精母细胞

摘要： 精子发生包括精原细胞有丝分裂、精母细胞减数分裂及精子形成3个过程,该过程涉及众多相关特异表达基因的精细调控。研究提示转录因子Foxj2表达于睾丸生殖细胞。为明确睾丸中过表达Foxj2对雄性生育的影响,本研究利用Cre-loxP重组系统构建了睾丸生殖细胞条件性敲入Foxj2的小鼠模型(Stra8-cre;Foxj2-cKI),发现Foxj2杂合敲入雄鼠生育率下降、Foxj2纯合敲入雄鼠不育。

摘要： 睾丸精母细胞型精原细胞瘤(或称精母细胞性肿瘤)临床罕见,在病理诊断中易误诊。除非罕见情况下发生肉瘤样转化,精母细胞性肿瘤的患者通常预后良好。因此,准确诊断并与经典型精原细胞瘤及包括淋巴瘤在内的其他恶性肿瘤的鉴别至关重要。

摘要： 目的:探讨高糖对小鼠精母细胞增殖和凋亡的影响并初步探讨其机制. 方法:体外培养小鼠精母细胞GC-2spd,分为正常对照组和高糖组,分别采用CKK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和凋亡情况,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测GC-2spd细胞caspase3、caspase9、Notch1、Jagged1和Hes1基因mRNA和蛋白的表达情况.结果:与正常对照组比较,高糖组GC-2spd细胞生长速度显著降低,G0/G1期细胞比例显著增多,早期、晚期凋亡率均显著增多,caspase3、caspase9 mRNA及蛋白相对表达量显著上调(P均＜0.05),Notch、Jagged1、Hes1 mRNA及蛋白相对表达量显著下调(P＜0.05). 结论:高糖可促进小鼠精母细胞凋亡,可能通过抑制Notch信号通路实现.

摘要： 目的 探讨配子生成素结合蛋白2(GGNBP2)和配子生成素(GGN)在小鼠睾丸生殖过程中的细胞定位以及作用,初步阐明GGNBP2缺失引起睾丸生精功能障碍的机制.方法 采用免疫沉淀方法检测GGNBP2与GGN相互作用;免疫荧光、免疫组化检测GGNBP2与GGN细胞定位;PCR检测野生型Ggnbp2基因敲除型小鼠睾丸生殖细胞GGN mRNA表达;Western blot检测其GGN蛋白表达.结果 GGNBP2与GGN相互作用,两种蛋白共同定位于精母细胞和精子细胞(Golgi phase,Cap phase)中的细胞核和胞浆,精子细胞(Acrosome phase,Maturation phases)中的顶体和尾部,GGNBP2缺失引起GGN mRNA水平和蛋白水平减低,在精母细胞中GGN定位改变.结论 Ggnbp2基因敲除引起小鼠生精功能缺陷可能通过降低GGN表达,改变GGN细胞定位,DNA双链损伤修复机制受损.

摘要： Objective:To investigate the effects of SET protein on the regulation of spermiogenesis,the proliferation and histone acetylation of spermatocyte cell line,GC-2 spd,were observed.Methods:The GC-2 spd cell was cultured in vitro,and identified by two markers of spermatocytes,lactate dehydrogenase C (LDHC) and Testis-Specific Kinase 1 (TESK1).The combination of SET and H4 was detected by an immunoprecipitation kit.The cells were transfected with AdH1-siRNA/SET to knockdown the expression of SET protein,AdH1-siRNA/NS as control.The cell proliferation was compared between two groups.The expressions of SET protein,histone acetyltransferases and histone deacetylases were detected using realtime RT-PCR and Western Blot.Results:Two markers of spermatocytes,LDHC and TESK1,were positively expressed in the GC-2 spd cell.SET protein was expressed in both cytoplasm and nucleus of GC-2 spd cell.Immunoprecipitation showed that SET protein combined with H4.The expression of SET protein in the cytoplasm and nucleus of the cells transfected cells with AdH1siRNA/SET was significantly decreased (P＜0.01),while the cell proliferation significantly inhibited.Interestingly,the acetylation level of H4 was significantly increased in the transfected cells (P＜0.05).However,there were no significantly differences in the expressions of HATs and HDACs (P＞0.05).Conclusions:SET protein was expressed in both cytoplasm and nucleus of spermatocytes,the knockdown expression of SET protein inhibited the cell proliferation.SET protein participated in the regulation of spermiogenesis,probably by regulating the acetylation level of histone H4.%目的:观察SET蛋白对GC-2 spd精母细胞株增殖和组蛋白乙酰化的影响,探讨SET蛋白调节精子形成的作用.方法:体外培养GC-2 spd细胞,通过精母细胞标志物乳酸脱氢酶C(LDHC)和睾丸特异激酶1(TESK1)鉴定.琼脂糖珠免疫共沉淀试剂盒检测SET蛋白与组蛋白H4的结合.分别转染空载腺病毒(AdH1-siRNA/NS,对照组)和SET干涉腺病毒(AdH1-siRNA/SET,干涉组),比较细胞增殖情况,荧光显微镜观察GC-2spd细胞中SET蛋白的表达;用实时定量逆转录聚合酶链反应(Red time RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测mRNA以及蛋白的表达.结果:免疫荧光显示精母细胞株GC-2 spd阳性表达LDHC和TESK1;SET蛋白表达于GC-2细胞的胞核和胞质中,免疫共沉淀提示SET蛋白与组蛋白H4结合.转染SET干涉腺病毒后,核内和胞质中SET蛋白表达明显降低(P＜0.01).与对照组相比,干涉组细胞增殖明显降低,组蛋白H4乙酰化水平明显增高(P＜0.05);但组蛋白乙酰化酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论:精母细胞核内和胞浆中均表达SET蛋白;SET蛋白降调,则抑制GC-2spd细胞增殖.SET蛋白可能通过与组蛋白H4相互作用调节其乙酰化,参与调节精子形成.

