精氨酸酶

摘要： 精氨酸剥夺疗法已经被证明在多种肿瘤中有效。事实上,美国食品药品管理局(Food and Drug Administration,FDA)已经批准精氨酸剥夺疗法在黑色素瘤、脑胶质瘤和肝细胞癌中的应用。究其原因是在恶性肿瘤中,精氨酸的代谢机制发生变化,其内源性合成关键酶的表达下调致使其更加依赖于外源性的精氨酸补给,因此通过干预其外源性的补给通路,可以达到抑制肿瘤细胞生长的作用。通过精氨酸的降解酶精氨酸脱氨酶(arginine deiminase,ADI)和精氨酸酶(arginase,Arg)降低血清中精氨酸浓度来达到干预精氨酸的外源性补给的目的,是目前最常用的手段。但由于在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞中发现,精氨酸的内源性合成酶的表达异常升高,因此认为其对精氨酸剥夺疗法并不敏感,相关的研究也进展并不十分顺利。但在近期的部分研究中发现,并非所有CRC细胞对精氨酸剥夺治疗均不敏感,且精氨酸剥夺与其他药物的联合应用于CRC取得了一定进展。其作用特点和机制值得进一步探索。本文拟对精氨酸剥夺在CRC中的最新研究进展作一综述。

摘要： 目的探讨黄芩素(BAI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的防治作用及其对中枢神经系统小胶质细胞(MG)极化和炎性因子的影响。方法将50只雌性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为空白对照组,EAE模型组及BAI低、中、高剂量组,每组10只。空白对照组不做处理,其余各组建立EAE模型。BAI低、中、高剂量组每日分别给予BAI 75、150、300 mg/kg灌胃,空白对照组及EAE模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d。观察小鼠的神经功能缺损和脊髓组织炎性脱髓鞘情况。采用免疫荧光双重染色法检测小鼠脊髓组织离子钙接头蛋白1(Iba-1)阳性MG中M1型MG标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、M2型MG标志物精氨酸酶1(Arg1)的表达情况及分歧指数(RI)变化,实时荧光定量PCR法检测小鼠脊髓组织中iNOS、Arg1及炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)mRNA的表达情况。结果空白对照组小鼠未见发病,其余各组均不同程度发病。与EAE模型组比较,BAI各剂量组小鼠发病潜伏期及达高峰期时间延长,神经功能障碍评分降低(均P<0.05),脊髓组织脱髓鞘程度减轻(均P<0.05),Iba-1阳性MG中iNOS表达降低,Arg1表达升高,RI值减小(均P<0.05),MG的形态倾向于M2型极化,脊髓组织中iNOS、TNF-αmRNA表达降低,Arg1、IL-10 mRNA表达升高(均P<0.05),且BAI剂量越大,变化越明显。结论BAI对EAE小鼠发病具有防治作用,且呈剂量依赖性,其机制可能与纠正M1/M2型MG失衡及调节炎性因子TNF-α、IL-10表达有关。

摘要： 目的 检测癫痫共病抑郁大鼠各脑区诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)表达及神经元凋亡情况。方法 将20只大鼠随机分为对照组、癫痫组、抑郁组、癫痫共病抑郁组(共病组),每组5只。采用氯化锂-匹罗卡品法建立癫痫共病抑郁大鼠模型,采用慢性不可预见中等应激刺激结合孤养法建立抑郁大鼠模型。采用免疫组织化学检测iNOS和Arg-1表达,TUNEL染色检测神经元凋亡情况。结果 与对照组和癫痫组比较,共病组大鼠体质量、蔗糖偏好率、水平运动和垂直运动明显减少(P<0.05)。与对照组、癫痫组、抑郁组比较,共病组大鼠额前皮质、海马、杏仁核iNOS表达和TUNEL阳性细胞数明显增多,Arg-1表达明显减少(P<0.05)。共病组海马iNOS表达(0.480±0.028 vs 0.447±0.024,0.394±0.005)和TUNEL阳性细胞数(61.6±2.0 vs 46.0±1.5,30.0±1.5)明显高于额前皮质和杏仁核(P<0.05)。结论 癫痫共病抑郁大鼠海马M1型小胶质细胞活化及凋亡神经元较额前皮质及杏仁核明显增多,可能在癫痫共病抑郁发病中发挥了更大的作用。

