等电聚焦电泳

摘要： 该文从寡克隆区带(OCB)的概念、研究历程、检测与结果判读分析、对MS的诊断价值以及影响MS患者脑脊液OCB阳性率的因素进行了叙述,深入研究这些问题可能对进一步认识OCB以及完善MS患者的神经免疫学检查指标有重要意义。

摘要： 目的：介绍一种高效新颖的 IFE 方法。方法采用簿层等电聚焦电泳。结果该方法简便实用，并可节省昂贵试剂的用量。结论此方法可用于药物蛋白质成分的研究。

摘要： 日本清酒生产使用多种型号的酵母，这些酵母在性质上非常接近，但又有差别。它们在清酒酿造上的生香或产酸等性质上是有差别的，但其差别由何而来一直未查明。各型号清酒酵母之间在特性上的差别起因于它们遗传基因上的细微之差，由此而显示出蛋白质量上的变化，这是其不同特征的由来。作者从酵母基因蛋白组分析着手，首先做了清酒酵母蛋白质量分析，用二元等电聚焦电泳对各型号的酵母蛋白组进行分析后得到它们之间在蛋白质量上的差别图谱，据此对各种酵母进行遗传基因的分类。

摘要： 目的:通过多种分析方法分析国内外两种剂型的近效期重组人生长激素(rhGH)有关物质的组成和含量.方法:采用2010版《中华人民共和国药典》二部rhGH各论下的分子排阻色谱、反相色谱及等电聚焦电泳等方法,结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对16批注射用rhGH及3批rhGH注射液进行了高分子蛋白质及有关物质的分析.结果:2种剂型rhGH高分子蛋白的含量及增长模式较为相近,效期结束时增加了约1倍,而总有关物质特别是脱酰胺rhGH的含量则有较大差异.注射用rhGH的总有关物质含量增长了约1.5倍.国内企业近效期rhGH注射液的总有关物质含量增长了约5倍,而国外企业增长了约9倍,均接近或超过注射用rhGH相关物质13.0％的限值,其中最主要的有关物质为脱酰胺rhGH.结论:rhGH在液态剂型中更容易产生有关物质.

摘要： Objective: To establish methods and requirements for quality control of recombinant human granulocyte colony - stimulating factor - Fc fusion protein (rhG - CSF - Fc). Methods: Biological activity of rhG - CSF - Fc was determined by NFS - 60 cell proliferation assay. Non reducing SDS - PAGE and RP - HPLC were applied to analyze the product purity. CHO host cell protein and Protein A residue were determined by ELISA. Routine tests were all carried out according to Pharmacopoeia of People's Republic of China( volume III ,2010 edition). Results; The requirements and methods for quality control of rhG - CSF - Fc were established and used for quality control of bulk and final product. The results of all tests complied with the requirements of Guideline for Quality Control of Recombinant DNA Products for Human Use and Pharmacopoeia of People' s Republic of China ( volume M ,2010 e-dition). Conclusion: The methods and requirements for quality control of rhG - CSF - Fc showed characteristics of assuring the products safety and efficacy, which can be used for routine quality control rhG - CSF - Fc.%目的:建立重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准.方法:采用NSF - 60细胞增殖法测定生物学活性；非还原SDS - PAGE电泳和RP - HPLC测定纯度；以ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A；其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行.结果:用建立的方法对重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求.结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定.

摘要： 改革目前生物化学实验中“同工酶”的实验方法,设计了等电聚焦电泳分析西方蜜蜂苹果酸脱氢酶Ⅱ同工酶及基因型的实验.等电聚焦电泳完全分离苹果酸脱氢酶Ⅱ同工酶的不同酶谱条带,电泳图谱清晰,并能同时分析同工酶型和基因型.该实验综合性强,实验结果清晰、直观.

摘要： 目的 对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达.方法 从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经Nde I、Xho I酶切后连接至pET-26b (+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达.超声破碎法提取蛋白表达产物,头孢硝噻吩检测其活性,并检测蛋白的等电点(pI).结果 PCR扩增获得879bp的产物,DNA序列显示该片断序列与目的 序列完全一致.重组表达载体经Nde I、Xho I酶切及DNA测序后表明,目的 基因已成功接入表达载体,表达产物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/LEN-5]构建成功.表达蛋白的等电点为7.6.结论 β-内酰胺酶LEN-5基因在原核细胞中完成了重组和表达,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础.

