择性富集糖肽的分析方法.谷胱甘肽和半胱氨酸双功能化的协同作用,使MOF具有超亲水性和低空间位阻,为糖肽选择性富集提供了更多的亲和位点.研究以辣根过氧化物酶(HRP)为模式糖蛋白,通过AuGC/ZIF-8富集后,MALDI-TOF MS分析.结果 表明,AuGC/ZIF-8对HRP糖肽的富集能力高达250 μg/mg,且在与牛血清白蛋白(BSA)混合溶液中(HRP-BSA(1∶200,质量比))显示出对HRP糖肽的高选择性,以及极低含量下(0.3ng/μL)的高灵敏度.因此,在复杂生物样品糖蛋白的富集分离中具有很大的应用潜力.

摘要： 蛋白质糖基化是生物体中最重要的翻译后修饰手段之一,糖蛋白/糖肽的有效分离和富集成为目前糖蛋白组学研究的首要问题.对于复杂的生物样本,糖蛋白的数量较少,酶解后大量高丰度非糖基化修饰肽的存在,使得低丰度糖肽的检测更加困难.因此,需要一些手段来有效地富集糖肽以提高其检测丰度,发展高选择性的糖肽富集材料及方法就成为在分子水平上有效地监测糖蛋白或糖肽的重要途径.相对于传统的糖肽富集材料,共价有机骨架材料具有比表面积大和可修饰位点丰富的优点,在糖肽富集领域具有很大的应用潜力.该文制备了一种新型的共价有机骨架材料(O-T-D-COFs),利用1,3,5-三(4-氨苯基)苯和2,5-二甲氧基苯-1,4-二甲醛作为反应单体通过共聚缩合反应生成的席夫碱构成了材料的框架,对合成后的中间体材料进行氧化处理,从而提高材料的富集性能.利用扫描电镜、透射电镜、红外光谱和固体核磁等表征技术对材料的结构进行了表征,并将其应用于糖肽的选择性富集.分别对富集过程的上样条件、淋洗条件、洗脱条件进行了优化,结合质谱检测技术,从人血清免疫球蛋白G酶解液中观察到32个明显的糖肽信号峰.通过模拟复杂样本体系验证材料富集选择性,在人血清免疫球蛋白G和牛血清白蛋白的酶解液混合物摩尔比达到1:50时,该材料仍然保持了良好的选择性.此外,还考察了材料的检测限、富集容量、回收率等富集性能,及在实际样品中的应用潜力.以人血清免疫球蛋白G为评价对象,O-T-D-COFs具有较低的检测限(2.5 fmol/μL)、较高的富集容量(120 mg/g),及较好的富集回收率(103.5％ ±6.6％、101.5％±10.4％).在血清样品中富集到来自46个N-糖蛋白中的73个N-糖肽序列,并鉴定到了81个N-糖基化位点.这些结果都表明,该材料在糖肽富集领域有较好的应用前景.

摘要： 糖蛋白的分离和鉴定对研究其生物功能、筛选生物标记物和研发新型生物药等具有重要的意义.由于生物样品成分复杂多样,以及糖蛋白较低的丰度,使得糖蛋白的分离和鉴定十分困难,因此,发展高效的糖肽富集方法非常重要.新型二维材料氮化石墨烯(C2N)具有高比表面积、良好的亲水性和丰富的氮,为糖肽富集提供了可能.本研究制备了C2N材料用于糖肽的选择性富集.所合成的C2N孔径为2.5 nm,比表面积为633 m2/g.基于C2N的糖肽富集方法具有高选择性(能从糖蛋白与牛血清白蛋白质量比为1:200倍的酶解液中选择性富集糖肽)、高吸附量(150 mg/g)和高回收率(82.2％±7.0％)等特点.将此方法应用于100μg HeLa细胞裂解液的3个技术重复样品的鉴定,分别得到来源于328、320和316条糖肽的339、353和327个糖基化位点.本研究为糖蛋白组学提供了新的技术,也为潜在肿瘤标记物的发现奠定了方法学基础.