摘要： 目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)和精氨酸酶1(Arg-1)在肝细胞性肝癌中的诊断价值。方法选取2016年1月至2021年12月接受细针穿刺(FNA)活组织检查的214例患者,其中肝细胞性肝癌110例,肝脏转移癌64例,肝脏非恶性肿瘤40例。用免疫组织化学法检测上述肝组织中GPC-3和Arg-1的表达情况,患者的最终确诊依据病理结果结合临床表现、血清肿瘤标志物及影像学结果。结果GPC-3在肝脏非恶性肿瘤、肝细胞性肝癌、肝脏转移癌中的阳性率分别为2.50%,80.91%,4.69%;Arg-1在肝脏非恶性肿瘤、肝细胞性肝癌、肝脏转移癌中的阳性率分别为97.50%,86.36%、1.56%。GPC-3在肝细胞性肝癌中的阳性表达率高于肝转移癌和肝脏非恶性肿瘤,差异有统计学意义(P<0.05);Arg-1在肝细胞性肝癌中的阳性表达率高于转移癌,差异有统计学意义(P<0.05)。GPC-3在鉴别肝细胞性肝癌与肝脏非恶性肿瘤中的敏感度和特异度分别为80.91%、97.50%;Arg-1在鉴别肝细胞性肝癌与非肝细胞性肝癌中的敏感度和特异度为86.36%、98.44%。结论GPC-3对于肝细胞性肝癌与肝脏非恶性肿瘤、肝细胞性肝癌与肝脏转移癌的鉴别诊断均具有很大价值,Arg-1对于识别肝细胞性肝癌具有较高的敏感度和特异度,同时也是反映肿瘤分化程度的敏感指标。FNA活检行GPC-3、Arg-1免疫组化染色用于肝细胞性肝癌诊断的敏感度和特异度均较高,对于临床工作有很大价值。

摘要： 采用碱提法,并以DEAE Sepharose Fast Flow离子柱层析和Sephacryl S-500 HR凝胶柱层析从灰树花(Grifola frondose)子实体中分离纯化得到水溶性多糖GFPN-2-A,通过高效尺寸排阻色谱-多角度激光散射-示差联用(high-performance size exclusion chromatography-multi-angle laser scattering-refractive index,HPSEC-MALLS-RI)、HPLC、傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)、扫描电子显微镜、原子力显微镜、刚果红实验和比色法等对其进行结构表征及精氨酸酶抑制活性分析。结果表明,GFPN-2-A是分子质量为4.56×106 Da的β构型多糖,主要由葡萄糖以及少量的葡萄糖醛酸、甘露糖、核糖和半乳糖组成,物质的量比为54∶1∶0.51∶0.37∶0.68,其主要为碎屑状和片状,在水溶液中的构象呈现出圆柱和圆锥的块状特征,不含三螺旋结构。GFPN-2-A能够抑制精氨酸酶的活性,IC 50为(0.855±0.64)mg/mL。动力学分析表明,GFPN-2-A对精氨酸酶的抑制为竞争性可逆抑制,抑制常数K i为0.284 mg/mL。该研究首次证明了灰树花多糖对精氨酸酶具有抑制作用,为灰树花多糖药物开发开辟新的药物靶点提供了理论依据。

摘要： 目的:通过检测冠心病患者血清精氨酸酶(Arg)和高敏C-反应蛋白(hs-CRP)的表达水平,探讨其在冠心病诊断中的临床应用.方法:回顾性分析2020年1—7月我院心内科收治的冠心病患者90例作为试验组,包括稳定型心绞痛组(SAP组)28例,不稳定型心绞痛组(UAP组)32例,急性心肌梗死组(AMI组)30例,同时选择冠状动脉造影结果正常的30例患者作为对照组.观察上述对象的Arg和hs-CRP水平.结果:试验组的Arg和hs-CRP表达水平高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);四组间AMI组的Arg表达水平显著高于其他组(P<0.05);SAP组和UAP组的Arg表达水平高于对照组(P<0.05);UAP组的Arg表达水平高于SAP组(P<0.05).AMI组和UAP组的hs-CRP表达水平显著高于SAP组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:Arg和hs-CRP表达水平与冠心病的发生发展有密切关系,并且随着冠心病患者的病情逐步加重,Arg和hs-CRP水平显著上升,这对于冠心病的早预防、早诊断具有重要的临床指导价值.

