筛选模型

摘要： 目的建立靶向Wee1激酶的小分子抑制剂体外筛选模型,为Wee1抑制剂的筛选提供评价方法。方法使用ADP-Glo法检测Wee1的激酶活性;在p53突变型人结直肠癌细胞(WiDr)上优化了损伤剂的作用时间与浓度以及Wee1抑制剂的作用时间,建立了评价Wee1抑制剂MK-1775单用以及与化疗药物吉西他滨联用的细胞活性评价模型;使用Odyssey in-cell Western方法检测细胞内Wee1的下游蛋白Cdc2及HH3的磷酸化水平,在细胞水平验证Wee1抑制剂的作用机制。结果优化了DNA损伤剂吉西他滨的作用浓度(4.5 nmol/L)与作用时间(48 h)以及Wee1抑制剂MK-1775的作用时间(72h)。使用MK-1775对筛选模型进行验证,吉西他滨或MK-1775单用对细胞均表现出较弱的增殖抑制作用,而在联用实验中,MK-1775能明显增加吉西他滨对细胞的损伤作用,且3次重复实验结果稳定。结论成功建立了一种简单、新颖、有效的Wee1激酶小分子抑制剂体外筛选模型。

摘要： 目的表达人6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)并建立其体外抑制剂筛选模型。方法设计一对5′端分别带NdeⅠ、XhoⅠ位点的引物,PCR扩增G6PD cDNA。将cDNA和质粒pET-28a经NdeⅠ+XhoⅠ酶切后连接,连接产物转化大肠杆菌Top10。将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.4 mmol/L IPTG诱导G6PD表达,镍离子亲和层析柱纯化G6PD。以6-磷酸葡萄糖(G6P)和烟酰胺腺嘌呤核苷二磷酸(NADP+)为G6PD的底物和辅因子,检测340 nm波长处光吸收值(A_(340))的变化,确定G6PD及其抑制剂脱氢表雄酮(DHEA)的最佳浓度,计算模型的可靠性指数—Z′因子。结果构建了重组质粒pET-28a-G6PD,重组菌BL21(DE3)-pET-28a-G6PD经IPTG诱导后,可溶性G6PD表达量为2.5 mg/L,G6PD、DHEA的最适浓度分别为900μg/L、20μmol/L,筛选模型的Z′因子为0.88。结论在大肠杆菌中表达了有活性的G6PD,建立了可靠的体外抑制剂筛选模型。

摘要： 2021年1月,中国农业科学院农业资源与农业区划研究所土壤植物互作团队在农田土壤重金属污染源解析及修复方法筛选机制研究方面取得重要进展,研究通过耦合非线性源解析和人工智能机器筛选模型,对城市河流及其周边农田土壤中重金属的污染源特征进行解析,提出了适用于农田土壤重金属源解析的新方法;并在对污染场地评估调查的基础上,率先构建了适用于农田周边污染场地修复的方法筛选机制。相关研究成果连续在线发表在2021年《危险材料学报(Journal of Hazardous Materials)》4月刊和6月刊上。

摘要： α-葡萄糖苷酶抑制剂在降低餐后高血糖方面发挥了重要的作用。临床常用的α-葡萄糖苷酶抑制剂类化药存在不同程度的不良反应,更多学者转向从天然药物中筛选此类抑制剂的研究。

摘要： α-葡萄糖苷酶抑制剂在降低餐后高血糖方面发挥了重要的作用.临床常用的α-葡萄糖苷酶抑制剂类化药存在不同程度的不良反应,更多学者转向从天然药物中筛选此类抑制剂的研究.