摘要： 目的:观察小鼠睾丸初次生精过程中的发育特点;检测Ddx3基因与蛋白在小鼠睾丸生精过程中的表达模式;探讨Ddx3基因对小鼠睾丸生精的影响.方法:采用HE染色与PAS染色的方法观察不同日龄小鼠睾丸组织的石蜡切片;用荧光实时定量PCR的方法检测Ddx3 mRNA在小鼠睾丸精子发生过程中的表达;采用免疫组织化学和Western blot方法检测DDX3蛋白在小鼠睾丸初次生精过程中的表达特点和细胞内定位.结果:HE染色结果显示4、13、21、35、42和60日龄是小鼠睾丸发生初次生精过程的特定阶段;荧光实时定量PCR结果显示Ddx3 mRNA在4日龄以后小鼠睾丸组织中均有表达,于35日龄开始明显增高,随后表达水平保持稳定;Western blot显示DDX3蛋白在35、42和60日龄小鼠睾丸生精小管中出现特异性表达并逐渐增高;免疫组织化学法显示DDX3蛋白主要在初级精母细胞和精子细胞的细胞质和细胞核中表达.结论:DDX3蛋白在小鼠初次精子发生过程中呈现特异性表达,提示Ddx3基因可能在精母细胞与精子细胞的发育中发挥作用.

摘要： Objective:To detect changes in mitochondrial membrane potential after sperm mother cell damage induced by bisphenol A by laser scanning confocal microscopy(LSCM) and underline its potential action mechanism.Methods: The cultured spermatogenic cells were divided into 3 groups, respectively. Then 0, 10μmol/L, 100μmol/L of Bisphenol A(BPA) were added into the culture, after 3 hours culture, fluorescence probe JC-1 was used to lable the three groups. The fluorescence intensity of JC-1 in mitochondrial was then detected by LSCM. LSCM software was used to analyze the fluorescence intensity. Change of the mitochondrial membrane potential was represented by the change of fluorescence colors (relative proportion of red and green fluorescence is commonly used to measure mitochondrial depolarization ratio). Results:The ratio between the red and green fluorescence in the control group, low dose group and high dose group had significant difference. Intracellular mitochondrial membrane potential of Bisphenol A treatment group was lower than that of the control group, while mitochondrial membrane potential of high dose group was lower than that of the low dose group. Conclusion: Bisphenol A could damage spermatocytes, and as the dose increased, the more serious the injury. The method could real-time monitor with high sensitivity the change of intracellular mitochondrial membrane potential.%目的：运用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术检测双酚A(BPA)致精母细胞损伤后线粒体膜电位的变化，探讨其作用机制。方法：将培养的GC-2小鼠精母细胞分为对照组、低剂量组和高剂量组，分别加入0、10μmol/L、100μmol/L的BPA，一同培养3 h后使用荧光探针JC-1对3个组样本分别进行标记，采用LSCM检测胞内线粒体内JC-1荧光强度的变化。利用LSCM专用软件分析荧光强度，通过荧光颜色的转变检测线粒体膜电位的变化，用红绿荧光的相对比例衡量线粒体去极化的比例。结果：对照组、低剂量组和高剂量组之间红绿荧光的比值有着显著差异。BPA低剂量组和高剂量组的胞内线粒体膜电位明显低于对照组，而高剂量组的胞内线粒体膜电位较低剂量组低。结论：BPA对精母细胞有损伤，且随着剂量加大，损伤越严重。LSCM技术方法灵敏度高，能够实时监测细胞内线粒体膜电位的变化。