摘要： 目的 分析急性肝功能衰竭在精氨酸血症患者中的发病情况.方法 回顾性分析2018年1月至12月首都医科大学附属北京友谊医院肝脏移植中心确诊的6例精氨酸血症患儿,收集其相关医疗数据,并对已留存患儿的血液进行检测,对ARG1基因突变进行分析.结果 6例患儿均有凝血功能异常,3例(50％)符合急性肝功能衰竭诊断,国际标准化比值(INR)范围2.5～4.6(正常＜1.2),血氨水平68～252μmol/L(正常＜45μmol/L),其中2例(例1、例4)体检发现小的出血点.6例患儿均存在ARG1基因复合突变,符合精氨酸酶缺乏症.结论 急性肝功能衰竭是精氨酸血症的并发症之一.对于原因不明的肝功能损害儿童,应考虑遗传代谢病的可能.对于已明确诊断精氨酸血症的患儿,即使没有明显的肝功能障碍或大出血,也应调查其凝血功能.

摘要： 以绿熟期番茄果实为试材,采用30 μmol·L-1精氨酸酶抑制剂Nw-羟基-nor-L-精氨酸(nor-NOHA)-35 kPa真空渗透结合0.05 mmol·L-1茉莉酸甲酯(MeJA)熏蒸处理,研究了精氨酸酶在MeJA介导采后果实灰霉病抗性中的作用,以期阐明MeJA调控采后果实抗病性的机制.结果 表明.MeJA处理能够显著提高贮藏前期过氧化氢含量,诱导超氧化物歧化酶、过氧化物酶和贮藏后期过氧化氢酶活性,有效抑制相对电导率和丙二醛含量升高,提高多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性,促进总酚积累,抑制采后番茄果实发病率及病斑面积.但是(nor-NOHA+MeJA)处理显著抑制了MeJA对精氨酸酶活力的诱导效应,降低了MeJA介导采后番茄果实灰霉病抗病性的诱导效应.综上所述,精氨酸酶在MeJA介导采后番茄果实灰霉病抗性中发挥重要作用.

摘要： 目的 观察复方景川片对大鼠缺血性脑损伤的神经保护作用,并探讨其对小胶质细胞/巨噬细胞极化的影响.方法 60只大鼠按照随机数字表法分为空白对照组,模型组,尼莫地平组(阳性对照)和复方景川片低、中、高剂量组.除空白对照组外,其他各组采用线栓法构建大脑中动脉闭塞模型,复方景川片低、中、高剂量组于建模前7d按照复方景川片0.78、1.56、3.12 g/kg连续灌胃给药10 d.建模后48 h采用Longa神经功能评分和横木行走实验评价大鼠神经行为改变,苏木素-伊红染色观察脑组织病理变化,免疫组化染色及Western blot检测大脑组织中细胞分化簇86(CD86)、精氨酸酶1(Arg1)表达.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠神经功能评分、横木行走评分显著增高(P<0.05),缺血侧大脑皮质神经元明显坏死、缺失,小胶质细胞/巨噬细胞增生较明显,CD86、Arg1表达均明显增加(P<0.05).与模型组比较,各给药组大鼠神经功能评分和横木行走实验评分明显降低(P<0.05),缺血侧大脑皮质病变减轻,神经元坏死数目减少,锥体细胞增多,仍可见小胶质细胞/巨噬细胞增生,大脑皮质及脑组织CD86表达降低,Arg1表达增加,尤以高剂量变化更为明显(P<0.05).结论 复方景川片能够减轻大鼠脑缺血后的神经损伤,且高剂量效果更为明显,其神经保护机制可能与其调控小胶质细胞/巨噬细胞极化状态有关.

摘要： 目的 研究高磷环境下内皮细胞凋亡的可能调控机制和信号通路.方法 人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)在正常磷(1.0 mmol/L)、高磷(3.0 mmol/L)、正常磷+辛伐他汀(simvastatin,SV,1.0 mmol/L+SV)及高磷+SV(3.0 mmol/L+SV)培养基中培养24 h,Western Blot评价Ras同源物基因家族成员A(Ras homolog gene family,member A,RhoA),Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1/2(rho-associated coiled coil forming protein kinase 1/2,ROCK1/2),细胞外信号调控激酶-丝裂原活化蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase-mi-togen activated protein kinase,ERK-MAPK)、磷酸化细胞外信号调控激酶-丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated-ERK-MAPK,p-ERK-MAPK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38-Mitogen Activated Protein Kinase,p38-MAPK)、磷酸化p38-丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated-p38-MAPK,p-p38-MAPK)、以及精氨酸酶1(arginase1,ARG1)和一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)蛋白的表达,比色法和膜联蛋白V/碘化丙啶双染法(Annexin V-FITC/prop-idium iodide,Annexin V-FITC/PI)检测ARG活性和细胞凋亡率.结果 高磷组RhoA,ROCK1/2,p-ERK MAPK,ARG1表达均上调,ARG活性升高,NOS表达下调,细胞凋亡增加;RhoA抑制剂SV能抑制高磷环境下p-ERK MAPK的活化和ARG1的表达,降低ARG1活性,促进NOS表达,减少内皮细胞凋亡.结论 高磷环境HUVECs可通过RhoA/ROCK途径激活p-ERK MAPK的表达,增加ARG活性,抑制NOS表达,引起内皮细胞凋亡;SV可以通过抑制RhoA/ROCK/ERK-MAPK通路,改善内皮细胞凋亡.