摘要： 人巨细胞病毒(HCMV)感染是常见的病毒性疾病,目前无有效的疫苗,故抗病毒药物筛选对HCMV的治疗具有重要意义.为了构建一种抗巨细胞病毒体外药物快速筛选模型,本研究以带有荧光素酶标签的鼠巨细胞病毒细菌人工染色体(Luc-MCMV-BAC)为基础,将其转染至小鼠成纤维细胞NIH-3T3,成功获得重组病毒Luc-MCMV,且其能够在细胞中稳定发光.噬斑法测定的病毒生长曲线显示,Luc-MCMV与野生型病毒Wt-MCMV具有相似的生长动力学,说明Luc-MCMV能够反映Wt-MCMV的生长状况,可用于后续抗病毒药物的筛选评价.进一步选用更昔洛韦(Ganciclovir)作为阳性对照药物,应用该体系对6种中药单体进行了筛选,结果显示黄芩素和黄芪甲苷具有抗MCMV活性,为抗HCMV药物的筛选奠定了前期基础.

摘要： 胃癌是全球危害最严重的恶性肿瘤之一,转移是造成其高致死率的主要原因.鉴定出胃癌转移相关基因,有助于理解胃癌转移发展机制,从而为胃癌的预防和靶向治疗研究奠定实验基础.本文就利用动物模型筛选胃癌转移相关基因及基因功能鉴定方法的最新研究进展进行综述,重点比较了不同转移模型的特征和体内体外评估转移相关基因功能的方法,以期为胃癌转移机制研究和筛选新的治疗靶点提供实验工具.

摘要： 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是导致全球新冠病毒肺炎暴发的病原体.SARS-CoV-2的3C样蛋白酶(3CL)在病毒复制中起关键作用,成为抗病毒药物设计的理想靶标.本文利用生物发光共振能量转移(BRET)的技术建立了细胞水平SARS-CoV-2病毒3CL蛋白酶的筛选模型,并初步应用和评价了该筛选模型.结果 显示,该方法重复性好(Z'因子为0.59),可以反映3CL蛋白酶底物剪切效率,与细胞水平抗病毒活性分析具有较好的一致性.本工作表明,该方法可以应用于3CL蛋白酶抑制剂的筛选与评价,为新药研发提供了有力工具.

摘要： 酪氨酸酶抑制剂在医药、化妆品、食品工业等领域应用广泛,本文旨在建立一种能用于该抑制剂研究的快速筛选方法。本研究以曲酸为阳性对照,通过紫外分光光度法检测反应体系的吸光度变化,以判断待测物质对酪氨酸酶的抑制作用。通过优化最终建立了最佳筛选方案为:最大吸收波长为475nm,底物最适浓度为2.5mg/mL酶最适浓度为0.2mg/mL。基于此模型筛选方法,对128个备用的发酵液提取物进行抑制活性的初步筛选,共筛选获得2个对酪氨酸酶具有高抑制活性的样品。结果证实本方法可以用于酪氨酸酶抑制剂的快速筛选,方法简单、易行、稳定、可靠,是寻找和发现有潜在活性的酪氨酸酶抑制剂的有效手段。

摘要： 本文主要研究10kV配网用户的用电情况,根据用户类别、耗能水平、重要等级、缴费情况等多维度,建立评价体系,再结合用户用电设备情况,创新性的提出“参与有序用电用户计算筛选模型”,为决策人员提供有参考意义的用户清单,合理开展有序用电工作.

摘要： 微生物次级代谢产物是新结构类别抗菌药物的重要来源，但新结构类别活性物质往往含量低、靶向不明确，因而难以发现。细菌细胞壁肽聚糖合成中，MurA是一个关键酶。本文结果表明含5'端上游调控序列的murA1反义片段及结构基因中部murA2反义片段所引起的反义沉默效果较好，靠近3'端的murA3反义片段效果最差。其原因可能是反义沉默效果与靶序列位置，长度，asRNA本身的二级和三级结构有关。本实验室前期通过反义RNA技术也已构建了针对acpP,fabl,ftsZ等基因的反义工程菌，并以其建立抗菌筛选模型，获得若干阳性样品。因此利用反义RNA技术构建细菌必需基因的超敏工程菌发掘新抗菌物质是切实有效的，具有一定的应用前景。