摘要： 蛋白质糖基化作为最重要的翻译后修饰之一,在生物体诸如细胞信号转导、蛋白质翻译调控、免疫应答等诸多生命过程中发挥重要作用.此外,蛋白质的异常糖基化还与肿瘤等疾病的发生发展密切相关,这为以糖蛋白为目标的疾病生物标志物的发现提供了可能.尽管质谱已经成为糖蛋白质组学的重要分析工具,但糖肽的低丰度和低电离效率使得其直接质谱分析仍面临挑战.在糖蛋白质组学研究中,从复杂的生物样品中富集糖蛋白和糖肽是重要的环节.磁性固相萃取(MSPE)是一种操作简单、成本低和萃取效率高的样品预处理方法.在磁性固相萃取中,磁性吸附剂是影响萃取效果的关键,将功能化磁性纳米材料作为吸附剂进行糖蛋白质组学研究已经得到广泛应用.该文综述了糖分子、离子液体、凝集素、硼酸亲和配体、金属有机框架、共价有机骨架等功能化磁性纳米材料的制备及其在糖蛋白及糖肽富集中的应用.上述功能化磁性纳米材料具有高比表面积、大量作用位点等特点,其富集机理包括亲水相互作用色谱、凝集素亲和作用色谱、硼酸化学法和肼化学法等,主要应用于血清、血浆、细胞、组织、唾液等样品的糖蛋白和糖肽的富集.该文引用了近十年来发表的约90篇源于科学引文索引(SCI)与中文核心期刊的相关论文,并于文末对磁性纳米材料在糖蛋白和糖肽富集领域的发展趋势进行了展望.

摘要： 为深入了解O-糖链对澳洲坚果糖肽结构和性质的影响,先从澳洲坚果油粕粉中分离纯化澳洲坚果糖肽(macadamia glycopeptide,MGP)、β-消除法脱糖链获得多肽(macadamia glycopeptide peptide,MGPP)后,用Tricine-甘油SDS-PAGE测定其分子质量;比较去糖基化前后糖肽的二级结构、热变性温度、空间结构的差异;采用3种方法(DPPH自由基的清除率、·OH清除率、还原能力)考察了MGP和MGPP的体外抗氧化活性.结果表明,MGP和MGPP都为均一组分,分子质量分别约为12 kDa和9 kDa;糖苷键为O型;β-消除反应后肽链二级结构中α-螺旋、β-折叠减少,热变性温度降低,空间结构变得杂乱无序,抗氧化活性显著降低.综上所述,O-糖基化会影响MGP二级结构和空间结构,从而影响肽链的热稳定性和抗氧化活性.

摘要： 本工作以磁性纳米颗粒为基质，采用层层自主装技术，在纳米颗粒表面逐层包覆透明质酸和壳聚糖，制备了包覆多层多聚糖的亲水性磁性纳米颗粒。该方法制备条件温和、操作简便、多糖聚合物层厚度可控、极大提高了材料表面糖单元的单位键合量。对糖肽富集具有高选择性、高富集容量、高回收率和高检测灵敏度，并成功用于鼠肝糖蛋白质组学研究。

摘要： 目的：探讨从海洋软体动物文蛤提取物中的糖肽MGP0501(MeretrixmeretrixGlycoPeptide)的体外抗癌活性.方法:文蛤粗提液经超滤,离子交换和SuperdexG75凝胶色谱纯化得到MGP0501.以溴化二苯偶氮盐(MTT)比色法分析MGP0501对体外培养的癌细胞的抑制作用和稳定性研究.结果:MGP0501对体外培养的人肺癌细胞株(A549),卵巢癌细胞株(HO8910),宫颈癌细胞株(Hela),鼻咽癌细胞株(KB),肝癌细胞株(SMMC-7721)生长均有很强的抑制作用,并且对鼠源性癌细胞株(B16)有更强的抑制作用,并呈量效关系.MGP0501有很好的温度稳定性,中性条件下抗肿瘤活性最强.结论:MGP0501具有稳定的、广谱的抗癌活性.