摘要： 目的：系统观察不同日龄小鼠睾丸组织的发育特点，检测 ddx1基因与蛋白在不同发育阶段小鼠睾丸组织中的表达模式，探讨 ddx1基因在精子发生过程中的作用。方法采用石蜡切片 HE 染色的方法观察不同发育阶段小鼠睾丸组织的结构特征；采用实时荧光定量 PCR 法检测 ddx1 mRNA 在不同日龄小鼠睾丸组织中的表达；采用免疫印迹和免疫组织化学法检测 DDX1蛋白在不同日龄小鼠睾丸组织中的表达特性与细胞内的定位。结果石蜡切片 HE 染色显示5、15、23、35、42和60日龄小鼠睾丸组织结构特点能代表生精上皮组织发生发育阶段；实时荧光定量 PCR 法显示 ddx1 mRNA 在各日龄小鼠睾丸组织中均有表达，于15日龄开始增高，随后维持稳定水平；免疫印迹法显示 DDX1蛋白在35、42、60日龄小鼠睾丸组织中特异性表达并逐渐增高；免疫组织化学法显示在少量精原细胞、大量精母细胞和圆形精子细胞胞质与细胞核中存在 DDX1蛋白阳性表达。结论 Ddx1基因和蛋白在小鼠精子发生过程中呈现阶段与细胞特异性表达，提示 ddx1基因可能在精子发生过程中发挥作用。%Objective To identify the different developmental stages of testis in mice.To investigate the dynamic expression of ddx1 mRNA and protein in mouse testis as well as the function of ddx1 during spermatogenesis.Methods Paraffin sections were used with H&E staining to show morphological structure of normal mouse spermatogenesis at postnatal stages of the developing testis.Quantitative real-time PCR was used to establish the ddx1 mRNA expression in the testis of mice at different ages.Immunohistochemistry and Western blotting were carried out to detect the expression and distribution of DDX1 protein in mouse testis and spermatocytes.Results Histological analysis showed morphological structure of normal mouse spermatogenesis at different postnatal stages of the developing testis from 5,15,23,35,42,60-day old mice.Quantitative real-time PCR showed that express of ddx1 mRNA situate at low relatively at postnatal P5,then increased at P15 and retained high afterwards.Western blotting confirmed that the specific expression of DDX1 protein in mouse testis.The DDX1 antigen was detected in testis of 35,42 and 60-day old and located mainly in the cytoplasm and nuclear of spermatocyte and round spermatid by immunohistochemistry.Conclusion The ddx1 mRNA and protein expressed in the testis of mice at different stage during spermatogenesis.It indicated that ddx1 may be involved in the regulation of spermatogenesis and spermiogenesis.

摘要： 目的：观察甘草对小鼠体外精原细胞分化的影响。方法取3只小鼠的新鲜睾丸切成组织块后随机分为5组，对照组不予处理，低浓度组、中浓度组、高浓度组分别加入终浓度为0．2、2．0、20．0μmol／mL的甘草溶液，卵泡刺激素组加入等量卵泡刺激素培养液，培养3d。采用免疫组化法观察并计数精母细胞，计算精原细胞分化率。结果对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组和卵泡刺激素组精母细胞数分别为（1．98±0．51）、（67．23±8．73）、（82．57±9．27）、（117．42±10．93）、（109．93±11．13）个，精原细胞分化率分别为0．38％±0．06％、12．93％±1．67％、15．87％±2．53％、22．37％±4．37％、20．97％±5．13％；与对照组比较，其他各组精母细胞数及精原细胞分化率均升高，P均＜0．01；低浓度组、中浓度组和高浓度组两两比较，P均＜0．01；高浓度组与卵泡刺激素组比较， P均＞0．05。结论甘草能促进小鼠体外精原细胞分化为精母细胞，并呈一定浓度依赖性。

摘要： 10.3969/j.issn.1008-0848.2012.08.010%　　目的检测减数分裂前期Ⅰ的人精母细胞联会复合体形态组成和遗传重组特征。方法利用表面铺展技术结合免疫荧光染色，分别标记联会复合体，侧轴、重组位点和着丝粒，电镜观察减数分裂前期Ⅰ各阶段的联会复合体。结果电镜下观察到减数分裂前期Ι的细线期、偶线期和粗线期阶段联会复合体。计算减数分裂前期各阶段细胞的比例。结论表面铺展技术结合免疫荧光染色可以用于人精母细胞联会复合体的制备及观察。

摘要： 本文采用电镜技术,对长吻(鱼危)精母细胞染色体的超微结构进行了研究,以期对其遗传的细胞生物学特性进行深入的了解.