摘要： 目的：建立具有上调OPG糖蛋白活性的抗骨质疏松药物高通量筛选模型。方法：选取OPG转录起始位点上游约5900 bp和约1000 bp的两段调控序列作为本模型的目标启动子序列，通过PCR的方法，从人类基因组中扩增出这两段序列，经双酶切后分别插入pGL4.17报告基因载体中，将两种重组质粒分别转染人骨肉瘤MG-63细胞，测定两种瞬时转染细胞的荧光素酶表达活性，选取荧光素酶表达活性更高且对阳性化合物染料木素更敏感的含约1000 bp调控序列的报告载体构建稳定转染模型，在500 pg/mL 6418抗性压力下，得到了稳定转染单克隆细胞株。对细胞接种数、DMSO浓度、化合物作用时间等条件进行了摸索;利用染料木素作为阳性对照，对模型进行了评价和优化。结果：以10000个/孔的细胞数量接种，模型细胞的荧光素酶表达活性最高;在0.01 %-0.5%(v/v)范围内，DMSO不会对模型细胞的荧光素酶表达活性造成明显影响;在加药48 h后，模型细胞的荧光素酶表达活性对阳性化合物染料木素呈现出明显的量效关系;此外，本模型的信号/噪音比值和信号/背景比值均较高，筛选窗相关系数Z'因子大于0.5，符合高通量筛选的要求。结论：本模型可用于从微生物天然产物、人工合成化合物及动植物产物中高效筛选具有OPG上调活性的具有潜在抗骨质疏松作用的候选化合物，为进一步开发新型抗骨质疏松药物奠定基础。

摘要： 目的：建立和优化蛋白酪氨酸激酶抑制剂高通量筛选模型，寻找蛋白酪氨酸激酶抑制剂。rn 方法：提取大鼠脑组织中的蛋白酪氨酸激酶，建立基于酶联免疫吸附方法的酪氨酸激酶抑制剂筛选模型，通过考察反应体系中酶稀释倍数，底物浓度，反应时间，抗体稀释倍数对该模型进行优化。并对本筛选中心样品库进行高通量筛选，选取抑制活性大于70％的样品进行复筛，并计算其IC50值。rn 结果和结论：该方法经优化后更加灵敏、稳定、可靠，且提高了筛选效率、降低筛选成本。经过对样品库中8万余样品的筛选，得到6个抑制活性较高且量效关系好的化合物，拟进入下一步活性评价阶段。

摘要： 目的：利用反义RNA技术构建针对细菌FabI的反义工程菌,利用该菌构建超敏全细胞FabI抑制剂筛选模型,并验证该模型的可行性。方法：本文利用携带paired termini结构的质粒模仿天然asRNA的二级结构表达稳定的反义RNA,通过平板表型观察对反义工程菌进行验证；考察了IPTG浓度对筛选模型的影响,确立了96孔板抗菌筛选模型的条件,并用三氯生作为阳性对照、氨苄西林作为阴性对照对该模型进行可行性验证。结果：获得了针对FabI的反义工程菌,成功构建了FabI特异性酶抑制剂的超敏全细胞筛选模型,并验证了其可行性。

摘要： 对血管紧张素转化酶抑制剂(Angiotensin-Converting EnzymeInhibitots，ACEI)的现行筛选模型进行总结，并对不同筛选模型的检测方法进行分析，以期为从中草药中筛选ACEI提供一定的指导.

摘要： 近期,国家推进投融资体制改革,对中国交建参与高速公路投资是机遇,也提出了挑战,如何甄选合适的高速公路投资项目,如何设计投资结构,防控投资风险,是从事高速公路投资实践工作者反复思考的问题,根据中国交建高速公路投资项目的实践经验,探讨了高速公路PPP全周期策划要点及构建投资筛选模型,对作出科学的投资决策提供智力支持,有一定的推广价值.