摘要： 本文介绍了几种重要的具有生物活性的糖肽的合成工艺方法,对于治疗人类的疾病,如抗癌,抗病毒等方面有重要的作用.

摘要： 蛋白质糖基化修饰是一种常见而又重要的蛋白质翻译后修饰,在很多生命活动中起到关键的作用.1然而,由于糖蛋白或糖肽的低丰度、低离子化效率以及生物样品的基质复杂性,开发高选择性富集糖蛋白或糖肽的方法在生物样品的糖蛋白组学分析中至关重要.本文制备了一种机械性能好、酸稳定性好的壳聚糖微球(Chitosan microspheres,CSMs),该微球的制备方法是在壳聚糖碱性溶液中以环氧氯丙烷为交联剂,不会对壳聚糖的亲水性造成破坏.还结合在线数据库分析了鼠脑糖肽的糖基化位点的基序组成和每个糖蛋白中的糖基化位点个数。此外，壳聚糖微球用于萃取糖肽的平衡时间特别短，所以单个萃取流程的时间只需5min，远短于之前报道的很多相关工作。总之，本文制备的壳聚糖微球对糖肽的萃取性能良好，可用于大规模的深入的糖蛋白组学分析。

摘要： 本文引入磁性MOF材料Fe304@PDA@Ui0-66-NH2，简便合成，其较大的比表面、良好亲水性，而且通过锆离子与磷酸化肽的紧密结合以及氨基与糖肽的亲水相互作用，使得其对磷酸化肽检测限达20amol/μL，糖肽检测限达200amol/μL，对非磷酸化肽段的选择性达1：500（质量比），对非糖肽的选择性达1：100（质量比），可直接从人体血清中检测到4条内源性磷酸化肽，以及307条氮端糖肽对应于121种不同的糖蛋白。在富集糖肽方面起到了巨大的进展，有着出色的灵敏度(200amol/μL)和选择性(HRP/BSA(1/100))，期望在实际生物应用上提供一个高效富集低丰度磷酸化肽／糖肽的广袤前景。

摘要： 采用了一个非常简单的一步修饰法，成功地将苯硼酸基团修饰到了磁性微球上，利用硼酸基团和糖之间的作用来选择性富集生物样品中的糖基化肽段，随后采用了MALDI-TOF MS对洗脱液进行了分析。利用HRP酶解液和IgG酶解液对材料的富集能力进行了表征，在效果测试中，分别富集到了33条源自HRP的糖肽片段和31条IgG糖肽片段，对HRP酶解液的检测限达到了1fmol/μL，与BSA酶解液的选择性达到了1：120 (w/w)。随后，对健康人血清酶解液进行富集，利用NanoLC-ESI-MS对洗脱液进行分析，单轮实验富集到273条糖基化肽段，鉴别到了131个糖蛋白。说明此材料具有较好的富集效果与应用前景。

摘要： 结合磁性石墨烯(MagG)材料超大比表面、快速磁性分离等特点和葡萄糖特异性亲和糖肽的特点，首次设计合成了磁性石墨烯表面包覆聚（二烯丙基二甲基氯化铵）和纳米金颗粒并修饰葡萄糖的纳米复合材料(MagG/PDDA/Au/Glc)，应用于糖基化肽段的分离富集。大比表面积的磁性石墨烯材料通过聚（二烯丙基二甲基氯化铵）的静电吸附作用负载纳米金颗粒，再结合金—硫键相互作用在材料表面充分修饰了巯基化的葡萄糖，形成了具有很好亲水性的纳米复合材料，对于复杂生物样品中的糖基化肽段具有选择性富集作用。材料具有较好的选择性，重复性，对于标准蛋白HRP酶解液中的糖基化肽段的检测限可达0.25fmol/μL，检测绝对量达到Ing，并在健康人血清样品中成功富集到431条糖基化肽段，归属于114个糖基化蛋白质，对于蛋白质糖基化的全面研究表现出很好的应用潜力。