摘要： 许多植物蛋白制成品均含有抑制动物消化的蛋白酶抑制剂.目前已从某些豆类及蔬菜种子中分离出多种对胰蛋白酶具有抑制作用的活性物质.该实验以花生、甘薯等为原料,通过DEAE-Sepharose 4B FF阴离子交换柱层析分离胰蛋白酶抑制剂,以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)为底物测定其对胰蛋白酶的抑制活性;将具有抑制活性的组分通过SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量(Mr);以聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定蛋白质等电点(pI).结果显示,甘薯中至少有4种胰蛋白酶抑制剂组分,相对分子质量为20～25 kD、等电点在pH5.0～6.6之间;花生中至少有三种胰蛋白酶抑制剂组分,相对分子质量为30～70 kD、等电点在pH5.0～5.8之间.

摘要： 目的 构建新型β-内酰胺酶CTX-M-38的表达载体.方法 应用PCR扩增CTX-M-38基因全长编码序列,经Nde I、XhoⅠ酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI).结果 PCR扩增获得894bp的产物,重组表达载体经Nde I.Xho I酶切及DNA测序后表明,目的 基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/CTX-M-38]构建成功.蛋白pI为8.4.结论 β-内酰胺酶CTX-M-38在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件.

摘要： [目的] 为了筛选脂肪氧化酶缺失的花生品种.[方法] 根据花生种子脂肪氧化酶同工酶等电点差异,利用等电聚焦电泳技术,对6份花生种子不同部位的脂肪氧化酶进行鉴定分析.[结果] 完整的花生种子脂肪氧化酶同工酶有3条带,子叶脂肪氧化酶同工酶有2条带,种胚的脂肪氧化酶同工酶有7条带;花生种胚脂肪氧化酶同工酶的IEF-PAGE图谱有差异,除品种P86呈现6条带以外,其他品种均呈现7条酶带,P86缺失1条带;相同品种花生种子不同部位的脂肪氧化酶的电泳图谱不同.[结论] 脂肪氧化酶主要集中在花生的种胚部分.

摘要： Gensci008的主要成分是由垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种糖蛋白激素，受下丘脑促性腺释放激素控制，其功能主要促进卵巢的卵泡发育和成熟，是辅助生殖的重要药物。在日常检测中发现检验方法存在检测周期长、检验费用高、检测灵敏度差、条带分辨率低等问题，因此小组成员确立本次攻关课题为Gensci008原液等电聚焦电泳方法优化。经过小组全体成员半年的共同努力，终于完成了课题的所有工作，完整的进行了一次PDCA循环工作，成功将Gensci008原液等电聚焦电泳检测时间由48h缩短至7.5h，降低了检验成本约50%，检测条带数由11条增加到17条，均达到了QC小组活动的预定目标，圆满的完成了本次课题的全部工作。

摘要： 目的:调查广州地区分离到的1株产CTX-M-15型ESBLs的肺炎克雷伯菌的分子特征。方法:等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点(PI)；接合试验判断酶基因的可转移性；琼脂微量稀释法测定供体菌和结合子对抗菌药物的MIC；抽提供体菌和受体菌的质粒DNA并电泳，初步判定质粒大小和来源；PCR以及测序比对分析ESBLs等相应基因型。结果:等电聚焦电泳表明供体菌携带的β内酰胺酶的PI分别为8.8(CTX-M-15)、8.2(SHV-12)、7.8(DHA-1)、5.4(TEM-1)；接合实验表明耐药基因CTX-M-15,SHV-12，TEM-1，DHA-1,qnrB可以通过结合作用转移给受体菌；供体菌体外对头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁和环丙沙星的MIC分别是128、128、128和128mg/L;质粒电泳图谱分析表明供体菌转移给受体菌的质粒有2个，其中1个质粒携带qnrB、DHA-1和SHV-12基因。质粒大小约152 kb，另1个质粒携带ctx-m-15、TEM-1基因。质粒大小约92kb。结论:在广州发现1株同时携带CTX-M-15、SHV-12、TEM-1、DHA-1和qnrB2基因的肺炎克雷伯菌，且ctx-m-15、TEM-1基因和SHV-12、qnrB2、DHA-1基因可以分别由大小不同的的耐药质粒介导耐药性的传播。