摘要： 近年来，为了筛选与发现新的抗菌抗生素，开展了针对潜在靶标的药物筛选模型的建立与筛选应用，并通过获得的阳性化合物进一步确认潜在靶标成为抗结核杆菌药物靶标的可行性。如针对核糖体中存在着大、小亚基，而每个亚基都是由20-30个蛋白质形成的蛋白质复合物，这些蛋白彼此在组成上相互连接，在功能上相互协调，存在着大量的蛋白质相互作用，选择核糖体大亚基上的L12与L10的相互作用作为可能的抗结核药物靶标，在体外首先证明了在结核杆菌中存在着L12与L10的相互作用，然后酵母双杂交技术建立了筛选阻断L12/L10相互作用的筛选模型，经过大量筛选，获得IMB-T766和IMB-T054;体外抗结核活性试验表明，这两个化合物具有对结核杆菌标准株H37Rv较强的抗菌活性，尤其是具有对临床分离的MDR-TB具有比利福平和异烟肼更强的体外抗菌活性。进一步，抗菌谱试验表明，IMB-T766和IMB-T054对其他G+菌、临床分离G+菌和G-菌及实验室标准株的都很弱。利用等离了表面共振SPR队两个阳性样品进行了干扰L12/L10试验，表明两化合物的作用机制是与L12结合，阻断了L12与L10的相互作用。利用模式分枝杆菌体外高表达L12和L10，以及异柠檬素裂解酶，再测定阳性化合物对于3株菌的MIC, L12高表达株可提高阳性化合物MIC 4倍高于另外两株菌的MIC增高值，间接表明两个阳性化合物作用靶标是L12。另外，L12/L10的相互作用也可用来筛选抗G-菌。另外，还以酪胺酰-tRNA作为潜在药物靶标开展了抗结核药物的筛选模型的建立、筛选，获得了具有很好抗结核杆菌标准株H37Rv和临床分离多药耐药株MDR-TB的活性化合物。相关确定药物靶标研究正在进行。

摘要： 长期以来,抑制细菌分裂被认为是有潜力的抗菌靶标.FtsZ是主要的细菌细胞骨架蛋白,是调控细菌细胞分裂的主要物质,广泛存在于细菌和古菌中,且序列保守,具有GTP酶活性位点且和真核生物的微管蛋白具有相似的结构.这使得FtsZ成为人们关注的抑菌位点.从将现有的FtsZ抑制剂进行归类分析,并分析其作用位点、抑菌浓度、筛选模型和检测抑制剂效果的方法,为FtsZ抑制剂进一步研究提供依据.

摘要： 目的:建立秀丽隐杆线虫—甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌感染模型,筛选抗耐药菌感染的活性化合物.方法:利用耐药菌对线虫进行感染,建立液体条件感染和抗生素救治模型,通过观察感染线虫的存活情况,考察筛选样品活性.结果:对456个样品孔进行考察,发现化合物sipi8294具有某种生物学活性,当浓度为16μg·mL-1时,可以使感染线虫存活率达到60％.通过联合用药实验发现,sipi8294与青霉素类药物联用,具有明显的增效作用.8μg·mL-1sipi8294和8μg·mL-1氨苄西林联用,可以使线虫存活率提高到80％以上.结论:该模型能反映病原菌在线虫体内的耐药性,并可以用于化合物的筛选,发现具有抗感染或是辅助抗感染作用的化合物.

摘要： 目的:建立秀丽隐杆线虫—甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌感染模型,筛选抗耐药菌感染的活性化合物.方法:利用耐药菌对线虫进行感染,建立液体条件感染和抗生素救治模型,通过观察感染线虫的存活情况,考察筛选样品活性.结果:对456个样品孔进行考察,发现化合物sipi8294具有某种生物学活性,当浓度为16μg·mL-1时,可以使感染线虫存活率达到60％.通过联合用药实验发现,sipi8294与青霉素类药物联用,具有明显的增效作用.8μg·mL-1sipi8294和8μg·mL-1氨苄西林联用,可以使线虫存活率提高到80％以上.结论:该模型能反映病原菌在线虫体内的耐药性,并可以用于化合物的筛选,发现具有抗感染或是辅助抗感染作用的化合物.