摘要： 高选择性糖肽富集方法的发展是糖蛋白组学中的难点问题,对研究疾病发生机理、发现疾病标记物及开发新药具有重要意义.受启示于凝集素对糖蛋白的特异性识别取决于凝集素特定的几何结构、高度多价性和肽与糖之间的氢键作用,在响应性聚合物主链中引入单糖、二糖或二肽组合的功能单元,设计和制备了相应的响应性聚合物材料.这些材料能将唾液酸与其他的羧基酸类分子区分开，展现了很好的特异性。这种特异性识别源于唾液酸与单糖／二糖间的多氢键作用以及唾液酸本身的独特结构。同时，糖或糖肽与材料作用时，引起聚合物链“线-球”构象变化和材料宏观性能（如表面浸润性和硬度）的改变。法选择性更高选择性、吸附量更大和可控性更好。智能聚合物材料的引入为糖肽的富集和分离提供了一种新方法、新思路。

摘要： 糖蛋白中的寡糖在疾病早期诊断、药物新靶点发现等方面所表现出的广阔应用前景，使得寡糖结构表征成为糖生物学研究的一项重要研究内容。寡糖高效分离方法对于寡糖结构分析至关重要，同时也是糖生物工程的质量控制得以顺利实施的重要保障，更是分离科学中的一个难点问题。

摘要： 糖蛋白质组分析中首要的工作就是将糖蛋白从非糖蛋白中选择性的富集出来。凝结素亲和色谱是当前选择性富集糖蛋白的主要方法，但是它仍有一些不足，比如为完成一个复杂样品的分析需要使用多种凝结素亲和色谱柱。本文以辣根过氧化物酶及其酶解产物验证了制得的整体柱的性能。

摘要： 本发明公开了一种灵芝活性成分多糖肽、多糖肽对照品及多糖肽分离纯化方法，将灵芝粉碎、水浸泡提取获得灵芝水提取液，通过净化处理经分子量级的膜分离，采用10KD透析膜所截留的高分子量透过液，经乙醇梯度分离，Bio‑GL，P‑10柱色谱分离，纯化获活性物质多糖肽对照品，在高效色谱条件下进行成分鉴定和口味鉴别及含量测定。本发明采用分子量膜分离方法把低分子部分苦味分开与传统乙醇提取比较，风险性小，安全性高，无毒副作用，易于工业化生产的方法。

摘要： 本发明提供了一种利用二维色谱分离技术，从单克隆抗体中制备N‑连接糖肽组分的高效分离制备方法，其主要的成分为肽段序列为EEQYNSTYRN的N‑连接糖肽组分。工艺过程为：将单克隆抗体用胰蛋白酶酶解后，离心浓缩，浓缩液用一维色谱柱去除酶解液中的盐、多肽及残余蛋白，收集目标馏分。将收集到的馏分离心浓缩，将浓缩液通过二维色谱柱，利用二维色谱分离的正交性，除去残余的小肽，得到纯度较高的N‑连接糖肽组分样品。

摘要： 本发明提供了一种从核糖核酸酶B中分离制备糖肽异构体的方法及糖肽异构体，其主要的成分是肽段序列为NLTK的糖肽异构体。将核糖核酸酶B通过胰蛋白酶酶解后，离心浓缩，浓缩液用一维色谱柱去除酶解液中的盐、多肽及残余蛋白，收集目标馏分。将收集到的馏分离心浓缩，将浓缩液通过二维色谱柱，与质谱联用，在质谱监测指导下，进行分离制备，得到两个高纯度的核糖核酸酶B中分子量为1852.75的糖肽异构体。