摘要： 弓形虫是一种典型的机会性致病细胞内寄生原虫.弓形虫虫株一般认为主要有3个典型的基因型,即Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ型,但越来越多的研究发现,情况远比想象中复杂得多.流行我国的弓形虫虫株主要为China 1,毒力与Ⅰ型接近.大量研究结果显示,不同品系的小鼠(mouse)对弓形虫均显示较高的敏感性,但大鼠(rat)则相反,有关的机理意见不一.经过多年大量的反复验证,证明了大小鼠腹腔巨噬细胞中的一氧化氮合酶和精氨酸酶的表达差异是决定其对弓形虫敏感与否的关键,该理论目前已受到国际同行的高度关注,重点将对大鼠腹腔巨噬细胞如何抗弓形虫感染的机理作详细的讨论.

摘要： 本课题组在前期日本血吸虫体被表膜蛋白研究中鉴定到精氨酸酶,为进一步阐明日本血吸虫精氨酸酶(SjARG)的特性和生物学功能,应用PCR克隆了SjARG基因,构建了重组表达质粒pET-28a-SjARG,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达并纯化到可溶性重组蛋白rSjARG,分子量约为43kDa.Western-blotting分析显示重组蛋白具有良好的抗原性.实时定量PCR分析显示SjARG在尾蚴时期高表达,基因转录拷贝数约为其它时期的20-100倍,在42d成虫中雌虫的基因转录水平显著高于雄虫.免疫组化实验结果表明SjARG在各期虫体的表膜、实质部分均有分布,在42d成虫雌雄虫生殖器官部位表达较集中.利用纯化的rSjARG重组蛋白建立了体外酶活性分析体系,酶活性分析结果表明重组蛋白rSjARG酶活性为502.67 U/mg,最适pH为10.2,最适温度为37°C,Km值为0.0827 mol/L.Mn2+能显著提高rSjARG的活性.精氨酸酶特异性抑制剂nor-NOHA和NOHA对SjARG均有抑制作用,但两者的抑制效果和底物精氨酸的浓度有关.

摘要： 精氨酸酶(ARG)是肝脏中的一种水解酶，它是三聚体结构，在鸟氨酸循环的最后过程中起催化作用最终形成尿素和鸟氨酸，近年来发现这种酶已经在哺乳动物的组织中被发现，它能和鸟氨酸一样供给细胞，预防生物合成聚胺、并在细胞增生和分化过程中起重要调节作用，有诱导分化癌细胞作用。近年发现在患肿瘤和肝病病人的血清中，此酶活性都较高。因此国内外学者均对精氨酸酶能否在癌症患者组织中和血液中准确稳定的检出感兴趣，并进行了许多尝试，在过去的50年中，已有大量ARG的测定方法报道，但多数是亢长、不便、不适合大量样品的筛查，甚至灵敏度较低，重复性较差。本文建立了一种新的ARG的测定方法，较好的克服了上述方法的不足，而且在肿瘤病人末梢血中能够简便的检出。

摘要： 根系是植物吸收水分、养分的主要器官,其在植物生长发育、抵抗逆境胁迫过程中发挥重要的作用,培育高吸收能力作物根系被誉为继作物矮化育种之后第二次绿色革命.尤其是利用基因工程技术改良植物根系发育,提高根系对水分、养分的吸收效率,进一步提高植物抵抗逆境胁迫的能力成为当前植物抗逆基因工程研究热点之一.前期研究发现NO是棉花根系发育重要调控分子,棉花根系NO主要由一氧化氮合成酶(NOS)分解精氨酸合成,NOS活性受到精氨酸酶(ARG)抑制.