摘要： 本发明公开了一种不分割石膏模型筛选方法、筛选治具制作方法及筛选治具，所述不分割石膏模型筛选方法包括：根据对历史石膏基牙模型的筛选测试结果制作具有不同基牙邻面角度的基牙治具；利用扫描仪对所述基牙治具进行扫描，从而确定所述扫描仪的最小扫描角度；根据所述扫描仪的最小扫描角度制作对应角度的不分割石膏模型筛选治具；利用所述不分割石膏模型筛选治具对不分割石膏模型进行筛选。本发明根据扫描仪的最小扫描角度制作不分割石膏模型筛选治具，并利用所述不分割石膏模型筛选治具筛选出可被扫描仪扫描的不分割石膏模型，从而提高不分割石膏模型扫描成功率，实现不分割石膏模型扫描批量化的效果。

摘要： 本发明公开了一种不分割石膏模型筛选方法、筛选治具制作方法及筛选治具，所述不分割石膏模型筛选方法包括：根据对历史石膏基牙模型的筛选测试结果制作具有不同基牙邻面角度的基牙治具；利用扫描仪对所述基牙治具进行扫描，从而确定所述扫描仪的最小扫描角度；根据所述扫描仪的最小扫描角度制作对应角度的不分割石膏模型筛选治具；利用所述不分割石膏模型筛选治具对不分割石膏模型进行筛选。本发明根据扫描仪的最小扫描角度制作不分割石膏模型筛选治具，并利用所述不分割石膏模型筛选治具筛选出可被扫描仪扫描的不分割石膏模型，从而提高不分割石膏模型扫描成功率，实现不分割石膏模型扫描批量化的效果。

摘要： 本发明提供筛选抗结核药物的组合物、筛选模型和筛选方法。具体地，本发明提供一种异源表达天冬氨酸半醛脱氢酶(ASD)的方法，其包括以下步骤：(1)将含有pET28a(+)::asd表达质粒的菌株转接于含Km和提高细胞渗透压的试剂的培养基中，培养得到转接培养物,其中，所述提高细胞渗透压的试剂的浓度为500‑1000mM；(2)将IPTG加入到所述转接培养物中，并于20°C‑23°C下培养得到表达ASD的菌体细胞，其中，IPTG终浓度为5‑20μM(优选10‑15μM)；(3)收集步骤(2)中得到菌体细胞，裂解，得到ASD。本发明还提供含有所述ASD的筛选抗结核药物的组合物、筛选模型和筛选方法，可快速、经济地高通量筛选抗结核药物。

摘要： 本发明涉及一种抗肺纤维化药物筛选模型的构建方法及由其构建的抗肺纤维化药物筛选模型及其应用。所述构建方法包括以下步骤：1)利用组织切片机冰浴下在肺切片制备缓冲液中批量制备肺切片；2)在肺切片预培养液中对所述肺切片进行预培养；3)用第一肺切片培养液对经预培养的肺切片培养1.5～3天；4)用第二肺切片培养液对步骤3)得到的肺切片继续培养1.5～3天；5)用第三肺切片培养液对步骤4)得到的肺切片继续培养4～7天，以得到所述抗肺纤维化药物筛选模型。本发明的抗肺纤维化药物筛选模型培养周期短，且具有均一性高、稳定性和重现性好的特点。