摘要： [问题]本发明提供了在通过Boc固相合成法合成糖肽时，位于糖链的非还原末端的唾液酸不会分解，且可在高产率下得到具有所需唾液酸糖链的糖肽的制造方法。[方案]该具有唾液酸糖链的糖肽的制造方法的特征在于，在用于Boc固相合成法的Boc-唾液酸糖链加成氨基酸衍生物中，将位于糖链的非还原末端的唾液酸的羧基以苯甲酰甲基进行保护。

摘要： 至少含有1个以上天冬酰胺糖链的糖肽、其制造方法以及用上述方法可以得到的糖肽，其特征在于，(1)使带有羟基的树脂(resin)的羟基与氨基氮被脂溶性保护基保护的氨基酸的羧基进行酯化反应，(2)脱去上述脂溶性保护基，形成游离氨基，(3)使该游离氨基与氨基氮被脂溶性保护基保护的氨基酸或天冬酰胺糖链的天冬酰胺部分的羧基进行酰胺化反应，(4)脱去上述脂溶性保护基，形成游离氨基，(5)将上述(3)和(4)工序重复1次以上，(6)用酸将树脂(resin)切去。

摘要： 本发明公开了一种灵芝活性成分多糖肽、多糖肽对照品及多糖肽分离纯化方法，将灵芝粉碎、水浸泡提取获得灵芝水提取液，通过净化处理经分子量级的膜分离，采用10KD透析膜所截留的高分子量透过液，经乙醇梯度分离，Bio‑GL，P‑10柱色谱分离，纯化获活性物质多糖肽对照品，在高效色谱条件下进行成分鉴定和口味鉴别及含量测定。本发明采用分子量膜分离方法把低分子部分苦味分开与传统乙醇提取比较，风险性小，安全性高，无毒副作用，易于工业化生产的方法。

摘要： 本发明公开了治疗铅中毒的药物及其所用糖肽和该糖肽的制备方法。本发明所提供的治疗铅中毒的药物含有名称为APL的糖肽，来源于毛木耳；所述APL的N末端序列如序列表中序列1所示。所述APL含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、葡萄糖醛酸及半乳糖醛酸。实验证明含有本发明所提取的糖肽APL各剂量组与模型组相比，均可以有效地清除肝中的铅，尤其是APL高剂量组，肝铅清除率达17.96％，效果优于阳性药物肝铅清除率16.01％。说明本发明的糖肽APL能用于治疗铅中毒。

摘要： 本文公开了用于诱导免疫反应以治疗癌症的免疫原性糖肽。本公开的其它方面是包含免疫原性糖肽的药物组合物；以及用于预防和/或治疗癌症的方法。

摘要： 本发明提供了一种从核糖核酸酶B中分离制备糖肽异构体的方法及糖肽异构体，其主要的成分是肽段序列为NLTK的糖肽异构体。将核糖核酸酶B通过胰蛋白酶酶解后，离心浓缩，浓缩液用一维色谱柱去除酶解液中的盐、多肽及残余蛋白，收集目标馏分。将收集到的馏分离心浓缩，将浓缩液通过二维色谱柱，与质谱联用，在质谱监测指导下，进行分离制备，得到两个高纯度的核糖核酸酶B中分子量为1852.75的糖肽异构体。

摘要： 本发明提供了一种利用二维色谱分离技术，从单克隆抗体中制备N-连接糖肽组分的高效分离制备方法，其主要的成分为肽段序列为EEQYNSTYRN的N-连接糖肽组分。工艺过程为：将单克隆抗体用胰蛋白酶酶解后，离心浓缩，浓缩液用一维色谱柱去除酶解液中的盐、多肽及残余蛋白，收集目标馏分。将收集到的馏分离心浓缩，将浓缩液通过二维色谱柱，利用二维色谱分离的正交性，除去残余的小肽，得到纯度较高的N-连接糖肽组分样品。