摘要： 本文采用联会复合体分析,精子单倍体分析,及体细胞核型分析,研究了2n=49杂种水牛减数分裂及其后代核型,结果表明,在减数分裂粗线期中,精母细胞形成22条完整的常染色体二价体,一条三价体和XY二价体.三价体呈顺式构型,既行平衡分裂,也行不平衡分裂,产生n=24、n=25、n=24+1和n=25-1四种核型的配子.其子代有三种正常核型,即2n=48、2n=49和2n=50.雌雄两性都是可育的,配种受胎率没有明显降低.

摘要： 目的:观察雷公藤复方(清络通痹方)组分配伍对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase3表达的影响,探讨复方配伍减轻雷公藤生殖毒性的作用机制.rn 方法:体外培养小鼠精母细胞系,分为对照组、雷公藤甲素3.5ug·mL-1组、雷公藤甲素3.5ug·mL-1+梓醇3ug·mL-1组、雷公藤甲素3.5ug·mL-1+三七总皂苷12ug·mL-1组、雷公藤甲素3.5ug·mL-1+草酸铵1.5ug·mL-1组、雷公藤甲素3.5ug·mL-1+青藤碱0.75ug·mL-1组.药物作用24h后流式细胞仪测定精母细胞凋亡率,western-blot测定精母细胞Bax、Bcl2、Caspase3蛋白表达情况.rn 结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,草酸铵和青藤碱组与单用雷公藤甲素比较差异不明显;雷公藤甲素可导致Bax、Caspase3蛋白表达上调,Bcl2蛋白表达下调,配伍梓醇、三七总皂苷后Bax、Caspase3蛋白表达下调,Bcl2蛋白表达上调,与单用雷公藤甲素比较差异显著,而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显.rn 结论:雷公藤甲素可诱导精母细胞凋亡,且与调控凋亡的Bax/Bcl2、Caspase3表达异常相关.清络通痹方不同功效药物的组分配伍可不同程度减轻雷公藤甲素所致的雄性生殖毒性,起到"异类相制"的作用.

摘要： 本发明公开了一种用于髓母细胞瘤分子分型的基因群，所述基因群由总共32个基因中的一个或多个组成。本发明还公开了用于对髓母细胞瘤进行分子分型的试剂盒，以及该基因群在制备用于对髓母细胞瘤进行分子分型的试剂中的用途。此外，本发明还提供了SNCA基因作为髓母细胞瘤的诊断或诊断标志物的用途。

摘要： 本发明提供了一种卵母细胞培养液，该培养液中含有成熟的卵泡液。成熟的卵泡液相对于未成熟的卵泡液，成熟的卵泡液对卵母细胞体外成熟有积极作用的物质丰度更高，离成熟期越近的卵泡，它的卵泡液越能促进卵母细胞IVM，并改善其质量。使用体内成熟卵泡液作为卵母细胞体外成熟培养液的组分能有效提高卵母细胞的质量，并且能降低卵母细胞中的ROS含量。由此。不仅可以用来改善各种物种(如：牛、羊等)的卵母细胞体外成熟，提高制备优质的体外受精胚胎及克隆胚胎的生产率，还可供人类辅助生殖中卵母细胞体外培养成熟的运用提供参考，以改进现有的卵母细胞体外成熟的培养体系，从而促进生物医学的发展。

摘要： 本发明提供了人参总皂苷碳纳米点在制备抗神经母细胞瘤和/或抑制神经母细胞瘤细胞的药物制剂中的应用。本发明得到的人参总皂苷碳点对神经母细胞瘤和神经母细胞瘤细胞(SH‑SY5Y细胞)具有特异性抑制作用，而对其他细胞无明显的增殖或抑制作用。该人参总皂苷碳点表面富含大量的羟基、羰基等结构，表面基团丰富，有益于其进行后续的改性和复合。