摘要： 本发明提供筛选抗结核药物的组合物、筛选模型和筛选方法。具体地，本发明提供一种异源表达天冬氨酸半醛脱氢酶(ASD)的方法，其包括以下步骤：(1)将含有pET28a(+)::asd表达质粒的菌株转接于含Km和提高细胞渗透压的试剂的培养基中，培养得到转接培养物,其中，所述提高细胞渗透压的试剂的浓度为500‑1000mM；(2)将IPTG加入到所述转接培养物中，并于20°C‑23°C下培养得到表达ASD的菌体细胞，其中，IPTG终浓度为5‑20μM(优选10‑15μM)；(3)收集步骤(2)中得到菌体细胞，裂解，得到ASD。本发明还提供含有所述ASD的筛选抗结核药物的组合物、筛选模型和筛选方法，可快速、经济地高通量筛选抗结核药物。

摘要： 本发明属于分子生物学和药理学领域，公开了一种用于筛选FXR激动剂的高通量筛选模型，具体公开了一种FXR反应元件，包括hSHP_FXRE、hBSEP_FXRE和hMDR2_FXRE，所述hSHP_FXRE的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述hBSEP_FXRE的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述hMDR2_FXR的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。与传统含有多个顺式作用元件IR1(如3xIR1)相比，本发明提供的FXR反应元件，可极大提高使用传统顺式作用元件系统的检测灵敏度。

摘要： 本发明提供了一种配体筛选模型构建方法及装置、筛选方法、设备和介质，属于药物筛选领域，方法包括获取药物配体训练集，药物配体训练集包含药物配体化学式以及分类标签；基于配体化学式，绘制配体图网络，配体图网络中原子为节点，化学键为连接节点的边；采用随机初始化向量标识配体图网络中的各节点的权重向量；根据配体图网络的连接关系重构配体图网络的各节点，得到重构图网络，重复重构步骤，得到至少两层重构图网络；根据分类标签对配体图网络和至少两层重构图网络进行深度学习，构建配体筛选模型。通过本公开的处理方案，准确地对不同尺度的生物和化学实验中化合物的性质进行预测。

摘要： 本发明提供了一种抑制或阻断SARS‑CoV‑2感染的药物筛选模型及筛选方法。在深入研究基础上，本发明揭示了SARS‑CoV‑2的Spike蛋白RBD结构域中的若干个关键氨基酸残基，包括454R、449Y、403R、439N、440N，这些位点与病毒对人细胞的感染能力密切相关。本发明还提供了用于筛选能抑制或阻断SARS‑CoV‑2感染的筛选模型，其以Spike蛋白的RBD肽段中的上述关键氨基酸作为分子对接虚拟小分子化合物/相互作用分子与新冠病毒Spike蛋白互作，从而抑制或阻断病毒的感染。

摘要： 本发明公开了一种晶体衍射图像筛选模型训练方法和晶体衍射图像筛选方法，其中训练方法包括：每个训练小组分别基于本地训练数据进行模型训练，并将训练的模型参数发送给中央服务器，中央服务器基于预设聚合方式对所有所述模型参数进行聚合以获取全局梯度参数组，并基于全局梯度参数组更新衍射图像筛选全局模型，每个训练小组分别判断其是否满足完成识别率不再降低要求，并将判断结果发送给中央服务器，中央服务器基于所有判断结果判断是否训练完成。本发明模型训练方法支持神经网络模型训练数据和全局模型的分离，实现了对私有数据的隐私保护，大幅增强了私有数据的安全性和保密性。

摘要： 本发明提供了一种药物筛选模型构建方法及装置、筛选方法、设备和介质，属于药物筛选领域，方法包括：获取药物训练集，药物训练集包含药物蛋白质的化学式、小分子的化学式以及分类标签；基于化学式，绘制药物蛋白质和小分子的初始图网络，初始图网络中原子为节点，化学键为连接节点的边；采用随机初始化向量标识初始图网络中的各节点的权重向量；根据初始图网络的连接关系重构初始图网络的各节点，得到重构图网络，重复重构步骤，得到至少两层重构图网络；根据分类标签对初始图网络和至少两层重构图网络进行深度学习，构建药物筛选模型。通过本公开的处理方案，可以准确地对不同尺度的生物和化学实验中药物化合物的性质进行预测。