摘要： 用聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(PA-IEF)分离了重组人肝细胞生成素(rhHPO)的二硫键异构体,用质谱确证了一级结构.通过胱氨酸裂解、修饰、肽质量指纹谱及自编二硫键分析软件,初步确定了其中一个具有生物活性的异构体的二硫键结构.

摘要： 本发明提供一种含无患子总皂苷的蛋白质提取液，以质量百分比计所述提取液含2％‑10％的无患子总皂苷，应用于蛋白质的提取，能够更加完全的提取细胞或组织中的全蛋白质，且对SDS‑PAGE兼容性最好；提取液天然可降解，无环境污染。本发明还公开一种无患子总皂苷在蛋白质非变性凝胶电泳中的应用，能使蛋白质复合物保持高度的完整性。本发明还公开一种含无患子总皂苷的等电聚焦裂解液，以质量百分比计所述提取液含2％‑10％的无患子总皂苷，应用于蛋白质的等电聚焦中，能将细胞或组织的全蛋白质得以更好的分离和展现。

摘要： 提供了用于通过在胶体或悬浮液中的纳米粒子上由介电电泳过程形成的电子地诱导的折射率梯度来进行光的光束转向和聚焦的方法和设备。方法和设备提供对在功率处理中具有大动态范围的多倍频程带宽和极化多样化光的控制。针对大角度光束转向和透镜提供该技术的实施例。讨论了用于基于窄带电磁辐射的流控模态控制来进行光转向以产生允许大量光束的方向控制的特殊类别的加速光的附加实施例。提供用于LiDAR、太阳能收集、机器人视觉、智能手机变焦透镜、定向能量系统和其他高价值领域的应用。

摘要： 本发明提供一种含无患子总皂苷的蛋白质提取液，以质量百分比计所述提取液含2％‑10％的无患子总皂苷，应用于蛋白质的提取，能够更加完全的提取细胞或组织中的全蛋白质，且对SDS‑PAGE兼容性最好；提取液天然可降解，无环境污染。本发明还公开一种无患子总皂苷在蛋白质非变性凝胶电泳中的应用，能使蛋白质复合物保持高度的完整性。本发明还公开一种含无患子总皂苷的等电聚焦裂解液，以质量百分比计所述提取液含2％‑10％的无患子总皂苷，应用于蛋白质的等电聚焦中，能将细胞或组织的全蛋白质得以更好的分离和展现。

摘要： 本发明提供了用于等电聚焦质控的内参多肽。所述多肽是如式(1)所示的多肽：F‑L‑aa1‑aa2‑aa3‑aa4‑aa5‑aa6‑aa7‑aa8(1)；或者式(1)所示多肽的具有相同功能的多肽衍生物。本发明的内参多肽的分子量低、用量少，能够保证双向电泳数据结果的重复性。

摘要： 本发明公开了一种用于等电聚焦电泳的电泳槽装置，包括正极电极端接触系统、负极电极端接触系统及聚焦槽，所述正极电极端接触系统与所述负极电极端接触系统中分别设有一个用于实现电极水平旋转的旋转轴；所述正极电极端接触系统与所述负极电极端接触系统中均设有两个旋钮；所述正极电极端接触系统中设有一个电源正极接触系统；本发明电极端采用水平旋转轴固定模式，可有效阻止正负电极端水平摆动；正极电极端采用双重弹簧缓冲系统，使电极端上下移动更加柔和，有效地与等电聚焦电泳胶条的胶面接触；正负极接触采用反扣式旋钮操作，既减少电极端与电源接触摩擦引起的装置寿命问题，又大大降低安装时聚焦槽振动引起的胶条扭曲现象。