摘要： 本发明涉及用于从未成熟卵母细胞生成成熟卵母细胞并提高卵母细胞质量以提高辅助生殖技术(ART)成功率的方法和装置。所述方法包括：使用隧道纳米管形成细胞和卵母细胞，其中，所述隧道纳米管形成细胞将自体基因组材料、生物分子和细胞组分转移至所述卵母细胞。本发明的装置包括微流体装置，以提高在隧道纳米管形成细胞和卵母细胞之间转移生物分子和细胞组分的效率。

摘要： 未成熟卵母细胞的诱导方法包括：将由FIGLA、NOBOX、LHX8和TBPL2组成的4种基因、或者它们的转录物或表达蛋白导入到选自由多能干细胞、外胚层样细胞和原始生殖细胞组成的组中的至少1种细胞中。成熟卵母细胞的制作方法包括：将由FIGLA、NOBOX、LHX8和TBPL2组成的4种基因、或者它们的转录物或表达蛋白导入到选自由多能干细胞、外胚层样细胞和原始生殖细胞组成的组中的至少1种细胞中；以及对导入后的所述细胞和卵巢体细胞进行共培养。

摘要： 本发明属于生殖生物学领域，具体涉及一种促进未成熟卵母细胞体外成熟的NO微泡制剂及促进卵母细胞体外成熟的方法，其由壳膜层与内层空腔组成，所述内层空腔填充有包含NO的气体；所述壳膜层包括脂质材料、起泡剂、冻干支撑剂，所述脂质材料、起泡剂、冻干支撑混合后加入溶剂进行冷冻干燥后制成冻干粉末，得到壳膜层；所述的脂质材料成分选自天然磷脂、氢化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修饰衍生物中的一种或多种；所述起泡剂为吐温‑80；所述冻干支撑剂为Poloxamer 188。本发明提供的NO微泡制剂添加进常规卵母细胞体外培养液中可实现NO长效释放，并且生物安全性高，促进了GV期卵母细胞的体外成熟率，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种区分不同时期精母细胞的方法及其在生精分期、雷公藤甲素致睾丸损伤中的应用。该方法采用睾丸标本的石蜡切片进行γ‑H2AX免疫组化染色来区分不同时期精母细胞。采用γ‑H2AX免疫组化染色，仅通过对阳性着色的精母细胞类型及染色强度进行区分，便可以对小鼠睾丸生精上皮精子发生周期的第Ⅶ‑Ⅻ期进行更精确、简便的划分，而且还可以确定雷公藤甲素致睾丸损伤的敏感细胞。

摘要： 本发明公开了一种用于小鼠精母细胞染色体铺展的方法，将小鼠睾丸破碎处理后并过滤离心后，以NaCl溶液作为低渗液；以多聚甲醛和十二烷基硫酸钠的PBS混合液作为固定液将小鼠精母细胞固定于玻片上；然后以小鼠SYCP3单克隆抗体为一抗，Dylight 549荧光标记的山羊抗小鼠IgG二抗为二抗，采用激光共聚焦显微镜观察小鼠精母细胞染色体铺展情况并记录分裂相。该方法能够更清楚的观察每一条染色体的形态特征，为研究和分析精母细胞的减数分裂进程或相关疾病发病机制提供便利。

摘要： 本发明公开了一种区分不同时期精母细胞的方法及其在生精分期、雷公藤甲素致睾丸损伤中的应用。该方法采用睾丸标本的石蜡切片进行γ‑H2AX免疫组化染色来区分不同时期精母细胞。采用γ‑H2AX免疫组化染色，仅通过对阳性着色的精母细胞类型及染色强度进行区分，便可以对小鼠睾丸生精上皮精子发生周期的第Ⅶ‑Ⅻ期进行更精确、简便的划分，而且还可以确定雷公藤甲素致睾丸损伤的敏感细胞。

摘要： 本发明公开了一种用于小鼠精母细胞染色体铺展的方法，将小鼠睾丸破碎处理后并过滤离心后，以NaCl溶液作为低渗液；以多聚甲醛和十二烷基硫酸钠的PBS混合液作为固定液将小鼠精母细胞固定于玻片上；然后以小鼠SYCP3单克隆抗体为一抗，Dylight 549荧光标记的山羊抗小鼠IgG二抗为二抗，采用激光共聚焦显微镜观察小鼠精母细胞染色体铺展情况并记录分裂相。该方法能够更清楚的观察每一条染色体的形态特征，为研究和分析精母细胞的减数分裂进程或相关疾病发病机制提供便利。