摘要： 本发明涉及产生发酵产物的方法，其包括：用α‑淀粉酶在天冬酰胺酶和/或氨基酸氧化酶的存在下将含淀粉材料液化为糊精；用葡糖淀粉酶将所述糊精糖化为糖；和使用发酵生物发酵所述糖。

摘要： 本发明涉及产生发酵产物的方法，其包括：用α-淀粉酶在天冬酰胺酶和/或氨基酸氧化酶的存在下将含淀粉材料液化为糊精；用葡糖淀粉酶将所述糊精糖化为糖；和使用发酵生物发酵所述糖。

摘要： 本发明提供了一种精氨酸酶组合物、精氨酸酶激活剂及其应用。所述精氨酸酶组合物包含精氨酸酶和精氨酸酶激活剂，所述精氨酸酶激活剂包括选自通式1至通式5所表示的化合物及其异构体或衍生物，及其组合。本发明的精氨酸酶激活剂大大提高了精氨酸酶的活性，从而一定程度上弥补了其半衰期短的缺陷。

摘要： 本发明提供了一种点突变的精氨酸酶及其制备方法，以及所述点突变的精氨酸酶在制备治疗与精氨酸酶相关的疾病的药物中的用途。本发明还提供了一种聚乙二醇化的精氨酸酶及其制备方法，以及所述聚乙二醇化的精氨酸酶在制备治疗与精氨酸酶相关的疾病的药物中的用途。

摘要： 本发明提供了一种点突变的精氨酸酶及其制备方法，以及所述点突变的精氨酸酶在制备治疗与精氨酸酶相关的疾病的药物中的用途。本发明还提供了一种位点特异性聚乙二醇化的精氨酸酶及其制备方法，以及所述聚乙二醇化的精氨酸酶在制备治疗与精氨酸酶相关的疾病的药物中的用途。

摘要： 本发明提供了一种精氨酸酶组合物、精氨酸酶激活剂及其应用。所述精氨酸酶组合物包含精氨酸酶和精氨酸酶激活剂，所述精氨酸酶激活剂包括选自通式1至通式5所表示的化合物及其异构体或衍生物，及其组合。本发明的精氨酸酶激活剂大大提高了精氨酸酶的活性，从而一定程度上弥补了其半衰期短的缺陷。

摘要： 本发明提供了一种点突变的精氨酸酶及其制备方法，以及所述点突变的精氨酸酶在制备治疗与精氨酸酶相关的疾病的药物中的用途。本发明还提供了一种位点特异性聚乙二醇化的精氨酸酶及其制备方法，以及所述聚乙二醇化的精氨酸酶在制备治疗与精氨酸酶相关的疾病的药物中的用途。

摘要： 本发明提供了一种点突变的精氨酸酶及其制备方法，以及所述点突变的精氨酸酶在制备治疗与精氨酸酶相关的疾病的药物中的用途。本发明还提供了一种聚乙二醇化的精氨酸酶及其制备方法，以及所述聚乙二醇化的精氨酸酶在制备治疗与精氨酸酶相关的疾病的药物中的用途。

摘要： 一种共表达精氨酸酶和天门冬氨酸酶制备门冬氨酸鸟氨酸的方法。本发明采用基因工程方法，构建能高效共表达精氨酸酶和天门冬氨酸酶的重组大肠杆菌BL21(DE3)-pET24a(+)-arg-asp，以发酵菌体细胞为酶源，在同一个反应体系内，双酶分别催化底物L-精氨酸、延胡索酸铵反应，生成L-鸟氨酸和L-天门冬氨酸，转化液收集后通过1万截留分子量中空纤维素柱去除大分子量杂质及活性炭脱色、减压浓缩，加入无水乙醇，冰水浴搅拌冷却析出得天门冬氨酸鸟氨酸。本发明提供了一种新的门冬氨酸鸟氨酸的绿色生产工艺方法，该方法具有条件温和、周期短、酶促体系中杂质少、产物分离提取方便、工艺步骤简单、操作安全等优点，有很好的产业化应用前景。

摘要： 本发明公开了一种发酵生产人重组精氨酸酶I的方法，包括以下步骤：(1)将人重组精氨酸酶I生产菌的种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养，发酵培养至发酵液稀释100倍后的OD600值为0.50‑0.60时，降温至22°C，向体系中加入IPTG，诱导培养20‑28h；(2)将诱导培养后的培养液的pH值调至7.1‑7.3，破碎，陶瓷膜过滤，收集滤液；将滤液采用镍柱亲和层析挂柱，然后加入牛凝血酶溶液进行切割，用生理盐水洗脱，收集洗脱液；将洗脱液依次过苯甲脒‑琼脂糖凝胶树脂和Sephadex G‑150葡聚糖凝胶，脱盐，浓缩、干燥，即生产得到人重组精氨酸酶I。本发明通过改造人重组精氨酸酶I生产菌和优化发酵生产工艺，显著提高了发酵生产人重组精氨酸酶I的产量和酶活。