摘要： 一种用于等电聚焦电泳的电泳槽装置，通过在原有装置中增加电极旋转轴、在电极端设置放置电极旋转轴的电极端内部通孔，有效避免了设备运行过程中电极端的水平摆动；通过在电极端接触系统内多个部位设置弹性部件，有效缓冲设备运行时产生的上下震动，保证了电极端与聚焦槽内胶条胶面的有效接触；通过电极端接触系统的卡扣式连接,电极端接触系统于电泳槽工作台间的反扣式连接，减少电极端与电源接触摩擦引起的装置寿命问题，也降低安装时聚焦槽振动引起的胶条扭曲现象。上述的创新设置在一定程度上保证了电泳电流的稳定性，提升物质聚焦纯化效果。

摘要： 本发明公开了一种用于等电聚焦电泳的电泳槽装置，包括正极电极端接触系统、负极电极端接触系统及聚焦槽，所述正极电极端接触系统与所述负极电极端接触系统中分别设有一个用于实现电极水平旋转的旋转轴；所述正极电极端接触系统与所述负极电极端接触系统中均设有两个旋钮；所述正极电极端接触系统中设有一个电源正极接触系统；本发明电极端采用水平旋转轴固定模式，可有效阻止正负电极端水平摆动；正极电极端采用双重弹簧缓冲系统，使电极端上下移动更加柔和，有效地与等电聚焦电泳胶条的胶面接触；正负极接触采用反扣式旋钮操作，既减少电极端与电源接触摩擦引起的装置寿命问题，又大大降低安装时聚焦槽振动引起的胶条扭曲现象。

摘要： 本发明公开了一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法，包括如下步骤：S1、材料准备；将实验所用的各类材料准备妥当，以保证试验顺利进行；S2、试剂准备；实验所需试剂，待检样品与对照品，需及时备好，以供实验使用；S3、仪器准备；实验仪器提前清洗完毕后备好；S4、配制试剂；将实验无法直接使用的试剂，进行人工配制，以供使用，保证实验的顺利进行；S5、检验方法；主要以电泳作为方法对其检验；S6、分析判断结果；通过对比对照品分析判断出结果；本发明涵盖了材料、试剂、仪器的准备，试剂的合理配制，科学的检验方法，严谨的分析判定，做到了将重组蛋白进行等电聚焦电泳等电点检测，结果科学合理，具有说服力。

摘要： 本发明提供了一种分析乙肝表面抗原病毒样颗粒的全柱成像毛细管等电聚焦电泳的方法，其包括如下步骤：配制上样溶液：将乙肝表面抗原病毒样颗粒样品溶液、甲基纤维素溶液、两性电解质载体、等电点标记物、尿素和亚氨基二乙酸溶解于水中，得到上样溶液；其中，所述两性电解质载体为pH 3‑10两性电解质载体；所述亚氨基二乙酸在上样溶液中的摩尔浓度为10‑20mmol/L；上机分析：采用全柱成像毛细管等电聚焦电泳测试仪对所述上样溶液进行等电聚焦，聚焦完成后得到等电聚焦图谱。本发明的分析方法依据不同电荷变异体的等电点(pI)特征进行测定，具有较好的稳定性和重现性。

摘要： 本实用新型公开了一种用于等电聚焦电泳的电泳槽装置，包括正极电极端接触系统、负极电极端接触系统及聚焦槽，所述正极电极端接触系统与所述负极电极端接触系统中分别设有一个用于实现电极水平旋转的旋转轴；所述正极电极端接触系统与所述负极电极端接触系统中均设有两个旋钮；所述正极电极端接触系统中设有一个电源正极接触系统；本实用新型电极端采用水平旋转轴固定模式，可有效阻止正负电极端水平摆动；正极电极端采用双重弹簧缓冲系统，使电极端上下移动更加柔和，有效地与等电聚焦电泳胶条的胶面接触；正负极接触采用反扣式旋钮操作，既减少电极端与电源接触摩擦引起的装置寿命问题，又大大降低安装时聚焦槽振动引起的胶条扭曲现象。